Штамм бактерий viвriо nag 083 серовара, используемый для приготовления моноварной диагностической сыворотки

 

Использование: медицина, диагностика , микробиология - получение сыворотки с целью идентификации патогенных вибрио нов. Сущность изобретения: культуру штамма Vibrio Nag KM-54 083 серо вара (864) высевают в 1%-ную пептонную воду при рН 7,6. и выращивают при 37°С 4 ч. Инокулят пересеивают петлей на агар рН 7.6. содержащий настой сердечной мышцы. Выращивают 18-20 ч при 37°С. Биомассу смывают физиологическим раствором рН - 7,2, дважды отмывают. Кроликов иммунизируют трехкратно с трехдневным интервалом: первую и вторую инъекции подкожно по 20 млрд. вибрионов, третью - внутривенно 5 млрд. вибрионов. На седьмые сутки кроликов обескровливают. Сыворотку консервируют м ертиолатом натрия 1:10000, диагностический титр сыворотки 1:400, сыворотка специфична, высокоактивна, гетерологических антител не содержит . 2 табл. Ь Ј

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4838851/13 (22) 12.06.90 (46) 15.04.92. Бюл. М 14 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (72) А.К.Адамов, Ю,Ю,Елисеев, Ю.Б.Резников, Г.А.Сомова, Г.И. Белоногова и О,И.Лукьянова (53) 576.851.31(088.8) (56) Jap. J. Medicine Science Biology, 1970, ч.23, р,р. 13-20. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO NAG 083

СЕРОВАРА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МОНОВАРНОЙ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ (57) Использование: медицина, диагностика, микробиология — получение сыворотки с целью идентификации патогенных вибриоИзобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к серологической идентификации патогенных вибрионов, Целью изобретения является штамм

Vibrio Nag нового 083 серовара, используемый для приготовления моноварной диагностической сыворотки для идентификации патогенных вибрионов.

Штамм Vibrio Nag КМ-54 (864) 083 серовара хранится в коллекции Музея живых культур .Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института "Микроб" под номером KM-54 (864).

Штамм Vibrio Nag KM-54 (864) обладает всеми свойствами, характерными для рода

Vibrio (табл.1).

Морфологические признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки, спор и капсул не образуют, грамотрицательные. (s1)s С 12 N 1/20, А 61 К 39/40

2 нов. Сущность изобретения: культуру штамма Vibrio Nag КМ-54 083 серовара (864) высевают в 1 -ную пептонную воду при рН

7,6, и выращивают при 37 С 4 ч. Инокулят пересеивают петлей на агар рН 7.6. содержащий настой сердечной мышцы. Выращивают 18 — 20 ч при 370С. Биомассу смывают физиологическим раствором рН -7;2, дважды отмывают. Кроликов иммунизируют трехкратно с трехдневным интервалом: первую и вторую инъекции подкожно по 20 млрд. вибрионов, третью — внутривенно 5 млрд. вибрионов. На седьмые сутки кроликов обескровливают. Сыворотку консервируют мертиолатом натрия 1:10000, диагностический титр сыворотки 1;400, сыворотка специфична, высокоактивна, гетерологических антител не содержит. 2 табл.

Культуральные признаки. На плотном агаре образует гладкие, круглые прозрачные с ровными краями колонии диаметром

2 — 2,5 мм. В жидких средах вызывает равномерное помутнение, образует на поверхности пленку, Физиологические свойства. Оксидазоположительный, относится к 1 группе Хейберга, ферментирует глюкозу до кислоты без газа, не ферментирует инозит и салицин, образует индол, ферментирует маннит, декарбоксилирует лизин и орнитин, не дигидрирует аргинин, не фосфоресцирует, не растет в 1 -ной пептонной воде с добавлением 7 и 10% хлорида натрия. Не агглютинируется холерными сыворотками О, Огава, Инаба, RO и вибрионными диагностическими сыворотками 02 — 082 сероваров. Не лизируется фагами С, Эльтор, ХДФ 3 — 5, 1726510

40

55

ТЭП — 2, ТЭП — 3, ТЭП — 4, ТЭП — 5 и

ТЭ П В вЂ” 6. Лизируется фага ми ТЭ П В вЂ” 1 и

ТЭП — 7. Лизируется фагами ДДФ.

Обладает специфическим О-антигеном.

При иммунизации кроликов О-антигеном 5 данного штамма образуют специфические антитела, Пример 1. Для приготовления моноварной диагностической сыворотки используют О-антиген штамма Vibrio Nag КМ-54 10 (864) 083 серовара. Культуру штамма Vibrio

Nag КМ-54 (864) высевают в 1 (,-ную пептонную воду, рН 7,6 и выращивают при 37 С

4 ч, затем пересевают на свежескошенный агар, содержащий настой сердечной мыш- 15 цы рН 7,6. Посевы инкубируют при 37 С

18 — 20 ч. Выросшую культуру смывают с агара физиологическим раствором рН 7,2. Полученную микробную взвесь кипятят при

100 С 2 ч с момента закипания в 107,-ном 20 растворе хлорида натрия, Затем взвесь дважды отмывают физиологическим раствором рН 7,2 путем центрифугирования. После контроля на специфическую стерильность микробную взвесь использу- 25 ют для иммунизации кроликов.

Кроликов породы шиншилла весом 2—

2,5 кг иммунизируют трехкратно с трехдневным интервалом; первую и вторую иммунизацию делают подкожно по 20 млрд, 30 м.т., третью инъекцию — 5 млрд. м,т. внутривенно. На седьмые сутки после последней инъекции кроликов обескровливают. Сыворотку консервируют путем добавления мертиолата натрия 1:10000, Титры сывороток составляют 1:3200, За диагностический титр принято разведение сыворотки 1:400.

Сыворотку применяют в реакции агглютинации с вибрионами. Реакцию агглютинации ставят объемным методом в пробирках. Сыворотку используют в одном разведении — диагностическом титре. Для разведения сывороток и приготовления взвесей культур используют физиологический раствор рН 7,2, Положительной считают реакцию с оценкой 2 — 4 "+".

Сыворотка против вибрионов 083 серовара строго специфична и высокоактивна.

Положительная реакция отмечалась только с гомологичным штаммом (табл,2).

Использование предлагаемой сыворотки при диагностике кишечных заболеваний имеет большое практическое значение, так как расширяет возможности дифференцирования патогенных вибрионов.

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio Nag 083 серовара КМ вЂ” 54 (864), используемый для приготовления моно варн ой диагностической сы воротки.

1726510

° ф

3> 3

K

hC о

z

IB

Cg (0

1и

>5 о

Ф (>

1

I 1 ((3

cv ! (>Ъ

3 i (>Ъ

1

I

I

1

I X

3 CO

I С

I (О в

1 а

I l

1 (3 о

1 Z а с

1 Э

I (О

I Cg

1 О)

1 X с о

CO в ! !

1

1 C I (Ъ >Z ! a Ф Ф !

1- С Х

CO

L а

Э

IО

1 и

I !

I

l !

Ю I

1 (Х I

1 I

1 1

I Щ I

1 3O

1 CO I

1 X 1 ! 1

I (О

1 (О I ! Cg I

1 1 I

Ю ! 1

3 I

I Ю I

I 1

1! 1v 1

I .О с

I Ф

1 (О

1 Cg

I X

1 11 Я с

1 L

I I CO (ап(I

I X CO S CO

3L3LZ

I x a x

ТЯФ z

v о R (- о

С0 Ф

S .а ао s

S S Я е z x а S

Z а v

Э Э с у о s

Х 31

I Э

1 а о

l 3g

I >у о! Z! Z о z

1 I- Э с х

1 Э Z с Ф с

I >S 03

l 2Я о

I о.о а

v! m

1 Z!

I 1v о

I (Ъ!

1 1! с 1

m ai оП а Is m а т

I I

1 1

I S 1 а

О 1I 1-3 Щ

1 К I

w) m s ! Паа(I 1

iv о ъ

imcz (а (0 п(а (Ю Х!

I — — 3

i I

1 а

1 ! Х !

I о(1

I

1

1- I

CO I

z I !

Cg ааi

1

1 I I (О Z X

13-ОО

is ах

1=Г Х О

1

Cg I

ПЪ 1

CO 1

3 I (О

iaа

i Oi 30

3O m

1 м

gO

С3

I

I Z

I Z

1 (0 ! 1IB

0 (A .3

X: cZ3

1 1

1 1

l 1 ! 1 I

I 1 I

lent

I о о 3. (О Э S е a= ! (3 l

i 3 1

1 36 1

I S .О I

1 (О I

3aV 1 + (О О 1

3C Z 1!

I 1 1

1 1 I I

Х Ф I

1 1 Ф С а Ф 1

I 1 Y (I 1 1

I 1 I 23 1 х m 1

m o I

1 С l I

1 !

1 I I 1

1 X CO 1 с z I

1%130 1

v a 1

I C0 I ! I- l 1

I z 1 Cg 1 (Э(О1- I

l Z I Z X I

I a 1xco 1 (е, — — 1

CO 1

z I

У X

1 !

I

I

I I

I 1 1 1

11 I S Cg

is (с(i as

О 1о

13О m

l a Щ 1 l 1

imс! s (Х Ф 1

I Э 1 S Щ (Ч Сz

1 1 1

1 I I

1 1 Ф I .11 1 1 1 S I (а i аz =г(I CO Э Ф CO 1 (ХZ i esl-i о

1CO V i 3 (O

1(ОВi V S (ОК! SZ

i R Q3 1 х Ф I о с

I ( (ПЪ 3

1 1

1 бЪ 1

1 I 1

I I

1 ПЪ 1 ! с 1

I (о3 М I

1 I

I (й 1 с 1 (Ъ (>3 I

I I! 1

1 ((3 I с 3

1 (оЪ I

3- 1

I I

1 1.(Ъ 1

I в 1 ! ч 1 х 1

i 1

1 4 I

I 1

I 1 х о — — -

I м (1 I ! в 1

I Ч I х I

1 I

1 1 I а 1 о

1 (>Ъ I- I —

1 1

1 1

1 I I Г 1

Ф(ÎOm

R а а

ЭОО !

Е(С(а —— о 1

1 Ф I I

Ф о 1 а 1 а 1 (О(zm 1 о! Хс l

3 3

1

1! 1

I

П> !

СЪ I

I

l 1

1

1 I

I!

I 1

I

I

3! 1

1! !

l

I (I

1

I 1

I

I

1 1

1

I

I 1

I

1! (I

+ I

1

1

I 1

I

+ I

1726510

Таблица 2

Специфичность моноварной сыворотки против патогенных вибрионов 083 серовара

20

30

Составитель Ю. Елисеев

Техред М.Моргентал Корректор Н,Король

Редактор Н.Горват

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1249 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5