Способ исследования нарушений в гистосовместимом почечном трансплантате

 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине. Сущность изобретения: удаляют из реципиентного организма одну интактную почку на стороне, противоположной аллотрансплантации донорской, перемещают донорскую аллогенную почку в таз реципиента, формируют соустье между реципиентным и донорским мочеточниками, определяют в моче маркеры нефроальтерации, при исчезновении которых в очередной мочевой пробе устанавливают первичное выключение трансплантата, а при повторном их появлении - включение последнего. При этом анастомозируют нижний отдел реципиентного мочеточника с культей мочеточника трансплантата по типу бок в конец, а затем при субтотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют герметичный канал между устьем мочеточника реципиента и внутренним отверстием уретры из оставшихся лоскутов стенки мочевого пузыря, при тотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют соустье между культей реципиентного и стенкой донорского мочеточников по типу конец в бок, а затем герметично соединяют мочеточник трансплантата с реципиентной уретрой. 2 з.п. флы. fe

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 09 В 23/28

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4938040/14 (22) 20.05.91 (46) 15.01.93. Бюл, N.. 2 (71) Донецкий государственный медицинский институт им, М,Горького (72) А.Г,Кот, С.В.Кичатый, Т.А.Гавриленко, С,Н.Трубеко и И.Ю,Кнуров (56) Авторское свидетельство СССР

N 1649594, кл. G 09 В 23/28, 1989. (54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ В ГИСТОСОВМЕСТИМОМ ПОЧЕЧНОМ ТРАНСПЛАНТАТЕ .(57) Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине.

Сущность изобретения: удаляют из реципиентного организма одну интактную почку на стороне, противоположной аллотрансплантации донорской, перемещают донорскую аллогенную почку в таз реципиента. формируют соустье между реципиентным и донорИзобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к патофиэиологическим проблемам трансплантологии и предназначено для исследования механизмов отторжения пересаженной почки.

Известен способ исследования функциональных нарушений в почках бесфистуль.ным методом, при реализации которого оперативным путем ликвидируют ре.,ервуар, мочевого пузыря субтотальной его резекцией, лишают культю мочевого пузыря его запирательного механизма рассечением внутреннего уретрального сфинктера и . герметично сшивают над последним и усть Ы 1788518 А1 ским мочеточниками, определяют в моче маркеры нефроальтерации, при исчезновении которых в очередной мочевой пробе устанавливают первичное "выключение трансплантата, а при повторном их появлении — "включение" последнего. При этом анастомозируют нижний отдел реципиентного мочеточника с культей мочеточника трансплантата по типу "бок в конец", а затем при субтотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют герметичный канал между устьем мочеточника реципиента и внутренним отверстием уретры йз оставшихся лоскутов стенки мочевого пузыря, при тотальном удалении резервуара мочевого пузыря формируют соустье между культей реципиентного и стенкой донорского мочеточников по типу "конец в бок", а затем герметично соединяют мочеточник трансплантата с реципиентной уретрой. 2 э.п. флы. ями обеих мочеточников оставшиеся лоскуты стенок мочевого пузыря в виде узкого канала.

В результате воспроизведения модели устанавливается беспрепятственное непрерывное выведение образующейся в почках мочи во внешнюю среду через естественный анатомический путь — мочеиспускательный канал, благодаря чему предоставляется возможность динамически оценивать количественный и качественный состав выделяющейся мочи в условиях моделируемой патологии почек.

1788518

Известен также способ экспериментального исследования нарушений в почечном трансплантате, при осуществлении которого перед взятием проб мочи из реципиентного организма удаляют обе почки с мочеточниками и мочевым пузырем до его шейки, пересаживают донорскую почку с мочеточником на подвздошные сосуды реципиента, после чего мочеточник транс. плантата герметично соединяют с мочеиспускательным каналом реципиента.

Недостатком способа является то, что он не позволяет исследовать экскреторные проявления и механизмы нефропатии отторжения, особенно терминальных ее стадий, поскольку нарушения азотистого и водно-электролитного баланса в условиях прогрессирующего криза отторжения развиваются раньше, чем наступает "почечная смерть" трансплантата. Закономерная в этих условиях гибель животного с единственной почкой-трансплантатом не позволяет оценить регистрируемые "на выходе" терминальные экскреторные симптомы на предмет обратимости криза отторжения, что имеет большую научно-практическую ценность. Таким образом, проведению точного и информативного исследования нефропатии отторжения гистонесовместимого почечного трансплантата препятствуют системные нарушения и гибель животного-реципиента, ограничивающие исследовательскую глубину эксперимента.

Цель изобретения — повышение точности и информативности исследования за счет сохранения жизни реципиента в условиях развившегося криза отторжения нефротрансплантата.

Цель достигается тем, что после удаления из организма реципиента одной из интактных почек преднамеренно сохраняют в ортопозиции вторую интактную почку на стороне пересадки донорской аллопочки и после ликвидации резервуарной функции мочевого пузыря формируют соустье между реципиентным и донорским мочеточника- ми, после чего определяют в непрерывно выделяющейся моче маркеры нефроальтерации, при исчезновении которых в очередной мочевой пробе устанавливают первичное "выключение" отторгающегося трансплантата, а при повторном их.появлении — "включение" последнего.

Способ осуществляется следующим об-. разом.

Удаляют из реципиентного организма одну интактную почку и пересаживают у ре-, ципиента резервуарную функцию мочевого пузыря субтотальной или тотальной его резекцией и формируют соустье между реципиентным и донорским мочеточниками, Герметиэируют нижеобразуемое мочеточниково-мочеиспускательное соеди5 нение на месте ликвидированного резервуара мочевого пузыря и наблюдают непрерывное мочевыделение через уретру из трансплантата и интактной почки. Исследуют мочевые пробы в динамике развиваю10

55 щегося криза отторжения, определяя в них маркеры нефроальтерации до момента их исчезновения из очередной порции, по которому устанавливают первичное "выключение" нефротрансплантата. В случае повторного появления маркеров нефроальтерации в выделяющейся моче диагностируют обратимое течение криза и включение" нефротрансплантата.

Пример 1. У беспородной собаки осуществляли забор донорской почки вслед за перфузией трансплантата ин ситу через почечную артерию. "Отмытую" почку консервировали бесперфузионным методом в охлажденном до 4СС растворе "Евроколлинз", У собаки-реципиента в период консервации донорской почки под наркозом через полную срединную лапаротомию про-. извели правостороннюю нефрэктомию, удалив почку с мочеточником во всю его длину, Затем субтотально резецировали мочевой пузырь вместе с устьем мочеточника удаленной почки, оставив вокруг второго устья и внутреннего отверстия уретры короткие лоскуты стенок пузыря. Затем произвели типичную гетеротопическую трансплантацию консервированной донорской аллопочки на подвздошные сосуды на стороне оставшейся интактной почки реципиента, т.е. слева.

Через наружное отверстие мочеиспускательного канала ввели в восходящем направлении гибкий катетер, который далее через внутреннее отверстие провели в устье и далее в просвет левого реципиентного мочеточника. В нижней трети последнего непосредственно над концом введенного катетера продольно рассекли стенку мочеточника и вывели конец катетера наружу.

Конец культи мочеточника трансплантата одели на конец катетера и продвинули его к предобразованному отверстию реципиентного мочеточника, сшив оба просвета на катетере в виде межмочеточникового соустья по типу "бок в конец" атравматичными несквозными. швами. Не извлекая катетера, над последним сшили ранее выкроенные лоскуты мочевого пузыря в виде узкого герметичного канала между устьем оставшегося левого мочеточника и внутренним отверстием уретры. Убедившись в герметичности обоих мест соединения новообразо° .с, 1708518

15

25

35

90 некротизированных и некробиотиче- 40 ски измененных канальцевых клеток, в связи с чем под наркозом осуществили ванного мочевого тракта, катетер извлекали, тотчас получив из наружного отверстия мочеиспускательного канала капельное непрерывное мочевыделение. В выделяемой через единый канал интактной почкой и аллотрансплантатом моче ежедневно в посттрансплантационном периоде исследовали содержание маркеров повреждения почечной паренхимы — специфических белковых фракций, активность нейтральной глюкозидазы и гексозаминидазы, концентрации которых по мере прогрессирования нефропатии отторжения существенно изменялись. Динамическая регистрация указанных параметров позволила установить, что "почечная смерть" трансплантата наступила íà II-e сутки, когда после прогрессирующего нарастания концентрации маркеров нефроальтерации вплоть до последней пробы, в очередной отметили отсутствие этих веществ, что отражало "отключение" пересаженной почки как экскреторного органа. Выделяющаяся из интактной реципиентной почки моча практически не содержала патологических примесей и по результатам анализов была близка к нормальной. Опытное животное при этом сохраняло относительно удовлетворительное состояние и имело признаки полного заживления операционной раны брюшной стенки. В течение последующих суток по повторным исследованиям порций мочи признаков "включения" зкскреторной функции нефротрансплантата не отметили, в связи с чем для морфологической верификации "почечной смерти" произвели транскутанную нефробиопсию трансплантата иглой ВНИИКиЭХ. При светооптическом исследовании биоптата обнаружили около трансплантатэктомию через нижний левосторонний трансректальный доступ. Реципиент после удаления трансплантата остался живым. Комплексное морфологическое исследование удаленного трансплантата выявило в нем все признаки, характерные для клеточного (тубуло-интерстициального) типа опоржения пересаженной аллопочки, Пример 2. Забор донорской почки с мочеточником во всю его длину вместе с концевым внутрипуэырным сфинктером осуществили у беспородной собаки с последующей консервацией трансплантата бесперфузионным методом в растворе

"Евроколлинэ". В ходе консервации у собаки-реципиента под наркозом удалили правую почку с мочеточником во всю длину и

55 мочевой пузырь вместе с юкставеэикальным отделом левого мочеточника. отрезав последний ниже уровня подвздошных сосудов реципиента. Консервированную аллопочку пересадили в таз реципиенту анастомозированием ее сосудов с подвздошными. Затем в просвет мочеточника пересаженной почки в восходящем направлении до юксталоханочного его отдела ввели мочеточниковый катетер М 6, где на кончике катетера произвели продольную уретеротомию около 5 мм. Через сформированное отверстие конец катетера провели в просвет культи реципиентного мочеточника и, адаптировав оба отверстия на используемом каркасе, сформировали донорско-реципиентное межмочеточниковое соустье

"конец в бок" атравматичными адвентициально-мышечными швами. В завершение воспроизведения модели конец мочеточника трансплантата с помощью второго конца используемого "каркасного" катетера внедрили в реципиентную уретру до легкого натяжения, герметизировав место стыка мочеточника трансплантата с реципиентным мочеиспускательным каналом одним рядом поверхностных кетгутовых швов. Катетер извлекли через наружное отверстие уретры и тотчас зарегистрировали наружное непрерывное мочевыделение. В посттрансплантационном периоде ежедневно исследовали пробы мочи на предмет выявления в ней маркеров нефроальтерации— специфических белковых фракций и активность нейтральной глюкозидазы и гексоэаминидазы. Наблюдаемый в динамике криз отторжения завершился "почечной смертью" трансплантата на 6 сутки, когда в очередной порции мочи исчезли резко возросшие накануне параметры маркеров повреждения почечной ткани, что указало на первичное "выключение" трансплантата.

Животное оставалось при этом в относительное удовлетворительном состоянии: отмечали лишь пиретическую реакцию и легкий озноб в течение двух суток, На 2 сутки под наркозом последовательно произвели нефробиопсию трансплантата, морфологическую экспресс-диагностику жизнеспособности трансплантата и некротрансплантатэктомию. В гистопрепаратах удаленного трансплантата выявили массивную инвазию почечной стромы лимфоцитами, распространенный тубулонекроз, отечные изменения стенок артериол, на основании которых диагностировали оструЮ нефропатию отторжения смешанного (сосудистоклеточното) типа, Сразу после некротранспиантатэктомии однопочечному реципиенту произвели ретранспиантацию

1788518

Составитель А.Кот

Техред М.Моргентал

Редактор

Корректор М.Керецман

Заказ 74, Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 аллопочки по вышеописанной методике.

Сверхострое отторжение ретрансплантированной почки спровоцировали ежедневным введением препарата "У" и по экскреторным знакам выделяющейся мочи к 3 суткам зарегистрировали смерть трансплантата, которую подтвердили морфологическими . иследованиями. Животное-реципиент осталось при этом живым. блатодаря наличию в организме собственной интактной почки, которая к этому сроку в момент ревизии и санации брюшной, полости перед ушивани.ем операционной раны уже имела явные признаки компенсаторной гипертрофии.

Способ апробирован и использован при исследовании патогенетических механизмов финальных стадий нефропатии отторжения на 9 беспородных собаках самцах в

Донецком мединституте.

Изобретение целесообразно использо вать для изучения патогенеза, а также оценки эффективности корригирующих воздействий на течение и обрат.имость отторжения гистонесовместйм почечного трансплантата.

Формула изобретения

1. Способ исследования нарушений в гистосовместимом почечном трансплантате, включающий удаление из реципиентного организма одной интактной почки, пересадку аллогенной донорской почки в таз реципиента, ликвидацию у него резервуарной функции мочевого пузыря, восстановление непрерывности мочевыводящего тракта трансплантата формированием герметичного мочеточниково-мочеиспускательного соединения с последующим изучением в динамике проб выделяющейся иэуретры мочи,отл ича ю щий ся тем, что, с целью повышения точности и информативности исследования за счет сохране5 ния интактной почки реципиента и его жизни в условиях развившегося кризиса отторжения нефротрансплантата удаляют интактную почку на стороне, противоположном аллотрансплантации до10 юрской, формируют соустье между реципиентным и донорским мочеточниками, а затем определяют в моче маркеры нефроальтерации и при их исчезновении в очередной мочевой .пробе устанавливают

15 первичное "выключение" трансплантата, а при их повторном появлении "выключение" последнего, 2. Способ по и. 1, о тл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью снижения травматичности

20 операции при субтотальном удалении ре, зервуара мочевого пузыря, формируют соустье между нижним отделом реципиентного мочеточника и культей мочеточника трансплантата по типу "бок в ко25 нец", а затем герметизируют соустье мочеточника реципиента с внутренним отверстием уретры лоскутами стенки мочевого пузыря, 3. Способ по и. 1, отл ич а ю щи йс я

30 тем, что, с целью снижения травматичности операции при тотальном удалении резервуара мочевого пузыря, формируют соустье между культей реципиентного и стенкой донорского мочеточников по типу "конец в

35 бок", а затем герметично соединяют мочеточник трансплантата с реципиентной уретрой.