Способ количественного определения гамма- глобулина

 

ОП ИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сова Советских

Содиалистичесчих

Республии

Зависимое от авт. свидетельства №

Кл. 42/, 3/08

Заявлено 19.VIll.1965 (№ 1024450/31-16) с присоединением заявки №

МПК G Оlп

УДК 543.062:612.398.132 (088.8) Комитет по делам иаобретекий и открытий лри Совете Министров

СССР

Приоритет

Опубликовано ОЗ.Х.1966. Бюллетень № 19

Дата опубликования описания 31.Х.1966

Г :(I

А. Б. Габрилович, С. A. Яковлева и T. П. Сахарова Г,-; ..;:(Ростовский научно-исследовательский институт эпи1 йисф ощ1т, ." микробиологии и гигиены

I;.f g 110т, Авторы изобретения

Заявитель

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАММАГЛОБУЛ И НА

Предмет изобретения

Известны способы количественного определения гамма-глобулина в растворе после осаждения посторонних белков этакридином при рН ниже 10. Указанные способы недостаточно чувствительны и не позволяют определять концентрацию гамма-глобулина в разбавленных (ниже 0,2%) его растворах.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что рН надосадочной жидкости, после отделения посторонних белков этакридином, доводят до 10,6 и определяют концентрацию гамма-глобулина по степени мутности. Такая методика определения позволяет определять гамма-глобулин при его концентрации в растворе от 1 мг/л и выше.

Для определения концентрации гамма-глобулина сначала осаждают посторонние белки. Осаждение производят при рН 9,9, ионной силе 0,115, концентрации этакридина 1% и температуре 20 — 25 С. Продолжительность осаждения 10 — 20 мин. Надосадочную жидкость после центрифугирования смешивают с карбонатом натрия для получения рН 10,6, оставляют на 2 час и затем турбидиметрируют.

Оптимальные условия осаждения гаммаглобулина соответствуют ионной силе 0,253.

Для выполнения определения используют следующие реактивы: 2% -ный водный раствор этакридина; карбонатбикарбонатная буферная смесь, содержащая в 100 мл раствора

30,7 мл 0,4 М раствора углекислого натрия и 69,3 мл 0,4 М раствора бикарбоната натрия; раствор углекислого натрия 0,5 моль;

0,85%-ный раствор хлористого натрия; фоновый белковый раствор, содержащий 10 мг/л белка и 0,85% хлористого натрия.

Пример. В пробирку последовательно вносят 0,1 мл фонового белкового раствора, 4 мл испытуемого раствора, содержащего

10 10 — 600 мкг гамма-глобулина (более концентрированные растворы разводят 0,85%-ным хлористым натрием), 0,9 мл буферной смеси и 5 мл раствора этакридина. Через 5 мин после перемешивания выпавший осадок уда15 ляют цептрифугированием в течение 10 мин при 6000 об .тин; 9 мл надосадочной жидкости быстро смешивают с 1 мл раствора углекислого натрия, переносят в кювету и оставляют на 2 час при 37 С. Во вторую кю20 вету наливают контрольную пробу, приготовленную таким же образом, но с использованием вместо испытуемого раствора 4 мл раствора хлористого натрия. Турбидиметрию проводят на светофильтре 500 — 560 ммк.

25 Расчет результатов производят по предварительно построенной калибровочной кривой.

30 Способ количественного определения гамма-глобулина в растворе после осаждения

186756

Сос авитель В. A. Таратута

Редактор Л. и. Пименова Техред T. Il. Курилко Корректоры: Т. Б. Костиков» и Г. Е. Опарина

Заказ 3281/7 Тираж 1175 Формат бум, 60X90 /в Объем 0,1 изд. л Подписное

111114ИП11 Ко.-нтет,". по делам пзобретенпй и открытий при Совете Министров C<,СР

"1оскиа, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 посторонних белков этакридипом при р1I ниже О, отличаюшийсн тем, что, с целью у величения чугствительности, р11: адосадоч1ои ;кндкости,оводят до 10,б и определяют концентрацию гамма-глобулина по степени мутности