Питательная среда для культивирования sтrертососсus species том 1606-продуцента антибактериального препарата томицид

 

Использование: в микробиологической промышленности для получения антибактериального препарата томицида. Сущность изобретения: в качестве питательной основы в ферментационной среде используют перевар соединительной ткани сельскохозяйственных животных. Штамм-продуцент томицида Streptococcus cpecies ТОМ 1606 культивируют на питательной среде следующего состава г/л: ацетат натрия 5: глюкоза 1; перевар соединительной ткани сельскохозяйственных животных с концентрацией 250 мг% аминного азота 1 л. 3 табл., 1 ил. (Л С

Ф

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 1/00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4913602/13 (22) 04.12.90 (46) 07,04.93. Бюл. М 13 (71) Научно-исследовательский институт, вакцин и сывороток им. И,И. Мечникова (72) Л.П.Блинкова, Н.И.Ершова, М.Ю.Зотина и Н,В,Щербатых (73) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им, И.И.Мечникова

РАМН. (56) Блинкова Л.П., Бутова Л.Г., Ершова 3.И.

Влияние экстрактивных веществ на рост

Streptococcus specIes TOM 1606-продуцента томицида. — Прикладная биохимия и микробиология, 1980, т. 16, вып. 5, с. 735-740.

Изобретение относится к микробиологической промьншленности и может быть использовано в производстве антибактериального препарата томицид.

Цель изобретения — снижение себестоимости томицида, повышение его активности.

Цель достигается тем, что в известной среде в качестве основы используют перевар соединительной ткани сельскохозяйственных животных, Приготовление перевара соединительной ткани.

Соединительную ткань (отходы от производства мясных питательных сред) отмывают, помещают в водопроводную воду в соотношении 1:2, вываривают на слабом огне в течение 5 ч. фильтруют, стерилизуют,. ЬЫ, 1808006 А3 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ STREPTOCOCCUS SPECIES

TOM 1606 — ПРОДУЦЕНТА АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ТОМИЦИД (57) Использование: в микробиологической промышленности для получения антибакте, риального препарата томицида. Сущность изобретения: в качестве питательной основы в ферментационной среде используют перевар соединительной ткани сельскохозяйственных животных, Штамм-продуцент томицида Streptococcus cpecies TOM 1606 культивируют на питательной среде следующего состава г/л; ацетат натрия 5: глюкоза

1; перевар соединительной ткани сельскохозяйственных животных с концентрацией

250 мго аминного азота 1 л. 3 табл., 1 ил.

1 автоклавированием при 112 С в течение 30 мин. Хранят перевар при 4-6 С. IQQ

Перевар соединительной ткани содер- () жит, : общий азот 4,6; аминный азот 2,5, l(X) пептон 60, полисахариды 0,5; липиды 2,5; хлориды 0,2, рН 7;4.

Приготовление питательной среды.

На 1000 мл перевара соединительной ткани добавляют 5 г ацетата натрия и 1 г глюкозы. рН готозои среды доводят 20д-, дд ным раствором NaOH до 7,4, Для оценки !(,Д влияния перевара соединительной ткани на рост бактерий и активность синтезированного ими томицида использовали среды, в состав которых входит перевар соединительной ткани в количестве 25, 50. 100 .

Пример 1, Пепсин-пептон 500 мл, МяСНая ВОда 250 МЛ, ПЕрЕВар СОЕдИнр1тЕЛЬ1808006 ной ткани 250 мл, ацетат натрия 5 г/л, рН

7,4, Пример 2, Пепсин-пептон 250 мл, мясная вода 250 мл, перевар соединительной ткани 500 мл, ацетат натрия 5 г/л, глюкоза 1 г/л, рН 7,4, Пример 3. Пепсин-пептон -, мясная вода -, перевар соединительной ткани 1000 мл, ацетат натрия 5 г/л, глюкоза 1 г/л, рН

7,4.

Среды стерилизовали при 112 C 30 мин.

В качестве контроля использовали ереду-прототип. Штамм-и родуцент томицида

Streptococcus species ТОМ 1606.

Посевной материал готовили путем трехкратного пассирования культуры штамма-продуцента. пассаж — 18 ч, il пассаж—

6 ч, 11i пассаж — 18 ч культивирования при

37 С на среде-прототипе. После этого исследуемые варианты сред засевали культурой в посевной дозе 10% от исходного объема (50-100 млн/мл) и .инкубировали при 28 С 72 ч(ферментация). Для улучшения синтеза во все варианты добавляли 1 % сахарозы, Качество сред оценивали по следующим параметрам: конечная концентрация клеток, продукция томицида (ед, активности). Концентрацию клеток в культуральной жидкости определяли по оптической плотности (ОД измеряли на ФЭК-5ПМ), по количеству клеток в 1 мл среды (подсчет клеток в камере Тома). Активность томицида, полученного в результате ферментации, определяли методом двухкратных серййных разведений томицида с последующим добавлением в пробирки индикаторной культуры

Mi rococcus luteus 2665 в концентрации

10 -10 клеток/мл. Титром томицида считали последнее разведение, в котором отсутствовал рост индикаторной культуры.

Характеристики роста и синтеза популяции Streptococcus species TOM 1606, полученные в четырех опытах, представлены в табл. 1.

Проведено сравнение результатов, полученных при культивировании на исследуемых вариантах сред, с результатами, полученными на среде-прототипе. Достоверность различий сравниваемых результатов оценивали с помощью критерия

Сть юде нта.

Статистический анализ характеристик ротса представлен в табл.2. Как видно из

"0 табл. 2, рост бактерий на всех вариантах сред достоверно не отличается от контроля.

Статистический анализ характеристик синтеза томицида представлен в табл.3. Как видно из табл.3 и диаграммы 1, замена компонентов среды-прототипа на перевар соединительной ткани приводит к увеличению активности томицидэ. Причем чем больше перевара соединительной ткани присутствует в среде, тем выше активность томицида

20 (см. диаграмму 1). Достоверное. повышение активности по отношению к контролю наблюдалось при полной замене пепсинпептона и мясной воды на перевар соединительной ткани (см. табл. 3)

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования Streptococcus species ТОМ 1606 — продуцента антибактериального препарата томицид, содержащая ацетат натрия, глюкозу и жидкую питательную основу, о т л и ч аю щ а я с я тем, что, с целью повышения активности томицида, в качестве жидкой питательной основы она содержит перевар соединительной ткани сельскохозяйственных

35 животных с концентрацией 250 мг% аминного азота при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Ацетат натрия 5

Глюкоза 1

Перевар соединительной ткани сельскохозяйственных животных с концентраций

45 250 мг% аминного азота 1л

1808006

Теблицв 1

Ростовые w биосинтетические свойстве исследуемых среди среды-прототипе

Опыт I Опыт II Опыт !И

Опыт IV

ОД

Коп клеток в1 мл

Активность том.

ОД

Активность том.

Кол-во an. в l мл

Кол-во an в 1мл

Активность том.

ОД

ОД

Кол-во кл. в 1 мл

236.10 64-128

1,93 192. 1О

104. IO

180 10

128

1,96

1.01

Контроль

Среда1.48

1,44

76.10

70 10

128

ПСТ - перевкр соединительной ткани инительной ткани

Табли

- перевар соединительной ткани прототип

Пример 1

25!1 ПСТ

Пример 2

50! ПС Г

1!ример 3

100 ПСТ

l. 18

1,18

1.18

1. 16

1.04

240 10 l70.10

200 10

200 10

210 10

240.10

250 10

64

64

128

128

128

64

256

1.84

1.68

1,88

1.48

120 10

112.10

106.10

78 10

128

64

64

1.88

l 80

1,761,64

1,76

2.32

2.44

220 !О

188 Ч 0

200 IO !

88 1О

216 10

224.10

192 10

64

128

128

128

128

126

128

1,92

1.68

1.68

2.16

2,16

2.12

224.10

248 10

258.10

264 10

272 10

224 10

187 10

64

128

128

128

128

256

258

1808006

d% . 29,4 уд%

ФУ%

% еадерииния гкредара аждиюмк тмаои 8

Ул иуламиВироВсямР

Составитель Л.Блинкова

Редактор Л.Волкова Техред M.Моргентал Корректор П.Гереши

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1394 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5