Способ получения полимиксана

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения полисахарида пол- 5имиксана. Цель изобретения - получение препаратов полисахаридов, лишенных спорового материала штаммов-продуцентов, что важно для пищевой промышленности и медицины. Сущность изобретения заключается в использовании штамма Вас. polymyxa ВКПМ В-4902 и выращивании этого штамма на питательной среде, содержащей в качестве источника азота только источник аммонийного азота, что приводит к утрате этим штаммом способности спорообразования. Зтабл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si>s С 12 P 19/04

ГОСУДАРСТВЕН.ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4847925/13 (22) 06.07.90 (46) 07.05.93. Бюл. ЛЬ 17

PS) В. А. Болоховская,-О. В. Нагорная и H. Б. Мартынюк (56) Авторское свидетельство СССР

N 1698293, кл. С 12 P 19/04, 1989; (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИМИКСАНА (57) -)изобретение относится к биотехнологии и касается получения полисахарида пол.имиксана. Цель изобретения — получение

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения полисахарида полимиксана, находящего применение в кондитерской промышленности (при приготовлении кремов, желе), в парфюмерии (в производстве шампуней, косметических средств), в нефтехимической промышленности (для повышения нефтеотдачи пластов), Цель изобретения — получение полимиксана, не содержащего спор штаммаи родуцента.

Поставленная цель была достигнута в результате того, что в качестве продуцента использовали штамм Вас. polymyxa 1459-Л, а выращивание его осуществляли на среде, содержащей источник аммонийного азота, например сульфат аммония.

Исследованиями было установлено, что штамм Вас. polymyxa 1459-Л не образует спор при культивировании на питательной среде, в которой в качестве источника азота использован источник аммонийного азота, При использовании в качестве источника азота источников органического и нитратного азота культура спорулировала, Реэульта Ж 1813784 А1 препаратов полисахаридов, лишенных спорового материала штаммов-продуцентов, что важно для пищевой промышленности и медицины. Сущность изобретения заключается в использовании штамма Вас. polymyxa

BKflM В-4902 и выращивании этого штамма на питательной среде, содержащей в качестве источника азота только источник аммонийного азота, что приводит к утрате этим штаммом способности спорообразования.

3 табл. ты проведенного исследования представлены в табл. 1.

Выращивание культуры проводили на среде, аодержащей, мас. . гидролизованный кукурузный крахмал 3,0; однозамещенный и двухзамещенный фосфат калия по

0,05; сульфат магния 0,02; хлористый кальций 0,02. Культивирование проводили в течение 72 ч при температуре 28 1 С и рН среды 7,0 на круговой качалке, делающей

220 об/мин;

Штамм Вас. poiymyxa 1459-В, применяемый в известном способе, образовывал споры при выращивании на всех исследованных средах.

По сравнению с известным способом предложенный способ-обеспечивает практически одинаковый выход полисахарида при несколько, меньшей длительности процесса. Сравнение предложенного способа с известным способом по ocHODHblM показателям приведено в табл. 2.

Поставленная цель — предотвращение загрязнения целевого продукта споровым материалом продуцента — достигается на.

1013784

4 средах различного состава, содержащих источник аммонийного азота как единственный источник азота, и подтверждается,, приводимыми ниже примерами. В равной мере может быть использован сульфат или хлорид аммония. При использовании нитрата аммонил возможно частичное спорообразование.

Выделение полимиксана иэ культуральной жидкости осуществляют обычно ис- 10 пользующимися для этого приемами.

Отличительные приемы предложенного способа — использование штамма Вас.

polymyxa 1459-Л и культивирование этого штамма на среде, содержащей источник ам-. 15 монийного азота как единственный иСточник азота —. для получения полисахарида, не содержащего спарового материала продуцента. ранее в технологии полисахаридов не использовались. Положительный эффект 20 достигается только при совместном испольэовании обоих этих приемов. l lO этим при-. чинам заявитель считает; что предложенный способ соответствует критериям существенных отличий,. 25

Более подробно сущность предложенного способа поясняется следующими примерами, Пример 1. Культурой Вас. poiymyxa

1459-Л, смытой с косяка картофельного ага- 30 ра, засевали среду, содержащую, масР/: гидролизованный кукурузный крахмал .1,5 по РВ: кормовые дрожжи 0,75; одноэамещенный фосфат калия О,О5; двухэамещенный фосфат калил 0,05; сульфат магния 0,02; 35 хлористый кальций 0,02; углекислый кальций 0,75 и вода до 100.

Предварительно среда была разлита в колбы емкостью 750 мл, в каждую колбу вносили по 200 мл питательной среды. 40

Кульгивирование осуществляли на качалке при температуре 28 + 1 С и числе оборотов качалки 220 об/мин. Начальный рН среды составлял 7,2; выращивание продолжалось 17 ч, 45

Полученная культуральная жидкость была использована в качестве посевного материала для последующей ферментации, Ферментацию осуществляли в колбах объемом 750 мл. В каждую колбу было внесено 50 по 200 мл питательной среды, содержащей, мас.$: гидролизованный кукурузный крахмал 3.0 по РВ; сульфат аммония 0 — 0,5, однозамещенный и двухзамещенный фосфат калия по 0,05; сульфат магния 0,02, хлористый кальций 0,02, углекислый кальций

0 75 и вода до 10О..Начальный рН среды 7 1, посевного материала вносили по 5 об,f в каждую колбу. Культивирование проводили на качалке при 220 об./мин при температуре28 10C, е

Через 72 ч культивирования были получены следующие результаты, представленные в табл. 3, Пример 2. Посевной материал был получен, как и в примере 1, но в аппарате объемом 1 куб, м.

Культивирование осуществляли в аппарате объемом 6,3 куб; м при использовании среды следующего состава, мас.$: гидролизованный кукурузный крахмал 3,0; сульфат аммония 0,1; однозвмещенный и двухзамещенный фосфат калия по 0,05; хлористый кальций 0,02; сульфат магния 0,02 и вода до

100 j,. Культивирование длилось 40 ч при температуре 28 и 1 С, . Кмоментузавершенияферментациисо- держание полисахарида в культуральной жидкости равнялось 9,2 г/л, вязкость культуральной жидкости -110 сП.,Споры в культуральной жидкости и в высушенном препарате полисахарида отсутствовали.

Таким образом, предложенный способ имеет определенные преимущества по сравнению с известным способом, который одновременно может рассматриваться и как способ-прототип и как базовый объект сравнения.

Формула изобретения

Способ получения полимиксана путем культивирования штамма-продуцента вида

Bacillus polymyxa на питательной среде, содержащей источники углерода и азота, с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью предотвращения загрязнения целевого продукта споровым материалом продуцента, в качестве продуцента используют штамм Bacillus polymyxa ВКПМ В-4902, а культивирование осуществляют на среде. содержащей в качестве источника азота сульфат аммония, 1813784

Таблица

Таблица 2

Известный способ.

Предложенный способ

Показатель лаб. условия

О лаб, условия

17-20

10-15

10-15

56-72

36 48

48-72

28 -2

28+ 2

7,0 "- 0,2

7,0 + 0,2

70й 02

7,0 - 0,2

Отсутств, До 10 ф, 20

Отсутста.

Таблица 3

Накопление полимиксана на стадии биосинтеза, г/л.

Оптимальная длительность процесса, культивирования.Оптимальная температура, С

Оптимальный рН

Наличие спор в готовом продукте, $ от сухой массы

48-72 "

l опытно-пром. условияI

17-24 опытно-п ром, условия