Способ получения 16, 17-ацетальзамещенных прегнан-21- овой кислоты в виде их стереоизомеров

 

(в)Я (и) 1839673 ЛЗ (я) е давор

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ, „. -""" 6фд

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН (21) 4028689/04 (22) 18.12.86 (31) 85 85060) 5 (32) 19.1285 (33) SE (48) 30,12.93 Ьол. Na 48-47 (71) Актиеболагет Драко (SE) (72) Пол Хокя.:s Àíäåðññîí(SE); Пер Туре АндерссонЩ Бенгт Ингмар Аксельссон(ЗЦ; Ральф Пеннар Браттсанд(ЗЕ); Бро Арне Тален(ЬЕ); Ян Вильям

Трофаст(ЗЕ) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 16, 17-АЦЕТАПЬЗАМЦЩЕННЫХ ПРЕГНАН-21- ОВОЙ КИСПОТЫ 8 ВИДЕ ИХ СТЕРЕОИЗОМЕРОВ (57) 1839673

Предметом настоящего изобретения является способ получения 16,17-ацетальзамещенных прогнан-21-оной кислоты общей формулы

СООЦ1

1

Ф C=O

)С

СН2СН СН

0 обладающих ценными фармакологическими свойствам. 15

Целью изобретения является создание новых глюкокортикостероидов, обладающих большой противовоспалительной активностью при местном применении и низкой глюкокортикоидной системной активностью в сравнении с известным аналогом подобного действия — будезонидом, Изобретение иллюстрируется примерами. В приведенных примерах в препаративных хроматографических исследованиях применяется скорость потока, равная 2,5 мл/см ч, Молекулярные веса во всех примерах определяются при помощи электронной ударной масс-спектрометрии, а температуры плавления определяются при помощи микроскопа для определения температуры плавления Leits Wetzler, Все анализы высокоэффективной жидкостной хроматографии выполнялись на колонке

Waters pBondapak С1в(300 3,9 мм для внутреннего диаметра) со скоростью потока 1,0 мл/мин и соотношением этанола и воды

50, 50 и 60:40 в качестве подвижной фазы, если нет специального указания.

Пример 1. Раствор 0,18 г ацетата 40 меди (II) в 100 мл метанола добавляют к раствору 0,825 г (22R)-16а, 17 а -бутилидендиокси-6 а, 9 а -дифтор-11 ф 21-диоксипрегнан-1,4-диен-3,20-диона в 50 мл метанола. Воздух барботирует через реак- 45 ционную смесь в течение 40 мин при комнатной температуре. Большую часть метанола удаляют, а остаток растворяют в

150 мл метиленхлорида, промывают 10%ным водным раствором хлористого аммо- 50 ния и водой, а затем сушат, Остаток после выпаривания осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира, в результате чего получают 0,837 г (22R)-16 а, 17 а-утилидендиокси-6 Q, 9 а -дифтор-11,В -окси-3,20диоксопрегнан-1,4-диен-21-ал-метилполуа цеталя, Чистота, определенная посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии, равна 98,5%.

100 мг этого альдегида растворяют s

1,25 Mll диметилфторамида. К этому раствору добавляют цианистый калий (13 мг), окись марганца (IV) (175 мг), метанол (0,5 мл) и концентрированную уксусную кис:оту (0,1 мл), после чего реакционную смесь г еремешивают в течение 50 мин при комнатной температуре. Окись марганца (IV) удаляют фильтрованием и к фильтрату добавляют 25 мл метиленхлорида. Этот раствор промывают 6%-ным водным раствором карбоната калия и водой, После высушивания растворители выпаривают и остаток рекристаллиэуют из смеси ацетона и воды с выходом 66 мг метил (22R)-16а, 17а -бутилидендиокси-6 а, 9 а -дифтор-11 Р -окси-3,20-диоксопрегнан1,4-диен-21-оата. Чистота, определенная при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии, равна 94,7%. Температура плавления 225-236 С, (а)о = +72,0 С =

=0,400; СН2С!2, Молекулярный вес равен

494, Пример 2. Ацетат меди (II) (0,5 г) добавляют к раствору 1 г (22R)-16 а, 17 а

-бутилидендиокси-6 ct, 9 а -дифтор-11 ф 21диоксипрегнан-1,4-диен-3,20-диона в 100 мл метанола. Эту смесь перемешивают в течение 3-х дней при комнатной температуре, В течение 3-х ч вводят кислород, после чего эту смесь перемешивают еще на протяжении 8 дней. Растворитель выпаривают и остаток растворяют в 300 мл метиленхлорида, промывают 4 х 25 мл 10 -ным раствором гидроокиси аммония, 2 х 25 мл воды, сушат и выпаривают. Остаток очищают посредством хроматографии на колонке из сефадекса LH-20 (72 6,3 см} с использованием хлороформа в качестве подвижной фазы, Фракции 2550 — 3000 мл (А) и 3150 — 3825 мл (В) собирают и выпаривают, Из фракции А получают 102 мг твердого вещества, идентифицированного как метил-(22R)-16 а, 17 а

-бу гилидендиокси-6 а, 9 а -дифтор-11 >3 -окси-3,20-ди оксо и регна н-1,4-див н-21-о ат, и из фракции В получают 586 мг метил-(22R)16а, 17 а-бутилидендиокси-6 к 9 (к -дифтор-1 1 Р, 20-диокси-3-оксоп регн ан-1,4-диен-2 1

-оата.

К раствору 100 мг последнего соединения добавляют 20 мг окиси марганца (IV) и реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч при комнатной температуре. Двуокись марганца (IV) удаляют фильтрованием через целит и растворитель, выпаривают.

Остаток растворяют в хлороформе и очищают хроматографированием ча колонке из сефадекса LH-20 (72 6,3 см) с использованием хлороформа в качестве подвижной фазы, Фракцию 2190-2560 мл собирают, 1839673 выпаривают и повторно очищают хроматографированием на колонке из сефадекса LH20 (72 6,3 см) с использованием смеси гептана, хлороформа, этанола с соотношением 20:20:1 B качестве подвижной фазы.

Фракцию 5130 — 5745 мл собирают и выпаривают с выходом 35 мг метил-(22R)-16 а, 17

Q -бутилидендиокси-6 а, 9 а -дифтор-11 Р

-окси-3.20-диоксопрегнан-1,4-диен-21-оата.

Чистоту определяют посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии, и она равна 95,5, Температура плавления

223-35 С. Молекулярный вес равен 494.

Пример 3. Раствор 0,45 г ацетата меди (II) в 100 мл абсолютного этанола добавляют к раствору 2,0 r (22R)-16 а, 17 а-бутилидендиокси-ба,9а-дифтор-11,0,21-диоксипрегнан-1,4-диен-3,20-диона в 300 мл абсолютного этанола и подвергают взаимодействию, после чего выделяют образовавшийся продукт так, как описано в примере

1, и выход составляет 2,0 г (228)-16, 17

-бутилидендиокси-6 а, 9 а -дифтор-11 Р -окси-3.20-диоксопрегнан-1,4-диен-21-ал-этил и алуа цетал я.

Этот альдегид подвергают взаимодействию в условиях, описанных в примере 1, заменив метанол этанолом, Выход 1,77 r неочищенного продукта, который очищают на колонке из сефадекса LK-20 (76,5 х 6,3 см) с использованием смеси гептана, хлороформа, этанола с соотношением 20:20:1 в качестве подвижной фазы. Фракцию 2655-3150 мл собирают и выпаривают, После рекристаллизации остатка из этанола получают

1,03 г атил-(22R)-16 а, 17 а -бутилидендиокси-6 а, 9 а -дифтор-11 /3-окси-3,20-диоксопрегнан-1,4-диен-21-оата. Чистота, определенная высокоэффективной жидкостной хроматографией, равна 97, Температура плавления 227 — 235 С. (а)р =+67,2 (с = 0,180; CHzCIz). Молекулярный вес равен 508.

Пример 4. Раствор 0,35 г ацетата меди (II) в 150 мл пропанола добавляют к раствору

0,80 г (22R)-16 а, 17 а -бутилидендиокси-6 а, 9а -дифтор-11 р, 21-диоксипрегнан-1,4-диен-3,20-диона в 100 мл пропанола и подвергают взаимодействию. Образовавшийся продукт выделяют так, как описано в примере 1, при этом выход составляет 0,95 г (22R)16 а, 17 а -бутилидендиокси-6 а, 9 а

-дифтор-11 j3 -окси-3,20-диоксоп регна н-1,4диен-21-ал-и ро пил пол уа цетал я.

Этот альдегид подвергают взаимодействию в условиях, описанных в примере 1, заменив метанол пропанолом, Неочищенный продукт очищают на колонке из сефадекса LH-20(76,5 6,3 см) с использованием

55 гептана, хлороформа. этанола с соотношением 20:20:1 в качестве подвижной фазы.

Фракцию 3450-3990 мл собирают и выпаривают. Остаток осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира с выходом

0,38 г н-пропил-(22R)-16 а, 17 а -бутилидендиокси-6 а. 9 а -дифтор-11 /3 -окси-3,20-диоксопрегнан-1,4-диен-21-оата. Чистота, определенная посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии, равна

98,9 . Температура плавления 192 — 195 С. ( а)р2 =+66,4 (с = 0,256; СН2СЬ), Молекулярный вес 522, Пример 5. Раствор 0.45 ацетата меди (II) в 150 мл метанола добавляют к раствору

1,0 г (22R)-16 а, 17 а-бутилидендиокси-ба, 9 а -фтор-11 Р, 21-диоксипрегнан-1,4-диен3,20-диона в 150 мл метанола и подвергают взаимодействию. Образовавшийся продукт выделяют так, как описано в примере 1.

Этот продукт растворяют в 15 мл изопропанола и выпаривают. Эту процедуру повторяют дважды, в результате чего получают 1,2 г (22R)-16 а, 17 а -бутилидендиокси-6 а, 9 а

-дифтор-11 /3 -окси-3,20-диоксопрегнан-1,4диен-21-ал-пропил полуацеталя.

Этот альдегид подвергают взаимоде qствию B условиях, описанных B примере 1, заменив метанол изопропанолом. Неочищенный продукт очищают на колонке из сефадекса LK-20 (71.5 6,3 см) с использованием хлороформа в качестве годвижной фазы. Фракцию 1845-2100 мл собирают и выпаривают с образованием 1,1? г твердого вещества, которое осаждаю из смеси метиленхлорида и петролейного эфира. Выход составляет 0,41 г изопропил(22R)-16 а, 17 а -бутилидендиокси 6 а. 9а

-дифтор-11 Р -окси-3,20-диоксопрегнан-1.4диен-21-оата. Чистота, определенная посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии 96,50ь. Температура пла еления, 198-210 С, (а)р = +62,0 (0.292;

CHzCIz). Молекулярный вес равен 522, Пример 6. Раствор 55 мг ацетата меди (II) в 25 мл метанола добавляют к раствору

200 мг (22R)-16а, 17а -бутилидендиокси-ба, 9а -дифтор-11Р, 21-диоксип регнан-1,4-диен-3,20-диона в 25 мл метанола и подвергают взаимодействию. Образовавшийся продукт выделяют так, как описано в примере 1, при этом выход 250 мл (22R)-16 гк, 17а

-бутилидендиокси-ба, 9 а -дифтор-11 /3 -окси-3,20-диоксопрегна н-1,4-диен-21-ал-метилполуацеталя, Этот альдегид подвергают взаимодействию в условиях, описанных в примере 1, заменив метанол бутанолом. Нео <ищенный продукт очищают на колонке из сефадекса

1839673

15 Н-20 (78,5 2,5 см) с использованием смеси гептана, хлороформа, этанола с соотношением 20:20;1 в качестве подвижной фазы.

Фракцию 610 — 674 мл собирают, выпаривают и осаждают из смеси метиленхлорида и петролейного эфира с образованием 76 мг бутил-(22R)-16 а, 17а -бутилидендиокси-6 а, 9а -дифтор- I 1 Р -окси-3,20-диоксоп регнан l,4-дие н-21-оата.

Фармакология.

Противовоспалительный эффект.

Избирательность в отношении противовоспалительного действия на месте применения в легких было исследовано в моделирующей системе у крысы после внутрибронхиального введения глюкокортикостероида, Введение шариком сефадекса в легкие крыс приводит к бронхиальному и альвеолярному воспалению. Это вызывает интерстициальный отек легких, который увеличивает аес легких, поэтому воспаление можно измерять в виде увеличения веса легких но сравнению с контрольной группой, которой было произведено вливание носителя. Образованию отека легких можно противодействовать путем предварительного лечения глюкокортикостероидами, предпочтительно в результате внутрибронхиального введения или ингаляции, В идеальном случае противовоспалительное действие должно быть достигнуто только в месте применения глюкокортикостериода в легких, а не за пределами этого участка, так как это при продолжительном лечении может привести к ограничивающим лечение системным побочным явлениям.

Дифференциация между действием глюкокорти«остероида в обработанном участке легкого и за пределами этого участка была охарактеризована в следующем протоколе испытаний. Крыс — ОаМеу (225 г) слегка анестезировали простым эфиром, после чего им вводили испытуемый препарат глюкокортикостероида в объеме 0,5 мг/кг только в левую долю легкого. Это достигалось путем введения тонкого и изогнутого стального катетера через рот и трахею а левую долю легкого (выбор этого режима введения только в левую долю был подвержен отдельными экспериментами с использованием сини Эванса, в результате выполнения которых было обнаружено, что более 95 введенного вещества находилось а левой доли и менее 5 — в правой доле легкого). Через тридцать мин вводили суспензию сефадекса в обьеме 1 мл/мг в трахею непосредственно над бифуркацией, 1ак что суспензия достигла как левой, так и

50 правой долей легких, Через двадцать часов крыс убивали, после чего у них отсекали левое и правое легкое и взвешивали отдельно. Также регистрировали вес тимуса. Контрольным группам вводили носитель вместо глюкокортикостероидного препарата и физиологический раствор вместо суспензии сефадекса для определения веса, не защищенного препаратом отека под действием сефадекса, и веса нормального легкого. Для каждого глюкокортикосте роидного и репарата испытывали. по крайней мере, 3 дозы в диапазоне 0,01-10 мг/кг и в отношении каждой 6 параллелей/дозу. Глюкокортикостероиды суспендировали в носителе

CMC-Na 0,75%, твине 80 0,04% и 0,7% NaCI, добавляемой до 100%.

При строго локальном противовоспалительном действии в случае заболеваний дыхательных путей идеальным профилем соединения является такой профиль, который должен противодействовать воспалению в подвергаемой локальному лечению левой доли легкого, а не правой доли легкого, куда сначала попадает глюкокортикостероид по большому кругу кровообращения (после поглощения из левого легкого). Соотношение между требуемой средней эффективной дозой (уменьшающей отек на 50 ) в правой и левой долях легкого может использоваться в качестве параметра для оценки избирательной активности на месте применения. Для идеального глюкокортикостероида это соотношение избирательности должно быть высоким.

Результаты выполненных испытаний приведены в таблице, где в верхней части представлены действия достигаемые ранее известными типами глюкокортикостероидов. Будезонид не обеспечивает какой-либо избирательности для места применения в легком, так как требуемая средняя эффективная доза для левой и правой долей легкого была почти одинаковой (соотношение избирательности 1,5). В случае самой высокой испытанной дозы (0,3 мг/кг) будесонид уменьшает вес тимуса на 22 (р < 0,01).

Ранее известный глюкокортикостериоид

FCB достигает некоторой избирательности, так как уменьшение отека правой доли легкого требует в 2 — 3 раза большей дозы по сравнению с необходимой дозой для торможения отека левого легкого.

Новые соединения по этому изобретению характеризуются гораздо лучшей избирательностью а отношении активности, связанной с подвергнутой местному лечению левой доли легкого. Соотношение избирательности достигает " или даже большего

1839б73

Действия испытанных глюкокортикостероидов в модели сефадекса.

Результаты приведены по отношению к соответствующей контрольной группе, которой вводился сефадекс.

Средняя эффективная доза — требуемая доза глюкокортикостероида, необходимая для уменьшения отека на 50%.

СНО

C=0

Н

:),, cooR

1 н нснсн г г з Корректор Е. Папп

Редактор

Техред М.Моргентал

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Заказ 3412

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 числа величин. С помощью этих соединений можно препятствовать развитию отека легкого. по меньшей мере, на 60 без какоголибо значительного влияния на отек правой доли легкого. При дозе 10 мг/кг соединения в соответствии с примерами 1 и 5 вообще не влияют на вес тимуса, в то время как соединение по примеру 3 при той же дозе вызыФормула изобретения

Способ получения 16, 17-ацетальзамещенных прегнан-21-оновой кислоты общей формулы 1

F в виде их стереоизомеров, где R> npeAставляет прямолинейный или разветвленный C> - Сд-алкил, отличающийся тем, что осуществляют окисление альдегида формулы вает незначительное уменьшение веса тимуса (на 15ь, р < 0,05).

Новые соединения обладают более высокой противовоспалительной активностью на

5 месте применения (значение средней эффективной дозы в левой доле легкого Б5 мг/кг) по сравнению с низкой активностью, продемонстрированной для препарата FCB (10 мг/кг).

F в виде его полуацеталя в присутствии цианид-ионов и спирта формулы

R<0H, где R1 имеет вышеуказанные значения.