Способ определения активности протеолитическихферментов
l9O85l
ОПИСАНИЕ
Союз Советскит
Социалистическит
Республин
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 01.Х!.1965 (¹ 1035112/28-13) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 14.!.1967. Бюллетень № 3
Дата опубликования описания 17.II.1967
Кл. 6а, 22j04
Комитет по делам
МПК С 12k
УДК 663.11:577.15.081 (088.8) изобретений и отнрытий при Совете Министров
СССР ц .А
А. П. Рухлядева и Г. В. Полыгалина
Авторы изобретения
Всесоюзный научно-исследовательский институт ферментной и спиртовой промышленности
Заявитсль
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ
ФЕРМЕНТОВ
0,1702 а n — 10,213
0,1881 1л — 14,528
/П
Известны способы определения активности протеолитических ферментов по степени гидролиза белка. Так, согласно одному из них, на белковый субстрат действуют раствором ферментного препарата, после чего определяют оптическую плотность раствора гидролизата по интенсивности окрашивания присутствуюгцего там тирозина с реактивом Фолина.
По найденному значению оптической плотности судят о степени гидролиза белка.
Предлагаемый способ по сравнению с известными дает более точные результаты определения, он проще и быстрее.
Сущность его заключается в том, что об активности протеолитических ферментов судят по общему количеству продуктов гидролиза белка, определяемому на интерферометре Ilo разности показателей преломления между гидролизатом и контрольным раствором (эталоном). Оба раствора перед определением разности их показателей преломления освобождают от непрогидролизованного белка одним из известных способов, например, путем осаждения раствором трихлоруксусной кислоты с последующей фильтрацией.
Предлагаемый способ заключается в следующем.
На 1%-ный раствор белкового субстрата, например казеина, действуют фгрментным раствором (в соотношении 2: 1) в течение
3 твин прп 30 С. Затем к реакционной жидкости добавляют 4%-ный раствор трнхлоруксусной кислоты для инактивации фермента и осаждения непрогидролизованного белка. Одновременно ставят контрольный опыт, для чего исследуемый ферментный раствор пнактивируют 4%-ным раствором трихлоруксусной кислоты и приливают 1%-ный раствор субстрата, при соблюдении количественного со10 отношения, указанного выше.
Оба раствора выдерживают при 30=C в течение 15 лшн для обеспечения полноты осаждения белка, после чего фильтруют. В прозрачном фильтрате определяют разность пре15 ломления исследуемого и контрольного растворов на интерферометре. По полученному значению разности показателей преломления (Ап) судят о протеолитической активности фермента, подставляя это значение в следу-, 20 ющее уравнение: для грибных препаратов
25 для бактериальных препаратов где П, — активность препарата в принятых
30 единицах;
190851
Составитель М, Андреева
Редактор В. Торопова Техред А. А. Камышникова Корректоры: О. Б. Тюрина и А. М. Смак
Заказ 196/4 Тираж 535 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прн Совете Министров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапунова, д. 2 т — количество взятого для протеолиза препарата в г;
Ли — разность показателей преломления;
0,1702; 10,213; 0,1881; 14,528 — постоянные коэффициенты, найденные экспериментальным путем.
Предмет изобретения
Способ определения активности протеолитических ферментов по степени гидролиза белка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения и ускорения процесса, степень гидролиза белка определяют по общему количеству прогидролизованных продуктов, устанавливаемому на интерферометре
5 по разности показателей преломления между гидролизатом и контрольным раствором (эталоном), при этом оба раствора перед определением разности их показателей преломления освобождают от непрогидролизованного бел10 ка одним из известных способов, например путем осаждения раствором трихлоруксусной кислоты с последующей фильтрацией.
