Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы

 

ОПИСАН ИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Соеетския

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства М

Заявлено 20Х111.1966 (№ 1098225 28-13) 1(л. 6а, 22,04 с присоединением заявки М. 11ПК С 12k

У, К 663.11:576.8.093. .1 (088.8) Приоритет

Комитет по делам изобретений и открытий при Сосете Мииистрое

СССР

Опубликовано 13.Х1.1967. Бюллетень ¹23

Дата опубликования описания 15.1.1968

Авторы изобретения

М. Ф. Гулый, Р. Г. Дегтярь, Ю. В. Чумаченко, Л. С. Лотоцкая, Н. M. Пидопличко, Е. А. Никольская и В. И. Билай

Институт биохимии АН Украинской ССР

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ

КАТАЛАЗЫ И ГЛЮКОЗООКСИДАЗЫ

Известен cfIOc00 получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба Penicillium vitale Pidopl. et Bilai, являющегося продуцентом этих ферментов.

Согласно этому способу, из культуральной жидкости адсорбируют каталазу, отделяют адсорбент с каталазой, например, фильтрацией, выделяют каталазу, например, элюцией и осаждением спиртом.

Затем из культуральной хкидкости (фильтрата), оставшейся после отделения адсорбента с каталазой, адсорбируют глюкозооксидазу, после чего выделяют ее элюцией, осаждают спиртом, растворяют осадок глюкозооксидазы в воде и затем осаждают ацетоном.

Предлагаемый способ проще и дешевле за счет того, что адсорбцию каталазы и глюкозооксидазы проводят на каолине, который задают в культуральную жидкость в два приема при естественных зна еш|ях ее рН 3,4 — 3,6.

В первый прием для адсорбцин каталазы следует задавать 0,5% каолина, а во второй прием для адсорбцни глюкозооксндазы — 2,!о каолина к ооьему культуральной якндкостп.

Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба Penicitlium vitale Pidopl. et Bila!, являющегося продуцентом этих ферментов, закзпочается в следующем.

1(культуральной жидкости естественного рН (3,4 — 3,6) прибавляют каолин в количестве 0,5% к объему жидкости и проводят адсорбцию каталазы в стационарных условиях в течение 15 хин. При содержании в 1 тт,т культуральной жидкости 300 единиц каталазы адсорбируется 95 †10 ее. Каолин с адсорбированной на пем каталазой отделяют центрифугировапием в течение 15 л ик. При этом глюкозооксидаза остается в центрифуге.

1(аталазу, адсорбированную на каолине, элюируют 0,1 лтоль фосфатного буфера с рН

7,2, добавляя 4 объема элюента по отношению к весу взятого каолнна, после чего рН раствора становится равным 6,8 — 6,9. Элюцию проводят при интенсивном перемешивании на протяжении 1 час. Элюат отделяют полутор2о ным объемом изопропилового спирта или ацетона, а затем высушивают.

В центрифугат, полученный после отделения адсорбента с каталазой, добавляют каолнн в количестве 2 jz к ооъему жидкости и

25 адсорбнруют глюкозооксидазу в стационарных условиях прн геремсшнвании в течен е

15 лтин.

Каолин с адсорбированной глюкозооксидазой отделяют центрнфугнрованнем. Адсорбп30 руется 95 — 100% глюкозооксндазы прн со204962

Составитель Г. Ф. Лошкарева

Редактор T. 3. Орловская Техред А. А. Камышникова Корректоры: И. Л, Кириллова и Н. В. Черняк

Заказ 4197/ ;! Тираж 535 Подписное

Ц! П1ИП14 Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр, Сапунова, 2 деpжанин ее в культуралы1ой жидкости до

50 едlмл и при p?l культуральной жидкости

3,4 — 3,6. Глюксзооксидазу элюируют 0,2 моль фосфатного буфера с рН 6,8, прибавляя элюент в количестве 4 объемов по отношению к весу адсорбента. После прибавления элюента рН составляет 6,1 — 6,2. Элюцию глюкозооксидазы проводят при энергичном перемешнвании в течение 1 час. Элюат отделяют 15-минутным центрифугированием. Он содержит

75 — 90»/» адсорбированной глюкозооксидазы.

Вторую элюцию проводят 0,1 моль фосфатного буфера с рН 6,2, прибавляя два объема элюента по отношению к весу каолина. Длительность второй элюции при перемешивании

30 мин. Адсорбируют и элюируют глюкозооксидазу и каталазу при комнатной температуре.

Весь полученный элюат объединяют и осаждают при 0 С двойным объемом этилового спирта (температура спирта — 10 — 12 С).

Осадок отделяют центрифугированием в течение 20 мин, затем растворяют его в воде, 1—

2 раза переосаждают ацетоном при 0 С, снова растворяют в воде и водный раствор высушивают методом лиофильной сушки.

Полу!енные препараты по своей активности, специфичности и другим качествам не уступают препаратам, полученным нз культуральной жидкости прн использовании в качестве адсорбснта окиси алюминия.

Предмет изобретения

1. Способ получения ферментных препаратов каталазы и глюкозооксидазы из культуральной жидкости плесневого гриба Penicillium vitale 1пidopl. et Bilai, являющегося продуцентсм этих ферментов, путем адсороции

10 каталазы из культуральной жидкости, отделения адсорбепта с каталазой, например, центрифугированием, выделения каталазы, например, элюцией и осаждением спиртом, адсорбции глюкозооксидазы из культуральной жид15 кости (центрифугата), оставшейся после отделения адсорбента с каталазой, и последующего выделения глюкозооксидазы элюцией, осаждением спиртом, растворением осадка в воде и осаждением ацетоном, отличающийся

20 тем, что, с целью упрощения и удешевления процесса, адсорбцию каталазы и глюкозооксидазы проводят на каолине, который задают в культуральную жидкость в два приема при естественных значениях ее рН (3,4 — 3,6).

25 2. Способ по п. I, отличающийся тем, что в первый прием для адсорбции каталазы задают 0,5% каолина, а во второй прием для адсорбции глюкозооксидазы — 2»/» каолнна к объему культуральной жидкости