Штамм бактерий pseudomonas aureofaciens для получения стимулятора роста растений

 

Использование: микробиологическая промышленность , производство средств, стимулирующих рост и повышающих урожай растений и касается нового штамма бактерии предназначенного для производства вышеуказанного средства Сущность изобретения: штамм бактерий Psaidomonss aureofadens H16 выделен из ризоплана корневищ пырея ползучего, депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов при ИБФМ АН СССР под номером В-1973Д Для получения стимулятора роста штамм выращивают на среде Альбит-1, содержащей отвар из проростков растений, спиртовой экстракт проростков семян хлористый натрий, гидролизат казеина и воду, в течение 24 - 30 ч фи 28-30°С с аэрацией до титра 2-4x109 кл/мл. Полученную суспензию используют для обработки семяа 1 табл.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации по патентам я товарным знакам (21) 5041824/13 (22) 130592 (46) 30.1093 &оп, Ne 39-40 (71) Акционерное общество "Агат-Кредит" (72) Павулсоне СА; Злотников АК (73) Акционерное общество Агат-Кредит" (54) ШТАММ БАКТЕРИИ cPSEUDOMONAS

АЦВЕОГАС!ЕМ!Ь ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ СТИМУЛЯТОРА РОСТА РАСТЕНИЙ (57) Использование: микробиологическая промышленность, производство средств, стимулирующих рост и повышаацих урожай растений и касается нового штамма бактерий, предназначенного для производства вышеуказанного средства Сущность ((9(((Ц ((((2200012Ù Cl (51) 1 1 30 А 01 N63/00 изобретения: штамм бактерий Рзеодстптж авео(абеле Н16 выделен из ризоплана корневищ пырея ползучего, депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов при ИБФМ АН СССР под номером 8-1973Д, Для получения стимулятора роста штамм выращивакп на среде Альбит-1, содержащей отвар из проростков растений, спиртовой экстракт проростков семян, хлористый натрий, гидролизат казеина и воду, в течение 24 — 30 ч при

28-30 С с аэрацией до титра 2-4х10 кл/мл.

Полученную суспензию используют для обработки семян. 1 табп 2001950 ч

Изобретение относится к микробиологическим средствам, стимулирующим рост и повышение урожая растений, и касается нового штамма бактерий Pseudomonas

aureofaclens, предназначенного для производства биопрепарэта БПМ-Агат-25, способствующего повышению урожая растениЯ.

В специальной научной литературе показано, что некоторые штаммы бактерий, в частности Pseudomonas, обладают комплексом полезных для растений свойств— стимуляция роста и развития растений, защита растений от различных фитопатогенов, улучшение минерального и водного питания растений, повышение урожая.

Известен штамм Pseudomonas sp

ВПКМ 8-34481, способный повышать урожай ячменя на 17,47 по сравнению с контролем.

В патентной и научно-технической лите ратуре не известно штаммов Pseugomonas с широким кругом действия по способности повышать урожай растений.

Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является получение нового штамма бактерий

Pseudomonas aureofaclens, обладающего способностью в составе биопредаратв стимулировать рост растений и повышать урожай, Штамм Pseudemonas aureofaclens H16 выделен из ризоплана корневищ пырея ползучего с использованием селективной среды Кинга 8. Критериями отбора служили следующие свойства!способность угнетать рост грибов, способность стимулировать прорастание семян растений, способность обеспечивать здоровое развитие растений и повышение урожая их при выращивании в условиях нативной почвы.

Состав среды Кинга В, г/л:

Пептон 20

Глицерин 15

Mg SO< х 7Н20 1.5

Агар 15

Штамм Pseudomonas aureofaclens Н16 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов при ИБФМ АН СССР под номером В-1973Д и хранится в коллекции

Центра биозэщиты и биостимуляции растений СП Агат-кредит под N1.

Штамм Pseudomonas aureofaciens ВКМ

В-197ЗД обладает следующими свойствами.

Культурально-морфологические признаки, Грамм-отрицательные бактерии с размером (0,7-0,8) х (2,0-3,0) мкм, слабо подвижные, имеют один жгутик, аэробы, спор не образуют. Клетки прямые или слабо изо35 гнутые, одиночные и в парах. Размеры клеток даны для односуточной культуры. выращенной на среде LB при 30 С.

Штамм хорошо растет как на твердых, 5 так и в жидких средах LB следующего состава: 5 г дрожжевого экстракта, 10 г Na|:I, 10 г бактотриптона мэ 1 л воды, для твердых сред добавляют 15 г эгера.

Кроме этого, штамм хорошо растет ма

10 среде Кинга В, как на твердой с добавлением агэрэ, так и в жидкой. Состав среды

Кинга В г/л: пептон 20; глицерин 15;

М9301 х 7Н20 1,5.

Штамм может расти на синтетической

15 соленой среде М9, как на твердой, так и в жидкой с добавлением глюкозы.

Состав среды М9:

NazHPO4 беэв., г 6

КН2РО4, г 3

20 йаС1, г 0,5

NHgCI, г 1

Глюкоза 40 Jf,, мл 5

0,1 М MgSO4, мл 10

0,1 М CaClz, мл 1

25 Тиамин, мкгl мл 5 рН 68

Также для выращивания штамма может быть использована жидкая или агаризовэнная мясопептонная среда и среда Альбит-1.

Состав среды Альбит-1: . Отвар иэ проростков растений, мл 100

Спиртовой экстракт проростков семян, мл 5

NaCI. г 0,5

Гидролизат казеина. г 10

Н20. л До 1 рн 6,5

40 Колонии ма МПА 2-3 мм в диаметре, круглые. гадкие, блестящие, пастообразной консистенции, желтовато-серые, среда вокруг колоний окрашена в желто-зеленый цвет эа счет диффузии флуоресцирующего пиг45 мента (пиовердима). При культивировании на некоторых средах (молоко, триптоэный агар, селективная среда с иргаэаном) в среду ваделяется желто-оранжевый феназиновый пигмент, растворяемый в хлороформе.

50 Культивирование на твердых средах осуществляют на чашках Петри или косяках в течение 24 ч при 28 — 32 С. Культивирование в жидких средах проводят в колбах при аэрации (качалка 160 об/мин) в течение 24 — 30 ч.

55 Физиолого-биохимические. признаки.

Строгий азроб оптимум температуры роста 28-32 С, растет при 42 С, рН 4,7-9,0, оптимум 7,0.

Отношение к источникам углерода. Активно ассимилирует сахарозу, сорбит, дуль2001950

55 цит, арабинозу. рафиноэу. глюкозу, Иэ глюкозы может образовывать желатин, индол не образуют.

Метаболиэирует органические кислоты, эта нол.

Нитраты редуцирует.

Ассимилирует нитратный и аммонийный азот.

В тесте Хью и Лейфсона проявляет окислительный метаболизм глюкозы, положительные реакции обнаруживает в тестах на каталаэу, оксидазу, 1=аргининдигидролазу, разжижение желатина и пептонизацию молока, образование левана иэ сахарозы, рост в средах с пропионатом, ацетатом, сукцинатом, образование кислоты из глюкозы, L-арабиноэы, галактозы, d-фруктозы, рибоэы, глицерина, мезоинозита, восстановление нитратов до нитритов; отрицательные— на гидролиз крахмала. рост при 39 С и в среде с оксалатом, образование кислоты из мальтоэы, d-ксилозы, рамнозы, раффинозы, этанола. сорбита. адонита.

Отношение к антибиотикам:

Рост бактериальных колоний на агариэованных средах не угнетается в присутствии стрептомицина (50 мкг/мл), гентамицина (20). ампициллина (300), карбеницилина (50), триметоприма (100). хлорамфеникола (10), рифампицина (10).

Штамм бактерий Pseudomonas

aureofaciens ВКМ В-1973Д хранят в 25,ф-ном глицерине при (-20)-+70) С в лиофильно-высушенном состоянии с сахароэо-желатиновым агаром

Штамм Pseudomonas aureofaclens ВКМ

В-1973Д непатогенен.

Испытание штамма Pseudomonas

aureofaclens ВКМ В-1973Д на способность повышать урожай растений было проверено при использовании его в составе биопрепарата БПМ-Агат-25, представляющего из себя свежую культуру данного штамма бактерий.

Пример 1. Получение биопрепарата

Б П M-Агат-25.

Штамм Pseudomonas aureofaclens В КМ

В-1973Д выращивают в жидкой среде Альбит-1, состав которой приведен выше. Штамм бактерий культивируют в течение 24-30 ч при 28-30 С с аэрацией до титра 2-4 х 10 кл/мл.

Биопрепаратом БПМ-Агат-25 обрабатывают семена растений перед посевом, При этом биопрепарат разводят водой 1;100(для зерновых и зернобобовых растений) или

1:50 (для овощных растений) и наносят на семена до полного смачивания их поверхности. Обработка гарантирует попадание на каждое семя 0.5-2,0 х 105 бактерий

Pseudomnnas aureofaclens BKM В-1973Д.

Обработанные семена высевают в течение

10 — 30 ч, оберегая от высушивания на солнце.

Пример ы 2-6 демонстрируют эффект штамма Pseudomonas aureufaclens ВКМ В1973Д на урожай зерновых и зернобобовых растений.

Пример 2, Семена ячменя сорта

"Подольский" обрабатывают биопрепаратом БПМ-Агат-25 в разведении 1:100 и высевают в открытом грунте по 100 семян на делянку размером 1 м (опыт). Параллельно высевают семена ячменя, обработанные водой (контроль). В контроле и опыте по шесть делянок. Урожай сравнивают по весу зерна на делянку. В опыте получают урожай. равный 250,5 г, в контроле 185,6 г. Разница между опытом и контролем достоверна с вероятностью Р=0,05 и составляет 65,9 г (превышение на 35;4).

П р и и е р 3, Семена овса сорта "Скакун" обрабатывают и высевают, как в примере 1.

В опыте получают урожай, равный 186,4 г на делянку. в контроле — 153,0 г. Разница между опытом и контролем достоверна с вероятностью Р=0,05 и составляет 33,4 г (превышение на 22 ),, Пример 4. Семена пшеницы сорта

"Мироновская-69" обрабатывают и высевают, как в примере 1, также учитывают урожай зерна. В опыте получают урожай, равный 218,9 г на делянку, в контроле—

174,1 г, Разница между опытом и контролем достоверна с вероятностью Р=,0,05 и составляет 44.8 г (превышение íà 26 ).

Пример 5. Семена гороха сорта

"Уладовский" обрабатывают и высевают, как в примере 1, также учитывают урожай зерен гороха. В опыте получают урожай, равный 141,8 rна делянку,,в контроле—

123,3 г. Разница между опытом и контролем достоверна с вероятностью Р=0,05 и составляет 18,5 г (превышение на 15)(,).

Пример 6. Семена сои сорта "Висконсин" обрабатывают и высевают, как в примере 1. В опыте получают урожай, равный

120,5 г зерен на делянку, в контроле — 102,9

r. Разница между опытом и контролем достоверна с вероятностью P=0,05 и составляет 17,6 г (превышение на 177ь), Пример ы 7 — 9 демонстрируют эффект штамма Pseudomonas aureofaclens ВКМ

В-1973Д на урожай овощных культур.

Пример 7. Семена капусты сорта

"Ранняя-июньская" обрабатывают биопрепаратом БПМ-Агат-25 в разведении 1:..О, получают из ник рассаду, которую затем высаживают в открытом грунте рядами по 10 шт. расстояние между растениями 50 см, 2001950

25 (56) Авторское свидетельство СССР

N 275600, кл. А 01 N 63/00, 1970, Влияние инокуляции семян растений биопрепарато л БПМ-Агат-25, содержащим штамм Pseudomonas aureofac}ens Ч-16.

Формула изобретения aureofaclens ВКМ В-1973Д для получения

Штамм бактерий pseudomonas стимулятора роста растении.

Составитель А. Злотноков

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор С. Патрушева

Редактор Л. Павлова

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва. Ж-35. Раушская наб., 4/5

Заказ 3156

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул, Гагарина, 101 между рядами 100 см, рядков десять (опыт). Параллельно высевают семена. обработанные водой (контроль), Урожай сравнивают по среднему весу кочана капусты в рядке. В опыте получают урожай, равный 2787 r, в контроле — 2015 г. Разница между опытом и контролем достоверна с вероятностью Р-0,05 и составляет 772 г ,(превышение на 38 ).

Пример 8. Семена огурцов сорта

"Либелла" обрабатывают, как в примере 6, и высевают в открытом грунте на расстоянии 50 см друг от друга, В опыте и контроле по 60 растений. Урожай сравнивают по весу огурцов на одно растение, собранных в течение 10 дней с момента появления на растении огурца длиной 12 см. В опыте получают урожай огурцов, равный 1127 г.

Разница между опытом и контролем достоверна с вероятностью P-0,05 и составляет

247 г(превышение на 28 g,).

Пример 9. Семена помидоров сорта

"Грибовский" обрабатывают, как в примере

6, биопрепаратом, получают из них рассаду, которую затем высаживают в открытом грунте. В опыте и контроле по 30 растений, Урожай сравнивают по весу помидоров на одно растение. В опыте получают урожай помидоров. равный 2003, в контроле—

1627 г. Разница между опытом и контролем

5 достоверна с вероятностью P-0,05 и составляет 376 r (превышение на 23ф,).

Таким образом, предлагаемый штамм

Pseudomonas aureofaslens ВКМ В-1973Д в составе биопрепарата БПМ-Агат-25 облада10 ет способностью повышать урожай зерновых (пшеница. ячмень, овес), зернобобовых (горох, соя) и овощных культур (капуста, огурцы, помидоры) после обработки семян этих растений биопрепаратом в среднем на 25ф

15 по сравнению с необработанным контролем, Штамм Pseudomonas aureofaslens BKM В1973Д является биологическим срсдсгвом повышения урожая и может быть рекомендован для получения биопрепарата, использу20 емого для стимуляции роста растений.

Средние данные по урожаю зерновых, зернобобовых и овощных растений приведены в таблице.