Способ моделирования посттрансплантационных изменений в почке

 

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине и трансплантологии. Сущность изобретения: выполняют нервную децентрализацию почки, нарушают ее лимфоотток с одновременным удалением парного органа, дополнительно коагулируют отводящие лимфоколлекторы органа в почечных варинтах и на поверхности фиброзной капсулы, отделяют от удаленной аутопочки мозговое вещество, готовят из него гомогенат и иммунизируют экспериментальное животное адъювантным методом.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к патофизиологическим проблемам трансплантологии.

Известен способ моделирования посттрансплантационных изменений в почке путем абсолютной нервно-лимфатической децентрализации органа ин ситу, достигаемой хирургическим и локальным электрофоретическим воздействием на нервы почечной ножки без выключения органа из кровотока и процедуры трансплантации наряду с одномоментным удалением контрлатеральной интактной почки (прототип). Но совокупность технических приемов прототипа не позволяет воспроизвести адекватную модель посттрансплантационного повреждения гистосовместимого нефротранслпантата длительно действующими неспецифическими факторами в реципиентном организме с циркулирующими в его кровотоке противопочечными антителами. Поэтому в результате нанесенного на почку-модель трансплантата экспериментального воздействия, развивающиеся в опытном органе структурно-функциональные изменения соответствуют семиотике тубуло-интерстициальной нефропатии со слабо или умеренно выраженными проявлениями, что является отражением недостаточной воспроизводимости трансплантационной патологии.

Цель изобретения - повышение воспроизводимости тубуло-интерстициальной нефропатии при моделировании посттрансплантационных изменений в почке.

Цель достигается преднамеренным усугублением интраорганного лимфостаза в децентрализованной почке за счет коагуляции всех пересеченных отводящих лимфоколлекторов и последующей иммунизацией опытного организма "бесклубочковым" канальцево-стромальным гомогенатом, приготовленным из медуллярного слоя тканей удаленной интактной аутопочки.

Способ осуществляют следующим образом.

После воспроизведения абсолютной нервно-лимфатической децентрализации левой почки путем хирургического и электрофоретического локального разрушающего воздействия на нервные элементы ножки органа с симультанным удалением правой интактной почки по способу-прототипу, дополнительно коагулируют все пересеченные отводящие почечные лимфоколлекторы в клетчатке ворот и на поверхности фиброзной капсулы, отделяют от удаленной почки ее мозговое вещество, из которого готовят тканевой гомогенат и иммунизируют им опытный организм.

Пример конкретной реализации.

У беспородной собаки-самца после недельной его дегельминтизации пиперазином и дронцитом исследовали суточные порции мочи на предмет исключения исходной патологии почек. Убедившись в отсутствие в исследованных пробах форменных элементов, цилиндров и повышенного содержания белка, животное взяли в эксперимент. Премедикацию накануне оперативного вмешательства осуществляли внутримышечными инъекциями атропина, реланиума и промедола. Через 20 мин внутривенно вводили кетамин и интубировали трахею. Ингаляционный наркоз осуществляли азеотропной смесью в условиях миорелаксации дитилином на фоне нейролептанальгезии, достигаемой кратными внутривенными инъекциями фентанила и дроперидола. По достижении 111Б стадии наркоза производили полную срединную лапаротомию и обнажали левую почку, имеющую более длинную ножку. Последнюю выпрепаровывали из окружающей клетчатки на протяжении 5-6 см, пересекая все видимые нервные волокна, располагающиеся вдоль почечных сосудов. Затем электрокоагулятором прижигали клетчатку в воротах почки, содержащую обрывки ее гилюсных отводящих лимфоколлекторов. С помощью электроножа саму почку выделяли из забрюшинных тканей, попутно коагулируя все перфорантные сосудисто-нервно-лимфатические микропучки в "люках" фиброзной капсулы. После этого в средних отделах почечной артерии и вены, а также в юксталоханочном отделе мочеточника скарифицировали их наружные адвентициальные оболочки, окутывали каждый из компонентов почечной ножки гибкими пластинчатыми электродами с прокладками, смоченными нейролитическим раствором и подсоединенными посредством единого микропровода к полюсу-аноду аппарата гальванизации "Поток-1". Пластинку катода фиксировали к коже животного и задавали параметры постоянного тока из расчета 0,1 мА/см² площади "суммарного" анода с последующей экспозицией электрофоретического воздействия продолжительностью 5 мин. По окончании процедуры абсолютной нервной децентрализации почки и нарушения ее лимфооттока опытный орган фиксировали в ортопозицию чрескапсулярными кетгутовыми швами к задней брюшной стенке. Контрлатеральную интактную почку вместе со всем мочеточником удаляли. Воспроизведение модели завершали субтотальным резецированием мочевого пузыря и герметичным сшиванием из его оставшихся лоскутов на катетере узкого канала между устьем мочеточника децентрализованной почки и внутренним отверстием мочеиспускательного канала, в результате чего тотчас устанавливалось беспрепятственное мочевыведение из опытного органа-модели через наружное отверстие висячей части уретры. Операционную рану ушивали наглухо и извлекали катетер из мочеиспускательного канала.

После завершения оперативного этапа моделирования трансплантационной нервно-лимфатической децентрализации на единственной левой почке, удаленную интактную правую почку опытного животного в стерильных условиях декапсулировали, иссекали острым лезвием весь кортикальный ее слой на заведомо достаточную для удаления всех гломерул глубину 6-7 мм, отсекали от ворот органа все компоненты почечной ножки, разрезали декортицированную почку на 5-6 горизонтальных тканевых блоков, отделяли от каждого из них имеющиеся фрагменты чашечно-лоханочной системы, а из оставшейся исключительно медуллярной ткани после ее измельчения на стерильном стекле острым скальпелем готовили на холоду в стерильной фарфоровой ступе тканевой гомогенат. Гомогенизированную ткань делили на три равные порции, которые тотчас тубировали в стерильные пластмассовые пробирки-контейнеры. Одну из порций смешивали с 1 мл предварительно приготовленного полного адъюванта Фрейнда и вводили опытному животному внутримышечно длинной иглой тотчас после его выхода из наркоза. Оставшиеся две порции помещали в холодильник и в последующем использовали для иммунизации животного спустя 5 и 10 сут после первой инъекции аналогичным способом. После полного заживления операционной раны и завершения иммунизации на 15-е и далее на 30-, 60- и 90-е сутки в каждом сроке у животного исследовали проявления моделируемой нефропатии. В ходе очередного исследования производили 5% -ную от массы тела пероральную водную нагрузку, в условиях которой определяли параметры парциальных экскреторных процессов (клубочковую фильтрацию, реабсорбцию натрия, канальцевую секрецию по триомбрасту, экскрецию глюкозы). В завершение функциональных проб после внутривенного введения гексенала (50 мг/кг) с помощью биопсийной иглы производили транскутанные нефробиопсии почки через поясничную область с последующим проведением светооптических и ультраструктурных исследований тканей нефробиоптатов.

Результаты проведенных функциональных исследований в опытной (заявленный способ) и контрольной (прототип) сериях показали, что, к примеру, на 30-е сутки при недостоверных различиях величин гломерулярной фильтрации (соответственно 71±9 и 76±11 мл/мин), в опытной серии более выраженно угнетается реабсорбция натрия (99,51±0,01 против 99,68±0,03% ), канальцевая секреция триомбраста (5,0±1,2 против 7,9 ±0,5 мг/мин), а также интенсивнее проявления глюкозурии (14,3 против 6,0 ммоль/час, P < 0,05), что являлось подтверждением преимущественного и более значительного, чем в контроле, поражения канальцевого аппарата опытной почки - модели трансплантата.

Динамические исследования в обеих группах нефробиоптатов позволили установить отсутствие отчетливых патологических измемений со стороны структурных компонентов гломерулярного фильтра наряду с более выраженными, чем в контроле инфильтративно-склеротическими изменениями почечного интерстиция и преобладанием клеточных элементов лимфоидного ряда в первичных стромальных инфильтратах, а также дистрофическими и атрофическими изменениями канальцевой системы.

Способ позволяет воспроизвести тубуло-интерстициальную нефропатию с выраженными структурно-функциональными проявлениями.

Изобретение целесообразно использовать в патофизиологии и трансплантологии при изучении патогенетических механизмов посттрансплантационного повреждения гистосовместимого нефротрансплантата и для разработки эффективных методов коррекции неспецифических нарушений в пересаженной почке.

Формула изобретения

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПОСТТРАНСПЛАНТАЦИОННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В ПОЧКЕ, включающий нервную децентрализацию почки, нарушение ее лимфооттока с одновременным удалением парного органа, отличающийся тем, что, с целью повышения воспроизводимости тубулоинтерстициальной нефропатии, дополнительно коагулируют отводящие лимфоколлекторы органа в почечных воротах и на поверхности фиброзной капсулы, отделяют от удаленной аутопочки мозговое вещество, готовят из него гомогенат и иммунизируют экспериментальное животное адъювантным методом.