Способ получения гиалуроновой кислоты

 

Сущность изобретения: измельченные куриные гребни 2-кратно экстрагируют водным раствором H-пропилового или трет-бутилового спирта /5 - 25 об.%/ при жидкостном модуле 1:(10 - 15). Экстракты объединяют, добавляют хлорид натрия до расслоения системы. Водный слой отделяют и осаждают из него гиалуроновую кислоту. 1 табл.

Изобретение относится к способам выделения полисахаридов и касается получения гиалуроновой кислоты из природного сырья.

Известен способ получения гиалуроновой кислоты, заключающийся в измельчении пуповины человека, ее обезжиривании, последующей обработке дистиллированной водой, гомогенизации, нагревании на кипящей водяной бане в течение 10 мин, последующем охлаждении, центрифугировании и осаждении целевого продукта (1).

Наиболее близким по технической сущности к предложенному изобретению является способ, заключающийся в 3-кратной экстракции гиалуроновой кислоты (ГК) из измельченных петушиных гребней водно-хлороформенным раствором. Полученные экстракты объединяют, добавляют хлорид натрия, хлороформ и перемешивают систему. Хлороформенную фазу и твердые вещества, выделившиеся на поверхности раздела фаз, отбрасывают, доводят рН водной фазы до 4,0-5,0 (разбавленной НСl) и снова добавляют хлороформ. Экстракционную очистку водной фазы, содержащей ГК, проводят не менее 3 раз.

Недостатком способа является длительность процесса экстракции (3-кратная экстракция), 3-5-кратная экстракционная очистка полученного раствора ГК и использование в качестве экстрагента большого количества высокотоксичного растворителя - хлороформа.

Целью изобретения является упрощение технологии способа выделения ГК.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения гиалуроновой кислоты, включающем многократную экстракцию измельченных куриных гребней водно-органическим растворителем, объединение экстрактов, добавление к ним хлорида натрия, расслоение системы, отделение водной фазы и осаждение из нее целевого продукта, в качестве водно-органического растворителя используют 5-25%-ный (об.) водный раствор н-пропилового, изо-пропилового или трет-бутилового спирта и экстракцию проводят при жидкостном модуле 1:(10-15).

Способ осуществляется следующим образом.

После каждой стадии экстракт отделяют от гребней фильтрованием, экстракты объединяют и добавляют кристаллический хлорид натрия до расслоения системы, отделяют водную фазу, из которой осаждают ГК известными методами.

В качестве сырья могут быть использованы куриные гребни.

Оказалось, что только в предлагаемых соотношениях гребень: экстрагент и определенных концентрациях водно-спиртовых растворов можно добиться ускорения процесса выделения ГК путем сокращения числа стадий экстракции ГК с 3 (по известному способу) до 2, а также сокращения числа стадий экстракционной очистки раствора ГК с 3-5 (по известному способу) до 1. Так при увеличении соотношения гребень:экстрагент до 1:16 неоправданно возрастает расход реактивов на выделение ГК, при уменьшении соотношения до 1:9 не достигается необходимая полнота экстракции ГК. При изменении концентрации экстрагента в любую сторону от указанного интервала наблюдается ухудшение экстрагируемости ГК.

П р и м е р 1. 100 г предварительно обработанного и измельченного куриного гребня заливают 1,5 л экстрагента, представляющего собой 5% по объему водный раствор н-пропилового спирта. Смесь перемешивают в течение 32 ч. Затем экстракт отделяют от гребней фильтрованием через нейлоновую сетку. К гребням вновь добавляют 1,5 л экстрагента того же состава и проводят повторную экстракцию. Экстракт отделяют от гребней фильтрованием. Затем экстракты объединяют и к объединенному экстракту при перемешивании до его полного растворения добавляют хлорид натрия в количестве 0,25 кг/л экстракта. Смесь центрифугируют при 2500 об/мин в течение 10 мин при 25^оС. После центрифугирования верхнюю фазу и нерастворившиеся вещества, находящиеся на поверхности раздела фаз, отделяют, а в нижней фазе проводят осаждение и дальнейшую очистку препарата ГК этанолом.

Результаты выделения ГК с использованием других спиртов приведены в таблице.

Гиалуроновая кислота, выделенная предлагаемым способом, представляет собой белый аморфный порошок, гигроскопичный, по внешнему виду напоминающий вату. Без запаха. Содержание белка - менее 1%. Влажность - 15%. УФ-поглощение для 1% р-ра гиалуроновой кислоты при 257 нм - менее 3,0; при 280 нм - менее 2,0, рН водного раствора очищенной гиалуроновой кислоты - 5,5-7,5. Степень извлечения гиалуроновой кислоты 50%.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ, включающий многократную экстракцию измельченных куриных гребней водно-органическим растворителем, объединение экстрактов, добавление к ним хлорида натрия, расслоение системы, отделение водной фазы и осаждение из нее целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве водно-органического растворителя используют 5 - 25%-ный об. водный раствор н-пропилового, изо-пропилового или трет-бутилового спирта и экстракцию проводят при жидкостном модуле 1 : 10 - 15.

РИСУНКИ

Рисунок 1