Способ получения гидролизата мозговой ткани "церебролизат"

 

Изобретение относится к производству лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике, и касается способа получения отечественного препарат, аналогичного по механизму биологического действия препарату "Церебролизин" фирмы Эбеве, Австрия. Цель изобретения упрощение технологии получения и разработка лекарственной формы отечественного препарата "Церебролизат". Для достижения этой цели гомогенизированное сырье кору головного мозга подвергают ферментативному гидролизу при рН 6,8 8,4 в течение 4 5 ч, затем проводят отделение жмыха микрофильтрацией через мембранные фильтры с размером пор 0,22 0,5 мкм и отделение белков и пептидов двухстадийной ультрафильтрацией на мембранах с порогом задержания веществ 30 50 кД и 5 15 кД. Смесь упаривают под вакуумом (концентрирование), добавляют консервант 0,3% фенола и подвергают стерильной фильтрации на мембранах 0,2 0,32 мкм. Процесс технологичен, полученный препарат обладает высокой клинической эффективностью. 1 табл.

Изобретение относится к способу получения отечественного препарата "Церебролизат", аналогичного по механизму биологического действия препарату "Церебролизин" фирмы Эбеве, получаемого путем ферментативного гидролиза головного мозга сельскохозяйственных животных. Описания технологии получения Церебролизина в доступных источниках информации не обнаружено.

Известный способ является трудоемким за счет использования центрифугирования и проведения доочистки гидролизата активированным углем. Кроме того, получаемый продукт (гидролизат) не является лекарственной формой и не может быть применен в клинической практике, а его получение сопровождается накоплением большого количества неутилизируемых отходов в виде отработанного активиpованного угля. Использование спирта делает производство взрывоопасным, дорогим и требует его отгонки на заключительных стадиях.

Цель изобретения упрощение технологии получения за счет снижения трудоемкости способа и разработка лекарственной формы отечественного препарата "Церебролизат".

С этой целью получение препарата "Церебролизат" проводят путем ферментативного гидролиза гомогената коры мозга крупного рогатого скота при рН 6,8-8,4, отделение жмыха проводят микрофильтрацией на мембранах с размером пор 0,2-0,5 мкм, а отделение белков и пептидов осуществляют двумя последовательными ультрафильтрациями на мембранах с порогом задержания веществ 30-50 кД и 5-15 кД, затем продукт концентрируют, а стерильную фильтрацию проводят на мембранах 0,2-0,32 мкм. Выбранный размер пор обусловлен необходимостью удаления из препарата белков (на мембранах 30-50 Кд) и низкомолекулярных пептидов (на мембранах 5-15 кД).

Сравнение предлагаемого способа с известным показывает, что общими существенными признаками у них являются: ферментативный гидролиз гомогената головного мозга животных, отделение жмыха и белковых фрагментов, концентрирование. Однако, в отличие от прототипа заявляемый способ предусматривает использование в качестве сырья коры головного мозга крупного рогатого скота, проведение ферментативного гидролизата в более щелочных условиях, отделение жмыха и белковых фрагментов микрофильтрацией с последующей двухстадийной ультрафильтрацией вместо спиртового осаждения, центрифугирования и обработки активированным углем, получение лекарственной формы путем добавления консерванта и проведения стерилизующей фильтрации.

Использование в качестве сырья коры головного мозга позволяет получить препарат, обладающий более направленным действием, поскольку не используются такие части мозга, как гипофиз, мозжечок и стволовая часть мозга. Проведение ферментативного гидролиза в нейтральной или слабо-щелочной среде обеспечивает оптимальные условия для работы сериновых эндопротеаз. Кроме того, при использовании в способе-прототипе более кислых значений рН увеличивается сухой остаток препарата за счет образования солей при подведении рН до нейтральных значений, что отрицательно сказывается на качестве препарата при доведении его до лекарственной формы. Замена спиртового осаждения на двухстадийную ультрафильтрацию позволяет избежать, указанных выше недостатков применения спирта, а совместно с микрофильтрацией повысить технологичность процесса за счет замены трудоемких операций. Проведение заключительной стерилизующей фильтрации также направлено на получение лекарственной формы препарата "Церебролизат". Дополнительный эффект от применения предлагаемого способа проявляется и в повышении экологической чистоты производства за счет исключения из технологии активированного угля.

Приведенная совокупность отличительных признаков заявляемого способа в литературе не описана и создает новый положительный эффект, следовательно, разработанный способ удовлетворяет критериям "Новизна" и "Изобретательский уровень".

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Дефростированный или свежий головной мозг без стволовой части и мозжечка измельчают и гомогенизируют в воде с нейтральным или слабо щелочным значением рН (6,8-8,4) и подвергают гидролизу сериновой эндопептидазой грибкового происхождения при температуре от 40 до 50^оС в течение 4-5 ч. По окончании гидролиза реакционную массу при перемешивании нагревают до 90-95^оС и выдерживают при этой температуре в течение 40 мин. После охлаждения до комнатной температуры проводят микрофильтрацию через мембранные фильтры с размерами пор 0,22-0,5 мкм и две последовательные ультрафильтрации через мембраны с порогом задержания веществ 30-50 и 5-15 кД. Смесь упаривают под вакуумом (концентрирование), добавляют консервант и проводят стерильную фильтрацию.

П р и м е р 1. 1 кг мозга без основания и мозжечка пропускают через мясорубку. Гомогенат ткани мозга готовят в дистиллированной воде рН 8,4 в соотношении 1: 1 вес мозга/объем воды. Гомогенат нагревают до 48±2^оС и при перемешивании добавляют 40 г сериновой эндопротеазы. Инкубацию проводят в течение 4 ч при перемешивании и постоянной температуре. Далее смесь нагревают до 98^оС, инбкубируют 40 минут и после охлаждения последовательно фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм (микрофильтрация для обесцвечивания раствора и стерилизации) и через ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 50 кД и ультрафильтрационную установку с молекулярным весом отсечения веществ 10 кД. Смесь упаривают под вакуумом до 200 мл (концентрирование), добавляют консервант (0,3% фенола) и перед разливом проводят стерильную фильтрацию на фильтрах 0,22 мкм.

П р и м е р 2. Получение препарата проводят согласно примеру 1, но с использованием микрофильтрационных мембран с размером пор 0,32 мкм, а ультрафильтрацию проводят на мембранах с порогом отсечения веществ 30 кД, а затем 15 кД. Аминокислотный состав полученных по примерам 1 и 2 препаратов был идентичен и представлен в таблице.

Препарат прошел клиническое изучение в ведущих неврологических центрах РСФСР и показал свою высокую эффективность для лечения травм и заболеваний центральной нервной системы: инсультов, нарушений мозгового кровообращения, энцефалопатий, детского церебрального паралича. Рекомендован для использования в медицинской практике.

Формула изобретения

Способ получения гидролизата мозговой ткани, включающий ферментативный гидролиз гомогената мозга крупного рогатого скота с последующим выделением целевого продукта путем отделения белковых фрагментов и концентрирования, отличающийся тем, что в качестве сырья используют кору мозга, ферментативный гидролиз проводят в интервале рН 6,8 8,4, отделение жмыха проводят микрофильтрацией на мембранах с размером пор 0,2 0,5 мкм, а отделение белков и пептидов осуществляют двухстадийной последовательной ультрафильтрацией на мембранах с порогом задержания веществ 30 50 кД и 5 15 кД, после концентрирования проводят стерилизующую фильтрацию на мембранах с размером пор 0,2 0,32 мкм.