Штамм бактерий corynebacterium pseudotuberculosis, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец

 

Использование: микробиология, биотехнология, диагностические препараты, казеозный лимфаденит овец. Сущность изобретения: получение штамма C. pseudotuberculosis ВГНКИ N 74 R - ДЕП для ускорения идентификации возбудителя казеозного лимфаденита при бактериологической, аллергической и серологической диагностике инфекции у овец. Молекулярные характеристики ДНК штамма: спектральная характеристика А 260/280 - 2,0, А 260/230 - 2,2, концентрация - 1200 мкг/мл, температура плавления - 33,5^oС, величина содержания Г + Ц - 47,8 мол.%. По гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК среди штаммов этого вида отнесен к группе III. При постановке диагноза на заболевание овцам внутрикожно в одну из подхвостовых складок вводят аллерген, приготовленный из данного штамма. Через 24 ч проводят учет реакции. Если животное больное, у него появляется воспалительная реакция в месте введения диагностикума. У здоровых животных воспаления в месте введения препарата не наблюдают. Данным методом в неблагополучных по казеозному лимфадениту овец хозяйствах удается дополнительно выявлять до 80% инфицированных животных, по сравнению с общеизвестным методом диагностики (пальпацией поверхностных лимфатических узлов).

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и может быть использована в практике бактериологических лабораторий.

Целью изобретения является изыскания штамма бактерий, легко и быстро размножающегося на естественных и искусственных питательных средах и продицирующего токсин.

Штаммы Corynebacterium pseudotuberculosis в отечественных коллекциях отсутствуют, хотя были выделены и изучались многими исследователями [1] В зарубежной литературе имеются сведения о штаммах C. pseudotuberculosis, из которых были приготовлены аллерген "Прейснокордин" и вакцины, но ввиду не высокой специфическости и имуногенности они не были использованы [2-4] Несмотря на широкое распространение инфекций в овцеводческих хозяйствах до настоящего времени не разработаны прижизненные методы диагностики заболевания, меры профилактики и борьбы. Это в определенной мере обусловлено отсутствием в отечественных коллекциях микроорганизмов эталонных штаммов C. pseudotuberculosis. В зарубежных коллекциях микроорганизмов эталонные штаммы, судя по специальным статьям и определителю микробов Берги (Хоулт Дж. Краткий определитель бактерий Берги. М. Мир, 1980, с. 312-319) обладают значительной вариабильностью фенотических свойств, однако сведения о генотипе весьма ограничены и укладываются по Г + Ц содержанию в ДНК данного вида 67,5 мол. а для всех патогенных для животных и человека микроорганизмов рода Corynebacterium в пределах от 57 до 60 мол.

Штамм C. pseudotuberculosis N 74R получен 26.03.87 года из гнойного содержимого абсцесса поверхностного шейного лимфатического узла овцы, принадлежащей совхозу "Екатеринославский" Щербакульского района Омской области.

Морфологические признаки. В мазках из культур микроорганизмов в виде коротких толстых палочек или овондов, размером в длину 1,09±0,02 мкм, толщину 0,68±0,02 мкм. Окрашивается по Граму. Более интенсивно воспринимают окраску концы и контур клетки. Чаще клетки собраны кучками, в молодых культурах присутствуют клетки, расположенные под углом друг к другу.

Культуральные, физиолого-биохимические признаки.

На всех питательных средах при пересеве со среды для хранения дает скудный рост. При нескольких пересевах на МПА рост становится более обильным.

На кровяном теллуритовом агаре через 2-3 суток культивирования при 37^оС, микроорганизм восстанавливает металлический теллур, в результате колонии приобретают черный цвет. Они круглой формы, радиально исчерченные, с неровными краями, поверхность матовая, сухая, шероховатая, консистенция крошковатая, колонии сдвигаются по поверхности среды при прикосновении.

На МПА колонии R-формы серо-белого цвета, круглые с неровными краями, с шероховатой матовой поверхностью, хрупкие, сдвигаются по поверхности среды.

На МПБ штамм растет в виде серо-белой тонкой, ломкой пленки, легко разбивающейся при встряхивании на отдельные глыбкие пристеночное кольцо. Среда остается прозрачной. На дне пробирки образуется зернистый осадок, увеличивающийся за счет обломившейся пленки.

При росте на МПБ штамм продуцирует экзотоксин, максимальное количество которого отмечается на третьи сутки, что совпадает со снижением рН среды.

Штамм каталозоположительный. Слабо ферментирует глюкозу. Не образует индол и сероводород, не разжижает желатин, не сбраживает молоко, не переводит нитраты в нитриты, не образует уреазу. Не ферментирует сорбит, мальтозу, арабинозу, маннит, сахарозу, рамнозу, дульцит, рафинозу, галактозу.

При внутрибрюшинном заражении морских свинок в дозе 10 МЕМ/мл микроорганизм вызывает поражение внутренних органов: геморратические очаги в легких, множественные некротические узелки на печени, селезенки, кишечнике. Гибель животных наступает через 3-7 суток.

Молекулярные характеристики ДНК штамма: 1. Спектральная характеристика А 260/280 2,0 А 260/230 2,2 2. Концентрация 1200 мкг/мл 3. Температура плавления Г + Ц 73,5^оС 4. Величина содержания Г + Ц 8 ДНК 47,8 мол.

В реакции ДНК-ДНК гибридации с несколькими десятками штаммов C. pseudotuberculosis штамм N 74R по уровню гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК отнесен к группе III (Трофимов И.Г. Борисенко М.С. Фомин Б.А. Артюшин С. К.).

Ввиду наличия у данного штамма микроорганизмов ряда отличительных свойств, от описанных аналогов, таких как свойства R-формы, низкое содержание Г + Ц в ДНК 47,8 мол. отношение к группе III, по гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК, он может быть использован в качестве эталона, а так же для приготовления диагностикумов (антигенов, аллергенов).

Штамму присвоен регистрационный номер Corynebacterium Pseudotuberculosis N 74R-ДЕП в коллекции микроорганизмов лаборатории контроля и стандартизации препаратов против туберкулеза, псевдо- и паратуберкулеза ВГНКИ ветпрепаратов (123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, 5), где он находится на хранении.

Формула изобретения

Штамп бактерий Corynebacterium pseudotuberculosis ВГНКИ N 74R-ДЕП, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец.