Штамм бактерий corynebacterium pseudotuberculosis, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец

 

Использование: биотехнология, микробиология, диагностические препараты, казеозный лимфаденит овец. Сущность изобретения: получение штамма C. pseudotuberculosis ВГНКИ N 146S-ДЕП для ускорения идентификации возбудителя казеозного лимфаденита при бактериологической, аллергической и серологической диагностике инфекции у овец. Молекулярные характеристики ДНК штамма: спектральная характеристика А 260/280 - 1,5, А 260/230 - 1,8, концентрация - 915 мкг/мл, величина содержания Г + Ц - 43,0 мол.%. По гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК среди штаммов этого вида отнесен к группе III. При постановке диагноза на заболевание овцам внутрикожно в одну из подхвостовых складок вводят аллерген, приготовленный из данного штамма. Через 24 ч проводят учет реакции. Если животное больное, у него появляется воспалительная реакция в месте введения диагностикума. У здоровых животных воспаления в месте введения препарата не наблюдают. Данным методом в неблагополучных по казеозному лимфадениту овец хозяйствах удается дополнительно выявлять до 80% инфицированных животных по сравнению с общеизвестным методом диагностики (пальпацией поверхностных лимфатических узлов).

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, эпизотологии и может быть использовано в практике бактериологических лабораторий.

Широкое распространение инфекций C. pseudotuberculosis в овцеводческих хозяйствах привело исследователей к необходимости разработки прижизненных методов диагностики заболевания. В настоящее время в нашей стране эти исследования затруднены отсутствием в коллекциях микро- организмов возбудителя данной инфекции.

Имеющиеся в зарубежных коллекциях штаммы C. pseudotuberculosis, исходя из данных определителя микробов Берги, обладают значительной вариабильностью фенотипических свойств, а сведения о их генотипе очень ограничены. Имеются данные о содержании Г + Ц в ДНК у микроорганизмов этого вида 67,5 мол. а всех патогенных для животных и человека микроорганизмов рода Corynebacterium в диапазоне от 57 до 60 мол.

Штамм Corynebacterium pseudotuber-culosis N 146S получен 26.09.87 из гнойного содержимого абсцесса в мышцах овцы, принадлежащей совхозу "Победа" Нововаршавского района Омской области.

Морфологические признаки. В мазках из чистых культур микроорганизмы присутствуют в виде грамположительных мелких овоидов длиной 0,908 ± 0,022 мкм, толщиной 0,826 ± 0,012 мкм, контур клетки и ее концы окрашиваются более интенсивно, чем центральная часть, клетки собраны в крупные кучки.

Культуральные, физиолого-биохимические признаки. Нa кровяном телкуритовом агаре через 2-3 суток культивирования при 37^оС появляются черные колонии круглой сферической формы, гладкие, блестящие с ровными краями, пастообразной консистенции, хорошо суспендирующиеся в физиологическом растворе.

На МПА образуются S-формы колоний серо-белого цвета, иногда с небольшим количеством желтого пигмента. Они круглые, сферической формы, с ровными краями, поверхность влажная, блестящая, консистенция пастообразная, при дотрагивании мажется по среде.

МПБ равномерно мутнеет, на дне образуется небольшое количество мучнистого осадка, поднимающегося косичкой при встряхивании.

При росте на МПБ образуется экзотоксин, максимальное количество которого можно зафиксировать снижением рН среды, чаще это происходит на третьи сутки культивирования.

Штамм редуцирует нитраты в нитраты, ферментирует глюкозу, лактозу, сорбит, рафиназу. Содержит каталазу, не содержит уреазу и желатиназу.

Внутрибрюшинное заражение морских свинок в дозе 10 МЕМ/мл вызывает поражение внутренних органов, геморрагические очаги в легких, увеличение селезенки.

Молекулярные характеристики ДНК штамма: 1. Спектральная характеристика А 260/280 1,5 А 260/230 1,8 2. Концентрация 915 мкг/мл 3. Величина содержания Г + Ц 43,0 мол.

В реакции ДНК ДНК гибридизации с несколькими десятками штаммов C. pseudotuberculosis N 146S по уровню гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК отнесен к группе III (Трофимов И.Г. Борисенко И.С. Фомин Б.А. и Артюшин О.К.).

Штамму присвоен регистрационный номер C. pseudotuberculosis N 146S ДЕП в коллекции микроорганизмов лаборатории контроля и стандартизации препаратов против туберкулеза, псевдо- и паратуберкулеза. ВГНКИ ветпрепаратов (123022 г. Москва, Звенигородское шоссе, 5), где он находится на хранении.

Формула изобретения

Штамп бактерий Corunebacterium pseudotuberculosis ВГНКИ N 146S-ДЕП, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфедените овец.