Способ выбора препарата для иммунокоррекции
Использование: медицина, иммунология. Сущность изобретения: предварительно определяют модифицирующее действие препаратов на экспрессию комплекса дифференцировочных антигенов СДЗ, 4, 8, 38, HLA 1, исходя из суммы баллов, рассчитанных в отношении каждого из маркеров по формуле (О - К100)/К при К нижней границе нормы и (К - О 100)/О при К верхней границе нормы, где К и О - % клеток, насущих данный антиген соответственно до и после инкубации с препаратом, причем, если препарат, оптимально корректирующий соотношение СД4+/СД8+ клеток не набрал максимальное число баллов, выбор между ним и препаратом наиболее интенсивно увеличивающим экспрессию комплекса рецепторов и изменяющим в сторону повышения указанное соотношение, обуществляется по формуле, указанной в тексте описания, и при результате < 1,5 назначается препарат, набранный большее число баллов. При исходном изменеии соотношения СД4/СД8 клеток 2 или 0,7 коэффициент выбора формулы равен 1,2. Способ позволяет повысить точность выбора и увеличить эффективность применения иммунокоррегирующего препарата. 1 з. п. ф-лы, 6 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности иммунологии, в педиатрии и может быть использовано в практическом здравоохранении и научно-исследовательских учреждениях в целях повышения точности выбора и увеличения эффективности применения иммуннокорректоров.
Известны способы определения необходимости введения иммунокоррегирующих средств на основании определения in vitro их индивидуальной модифицирующей реакции поверхности мононуклеаров крови обследуемого лица. В большинстве своем в качестве критерия определения необходимости введения того или иного иммуностимулятора используется степень повышения реакции Т-розеткообразующих клеток (отражает изменения экспрессии на лимфоцитах СД2-Т клеточного антигена) под воздействием данного иммунокорректора. Наиболее близким к заявляемому является способ, который выбран в качестве прототипа. После выделения мононуклеаров проводится инкубация их с иммунокоррегирующими препаратами. По степени увеличения Т-РОК в каждой пробе судят о чувствительности данного пациента к соответствующему препарату. Недостатками прототипа является, с одной стороны, то, что этот способ выбора и назначения иммуннокорректора не учитывает исходное состояние, модифицирующее влияние лекарственных препаратов на экспрессию, соотношение других рецепторов, которые принимают участие в процессах клеточного распознавания, кооперации, осуществляющейся в процессе иммунного ответа, от наличия которых, соотношения зависит интенсивность, другие характеристики иммунного ответа. Известно, что наличие различных дифференцировочных антигенов ассоциировано с определенными функциями иммунокомпетентных клеток. Другим недостатком используемого способа является то, что применяющийся методический подход определения реакции мононуклеаров в реакции розеткообразующих клеток является методом, устанавливающим субпопуляции клеток опосредованно, тем самым менее точным и воспроизводимым, чем определение дифференцировочных маркеров с помощью моноклональных антител. В прототипе отсутствуют конкретные показатели, позволяющие оценить степень увеличения Т-РОК. В связи с указанными недостатками выбор иммунокорректора с помощью применяемого способа-прототипа может оказаться невозможным или этот выбор будет неоптимален. Техническим результатом является повышение точности выбора и увеличение эффективности применения препарата. Технический результат достигается тем, что предварительно определяют влияние препаратов на экспрессию комплекса дифференцировочных антигенов, например СД 3, 4, 8, 38, HLA1, исходя из суммы баллов, рассчитанных в отношении каждого из маркеров по формуле 100 при К (нижней границы нормы и 100 при К) верхней границы нормы, где К и O клеток, несущих данный антиген соответственно до и после инкубации с препаратом, причем, если препарат, оптимально корректирующий соотношение СД4-/СД8- клеток, не набрал максимальное число баллов, то выбор между ним и препаратом, наиболее интенсивно увеличивающим экспрессию комплекса рецепторов и изменяющим в сторону повышения вышеуказанное соотношение, осуществляют по формуле в сторону понижения по формуле где СД4-/СД8- оптим оптимальное соотношение; Бмакс максимальное количество баллов, и при результате (1,5 назначают препарат, набравший большее число баллов. При исходном изменении соотношения СД4-/СД8-) 2 или (0,7 коэффициент изменения разности соотношения СД4-/СД8- к изменению разности баллов равен <1,2).<P> Сущность способа состоит в следующем. Из пробы крови с использованием градиента плотности выделяют мононуклеары. Стандартизуют взвесь мононуклеаров (концентрацию доводят до 1-2х10 кл/мл) и отдельные порции их (по 0,02 мл) инкубируют 30 мин с 0,02 мл соответствующих иммунокорректоров в концентрациях, близких к терапевтическим (берут 3-5 препаратов, если необходимо и более, например: тималин 0,5 мкг/мл; Т-активин 0,1 мкг/мл; тимоптин 0,1 мкг/мл) и средой 199. Наличие рецепторов выявляют инкубацией с соответствующими антисыворотками в реакции непрямой или прямой иммунофлюоресценции. Модифицирующее действие препаратов на экспрессию комплекса дифферен- цировочных антигенов (например, СД3, 4, 8, 38, HLA1) определяют исходя из суммы балов, рассчитанных в соотношении каждого из маркеров по формуле при К< нижней границы нормы и при К> верхней границы нормы, оценка первоначальной экспрессии дифференцировочных маркеров может осуществляться как исходя из так и абсолютного количества клеток в мкл крови. После подсчета баллов и анализа соотношения СД4-/СД8- клеток, изменившегося под влиянием апробируемых препаратов, для иммунокоррекции выбирают препарат, набравший наибольшее число баллов и наилучшим образом изменивший в заданную сторону соотношение СД4-/СД8- клеток. Если препарат оптимально корректирующий соотношение СД4-/СД8- клеток, не набрал максимальное число баллов, выбор между ним и препаратом наиболее интенсивно увеличивающим экспрессию комплекса рецепторов и изменяющим в сторону повышения, понижения указанное соотношение производят соответственно исходя из формул где СД4-/СД8- оптим оптимальное соотношение; Бмакс максимальное количество набранных баллов, и при результате <1,5 назначают препарат, набравший большее число баллов. При исходном, более резком изменении соотношения СД4-/СД8- клеток >2 или <0,7 коэффициент выбора указанных формул равен <1,2. Если инкубация с отдельными препаратами не дает полностью желаемого эффекта изменения экспрессии рецепторов, инкубацию мононуклеаров, при необходимоси совместного использования иммунокорректоров, проводят с соответствующими смесями их (каждый препарат используется в дозе близкой к терапевтической). Выбор при необходимости совместного назначения иммунокорректоров осуществляется таким же самым способом. Коэффициенты 1,5 и 1,2 выбраны на основании экспериментальных разработок, путем расчетов, показывающих, что превалирование изменений экспрессии общей суммы исследуемых рецепторов над изменениями соотношения СД4-/СД8- клеток в 1,5 раза является более существенным для воздействия, чем изменения экспрессии и соотношения этих 2-х рецепторов. При более резком изменении соотношения СД4-/СД8- клеток (>2 и <0,7) важность изменения экспрессии этих рецепторов возрастает поэтому коэффициент, определяющий разницу модифицирующего влияния препарата на экспрессию суммы рецепторов к изменению соотношения 2-х эффекторных субпопуляций мононуклеаров снижают до 1,2. Иммунокоррекцию осуществляют выбранным препаратом по общеупотребляемым схемам: например, тималин вводят в/м глубоко в дозе 0,1-0,2 мг/кг веса тела 3-5 инъекций ежедневно по 1 уколу; Т-активин и тимоптин вводят 1 раз в день в/м, в дозе 1 мкг/кг веса тела 3-5 инъекций по 1-й ежедневно или с интервалом 7-10 дней. Примеры конкретного выполнения способа. П р и м е р 1. Г.Е. 26.03.88 г. М. Ленина, 153-44. DS: Гиперплазия вилочковой железы. Приобретенное иммунодефицитное состояние, ЧДБ (см. табл.1) Исходя из того, что экспрессия рецепторов под воздействием тималина in vitro возрастает наиболее сильно (140,21 балла) и данный препарат наиболее оптимально (до 1,06) корректирует соотношение СД4-/СД8- клеток, изначально сниженное до 0,7, данному больному назначено введение тималина в дозе 0,1 мг/кг веса в/м 1 раз в день N 5. Во время проведения (3 курса) иммунокоррегирующей терапии и после нее в течение 10 месяцев интеркурентными инфекциями не болела. До лечения же частые респираторные инфекции 1-2 раза в месяц. Интенсивность экспрессии рецепторов in vivo при последнем исследовании составила: СД4 29% СД3 78% СД8 24% СД38 22% HLAI 84% Соотношение СД4-/СД8- 1,2. П р и м е р 2. А.О. 5.09.1975 г М. ул. Трояновского, 70/13. DS: Атопический дерматит. Аллергическая ринусинусопатия, ЧДБ (см. табл. 2). Установлено изменение экспрессии исследованных маркеров, несколько увеличенное соотношение СД4-/СД8- клеток за счет более резкого снижения выявляемости антигена СД8. Данное соотношение нормализовали Тимоптин и Т-активин. Однако, интенсивность изменения экспрессии исследованных антигенов была более выражена у Т-активина. Различия в изменении соотношения СД4-/СД8- при использовании 2-х указанных препаратов оказались незначительными в отношении к вариациям экспрессии исследуемых маркеров. Коэффициент формулы составил 1,4. В связи с вышеизложенным назначено введение Т-активина N 3. В период проведения иммунокорригирующей терапии состояние ребенка улучшилось. Уменьшились аллергические проявления, исчезла риноррея, Интеркурентными заболеваниями не болел. Интенсивность экспрессии маркеров составила СД4 29% СД3 69% СД8 21% СД38 28% HLA1 81% Соотношение СД4-/СД8- 1,43. Данные изменения Т-РОК популяций мононуклеаров под воздействием иммуномодуляторов in vitro дали во всех случаях увеличение экспрессии рецепторов на 18-20% и выбор препарата по этим данным невозможен. П р и м е р 3. Ч.О. 25.04.90 г. Д. ул. Набережная 1776-83. DS: Тимомегалия 2 ст. Вторичное иммунодефицитное состояние, ЧДБ (см. табл.3). У ребенка вторичное иммунодефицитное состояние с резким снижением СД4 и СД8 рецепторов. Соотношение СД-/СД8- клеток также резко уменьшено до 0,6. Инкубацией мононуклеаров крови установлено, что тимоптин и тималин коррегируют экспрессию рецепторов, увеличивая указанное соотношение. Коэффициент выбора между указанными препаратами равен 1,1, что <1,2, поэтому вышеуказанному пациенту назначено введение тималина N 3. До лечения частые ОРВИ, длительный, постоянный субфибрилитет. После 1-ого курса терапии субфибрилитет исчез. ОРВИ не болел. Экспрессия рецепторов СД3 72% СД4 17% СД8 16% СД38 20% HLA1 90% Соотношение СД4-/СД8- мононуклеаров 1,06. Иммунокорригирующая терапия продолжена. П р и м е р 4. Р.Е. 21.11.89; М. Монтажная 54/4DS: ЧДБ. Тимомегалия 1 ст. (см. табл.4). У ребенка вторичное иммунодефицитное состояние с увеличением вилочковой железы. Соотношение СД4-/СД8- клеток снижено до 0,7. Инкубацией мононуклеаров крови установлено, что тималин, тимоптин и Т-активин корректируют экспрессию рецепторов, увеличивая вышеуказанное соотношение. Коэффициенты формулы между препаратом, наиболее оптимально корректирующим СД4-/СД8- маркеры, тималином и двумя другими препаратами тимоптином, Т-активином равны соответственно 1,5 и 9,7. Исходя из того, что исходное соотношение Т-хелперов и Т-супрессоров 0,7 при результате коэффициента 1,5 и более назначили тималин, более оптимально корректирующим соотношение этих эффекторных субпопуляций. После 1-го курса терапии ОРВИ не болел. Экспрессия рецепторов СД3 70% СД4 14% СД8 12% СД38 14% HLA1 81% Соотношение СД4-/СД8-мононуклеаров равно 1,17. П р и м е р 5. Ш.И. 4,06.85 г. М. Коминтерна 34,
DS: Атопический дерматит. ЧДБ (см. табл.5). У ребенка вторичное иммунодефицитное состояние. Соотношение СД4-/СД8- клеток увеличено до 2. Инкубацией мононуклеаров установлено, что все использованные препараты, особенно Т-активин и тимоптин, корректируют вышеуказанное соотношение, снижая его. Коэффициент выбора, подсчитанный по формуле, 1,2, поэтому ребенку назначили введение Т-активина 5 инъекций. После проведенного курса терапии проявления аллергического дерматита уменьшились, ОРВИ болел. Продолжительность, выраженность течения болезни значительно легче, чем обычно (t соответственно 2 дня и 5-6 дней 38,5 и до 39,5-40оС). Экспрессия рецепторов СД3 5% СД4 20% СД8 14% СД38 36% HLA1 74% Соотношение СД4-/СД8- мононуклеаров 1,43. Приведенные примеры показывают, что применение для оценки потенциального действия иммунокорректора реакции Т-РОК или изменения экспрессии СД2 маркера далеко не всегда дает достаточную и объективную оценку влияния иммуностимуляторов на рецепторный аппарат мононуклеаров как вследствие возможной вариабельности методик (несовпадение абсолютных цифр клеток, обладающих рецептором по результатам Т-РОК и выявленных с помощью моноклональных антител пример 1), так и вследствие объективной невозможности установления оптимального препарата по результатам изменения экспрессии Т-клеточных рецепторов СД2 (почти равная стимуляция различными иммунокорригирующими препаратами рецепторов СД2- пример 3), возможности получения неправильных ориентиров исходя из результатов оценки иммунокорригирующего препарата по одному маркеру (пример 1: по результатам реакции Т-РОК введение тималина не показано, кажущийся лучший эффект принадлежит Т-активину) и т.д. Проведенная иммунокоррекция по предлагаемому способу в сравнении со способом-прототипом позволила улучшить состояние иммунологических показателей (см. табл. 1), обеспечить более интенсивное (р < 0,05) снижение частоты заболеваемости ОРВИ детей, страдающих частыми болезнями. Клинические и иммунологические показатели детей с измененной реактивностью, иммунокоррекция которым проводилась с использованием различных схем, приводятся в табл.6. Таким образом, преимуществами предлагаемого способа является то, что он позволяет сделать оптимальный выбор иммунокорректора. Применение метода обеспечивает снижение числа заболеваний в группе часто болеющих детей по сравнению со способом-прототипом более чем в 3 раза, обуславливает более оптимальную коррекцию иммунного статуса (см. табл.6 СД4-, СД8- рецепторов, тенденция к увеличению рецепторов константной части HAL1).
Формула изобретения
при К нижней границы нормы и по формуле
при K верхней границы нормы, где K и 0 процент клеток, несущих данный антиген соответственно до и после инкубации с препаратом, причем, если препарат, оптимально корректирующий соотношение СД4+/CД8+ клеток, не набрал максимальное число баллов, выбор между ним и препаратом, наиболее интенсивно увеличивающим экспрессию комплекса рецепторов и изменяющим в сторону повышения указанное соотношение, осуществляют по формуле
а в сторону понижения - по формуле
где СД4+/CД8+оптим - оптимальное соотношение;
Бмакс - максимальное количество баллов,
и при результате менее 1,5 назначают препарат, набравший большое число баллов. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что при исходном изменении соотношения СД4+/CД8+ клеток > 2 или < 0,7 коэффициент изменения разности соотношения СД4+/CД8+ к изменению разности баллов равен или менее 1,2.
РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6