Способ диагностики туберкулезного синовита

 

Использование: медицина, для диагностики туберкулезного синовита. Сущность изобретения: одновременно в синовиальной жидкости и сыворотке крови определяют титр противотуберкулезных антител в реакции РНГА с фосфатидным антигеном и реакции РСК с туберкулиновым антигеном, выражают полученные значения в виде логарифма основания два и рассчитывают диагностический показатель по предлагаемой формуле.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике туберкулеза.

Известен способ диагностики костно-суставного туберкулеза, включающий иммунологические исследования на фоне пробы Коха и одновременное определение противотуберкулезных антител (ПТАТ) в сыворотке крови (СК) и синовиальной жидкости (СЖ), причем туберкулезный артрит диагностируют в случае повышения титра ПТАТ в СЖ более чем в два раза (1). Этот способ сложен и недостаточно точен, т.к. по данным самих авторов частота реакции на туберкулин в случаях пробы Коха не превышает 55% Цель изобретения повышение точности и упрощение способа диагностики туберкулезного синовита.

Поставленная цель достигается тем, что у больного с подозрением на туберкулезный синовит проводят одновременно поиск противотуберкулезных антител (ПТАТ) в синовиальной жидкости (СЖ) и сыворотке крови (СК) с применением двух реакций реакции непрямой гемагглютинации с фосфатидным антигеном (РНГА-Ф) и реакции связывания комплемента с туберкулином (РСК-Т), причем по формуле определяют диагностический показатель (ДП), позволяющий подтвердить или отвергнуть туберкулезную этиологию заболевания.

Принципиальным отличием способа является: 1) выявление ПТАТ параллельно в СЖ и СК с помощью комплекса из 2-х серологических реакций без подкожного введения туберкулина и дополнительных сложных иммунологических исследований; 2) поиск ПТАТ с помощью 2-х туберкулезных антигенов туберкулина и фосфатида микобактерий, повышающий точность реакции; 3) применение разработанного авторами диагностического показателя (ДП), суммирующего и конкретизирующего результаты иммунологических тестов.

Для сравнительной оценки предлагаемого способа и способа-прототипа обследованы 2 группы больных с достоверно установленными диагнозами: 1 гр. - больные с туберкулезным синовитом 27 больных, 2 гр. больные с неспецифическим синовитом 17 больных. Все 44 больных обследованы указанными двумя способами. Установлено, что специфичность предлагаемого теста очень высока (100% ), ложноположительных результатов у больных неспецифическим синовитом не было получено ни разу. Чувствительность способа достигает 93,1% Ложно-отрицательные результаты получены в 3 случаях из 27 Специфичность способа-прототипа равна 94,12 и 82,35% т.е. является несколько менее высокой. Чувствительность же способа-прототипа резко уступает заявляемому. Она равна 25,93 и 77,78% в зависимости от применения туберкулина или фосфатидного антигена. Ложно-отрицательные результаты получены в 20 и в 6 случаях из 27 соответственно.Необходимо отметить, что в оригинальном способе-прототипе авторы пользовались в качестве антигена только туберкулином, а фосфатидный антиген не применяли.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного натощак из локтевой вены берут 5 мл крови, а затем путем пункции сустава набирают 2 мл СЖ. Кровь выдерживают в термостате при температуре плюс 37±1^oC в течение 60 мин, после чего сгусток осторожно обводят стерильной пастеровской пипеткой. Пробирку переносят в холодильник с температурой плюс 4-6^oС. Пробирку с СЖ сразу помещают в холодильник На следующий день из пробирки с кровью отсаcывают СК в сухую стерильную пробирку и помещают в морозильную камеру при минус 10- 20^oС на 1 неделю. СЖ центрифугируют в течение 10 мин при 1500 об/мин, надосадочную жидкость переносят в сухую стерильную пробирку и замораживают подобно СК. Через неделю СК и СЖ размораживают при комнатной температуре и используют для определения ПТАТ.

Антифосфатидные гемагглютинины (ГА) определяют с помощью РНГА-Ф согласно "Наставлению по применению диагностикума туберкулезного эритроцитарного антигенного сухого", изложенному в листовке-вкладыше в коробке с коммерческим препаратом.

Комплементсвязывающие антитела (КСА) определяют в РСК-Т с помощью метода Худомела, используя собственную модификацию, а именно: а) в СК: в пробирку наливают 0,1 мл цельной СК и 0,1 мл туберкулина в рабочем разведении; пробирку помещают в водяную баню при +37^oС вместе с контролем-пробиркой, содержащей 0,1 мл СК и 0,1 мл физиологического раствора; во время инкубации в течение 1 ч. пробирку встряхивают через каждые 15 мин; по окончании инкубации и в опытную, и в контрольную пробы добавляют по 5 мл гемолитической системы (смесь равных объемов эритроцитов барана и гемолитический сыворотки к ним), содержимое пробирок тщательно перемешивают и помещают на 15 мин в водяную баню при +37^oС. Для остановки реакции пробы на 5-7 мин помещают в морозильную камеру бытового холодильника, после чего встряхивают, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин; надосадочную жидкость отсасывают в чистые пробирки. Учет реакции производят путем колориметрировация надосадочной жидкости опытной и контрольной проб. Разность в величинах экстинкции контрольной и опытной проб, умноженная на 100, означает уровень КСА в условных единицах (У.Е.).

б) в СЖ: в пробирку наливают 0,13 мл СЖ с добавленным в нее комплементом морcкой свинки и 0,1 мл рабочего раствора туберкулина; пробирку помещают в водяную баню при +37^oС вместе с контролем пробиркой, содержащей 0,13 мл СЖ с комплементом морской свинки и 0,1 мл физиологического раствора. Все дальнейшие процедуры в точности соответствуют описанным в методике обнаружения КСА в СК (см. а). Математическая обработка полученных показателей заключается в следующем. Титры ПТАТ в РНГА-Ф выражают в значениях логарифмов основания 2 (log₂). Вычисляют произведение выраженных указанным способом титров ГА на титры КСА, выраженные в у.е. раздельно в СК и СЖ. Из произведения, полученного для СЖ, вычитают произведение, полученное для СК. Найденная разность и является диагностическим показателем (ДП). Получение ДП выражается формулой: Опытным путем установлено, что пограничным значением ДП является уровень, равный 8. При ДП=8 и выше ставят диагноз туберкулезного синовита, если ДП ниже 8, то туберкулезная этиология заболевания отвергается Пример N 1. Больная Р-а, 39 пет, поступила с подозрением на туберкулезный синовит правого коленного сустава. Давность заболевания 5 лет, лечение без эффекта. Клинико-рентгенологические и лабораторные данные: воспаление в области правого коленного сустава с выраженной припухлостью, болезненностью, без выявленных деструктивных изменений при наличии небольшого остеопороза костей сустава, пунктат СЕ стерилен. При исследовании СК установлено, что титр ПТАТ в РНГА-Ф 1:16, следовательно ГА^lo_СК^g2=4; титр ПТАТ в РСК-Т равен 0, следовательно KCA^e&_СК^t&. При исследовании СЖ установлено, что титр ПТАТ в РНГА-Ф 1:512, следовательно =9; титр ПТАТ в РСК-Т равен 8 у.е. следовательно KCA^e&_СЖ^t&=8. Вычисляем ДП. ДП 9 x 8 4 x 0 72.

Установлен диагноз туберкулезного синовита правого коленного сустава. Диагноз подтвердился: выявлением у больной инфильтративного туберкулеза S_1-2 правого легкого в фазе уплотнения, положительной очаговой реакцией на пробу Коха, благоприятным эффектом противотуберкулезной терапии.2 Пример N 2. Больной С-ов, 52 года, поступил с подозрением на туберкулезный синовит обоих коленных и левого голеностопного суставов. Клинико-рентгенологические и лабораторные данные: выраженное воспаление правого коленного сустава, местное повышение температуры, болезненность, выпот, небольшой остеопороз и утолщение мягких тканей, пунктат СЖ стерилен. При исследовании СК установлено, что титр ПТАТ в РНГА-Ф 1:4 ( 1), титр ПТАТ в РСК-Т 0 у.е. (KCA^у._СЖ^е. 0). При исследовании СЖ установлено, что титр ПТАТ в РНГА-Ф 1:4 ( 1) титр ПТАТ в РСК-Т 3 у.е. (KCA^e&_СЖ^t& 3). Вычисляем ДП. ДП 1 x 3 1 х 0 3.

Установлен диагноз неспецифического артрита. Диагноз подтвержден: отрицательной пробой Коха, отсутствием эффекта от противотуберкулезной терапии, не характерным для туберкулеза клиническим течением и дальнейшим развитием заболевания ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ Бараш Л. И. Морозкина Н.С. Шпаковская Н.С. Иммунологические показатели крови и синовиальной жидкости до и после подкожного введения туберкулина у больных костно-суставным туберкулезом. //Пробл. туб. 1990. 8. С.5 7.

Формула изобретения

Способ диагностики туберкулезного синовита, включающий исследование крови и синовиальной жидкости, отличающийся тем, что определяют титры противотуберкулезных антител в реакции непрямой гемаггютинации с фосфатидным антигеном и реакции связывания комплемента с туберкулиновым антигеном одноверменно в синовиальной жидкости и сыворотке крови, показатели титров гемагглютинации выражают в виде логарифмов основания два и производят расчет диагностического показателя по формуле:
ДП = ГА^log_СЖ2 × КСА ^у.е_СЖ^.- ГА^log_СК2 × КСА ^у.е_СК ,
где ДП диагностический показатель;
ГА титр гемагглютининов в РНГА-Ф, выраженный в Iog₂;
КСА титр комплементсвязывающих антител в РСК-Т, выраженный в у.е.

СЖ синовиальная жидкость;
СК сыворотка крови,
и при его значении, равном или большем 8, диагностируют туберкулезный синовит.