Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота

 

Использование: профилактика бруцеллеза у крупного рогатого скота, вакцинация, В-активин, Т-активин. Сущность изобретения заключается в том, что животных в 20-30 суточным возрасте иммунизируют в стандартной дозе 5 мл вакциной из штамма бруцелла абортус 82 с последующим, через 14-21 сутки, введением подкожно Т-активина в дозе 4 мкг/кг или 0,04 мл/кг 0,01% раствора и В-активина в дозе 6 мг порошка, растворенного 0,01% раствором Т-активина, однократно в сутки, в течение 3-х суток с последующим, через 12 месяцев, серологическим исследованием и ревакцинацией, той же вакциной в той же дозе серологически отрицательно реагирующих животных. Это повышает иммуногенные свойства вакцины из штамма 82 бруцелла абортус и обеспечивает более длительный иммунитет у животных, до 12 месяцев, что на 2 месяца больше установленного ранее. 1 табл.

Областью применения изобретения является сельское хозяйство, молочное животноводство, ветеринария, инфекционная патология крупного рогатого скота.

Учитывая, что возбудитель бруцеллеза способен к значительной трансформации, длительной персистенции и риверсии (П.А.Триленко, 1976) с целью иммунокоррекции испытывается значительное количество фармакологических средств синтетического бактериального и животного происхождения: диабазол, поливинилпирролидон (ПВП), нилверм (левамизол) (А.П.Красиков, В.С.Бронников, 1989; Д. Н. Лазарева, Е.К.Алехин, 1985); гидрат окиси алюминия, легкое миндальное масло, ПВП, дрожжевая РНК, левамизол, убитая культура БЦЖ (В.И.Белобаб, К.А. Калашников, В. Б. Тен, 1985); синтетический линейный карбоцепной полимер ПВП-40 и ПВП-700, синтетический полимер винилпиридинвинилацетат, синтетический карбоцепной полимер поли-4-винилпиридин, левамизол; коринеморфные бактерии шт. N 51, гидролизат молозива, нуклеината натрия, зимозан (П.Е.Игнатов, Н. И. Блинов, Ю. З.Кирш, 1983). Применяемые, как адъюванты, преимущественно вместе с вакцинами, иммунокорректоры повышают у лабораторных животных невосприимчивость к бруцеллзу, нивелируют отрицательное действие вакцины из шт.19 (реактогенность, длительная серопозитивность), усиливают иммуногенность бруцеллезной химической вакцины, стимулируя, в основном, клеточный иммунитет. Однако производственных испытаний этих веществ на сельскохозяйственных животных, в том числе на молодняке крупного рогатого скота, пока недостаточно и определенных выводов о их внедрении в клиническую ветеринарию пока не имеется.

С целью формирования противобруцеллезного иммунитета телкам 4-5-месячного возраста в комплексе с противобруцеллезной вакциной Бруцелла Абортус шт. 19 используют в качестве природных иммуномодуляторов препараты тимуса (экстракт, тимарин). При этом экстракт тимуса применяют перед вакцинацией двукратно через одни сутки (Б.И.Кандауров, Н.Г.Кузнецова, 1989), а тимарин в день вакцинации, на 4-е и 7-е сутки после вакцинации (С.К.Переходова, М.А. Бажин, В. А. Мироненко, 1990). Недостатком данных рекомендаций является то, что применение только тимусных препаратов преимущественно влияет на Т-защитные стороны иммунитета, мало затрагивая динамику Б-лимфоцитов и, кроме того, учитывая, что пик реакции организма на антигенные препараты бруцелл приходится на 21-30-е сутки, а пик иммунного ответа на иммуномодуляторы приходится на более ранние сроки, становится очевидным недостаточная эффективность рекомендаций авторов по формированию иммунной защиты организма при комплексном применении противобруцеллезных вакцин и иммуномодуляторов. Кроме того, применение противобруцеллезных вакцин в 4-5-месячном возрасте на фоне отсутствия или значительного ослабления колострального иммунитета создает условия для спонтанного заражения молодняка возбудителем бруцеллеза.

Прототипом изобретения является способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота, заключающийся в иммунизации телок в 4-5-месячном возрасте в стандартной дозе 5 мл. вакцины бруцелла абортус шт. 82 с последующим серологическим исследованием животных через 10 месяцев и ревакцинацией серологически отрицательно реагирующих той же вакциной в той же дозе (см. "Наставление по применению вакцины сухой живой из шт. 82 Бруцелла Абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота".). Недостатком данного способа является продолжительность иммунитета после первичной вакцинации только в течение 10 месяцев, а также возможность спонтанного заражения животных в период до первичной иммунизации (до 4-5 месяцев).

Задачей изобретения является обеспечение более длительного иммунитета у животных путем повышения иммуногенных свойств вакцины бруцелла абортус шт. 82.

Сущность изобретения заключается в том, что животных в 20-30-суточном возрасте иммунизируют в стандартной дозе 5 мл. вакциной бруцелла абортус шт. 82 с последующим, через 14-21 сутки, введением подкожно Т-активина в дозе 4 мкг/кг (0,04 мл/кг) 0,01% раствора и В-активина в дозе 6 мг порошка, растворенного 0,01% раствором Т-активина в течение 3-х суток, однократно в сутки, с последующим, через 12 месяцев, серологическим исследованием и ревакцинацией той же вакциной в той же дозе отрицательно реагирующих животных.

Существенными признаками является то, что: 1). Животных иммунизируют первично в 20-30-суточном возрасте, а не в 4-5-месячном возрасте (прототип), что дает возможность предотвратить заражение животных возбудителем бруцеллеза в период до 4-5 месяцев.

2). Введение животным Т- и В- активинов. (Т-активин получают из тимуса крупного рогатого скота, а В-активин из культуры клеток костного мозга свиней). Т- и В-активины никогда ранее не применяли для усиления иммуногенных свойств вакцины из штамма 82. Известно, применение Т- и В-активинов для лечения респираторных болезней телят (Е.С.Воронин и др. 1987). 3). Ревакцинируют животных через 12 месяцев, что на 2 месяца удлиняет иммунитет против бруцеллеза у первично иммунизированных животных. Это происходит за счет коррекции иммунной системы у животных раннего возраста, повышенной активности ее в течение 12 месяцев и снижения восприимчивости их к вирулентному штамму бруцелл.

4). Т- и В-активины вводят животным через 14-21 сутки после иммунизации. Стандартное применение вакцины животным в 4-5-месячном возрасте обусловлено более поздним образованием антител на бруцеллезный антиген, что связывают со специфичностью реактивности иммунной системы у животных раннего периода развития (В.П.Урбан, И.Л.Найманов, 1984).

Для первичной иммунизации животных определен 20-30-суточный возраст, что объясняем необходимостью создания не менее 2-недельного интервала после иммунизации животных вакциной БЦЖ, широко внедряемой с целью специфической профилактики туберкулеза.

Природные иммуномодуляторы Т- и В-активины у животных, иммунизированных в 20-30-суточном возрасте, выполняют роль искусственных антигенных раздражителей, обусловливая уже через одни сутки после введения увеличение содержания в крови иммуноглобулина g на 83,8% а через 14 суток на 51,6% иммуноглобулина М соответственно на 400 и 20% В аналогичные периоды возрастают на 23,0 и 90,0% содержание лизоцима в крови, 5,5 и 3,7% - содержание В-лимфоцитов 0,3 и 3,3% содержание Т-лимфоцитов в крови. Увеличение через одни сутки содержания в крови иммуноглобулина g обусловлено за счет иммуноглобулина g₁, а через 14 суток как за счет иммуноглобулина g₁, так и иммуноглобулина g₂. Характерно, что повышенный уровень содержания В-лимфоцитов, иммуноглобулинов g₁ и 2, лизоцима в крови сохраняется в течение 12 месяцев, обусловливая высокую специфическую защиту животных за счет активной выработки иммунитета на бруцеллезный антиген вакцины из штамма 82. Об этом можно судить и на основании того, что через 12 месяцев после использования Т- и В-активинов 20-30-суточному молодняку, иммунизированному вакциной из штамма 82, от вирулентного штамма Бруцелл 54 заразилось только 33% животных, при индексе инфицированности в 3,1% в то время как в аналогичных условиях заразилось 100% телок, иммунизированных вакциной из штамма 82 в 4-5-месячном возрасте и не получивших Т- и В-активинов, а также 100% телок, не иммунизированных вакциной из штамма 82 и не получивших Т- и В-активинов. Индекс инфицированности этих животных составил 10,4 и 25,0% Реактивность животных, иммунизированных вакциной из штамма 82 в 4-5-месячном возрасте и получивших Т- и В-активины, на вирулентный штамм бруцелл аналогична животным, иммунизированным в 20-30-суточном возрасте, однако, более ранее использование профилактической иммунизации против бруцеллеза на фоне продолжительно сохраняющегося позитивного иммуномодулирующего влияния Т- и В-активинов позволяет вслед за колостральным противобруцеллезным иммунитетом обеспечить высокий уровень специфической защиты животных в более ранний возрастной период жизни, что повышает народно-хозяйственную значимость изобретения, гарантируя специфическую защиту от заражения бруцелезом телят более раннего периода развития.

Учитывая, что пик формирования противобруцеллезного иммунитета у животных приходится на 21-30-е сутки после иммунизации с целью повышения иммунного ответа организма на антигенный раздражитель предлагаем Т- и В-активины применять не как адъюванты вместе с вакциной, а именно через 14-21 сутки после введения вакцины в период начала формирования пика иммунного ответа на вакцину из штамма 82, что связано с выше приведенным примером быстроты ответной реакции иммунной системы животных на Т- и В-активины. Характерно, что через 30 суток после введений Т- и В-активинов после первого пика повышения иммунного ответа организма отмечается тенденция к снижению активности этого ответа, о чем свидетельствует повышение содержания в крови иммуноглобулина g₁ только на 56,2% в то время как через 14 суток их содержание в крови возрастало на 349,6% Аналогично показатели по иммуноглобулину g₂ составили 18,4 и 37,1% бактерицидная активность крови 22,6 и 22,6% Тенденция к повторному росту активности иммунной системы намечается через 2-3 месяца после применения Т- и В- активинов и сохраняется на достаточно высоком уровне в последующие 9 месяцев, обеспечивая 12 месяцев стабильную иммунную защиту организма против бруцеллеза.

Выше отмечено, что по результатам заражения животных, иммунизированных вакциной из штамма 82 в 20-30-суточном возрасте и стандартном 4-5-месячном возрасте и получивших Т- и В-активины, получен одинаковый профилактический эффект. Однако, рекомендуем переход на иммунизацию животных с применением Т- и В-активинов в 20-30-суточном возрасте, что связано со специфичностью реакции иммунной системы на иммуномодуляторы (таблица).

Из данных таблицы видно, что эффективность ответной реакции иммунной системы на Т- и В-активины выше у животных 20-30-суточного возраста, иммунизированных вакциной из штамма 82, в сравнении с животными 4-5-месячного возраста. При идентичных показателях содержания лейкоцитов в крови и индекса завершенности фагоцитоза у животных более старшего возраста отмечается кратковременное повышение фагоцитарного индекса моноцитов и нейтрофилов, в то время как у 20-30-суточных животных этот индекс возрастает к 14-м суткам и эта тенденция сохраняется и через 30 суток (соответственно 88,4 и 18,3% а у 4-5-месячных 25,0 и 27,9) при повышении индекса завершенности фагоцитоза у животных 20-30-суточного возраста на 43,4% а у животных 4-5-месячного возраста на 6% Характерно, что у животных более старшего возраста на фоне действия Т- и В-активинов в крови относительно более высок уровень Т- и В-лимфоцитов и эта закономерность сохраняется и на 30-е сутки. Однако, динамика повышения бактерицидной активности сыворотки крови и содержания в крови иммуноглобулинов, особенно группы g, свидетельствует о более высокой иммунной защите животных, привитых в 20-30-суточном возрасте и получивших Т- и В-активины, в сравнении с животными, более старшего возраста, у которых иммунная система находится в состоянии повышенного функционального напряжения и не может адекватно реагировать на иммуномодуляторы в сравнении с животными более раннего возраста.

Показатели через 12 месяцев после иммунизации животных в 20-30-суточном и 4-5-месячном возрастах с дополнительным применением через 14-21 сутки Т- и В-активинов соответственно: Т-лимфоциты 32,4 ± 0,71 и 31,0 ± 0,68% В лимфоциты 12,8 ± 1,24 и 14,6 ± 1,34% фагоцитоз моноцитов 70,0 ± 5,78 и 76,7 ± 3,34% фагоцитарный индекс моноцитов 3,07 ± 0,17 и 3,2 ± 0,12, фагоцитов нейтрофилов 77,3 ± 1,33 и 76,0± 2,31% фагоцитарный индекс нейтрофилов 2,37 ± 0,23 и 2,27 ± 0,08, индекс завершенности фагоцитоза 0,38 ± 0,01 и 0,33 ± 0,01, содержание иммуноглобулина g₁ 21,3 ± 2,13 и 21,3 ± 2,14 мг/мл, иммуноглобулина g ₂ 47,0 ± 4,20 и 42,7 ± 8,54 мг/мл, иммуноглобулина М 5,6 ± 0,80 и 6,4 ± 0,80 мг/мл, бактерицидная активность сыворотки крови 68,2 ± 0,11 и 68,2 ± 0,12% содержание лизоцима в сыворотке крови 21,0 ± 2,00 и 17,0 ± 0, свидетельствуют о сохраненном высоком уровне активности иммунной системы у животных, иммунизированных в 20-30-суточном возрасте, что подтверждает положительное влияние Т- и В-активинов, применяемых животным на фоне иммунизации их в более раннем возрасте вакциной из штамма 82, и указывает на целесообразность изменения сроков первичной иммунизации с 4-5-месячного возраста на 20-30-суточный возраст, а проведение ревакцинации их не через 10, а через 12 месяцев.

Опыты, приведенные выше, проводили на телках красной степной породы в условиях хозяйств Ставропольского края и лабораторий СКЗНИВИ.

Таким образом, положительный эффект изобретения достигается введением иммуномодуляторов Т- и В-активинов животным, иммунизированным в 20-30-суточном возрасте противобруцеллезной вакциной из штамма 82, через 14-21 сутки после иммунизации, что обеспечивает более длительный иммунитет (до 12 месяцев) и позволяет ревакцинацию животных производить не через 10 месяцев, как рекомендует "Наставление по применению вакцины сухой живой из штамма Бруцелла Абортус 82 против бруцеллеза крупного рогатого скота", а через 12 месяцев при сохранении у животных высокого уровня активности иммунной системы.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ: 1. Белобаб В.И. Калашников К.А. Тен В.Б. Влияние некоторых стимуляторов на иммуногенность бруцеллезных препаратов и на морфоструктурные изменения органов. Меры борьбы с инфекционными, паразитарными и незаразными болезнями сельскохозяйственных животных в Казахстане. Алма-Ата, 1985, с.10-16.

2. Донченко А.С. Аликин Ю.С. Донченко В.Н. Применение биологически активных веществ в качестве иммуномодуляторов в ветеринарии и медицине: Обзор литературы. ВАСХНИЛ. Сибирское отделение. ИЭВСиДВ. Новосибирск, 1989. c.44.

3. Игнатов П.Е. Блинов Н.И. Кирш Ю.З. Действие иммуномодуляторов в условиях in vitro и in vivo. Проблемы ветеринарной иммунологии. Тр. ВИЭВ. т. 57. -М. 1983, с.74-77.

4. Кандауров Б. И. Кузнецова Н.Г. Биостимулирующие факторы лимфоидной ткани при вакцинации шт. 19. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. Омск, 1989, с.69-75.

5. Красиков А.П. Бронников В.С. Влияние иммуномодуляторов на иммуногенность противобруцеллезных препаратов. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. Омск, 1989, с.75-78.

6. Лазарева Д.Н. Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. М. Медицина, 1985, с.256.

7. Переходова С.К. Бажин М.А. Мироненко В.А. Влияние тимарина на показатели иммунитета при экспериментальном бруцеллезе. Пути совершенствования профилактики и диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Омск, 1990, с.110-118.

8. Триленко П. А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. -Л. Колос, 1976, с.387.

9. Урбан В.П. Найманов И.Л. Болезни молодняка в промышленном животноводстве. M. Колос, 1984, с.207.

Формула изобретения

Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота путем иммунизации животных в стандартной дозе 5 мл вакциной из штамма 82 бруцелла абортус и ревакцинации серологически отрицательно реагирующих животных той же вакциной в той же дозе, отличающийся тем, что животных иммунизируют в 20 30 суточном возрасте с последующим через 14 21 сутки введением 0,01%-ного раствора Т-активина в дозе 4 мкг/кг или 0,04 мл/кг и В-активина в дозе 6 мг порошка, растворенного в 0,01%-ном растворе Т-активина, однократно в сутки в течение 3-х дней, а ревакцинируют через 12 месяцев.

РИСУНКИ

Рисунок 1