Способ иммунотропной модификации препарата тимического происхождения

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в технологии изготовления модуляторов иммунитета, применяемых при различных заболеваниях. Сущность его заключается в том, что иммунотропным препаратам придает большую биологическую активность и стабильность. Способ осуществляют путем механохимического диспергирования 20 мг препарата, запаянного в сосуд при температуре +25^o C и относительной влажности 30% семью шарами диаметром 6 мм из молибденового стекла в течение 2 - 5 мин с амплитудой вибрации 9 мм и частотой 60 Гц. Использование изобретения способствует уменьшению дозы препарата при одновременном снижении вероятности побочных явлений.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармации иммуноактивных лекарственных средств, и может быть использовано в технологиях изготовления модуляторов иммунитета, применяемых при различных заболеваниях.

В современной медицине, при лечении различных заболеваний иммунной системы организма применяют полипептидные гормоны тимуса. Технология изготовления и модификации препаратов включает в себя получение их из ткани зобной железы телят с применением уксусной реакции с последующей гель-фильтрацией. Этот препарата относится к полипептидам с низкой молекулярной массой (Морозов В. Г. Хавинсон В.Х. Выделение из тимуса и изучение природы фактора, стимулирующего иммуногенез. Доклады АН СССР, 1977, т. 233, N 3, с. 491 494).

Известный способ из-за того, что получение препарата основано на экстрагировании с помощью кислот и ионообменной хроматографии, не позволяет извлечь из исходного сырья лекарство с высокой биологической активностью, что обуславливает необходимость применения достаточно больших доз лекарственных средств.

Известен также способ модификации биологически активных веществ, основанный на принципе механического диспергирования высокомолекулярных веществ, в частности, при температурах 80 150 К, в стальном барабане лабораторной микромельницы со стальными шарами до 12 мин (Дубинская А.М. и др. Изменение структуры коллагена под влиянием механического диспергирования, Биофизика, 1980, т. XXV, вып. 4, с. 610 614).

Однако существующий способ модификации вызывает в иммунотропных препаратах полиморфные переходы с неактивной реакционной формой, денатурацию белка, инактивацию ферментативной активности и нестабильность в результате гидролитического разложения.

Целью изобретения является предание иммунотропным препаратам большей биологической активности и стабильности.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе модификации иммунотропных препаратов, включающем механохимическое диспергирование 20 мг препарата в запаянном сосуде из молибденового стекла, имеющего объем 20 см ³, в воздушной среде с 30% относительной влажности и температурой +25^o C с помощью 7-ми стеклянных шаров из молибденового стекла массой 7 г и диаметром 6 мм в течение 2 5 мин с амплитудой вибрации 9 мм и частотой 60 Гц.

Принципиальное отличие предлагаемого способа модификации заключается в том, что основные механохимические изменения при заявляемых режимах диспергирования вызывают специфическую модификацию молекулярных связей полипептидов гормона тимуса с образованием свободных радикалов, а поскольку диспергирование проводили в присутствие воздуха с 30% относительной влажности, то основную массу свободных радикалов составляли радикалы перекисного типа, которые образуются при окислении первичных свободнорадикальных продуктов механодеструкции кислородом воздуха.

Известно, что иммунизация организма сопровождается, на определенных стадиях, активацией процессов перекисного окисления (Лукашова Р.Г. и др. Влияние гормонов тимуса на активацию перекисного окисления липидов в лимфоидных органах крыс в процессе развития гуморального иммунного ответа. Докл. АН УССР. Сер. Б, 1989, N 9, с. 63 67). Поэтому введение в организм предварительно механохимически модифицированных полипептидных гормонов тимуса приводит к процессам активации иммунологических реакций. При этом образуется стабильная топохимическая форма препарата со значительно более высокими биологически активными свойствами, без загрязнения продуктами износа мелящих его стеклянных продуктов, т.к. модифицируемые природные пептидные гормоны значительно мягче стекла.

Пример. Проводили механохимическое вибрационное модифицирование 20 мг официального препарата "Тималин" (серия 250690, год выпуска 1992, г. Санкт-Петербург), помещенного в запаянный сосуд из молибденового стекла, имеющего объема 20 cм³ в воздушной среде при температуре +25^o C и 30% относительной влажности с помощью 7 стеклянных шаров массой 7 г из молибденового стекла диаметром 6 мм в течение 2 и 5 мин с амплитудой вибрации 9 мм и частотой 60 гц в лабораторной микромельнице.

Биологическую активность препаратов после механохимического модифицирования, а также содержание веществ с тимозиноподобной сывороточной активностью (ТСА) в сыворотке крови тимэктомированных мышей определяли в тесте (Bach J.F. Dardenne M. Bach M.A. Demonstration and characteeization of a circulating thymic hormones in mouse and in man. Transplant. Proc. 1973, v. 1, N 1, p. 99 104). Механохимическую модификацию биопроб оценивали методом исследования перекисного окисления механолюминесценции (Орел В.Э. Алексеев С.Б. Гриневич Ю.А. Изучение механолюминесценции лимфоцитов при опухолевом процессе. Эксперим. онкология, 1991, т. 13, N 6, с. 71 73).

Исследования проведены на 100 мышах-самцах линии СВА массой 16 18 г, полученных из питомника "Столбовая" АМН РФ.

Результаты проведенных исследований приведены в табл. 1 и 2.

Представленные в таблице 1 данные характеризуют непосредственно свойства тималина в системе in vitro и свидетельствуют о том, что модифицированные препараты обладают большей биологической активностью и, соответственно, большей интенсивностью перекисного окисления (по параметру механолюминесценции) по сравнению с контрольным официальным препаратом, полученным известным способом.

Анализ данных представленных в таблице 2 свидетельствует, что способностью повышать уровень тимозиноподобной сывороточной активности у тимэктомированных мышей до уровня и выше тимической сывороточной активности интактных мышей обладали только механохимически модифицированные препараты. Введение модифицированных препаратов также восстанавливало механолюминесценцию спленоцитов тимэктомированных мышей до значений, наблюдаемых у интактных мышей. В то же время, введение официального тималина лишь частично восстанавливало исследуемые показатели. Отмеченные свойства механохимически модифицированных препаратов пи хранении их в лиофилизированном виде в запальных стеклянных ампулах в темноте при температуре +4^oC сохраняются более 6 месяцев.

использование предлагаемого способа модификации иммунотропных препаратов обеспечивает, по сравнению с существующими способами, следующие преимущества: существенное сокращение расхода исходного лекарственного сырья, уменьшение доза используемого препарата при одновременном уменьшении вероятности побочных явлений; надежное сохранение полученного уровня свойств при общепринятых условиях хранения.

Формула изобретения

Способ иммунотропной модификации препарата тимического происхождения, отличающийся тем, что проводят механохимическое диспергирование 20 мг препарата, запаянного в сосуд из молибденового стекла, имеющего объем 20 см³ в воздушной среде при 25^oС и 30%-ной относительной влажности, семью шарами диаметром 6 мм из молибденового стекла в течение 2 5 мин, с амплитудой вибрации 9 мм и частотой 60 Гц.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2