Способ получения человеческого лейкоцитарного интерферона

 

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производства человеческого лейкоцитарного интерферона. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. С этой целью в предлагаемом способе выделенные лейкоциты из донорской крови, лейкоцитарной или эритроцитарной массы суспендируют в питательной среде, содержащей 0,0015 ед/мл инсулина и 1500-3000 МЕ/мл человеческого лейкоцитарного интерферона и другие необходимые добавки. Исходная температура питательной среды 20^oC, количество лейкоцитов в 1 мл 10-20 млн. Процесс стимуляции ведут постепенно повышая температуру суспензии с 20^oдо 36, в течение 4-6 ч. Затем температуру суспензии доводят до 35,9^oC±0,1 и проводят индукцию и биосинтез интерферона. Противовирусная активность полученного интерферона составляет 10-12 тыс. МЕ/мл.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производства человеческого лейкоцитарного интерферона.

Известна технология производства человеческого лейкоцитарного интерферона, которая включает в себя следующую последовательность операций: выделение лейкоцитов из донорской крови, лейкоцитарной или эритроцитарной массы, суспензирование их в питательной среде при температуре (37±0,5)^oC, добавление к лейкоцитам аллантоисного вирус-индуктора и инкубирование при (30±0,5)^oC 3 ч. После этого отделяют вирус-индуктор, а к осадку лейкоцитов добавляют питательную среду и суспензию выдерживают при (37±0,5)^oC в течение 18-20 ч. На этом этапе происходит биосинтез интерферона в лейкоцитах и накопление его в питательной среде, полученной по этой технологии, имеет противовирусную активность 800-1000 МЕ в 1 мл препарата (1).

С целью увеличения продукции интерферона лейкоцитами на стадии биосинтеза в другом регламенте производства человеческого лейкоцитарного интерферона N 302-82 суспензию лейкоцитов выдерживают при 37,5^oC в течение 2 -10 ч в питательной среде, содержащей 100-200 ед/мл человеческого лейкоцитарного интерферона и 0,0015 ед/мл инсулина стадия прайминга добавляют вирус-индуктор на 1-2 ч стадия индукции интерферона. Затем удаляют вирус-индуктор, а к осадку лейкоцитов добавляют питательную среду и суспензию выдерживают при 37,5^oC в течение 18-20 ч стадия биосинтеза интерферона, а надосадочную жидкость, содержащую интерферон, подвергают инактивации (2).

Введение стадии прайминга значительно повышает продукцию интерферона лейкоцитами, а противовирусная активность интерферона, полученного этим способом составляет 4000-5000 МЕ/мл.

Необходимо отметить, что во всех вышеприведенных производственных технологиях и других известных способах получения человеческого лейкоцитарного интерферона, лейкоциты выделяют из крови, которая хранится при 4-6^oC, а сам процесс выделения идет при такой же температуре с последующим внесением их в питательную среду с температурой 37,5^oC и проведение стадии прайминга, стадии индукции и биосинтеза интерферона.

В качестве прототипа изобретения выбирается последний способ получения интерферона, так как он является наиболее близким по технической сущности.

Цель изобретения повышение выхода целевого продукта. С этой целью предложен способ получения интерферона, включающий выделение лейкоцитов, суспендирование их в питательной среде и праймирование в условиях постепенного повышения температуры суспензии с 20^o до (36,6 ±0,1)^oC в течение 4-6 ч, индукцию аллантоисным вирусом болезни Ньюкасла, биосинтез интерферона и инактивацию вируса-индуктора.

Сравнительный анализ существенных признаков изобретения и прототипа свидетельствует, что отличительными признаками заявляемого изобретения являются проведение прайминга лейкоцитов при медленном подъеме температуры суспензии с 20^o до (36,6±0,1)^oC в течение 4-6 ч. Предложенный температурный режим праймирования лейкоцитов обеспечивает условия для интенсивного биосинтеза интерферона.

Влияние приведенных отличительных признаков на достижение технического результата не следует из известного уровня знаний в области технологии производства вирусиндуцированных препаратов, следовательно, разработанный способ соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".

Способ осуществляется следующим образом. Выделенные лейкоциты из донорской крови, лейкоцитарной или эритроцитарной массы суспендируют в 5 л питательной среды (среда 199), содержащей 0,0015 ед/мл инсулина и 1500-3000 МЕ/МЛ человеческого лейкоцитарного интерферона 5-10% плазмы крови человека или 1,5-2% альбумина человека и антибиотики. В 1 мл питательной среды содержится 10020 млн. лейкоцитов. Питательная среда, содержащая вышеперечисленные исходные компоненты, имеет исходную температуру 20^oC.

В автоматизированном режиме, по программе, температуру суспензии с 20^oC повышают до (36,6±0,1)^oC в течение 4-6 ч. Затем температуру суспензии доводят до (36,9±0,1)^oC и в суспензию добавляют вирус-индуктор в дозе 2000-4000 ГАЕ на 2 млрд лейкоцитов, инкубируют взвесь при (36,9±0,1)^oC в течение 18-20 ч, постоянно перемешивая.

Лейкоциты удаляют центрифугированием, а надосадочную жидкость в количестве 4,5 л, содержащую интерферон, подкисляют 10% соляной кислотой до pH 2,2-2,4. Выдерживают подкисленный полуфабрикат интерферона в течение 10 дней для инактивации вируса-индуктора.

Противовирусная активность полученного таким способом интерферона составляет 10-12 тысяч МЕ/мл.

Таким образом, предлагаемый способ получения человеческого лейкоцитарнрого интерферона обеспечивает повышение его противовирусной активности в 2 и более раза по сравнению с прототипом. Использование предлагаемого способа в производстве будет способствовать экономии материальных затрат, т.к. он направлен на более эффективное использование лейкоцитов, а не на увеличение их количества.

Формула изобретения

Способ получения человеческого лейкоцитарного интерферона, включающий выделение лейкоцитов, их суспензирование в питательной среде, стимуляцию лейкоцитов, индукцию аллантоисным вирусом болезни Ньюкасла, биосинтез интерферона и инактивацию вируса индуктора, отличающийся тем, что стимуляцию лейкоцитов проводят в условиях постепенного повышения температуры суспензии с 20 до 36,7^oC в течение 4 6 ч.