Инактивированная вакцина против сальмонеллеза овец
Использование: ветеринарная микробиология, инактивированная вакцина против сальмонеллеза овец. Сущность изобретения: вакцина включает формалинизированную суспензию клеток штаммов Salmonella abortusovis ВИЭВ N 876, Salmonella typhimurium ВИЭВ N 159, Salmonella dublin ВИЭВ N 1449 в физиологическом растворе, адъювант - масло-ланолиновую смесь и иммуностимулятор - взвесь клеток Rodococcus equi ВИЭВ N 2. Вакцина ареактогенна, обеспечивает создание в организме животного длительный и напряженный иммунитет против сальмонеллеза овец при однократном введении в дозе 1,0 мл. Вакцина найдет применение в хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец.
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к получению инактивированной вакцины против сальмонеллеза овец.
Сальмонеллез овец и коз (Паратиф, Паратифозный аборт), инфекционная болезнь, вызываемая бактериями паратифозной группы, и характеризуется абортами, септическими явлениями и рождением нежизнеспособного молодняка. Аборты могут наступать у 25-30 от суягных овцематок. Ущерб складывается из затрат на лечение, недополучения молодняка, гибели абортировавших овцематок. Заболевание регистрируется во всех районах страны с развитым овцеводством. При использовании эффективных вакцин количество абортов и гибель овцематок снижается в десятки раз с 25 до 2,5 и более. Известна живая, авирулентная вакцина против сальмонеллеза овец, включающая антиген сальмонелл, серовара аборта овец из штамма N 17 HC, которую перед употребление разводят физиологическим раствором. Для получения вакцины берут бактериальную массу живых сальмонелл вакционного штамма, концентрируют, добавляют криопротекторы, разливают в ампулы и лиофильно высушивают. Вакцинируют овец за 1 мес до начала случной кампании в дозе 1 мл однократно в хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец. Продолжительность иммунитета 6 мес /1/. Известна также вакцина концентрированная, формолтиомерсаловая против сальмонеллеза овец, выпускаемая Армавирской биофабрикой. Вакцина содержит антигены 3-х сероваров сальмонелл: аборта овец, мышиного тифа, дублин. Вакцину применяют для профилактики сальмонеллеза овец в хозяйствах, неблагополучных по данному заболеванию, вводится двукратно: первый раз 3-4 мл, второй раз с интервалом 7-10 дней 4-5 мл внутримышечно /2/. Задача наших исследований получение инактивированной, ареактогенной вакцины против сальмонеллеза овец, обеспечивающей создание напряженного, длительного иммунитета в организме животного, уменьшение дозы и кратности введения. Нами выделены серовары сальмонелл Аборта овец N 876 и Дублин N 1149 из абортированных плодов овец в 1989 г. используемые в предлагаемой вакцине в качестве антигенов. Кроме того, нами выделен штамм Rodococcus equi N 2 от крупного рогатого скота из хозяйства Московской области в 1986 г. который использован в предложенной вакцине как иммуностимулятор, на который одновременно подана заявка. Помимо этих штаммов для получения вакцины против сальмонеллеза овец был использован ранее известный штамм Salmonella typhimurium N 159, полученный из Коллекции музея типовых культур лаборатории Бактериологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, г. Москва, который обладает следующими свойствами. Культурно-морфологические признаки. Грамотрицательные мелкие палочки, подвижные, формирующие выпуклые колонии 1-3 мм диаметром, прозрачные или беловатые. Хорошо растут на обычных питательных средах, на МПБ образует пленку и пристеночное кольцо. Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, способный расти в микроаэрофильных условиях. Оптимум рН 7,2-37 oC. Не изменяет молоко, не разжижает желатин, выделяет сероводород, не выделяет индол, не разлагает мочевину, сбраживает глюкозу, маннит, сорбит, арабинозу, мальтозу с образование кислоты, алктозу, сахарозу не сбраживает, имеет ферменты лизиндекарбоксилазу, орнитиндегидролазу. Агглютинируется диагностическими сальмонеллезными сыворотками 0-4, H i 1,2. Патогенна для белых мышей. ЛД50 равна 10103 клеток. Предложенная вакцина включает антигены 3-х сероваров сальмонелл: аборта овец, мышиного тифа и дублин в физиологическом растворе с 0,4-0,5 (об/об) формалина, адъювант - маслоланолиновая взвесь клеток Родококка иммуностимулятора. Штамм Salmonella abortusovis N 876 обладает следующими свойствами. Культурно-морфологические признаки. Грамотрицательные мелкие палочки, спор и капсул не образующие, подвижные. На МПа образуют мелкие колонии диаметром до 1 мм, на МНБ не образуют пленки и пристеночного кольца, бульон равномерно мутнеет. Физиолого-биохимические свойства. Аэробы, способные расти в микроаэробных условиях. Оптимум pH 7,2, t 37 oC. Не изменяют молоко, не разжижают желатин, выделяют сероводород, не выделяют индол, не разлагают мочевину, сбраживают глюкозу, маннит с образованием кислоты и очень слабо газа; лактозу, сахарозу, арабинозу, сорбит не сбраживают, имеют фермент лизиндекарбоксилазу. Агглютинируются диагностическими сальмонеллезными сыворотками 0-4, Н-с, 1,6. Патогенна для белых мышей. ЛД50 47106 клеток. Штамм Salmonella dublin N 1449 обладает следующими свойствами. Культурно-морфологические свойства. Грамотрицательные мелкие палочки, спор и капсул не образуют, подвижные, формируют выпуклые колонии 1-3 мм диаметром, прозрачные или беловатого цвета. Хорошо растут на обычных питательных средах: на МПБ образует пленку и пристеночное кольцо. Физиолого-биохимические свойства. Аэробы, способные расти в микроаэробных условиях, оптимум pH 7,2, t 37 oC. Не изменяют молоко, не разжижают желатин, не выделяют индол, выделяют сероводород, не разлагают мочевину, сбраживают глюкозу, маннит, сорбит с образованием кислоты и газа; лактозу, сахарозу, инозит, арабинозу не сбраживают, имеют фермент лизиндекарбоксилазу. Агглютинируются сальмонеллезными диагностическими сыворотками: 0-9, H др, (первая фаза). Патогенна для белых мышей ЛД50 равна 7103 клеток. Штамм Rodococcus equi N 2 обладает следующими свойствами. Культурально-морфологические признаки. Грамположительные, неподвижные, палочковидной и кокковидной формы бактерии, формирующие выпуклые колонии до 1 мм диаметром, серовато-желтого цвета. Для Rodococcus equi N 2 характерен медленный рост на простых питательных средах (3-4 сут), но при обогащении 10 сыворотки при 37 oC отмечается хороший рост через 24 ч. При выдерживании пробирок с культурой на свету колонии приобретают пигмент цвета семги. Физиолого-биохимические свойства. Аэроб, способный расти в микроаэробных условиях. Оптимум pH 7,2, t 37 oC. В отношении углеводов, аминокислот, многоатомных спиртов неактивен. Сбраживает только глюкозу. Не образует индол и сероводород, не разжижает желатин, не лизирует эритроциты крови животных. Имеет ферменты каталазу и уреазу. Непатогенный при внутрибрюшинном введении белым мышам массой тела 8-20 г в дозе 10109 микробных клеток не вызывает их гибели в течение 14 сут. Способ приготовления вакцины состоит в следующем. Пример 1. Для приготовления 1 л вакцины берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе с 0,4-0,5 формалина. Концентрация клеток в 1 мл взвеси 100 млрд. Антигены Salmonella abortusovis N 876 200 мл Антигены Salmonella typhimurium N 159 100 мл Антигены Salmonella dublin N 149 100 мл Взвесь клеток Rodococcus equi N 2 на физиологическом р-ре, содержащая в 1 мл 150 млрд мт 100 мл Легкое минеральное масло и безводный ланолин в соотношении 83-87:17-13 - Остальное После перемешивания всех компонентов концентрация формалина составит 0,2-0,25 Применяют вакцину однократно в дозе 1,0 мл с профилактической и лечебной целью в овцеводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец. Эффективность от применения вакцины в экспериментальных условиях (с применением тройной заражающей дозы) составила 80 Пример 2. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4-0,5 формалина (в 1 мл бактериальной взвеси содержится 100 млрд м.т.) в следующих количествах: Антиген Salm.abortusovis N 876 190 мл Антиген Salm.typhimurium N 159 95 млАнтиген Salm.dublin N 1449 95 мл
Взвесь клеток Rodococcus equi N 2 на физиологич. растворе, содержащем в 1 мл 150 млрд. м.т 95 мл
Масло-ланолиновый адъювант в соотношении 83-87:17-13 Остальное
Пример 3. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом р-ре, содержащем 0,4-0,5 формалина (в 1 мл антигена содержится 100 млрд. м.т.)
Антиген Salmonella abortusovis N 876 210 мл
Антиген Sakm.typhimurium N 159 105 мл
Антиген Salmonella dublin N 1449 105 мл
Взвесь клеток Rodococcus equi N 2 (концентрация 150 млрд в 1 мл) 150 мл
Масло-ланолиновая смесь в соотношении 83-87:17-13 Остальное
Поименованные в одном из примеров 1, 2, 3 компоненты вакцины помещают в гомогенизатор и по истечении 10-15 мин гомогенизации вакцину фасуют во флаконы. Как видно из примеров, предложенная вакцина является ареактогенной, обеспечивает создание в организме животного длительного и напряженного иммунитета против сальмонеллеза овец при однократном введении в дозе 1,0 мл. Вакцину в указанных дозах можно применять с лечебной целью. Вакцина апробирована с положительным результатом на 47 тыс. овец в Александровском и Левокумском районах Ставропольского края в 1992-1994 гг. Вакцина найдет применение в овцеводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу овец. Источники информации:
1. Наставление по применению вакцины против сальмонеллеза овец из штамма N 17 НС, 1991 г. 2. Поливалентная формол-тиомерсаловая вакцина против сальмонеллеза овец. В справочнике: Ветеринарные препараты, 1986 г. Киев, Урожай, с.236.
Формула изобретения
Формалинизированная суспензия клеток штамма Salmonella abortusovis ВИЭВ N876 с концентрацией 100 млрд.м.кл./мл 190 210
Формалинизированная суспензия клеток штамма Salmonella typhimurium ВИЭВ N159 с концентрацией 100 млрд.м.кл./мл 95 105
Формалинизированная суспензия клеток штамма Salmonella dublin ВИЭВ N1449 с концентрацией 100 млрд.м.кл./мл 95 100
Суспензия клеток штамма Rodococcus equi ВИЭВ N2 с концентрацией 150 млрд.м.кл./мл 95 105
Маслоланолиновая смесь в соотношении 83 87 17 13 Остальноеж