Способ производства питательной среды для микроорганизмов

 

1

1

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскив

Социалистические

Республив

Зависимое от авт. свидетельства № 171827

Заявлено 09.Х11.1966 (¹ 1117ll02/28-13) Кл. 6а, 14 с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 12Л11.1968. Бюллетень ¹ 10

Дата опубликования описания 12Х.1968

МПК С 12k

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете уйинистров

СССР

УДК 663.11: 576.8.093.1 (088.8) AHroP изобретения

Е. Г. Борисенко

Заявитель

Кубанский медицинский институт

СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ

ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

Полу 1сние в промышленности сиомассы дрожжеподобных грибов Сапс11(1а, растущих на парафинах нсфги, изьестно. По основному авт. св. ¹ 171827 известен способ производства биомассы, являющейся питагельнсй средой для микроорганизмов, путем выращивания дрожжей на питательной среде, содержащей

I. качестве исто«ника углерода углеводородные фракции нефти, например парафины, отделения выращенных дрожжей от питательной среды, сус17ендировс1ния и стерилизации полученной биомассы.

Для использования биомассы в качестве питательной среды при вырашивании микроорганизмов, высокотребовательных к составу сред, например патогенных, предло>кено суспензию биомассы перед стерилизацией разрушать автолизом при перемешивании всей массы, после «clo отделять полученный автолизат от нерастворимых белковых веществ, не усваиваемых микроорганизмами, одним из известных способов, например фильтрацией.

Автолиз следует вести в течение 24 час при

45 — 48 С, чтобы предотвратить развитие посторонней микрофлоры в процессе автолиза, в биомассу целесссбразно вводить антисептик, например толуол.

Способ заключается в следующем.

Дрожжи рода Candida выращивают на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода нефтепродукты, например парафины. Полученную биомассу отделяют от питательной среды одним из известных способов, например сепарацией, и суспендируют.

5 Суспензию живых дрожжей (с содержанием

850 — 400 г прессованных дрожей в 1 л) направляют для автолизя в лабораторный ферментер емкостью 10 л. Серной кислотой актизную реакцию среды доводят до рН 4,5, в

10 дальнейшем этот показатель не регулируют, 13 ферментере поддерживают температуру 45—

48 С, а в качестве антисептика в него добавляют толуол. Автолиз ведут 24 час, ка>кдый

«3с автолизат подвергают легкому механиче15 скому перемешиванию. Процесс автолиза прекраща;ст путем кипячения автолизата в течение 1 час, затем явтолизат освобождают от рыхлого осадка, например, сепарированием на лабораторной сепяраторной центрифуге, Очи20 щенный от осадка автолизат содержит следующие компоненты (в >иг()о): общий азот около 500 аммпнный азст 340 — 350 пептон-следы, азот полипептидов 210 †2

25 азот аминокислот 190 — 200.

Хрсматогра(рией на бумаге в автолизате определяется 14 свободных аминокислот и 2 мсносахара: глюкоза 100 — 110 и маниоза 80—

30 90 >иго о.

212935

Состав:пель М. И. Андреева

Редактор В. Ф. Чулкова Техред Л. Я. Бриккер Корректоры: Л. В. Наделйева и И. В. Босняцкая

Заказ 1009,10 Тираж 530 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Це:пр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2

Автолизат разводят водопроводной водой до нужной концентрации питательных веществ, доводят до кипения, подщелачивают 40% ным раствором МаОН до рН 7,6, затем вносят

0,1% двухзамещеHHOI фосфорнокислого натрия (Ха,НРО,) и 0,5!, поваренной соли (ХаС!). Полученную среду кипятят 15 —.. 20 Itua после чего фильтруют через полотно.

Плотную среду готовят из жидкой дооавлением 2,5з7в агаР-агаРа. СтеРилизацшо пРоводЯг в автоклаве 20 лин при 120 С.

На основе такого автолизата можно получать и сухие агаровые среды путем упаривания (концентрирования) его в вакуум-выпаривателе до содержания (в лг %): общего азота 1200 — 1500, а м минного азота 850 — 1000; пропитывания им агар-агара в соотношении

4: 1 и последующего высушивация.

При выращивании на жидких и плотных средах. приготовленных из aBòîëèзата, разведенного в два раза, в стaIIHQHapHbtx условиях нскоторых представителей тифопаратифозной и дизентерийной групп и ряда других микроорганизмов, интенсивность роста их не уступала таковой на общепринятых мясных средах.

Пример. (Глубинное культивирование микроорганизмов с аэрацией). Выращивают штамм Salmonella pat.atyphi В 50502 в 5-литровых бутылях с матерчатыми барботерами, через которые продувают 2 л воздуха в течение 1 мин. Количество опытной и контрольной среды (бульон Хоттингера в бутылях) 2 л, Перед высевом в питательные среды вносят 0,5% глюкозы и пеногаситель (оксидированное персиковое масло 1 ил масла на 1 л питательной среды). Интенсивность роста определяют по оптическим стандартам контрольного института имени Тарасевича.

После 14 час выращивания в среде из автолизата содержалось в среднем 9 илрд. клеток в 1 л л, в бульоне Хоттингера — 8 ллрд. в 1 лл.

При этом интенсивность роста на ней микроорганизмов не уступала интенсивности роста на бульоне Хотти нгера, Морфологические, культуральные, биохимические и антигенные свойства микроорганизмов, выращенных на средах из автолизата

Candida, не отличались от таковых у микроорганизмов, выращенных на бульоне Хоттингера.

Предлагаемая среда может быть использована во многих микробиологических производствах, например ее можно использовать вме10 сто,кукурузного экстракта в производстве кормового витаминизированного биомицина и вместо гидролизата соевой муки при микробиологическом получении р-каротина.

Себестоимость такой среды значительно ниже себестоимости сред, изготавливаемых из других белковых субстратов (мяса, рыбы, казеипа и т. д.). Для промышленности медицинской микробиологии можно использовать автолизаты Candida, выращенные на очищен20 вых парафинах, а для отраслей технической микробиологии, производящих продукты, не идущие в пищу человеку и животным, рациона Iьнее использовать автолизаты дрожжей, выращенных на неочищенных парафинах.

Предмет изооретения

1. Способ производства питательной среды для микроорганизмов по авт. св. № 171827 отличающийся тем, что, с целью использования

30 полученной среды для выращивания микроорганизмов, высокотребовательных к составу сред, например патогенных, суспензию биомассы перед стерилизацией разрушают автолизом прн перемешивании всей массы с пос35 ледующсГ очисткой полученного автолизата от нерастворимых белковых веществ одним из известных способов, например фильтрацией.

2. Способ по п, 1, отличающийся тем, что автолиз проводят в течение 24 час при 45—

40 48 С.

3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что, с целью предотвращения развития посторонней микрофлоры в процессе автолиза, в биомассу вводят антисептик, например

45 толуол.