Фармацевтические бактериоциновые композиции и их применение

 

Область использования: изобретение относится к области фармации и касается бактериоциновых средств. Сущность изобретения: композиции содержат лантионинсодержащее соединение, фармацевтически приемлемый носитель, включающий дополнительно кислотный носитель. Композиции применяют для лечения и профилактики желудочно-кишечных нарушений, вызванных патогенными микроорганизмами. 2 с. и 12 з. п. ф-лы, 13 табл.

Антимикробное действие лантионинсодержащего бактериоцинового низина ограничено по отношению к определенным грамположительным микроорганизмам и является оптимальным при pH 5,0. Антимикробное действие низина усиливается при применении его в комбинации с таким хелатором, как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК). Было обнаружено, что действие низин-хелаторных композиций значительно сильнее или оптимальное при pH большем, чем 5,0. Например, было определено, что антимикробное действие композиции, включающей низин и ЭДТК в отношении золотистого стафилококка (Staphylococcus auteus) значительно сильнее при pH 8,0, чем действие той же композиции на золотистый стафилокок при pH 5,0. Было также обнаружено, что комбинация хелатора с низином является активнодействующим по отношению к грамотрицательным бактериям, что обычно не свойственно самому низину.

Настоящее изобретение касается лантионинсодержащих бактериоциновых композиций, которые активны при кислотном pH ниже 5,0 и проявляют значительную активность в отношении грамотрицательных бактерий. Эти активные при pH композиции могут применяться, например, в методике лечения или профилактики инфекции или роста микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте человека и животных. Эти композиции, будучи введенными в желудочно-кишечный тракт, поведут себя как бактерициды даже в среде желудка с низким pH. Это антибактериальное действие может быть использовано в сдерживании роста инфекций, вызванных такими болезнетворными организмами, как геликобактер (Helicobacter), эшерихия (Eschrichia), сальмонелла (Salmonella), бацилла (Bacillus), клостридия (Clostridia), бактероид (Bacteroides), кампилобактер (Campykobacter) и ерсиния (Yersinia). Такие бактериоциновые композиции, активные при низком pH, могут поэтому применяться при лечении различных заболеваний или симптомов, вызванных присутствием этих патогенных бактерий.

Различные желудочно-кишечные заболевания или симптомы, включая диарею, гастрит, пептическую и доуденальную язву и гастральную карциному, являются результатом присутствия в желудочно-кишечном тракте патогенных микроорганизмов. Эшерихия и сальмонелла, в частности, а также определенные виды клостридии, бациллы, бактероида и ерсинии могут являться причиной диареи, особенно у новорожденных сельскохозяйственных животных (R.E. Голландия, 1990. Клиническая микробиология. Обзор 3:345, "Случаи инфекционной диареи среди сельскохозяйственного молодняка").

Можно говорить о причастности геликобактор пилори (Helicobacter pylori) к гастриту, дуоденальной и пептической язвенной болезни (Петерсон В.Л., 1991, Новая Англия, журнал "Медицина", 324:1043, "Геликобактер пилори и пептическая язвенная болезнь"), а также об их связи с гастральной карциномой (Хендерсон Б.Е., Росс Р.К., и Пайк М.К., 1991, Наука, 254:1131, "О первичной профилактике рака", Номура А., Штеммерманн Г.А., Кайеу П.Х., Като И., Перец-Перец, Г. и Блейзер М. Дж. (1991) Новая Англия, журнал "Медицина", 325: 1132, "Инфекция галикобактер пилори и гастральная карцинома среди японских американцев на Гавайях; Парсоннет Дж., Фридман Г.Д., Вандерштин Д.П., Чан Й. , Фогелман Дж. Х. , Орентрайх Н. и Сибли Р.К. (1991) Новая Англия, журнал "Медицина", 325: 1127, Форман Д., Сайтас Ф., Ньэлл Д.Г., Стейси А.Р., Борэм Дж. Пето, Р., Кэмпбелл Т.К., Ли Дж. и Чень Дж. (1990) Международный журнал "Рак", 46:608, "Географическая связь распространенности антител галикобактер пилори и смертности в результате заболевания гастральным раком в сельской местности Китая").

Многие желудочно-кишечные патогенные организмы являются грамотрицательными бактериями, по отношению к которым низит обычно считался инертным (Херст А. , 1981, Низин, Достижения в области прикладной микробиологии, т. 27, с. 85-121). Например, Helicobacter pylori (который на предшествующем уровне техники также идентифицировался как Compylobacter pylori представляют собой грамотрицательную микроаэрофильную бациллу, которая колонизирует гастральную мукозу. Со времени первой публикации в связи с гистологическим гастритом (1983) отмечалась зависимость между подавлением инфекции H. pylori и улучшением в сфере гастральных нарушений. Однако, несмотря на то, что испытывались многочисленные антибиотики против инфекции Helicobacter pylori ни один из них не получил подтверждения приемлемого и ни один агент или режим не был одобрен для применения против этой бактерии. В редких случаях добивались искоренения этого организма при долгосрочном применении антибиотиков, которые сами по себе могли продуцировать неприемлемые побочные эффекты (Петерсон В.Л., 1991, Новая Англия, журнал "Медицина", 324:1043, "Helicobacter pylori" и пептическая язвенная болезнь", Уоррен Дж. Р, 1983, Ланцет, 1:1273, "Неопознанные изогнутые бациллы на гастральном эпителии при активном хроническом гастрите", Морган и др., 1988, Гастроэнтерология, 95: 1178, "Нитрофураны при лечении гастрита в связи с Campylobacter pylori, Глупцинский У и др. 1988, американский журнал "Гастроэнтерология", 83:365, "Гастрит в связи с Campylobacter pylori" испытание амоксипиллином, контролируемое двублиндированным плацебо, Ровз Е.А. и др., 1988, Гастроэнтерология, 94: 33, "Хронический антральный активный гастрит в связи с Campylobacter pylori, Глупцинский У. 1990, "Helicobacter pylori, гастрит и пептическая язва", Малфертейнер П., Дичунейт Х., Изд. Шпрингер-Ферлаг, Берлин, Германия, с. 49-58: Ровз Е.А. и Титгат Г.Н. 1990, Ланцет, 335:1233, "Лечение дуоденальной язвы в связи с искоренением H. pylori", О'. Риордан Т., и др. 1990, Пищеварительный канал, 31:999, "Стимуляторная антибиотическая терапия в сфере дуоденальных язв, леченных субцитратом коллоидного висмута"; Вейл Дж. и др., 1990, Алиментарная фармакологическая терапия, 4:651, "Инфекция Ню pylori, обработанная трехкалийный дицитратовисмутатом и соединением метронидазола"; Кофлан Дж. Г. , Галлиган Д., Хамфрис Х. и др., 1987, Ланцет, 2:1109, "Campylobacter pylori" и рецидив дуоденальной язвы - 12-месячное доскональное обследование"; Маршалл Б. Дж., Гудвин К.С., Уорен Дж. и др., 1988, Ланцет, 2: 1437, "Возможное двублиндированное испытание рецидива дуоденальной язвы после искоренения Campylobacter pylori".

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим в себя лантионсодержащий бактериоцин, такой, как низин и хелатор с подходящим носителем для применения в качестве бактерицидов в среде с низким pH. Эти композиции устойчивы и активны в кислотном pH и применимы для антибактериального воздействия в отношении грамотрицательных бактерий в среде с низким pH подобно той, которая имеет место в желудочно-кишечном тракте. Фармацевтические низиновые композиции согласно данному изобретению являются быстросрабатывающими, так что после введения их в желудок и желудочно-кишечный тракт их активность не должна лимитироваться скоростью очищения содержания желудка. Более того, в отличие от антибиотиков, глотание низиновых композиций безопасно. Фармацевтические композиции в лечебном режиме могут применяться самостоятельно или в комбинации с другими фармацевтическими агентами или препаратами. Данное изобретение также касается способов применения и изготовления таких композиций.

Эффективность настоящего изобретения была продемонстрирована на примере кишечных бактерий E. coli, которые обнаруживаются в пищеварительном канале млекопитающих и нередко являются нарушителями правильной работы желудочно-кишечного тракта. Выживаемость E.coli остается неизменной после воздействия на них ЭДТК или цилиндра, а также после воздействия на них низина. Кроме того, суспензии E.coli под воздействием кислоты прекрасно выживают в кислотной среде, если pH не падает ниже 2,5. Однако, как это изложено ниже, когда низин соединяется с ЭДТК в диапазоне значений кислотного pH, наблюдается значительное ослабление жизнеспособности бактерий после только одной минуты воздействия этих низиновых композиций. При pH 3,5 за счет низина можно отнести сокращение количества жизнеспособных бактерий на более чем 6 логарифмов после подвергания их воздействию низинхелаторных композиций в течение только одной минуты. При pH ниже 3,5 очевидно некоторое ослабление потенции низиновых композиций, но, тем не менее, остается приблизительное тысячекратное увеличение активности низина даже при pH 2,5 (табл. 1).

Низин, активированный ЭДТК, является бактерицидным по отношению к E.coli в присутствии разнообразных кислотных носителей, включая ацетат, цитрат, лактат и сукцинат, как показано в табл. 2-5. Как это проиллюстрировано результатами, полученными при pH 3,5, быстрая бактерицидная активность низиновых композиций может зависеть от выбора кислотного носителя. Во всех указанных случаях по мере увеличения концентрации каждого кислотного аниона наблюдается уменьшение бактерицидной активности низиновых соединений. Тем не менее каждый из этих кислотных носителей подходит для выражения активности низина с хелаторным усилением. Воздействие этих низиновых соединений на бактерии в течение периода времени большего, чем одна минута, эффективно в отношении сокращения количества бактерий, даже если рецептурные составы содержат менее эффективные концентрации кислотных носителей.

Незамедлительная эффективность различных низиновых композиций с хелаторным усилением была оценена в кислотных носителях методом анализа бкктерицидной суспензии.

Клетки E.coli от ночного триптиказового соевого питательного агара (TSA) ресуспендировались до плотности, измеряемой как абсорбция 1,0 при 600 nm в стерильном dd H₂O. При анализе каждого пробного бактерицидного состава реакция клеток начиналась с добавлением к 970 μl пробного состава 30 μl клеток. Реакционная смесь инкубировалась при 37^oC в течение по крайней мере 1 мин, а затем центрифугировалась с микрофуге в течение 1 мин. Клеточный осадок смывался ресуспензией в 1 ml нейтрализационного буфера. (Нейтрализационный буфер: 50 mMTris - HCl pH 7,0; 5 mM Mg-S-O₄, 20 mM CACl₂, 0,1 M NaCl и 0,1% желатина - вначале был приготовлен Tris-буфер и отрегулирован pH. Затем добавлялись соли и желатин и раствор помешивали при нагревании до состояния полной прозрачности. Далее раствор автоклавировался в течение 20 мин. Нейтрализованный буфер не разбавлялся). Клетки центрифугировались в микрофуге в течение 1 мин, а затем ресуспендировались в I ml нейтрализационного буфера. Количество жизнеспособных микроорганизмов определялось путем распластывания 100 μl бактериальной суспензии и ряда ее разведений в нейтрализационном буфере на питательный агар, и подсчитывания выживающих колоний после 24 ч при 37^oC. Процентное выживание относительно необработанных стандартов исчислялось от подсчитанных величин.

Активность низина, усиленного ЭДТК, проявляется при низком pH. При pH ниже 3,5 степень усиления снижается, предположительно, по мере титрования карбоксильных групп хелатора. Тем не менее наблюдалось тысячекратное усиление действия низина посредством ЭДТК даже при pH 2,5. См. результаты, представленные в табл. 1. В табл. 1 и последующих табл. 2,4 и 8-13 величины с предшествующим знаком "<" представляют выживаемость в процентном исчислении, основанную на исходной концентрации жизнеспособных бактерий (выраженных как колониеобразующие единицы cfn/ml) а анализируемой бактериальной суспензии и в аликвотном объеме данной суспензии, взятом для анализа, соответствующем определению невыживаемости колоний.

При pH 3,5 активность низина, усиленная посредством ЭДТК, наблюдалась в присутствии всех испытываемых кислотных анионов (см. табл. 2-5). При pH 3,5 лактат при концентрации 0,3% являлся до некоторой степени ингибитором активности низина, усиленного посредством ЭДТК. Тем не менее эта активность все же остается усиленной более чем в 1000 раз, имея в виду только 0,3%-ный лактат, а 0,1%-ный лактат уже не подавляет активность низина, усиленного посредством ЭДТК.

При pH 3,5 концентрации ацетата до 0,3% и цитрата до 0,3% проявляют свою совместимость с бактерицидной активностью низина с хелаторным усилением в отношении суспензий Е. соli. Эти анионы проявляются как наиболее многообещающие в качестве кислотных носителей в составе низина, усиленного посредством ЭДТК. Цитрат - один из наиболее подходящих кислотных носителей для соединений низина, усиленного посредством ЭДТК.

Цитрат является естественной кормовой субстанцией и промежуточным метаболитом, а также в своем праве - эффективным усилителем бактерицидной активности низина (табл. 3). Можно надеяться, что соединения низин-цитрата будут безвредными и эффективными для сдерживания или устранения роста нежелаемых микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте человека и животных.

Цитрат является метаболитом, он не подавляет рост бактерий, и бактерии растут прекрасно на питательном агаре с добавлением цитрата. Однако низин в присутствии цитрата проявляет активность в отношении грамотрицательных бактерий. Таким образом, является возможным продемонстрировать активность низина в отношении грамотрицательных бактерий путем произведения анализов на торможение роста на питательном агаре с добавлением различных концентраций цитрата. Этот анализ агара-низин-цитрата имеет гораздо более широкое применение. Анализ предусматривает метод отбора потенциальных агентов, иных, чем цитрат, в соединении с низином ради их потенциальных свойств, позволяющих им быть усилителями присущей низину бактерицидной активности.

Примеры других органических кислот в комбинации с низином - ацетат, пропинат, лактат, сукцинат, фумарат, малонат, адипат, сорбат, фосфат и аскорбат.

Другие агенты, потенционирующие активность низина, включают в себя неионогенные и амфотерные поверхностно-активные вещества и эмульгаторы, четвертичные соединения, моноглицериды и жирные кислоты.

Низин-цитат-агаровый анализ производится следующим образом. E. cоli ресуспендируется до оптической плотности 1,0, при A₆₀₀. Берется 100 μl пробы бактериальной суспензии и равномерно распластывается на триптиказовый соевый питательный агар с различными концентрациями цитрата (например, 0,1, 0,3, 1,0, 3,0%), затем инкубируется в течение 1 ч при 37^oC. Потом готовится низиновый маточный раствор и ряд его растворов, разведенных в 0,1%-ном альбумине бычьей сыворотки (BSA); далее берется по 5 μl от каждого раствора и помещается на газон с растущими бактериями. Пластинки (возможный вариант перевода "чашки") с TSA затем инкубируются в течение 24 ч при 37^oC. После 24 ч при 37^oC E .coli, выращенные на TSA с добавлением цитрата, формируют сливающийся газон. Активность низина в отношении бактерий, выращенных в присутствии цитрата, демонстрируется чистыми зонами на бактериальном газоне, где был расположен ряд разведенных низиновых проб. Эффективность низина в отношении грамотрицательных бактерий может быть оценена путем определения минимального количества низина, необходимого для продуцирования чистой зоны торможения роста. По мере увеличения концентрации цитрата в питательном агаре, уменьшается количество низина, требуемого для торможения роста E.coli, как это подтверждается данными, представленными в табл. 6.

Активность низина, усиленного посредством ЭДТК, цитрата или других хелаторов также была продемонстрирована в отношении нескольких штаммов Helicobacter pulori, а также других родственных видов, в частности, Compylobacter jejnm методом анализа бактерицидной суспензии.

Примеры представлены в табл. 7-13.

Свежевыращенные клетки Helicobacter pylori, выращенные на пластинке с питательным агаром (триптиказовый соевый агар, BBL 11043, с добавлением 5% дефибринированной овечьей крови) были собраны с последующим выращиванием при 37^oC в течение 72-96 ч в камере системы Гаспак® BBL с оболочками микроаэрофильной системы BBL Кампи Пак^TH, при этом применялся компилобактерный микроаэрофильный газовый генератор (BBL 7134). Эти клетки затем были ресуспендированы в стерильной деионизированной дистиллированной воде до клеточной плотности 1,0 A₆₀₀ для того, чтобы обеспечить исходную суспензию, анализ начинался с добавления 50 μl бактериальной суспензии и 950 μl испытываемого раствора, инкубированного при 37^oC в течение 5 мин, а затем центрифугированного в течение одной минуты в микрофуге. Клеточный осадок вымывался ресуспензированием в 1 μl стерильного нейтрализационного буфера, описываемого ранее, и центрифугировался в течение 1 мин в микрофуге. Клетки затем ресуспендировались в бульоне Brucella Albim (BBL) и последовательно также разбавлялись перед посевом на питательный агар. Количество жизнеспособных микроорганизмов определялось путем распластывания 100 μl бактериальной суспензии и ее разведений на питательный агар, описанный выше, и путем подсчитывания выживающих колоний после 72-96 ч инкубации при 37^oC при умеренной атмосфере, описанной ранее. Процентное выживание относительно необработанных стандартов исчислялось, исходя из подсчитанных величин.

Концентрационная зависимость активности низина в отношении Helicobacter pylori в присутствии и отсутствии 0,1%-ного цитрата при pH 5,0 проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 7. Несмотря на то, что H. pylori является грамотрицательной бактерией, низин, считающийся активным только в отношении грампозитивных бактерий, неожиданно проявляет некоторую бактерицидную активность в отношении этого организма. Однако активность низина в отношении H.pylori значительно усилена присутствием цитрата.

Концентрационная зависимость активности низина в отношении H.pylori от цитрата при pH 5,0 и pH 7,0 проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 8. В общем, цитрат сам по себе мало влияет на жизнеспособность этого бактериального вида при pH 5,0 тем не менее при pH 7,0 жизнеспособность этого организма несколько снижается при более высоких концентрациях цитрата. Влияние, оказываемое одним цитратом, само по себе удивительно, так как цитрат является метаболитом. Усиленная активность, свойственная низину в присутствии цитрата, является достаточной для того, чтобы полностью убить 10⁵ cfn/ml - суспензию H. pylori в течение 5 мин при 37^oC.

Данные, представленные в табл. 9, показывают, что активность низина в отношении H. pylori при pH 5,0 и pH 7,0 также значительно усиливается в присутствии хелатора ЭДТК. Этот хелатор сам по себе не оказывает большего влияния на жизнеспособность этих организмов, если не иметь в виду более высокие концентрации. Однако активности, свойственной низину с усилением посредством ЭДТК, вполне достаточно для уничтожения 10⁵ cfn/ml суспензии H. pylori в течение 5 мин при 37^oC.

Бактерицидная активность низина в отношении H. pylori в присутствии или отсутствии цитрата или ЭДТК в диапазоне значений pH проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 10 и 11, соответственно. Несмотря на факт изоляции H. pylori по отношению к желудку, полость которого является кислотной, жизнеспособность этого организма оказывается удивительно низкой после подвергания его воздействию условий с низким pH. H. pylori колонизирует мукозальный эпителий желудка, менее кислотную микросреду, чем та, которой является желудочная полость.

Несмотря на ограниченную жизнеспособность H. pylori при низком pH в этих экспериментах, данные показывают, что низин с цитратом или ЭДТК может быть бактериальным в отношении H. pylori при условии, подобных тем, которые преобладают в желудке и его мукозальном эпителии, где H. pylori способны буйно разрастаться. Campylobacter jejuni является грамотрицательной бактерией, которая колонизирует кишечник птиц и млекопитающих и имеет связь с пищевым отравлением. Бактерицидная активность низина в присутствии и отсутствии цитрата или ЭДТК в отношении C. jejuni проиллюстрирована на примере данных, представленных в табл. 12 и 13, соответственно. Низин сам по себе чрезвычайно эффективен в отношении этой грамотрицательной бактерии. При pH 5,0 более высокие концентрации цитрата также показали свою токсичность в отношении этой бактерии.

Таким образом, соединения низина с цитратом или ЭДТК могут быть эффективными в отношении C. jejuni как это проиллюстрировано на примере данных в табл. 12 и 13.

Активность низина, усиленная посредством ЭДТК, цитрата или других хелаторов может быть также наглядно показана в отношении видов сальмонеллы путем анализов бактерицидной суспензии. Свежевыраженные клетки S. typhimurium берутся с пластинки питательного агара (триптиказовый соевый агар BB L 11043) после выращивания в течение 24 ч при 37^oC. Клетки ресуспендируются до клеточной плотности 1,0 A₆₀₀ для обеспечения подходящей исходной суспензии. Анализ начинается с добавления 30 μl бактериальной суспензии к 970 μl контрольного раствора и инкубирования в течение по крайней мере 1 мин, а затем - центрифугирования в течение 1 мин в микрофуге. Клеточный осадок вымывается посредством ресуспензии 1 ml стерильного нейтрализационного буфера, снова ресуспендируется, а затем последовательно разбавляется в нейтрализационном буфере. Количество жизнеспособных микроорганизмов определяется распластыванием 100 μl бактериальной суспензии и ее разведений на питательный агар и подсчитывания выживающих колоний после 24 ч инкубации при 37^oC. Процентная выживаемость относительно необработанных стандартов исчисляется, исходя из подсчитанных величин.

Бактериоциновые соединения данного изобретения, активные при низком pH, предпочтительно вводятся орально в виде фармацевтического препарата, который содержит эффективное количество лантионинсодержащего бактериоцина и фармацевтически приемлемые носитель. Носитель может также включать в себя эффективное количество хелатора и/или кислотного носителя и/или поверхностно-активного вещества или эмульгатора, моноглицерида или жирной кислоты. Лантионинсодержащий бактериоцин может быть выбран из группы, состоящей из низина, субтилина, эпидермина, Пеп 5, анковенина, галлидермина, дуромицина или циннамицина. Соответствующие хелирующие агенты включают в себя (но не ограничиваются этим) ЭДТК, СаЭДТК, Ca Na₂ЭДТК и другие тетрацетаты алкидиамина, а также цитрат. В отдельных случаях хелатор и кислотный носитель могут быть одним и тем же, например, тогда, когда кислотный носитель и хелатор оба представляют собой цитрат. Подходящими кислотными носителями для применения в этом изобретении являются ацетат, пропинат, цитрат, лактат, сукцинат, фумарат, малонат, адипат, сорбат, фосфат и аскорбат.

Соединения данного изобретения также эффективны при слегка кислотных уровнях pH (например, pH 5,0) и даже более высоких уровнях рH (например, pH 8,0) против патогенных бактерий, которые могут обитать в желудочно-кишечном тракте, такие как E. coli и S.tyrhimurium, как это указывается в выданном патенте США N 5135910. Раскрытие патента США N 5135910 настоящим инкорпорируется ссылкой на совместную собственность.

Фармацевтические соединения этого изобретения могут, таким образом, также формулироваться как антацидные соединения или вводиться в соединении с антацидом, результатом чего, например, явится повышение pH желудочной среды, по сравнению с тем, что имело бы место до введения. При таких условиях низиновые хелаторные соединения окажутся еще более эффективными в отношении патогенных бактерий.

Фармацевтически приемлемый носитель может быть в виде твердого, полутвердого или жидкого растворителя или капсулы. В определенных вариантах осуществления изобретения кислотный носитель и фармацевтический носитель могут быть одним и тем же. Другими фармацевтически приемлемыми носителями могут быть производные целлюлозы, желатин, лактоза, крахмал и др.

фармацевтические соединения могут быть в виде растворов, коллоидов или эмульсий, порошков, таблеток, капсул или гелей.

Сухие виды соединений, активные при низком pH, могут быть спрессованы в таблетки, которые могут иметь оболочки из концентрированного раствора сахара и которые могут содержать другие фармацевтически приемлемые заместители, такие, как гуммиарабик, желатин, тальк или двуокись титана и могут быть также покрыты различными красителями. Можно изготовить твердые желатиновые капсулы, содержащие гранулы бактериоцина, кислотный носитель и хелирующий агент в комбинации с твердым носителем, таким как лактоза, картофельный крахмал, кукурузный крахмал, производные целлюлозы или желатин.

Жидкие препараты для орального введения могут быть изготовлены в виде сиропов или суспензий, содержащих пептидный бактериоцин, хелирующий агент, кислотный носитель и сахар, воду и глицерин или пропиленгликоль. При желании, такие жидкие препараты могут содержать красители, вкусовые вещества, сластители, такие как сахарин, и сгустители, такие как производные целлюлозы.

Доставка дозированной формы может быть достигнута, по всей видимости, усовершенствованием простых водных составов путем включения сгустителей, эмульгаторов или партикулята для достижения эффекта коллоидной суспензии. Альтернативно могут вводиться осмотически сбалансированные растворы, содержащие подходящие дозы в таких малых объемах, как 10 ml или таких больших объемах, как 4 л. Осмотически сбалансированные растворы, подобные этим, могли бы быть применимы в качестве промывочной жидкости желудочно-кишечного тракта (Ди Палма Дж. А. и Брейди К.Э., 1989, американский журнал "Гастроэнтерология", 34:1008, "Очищение ободочной кишки для диагностических и хирургических процедур: полиэтиленгликолевый промывочный раствор". Ди Палма Дж. А. и Маршал Дж. Б., 1990, Желудочно-кишечная эндоскопия 1990, 36: 285, "Сравнивание нового бессульфатного полиэтиленгликолевого электролитного промывочного раствора со стандартным раствором для колоноскопического промывания". Фордтран Дж. С., и др., 1990, Гастроэнтерология, 98:11, "Раствор с низким содержанием соды для желудочно-кишечного промывания"). Можно надеяться, что путем включения описанных здесь бактерицидных соединений возможно создание улучшенных промывочных растворов для очищения желудочно-кишечного тракта.

Типичная дневная доза предложенных композиций может варьироваться в соответствии с обрабатываемой патогенномикроорганической инфекцией, расположением инфекции и симптомами излечиваемой болезни. В общем, можно полагать, что оральные дозировки можно варьировать от 0,1 mg на дозу 300 mg на дозу лантионинсодержащего бактериоцинового вещества и от 0,1 g на дозу до 30 g на дозу хелатора.

Например, так как объем желудочного содержимого варьирует как функция времени, прошедшего после последнего приема пищи, простые водные составы, пригодные для желудочно-кишечного применения, могут быть приготовлены следующим образом.

Для получения конечной концентрации в желудке при 0,1% цитрата + 0,001% низина (10 ng ml), помещенных в 10 ml и составляющих, приблизительно, 100 ml в желудке.

Дозировка 1:1,0 mg низина и 0,1 g цитрата, % : Na цитрат - 1,0, Низин - 0,01 Сахарин - 0,005 Полисорбат 20 - 1,0 Глицерин - 10,0 Вода 87,985 Для получения конечной концентрации в желудке при 3,0% цитрата + 0,03% низина (300 ng 1 ml), помещенных в 10 ml и составляющих 100 ml в желудке.

Дозировка 2:30mg низина и 3,0 g цитрата, % : Na цитрат - 30
Низин - 0,3
Сахарин - 0,005
Полисорбат 20 - 1,0
Глицерин - 0,0
Вода - 58,695
Для получения конечной концентрации в желудке при 0,1% цитрата + 0,001% низина (10 ng/ml), помещенных в 10 ml и составляющих 1000 ml в желудке.

Дозировка 3:10 mg низина и 1,0 g цитрата, %:
Na цитрат - 10,0
Низин - 0,1
Сахарин - 0,005
Полисорбат 20 - 1,0
Глицерин - 10,0
Вода - 78,895
Для получения конечной концентрации в желудке при 3,0% цитрата + 0,03% низина (300 ng/ml), помещенных в 100 ml и составляющих 1000 ml в желудке.

Дозировка 4:300 mg низина и 30 g цитрата, %:
Na цитрат - 30,0,
Низин - 0,3
Сахарин - 0,005
Полисорбат 20 - 1,0
Глицерин - 10,0
Вода - 58,695
Для получения конечной концентрации в желудке при 3,0% цитрата + 0,03% низина (300 ng/ml), помещенных в 100 ml и составляющих 1000 ml в желудке:
Дозировка 5:60 mg низина и 6,0 g цитрата, %:
Na цитрат - 6,0
Низин - 0,06
Сахарин - 0,005
Полисорбат 20 - 1,0
Глицерин - 10,0
Вода - 82,935
Предлагается также, что в зависимости от типа патогенного микроорганизма и лечимой болезни в режиме лечения могут включаться иные препараты и фармоцевтические агенты или как часть вводимой фармацевтической композиции, или в режимах лечения, которые объединяют как бактериоциновое соединение, активное при низком pH, так и другой препарат, эффективный в лечении желудочно-кишечного тракта. Например, в лечении диареи, которая может возникнуть путем заражения патогенным микроорганизмом, таким как один из видов сальмонеллы, бактериоциновое соединение, активное при низком pH, может вводиться в фармацевтический препарат, который также содержит каолин, пактин или другой связующий агент. Такие симптомы могут также излечиваться совместным введением бактериоциновой композиции и связующего агента. Кроме того, при таких режимах лечения могут применяться антацидные составы, и как предполагается, антацид не будет влиять на активность низиново-хелаторной композиции.

При обработке инфекции патогенного микроорганизма Helicobacter pylori бактериоциновое соединение, активное при низком pH, может вводиться в соединении с другим веществом, фармацевтически активном в отношении H. pylori таким, как соль висмута, например, субцитрат или субсалицилат висмута. Предполагаемые соединения могут вводиться в соединении с другими агентами, такими как циметидин, ранитидин, омепразол, антациды, ингибиторы уреазы или их комбинации, для лечения некоторых болезней и симптомов, связанных с присутствием H.pylori в желудочно-кишечном тракте. Предполагается, что в этих направлениях терапии активные фармацевтические агенты могут вводиться одновременно или вперемежку с предлагаемыми фармацевтическими соединениями, а режим введения по необходимости может варьироваться во время курса лечения.

H. pylori, изолируется от дентальной плакии, которая может служить источником рецидива инфекции желудка (Деза Х.Г., Гилл Х.Х., Шанкаран К., Мехта П. Р. и Прабха С.Р., (1991) "Дентальная плакия: постоянный источник Helicobacter pylori; "Скандинавский журнал" Гастроэнтерология", 26:1205 и Шеймз Б. , Крайден С. , Фукаса М., Бабида К. и Пеннер Дж. Л.(1989) "Доказательство случаев возникновения одного и того же штамма Campylobacter pylori; в желудке и дентальной плакии". Журнал "Клиническая микробиология", 27:2849).

Следовательно, можно предвидеть, что бактериоциновые соединения, пригодные для применения против H. pylori в дентальной плакии, могут быть применимы вместе с бактериоциновыми соединениями, активными при низком pH в отношении H. pylori в желудочно-кишечном тракте.

Формула изобретения

1. Бактерицидная фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество лантионинсодержащего бактериоцина и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что содержит дополнительно кислотный носитель в количестве 0,1 3% с pН 2,0 5,0.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит хелатор.

3. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве хелатора она содержит цитрат.

4. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве хелатора она содержит ЭДТК.

5. Композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве хелатора она содержит цитрат и ЭДТК.

6. Композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что бактериоцин выбран из группы, состоящей из низина, субтилина, эпидермина, пеп 5, анковенина, галлидермина, дуромицина или циннамицина.

7. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что в качестве бактериоцина она содержит низин.

8. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что в качестве бактериоцина она содержит низин, а в качестве хелатора цитрат или ЭДТК.

9. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что кислотный носитель выбирают из группы, состоящей из ацетата, пропиноата, цитрата, лактата, сукцината, фумарата, малоната, адипата, сорбата, фосфата или аскорбата.

10. Применение фармацевтической композиции, включающей лантион, содержащий бактериоцин и фармацевтически приемлемый носитель для профилактики или лечения желудочно-кишечных нарушений, вызванных патогенными микроорганизмами в желудочно-кишечном тракте.

11. Применение по п.10, отличающееся тем, что нарушения вызваны грамотрицательными бактериями.

12. Применение по п.10, отличающееся тем, что микроорганизм представляет собой разновидность Helicobacter, Salmonella, Escherichia, Clostridia, Bacillus, Bacteroides, Campylobacter или Jersinia.

13. Применение по п.12, отличающееся тем, что микроорганизм представляет собой Helicobacter pylori или Campylobacter jejuni.

14. Применение по п.10, отличающееся тем, что бактериоцином является низин для профилактики или лечения желудочно-кишечной бактериальной инфекции, вызванной Helicobacter pylori или Campylobacter jejuni.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5