Кристаллический дигидрохлорид 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)- 1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1н- индазола и его 3,5-гидрат, способы их получения

 

Кристаллы 3,5-гидрата дигидрохлорида 3-[-2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-Н-индазола, имеющие определенные характеристики дифракции рентгеновских лучей, имеют превосходные характеристики как фармацевтический материал, который имеет высокую стабильность при хранении. 5 с. и 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл.

Это изобретение относится к дигидрохлориду, который является также содержащим молекулу воды гидратом, 3-[2-[4-(3- хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси- 1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола, представленного формулой (1): и к его способу получения, и кроме того, относится к использованию гидрата в терапии человека или животных или для получения фармацевтических препаратов.

Предпосылки создания изобретения Было раскрыто, например в патенте США 3362956, что определенные производные индазола обладают действием на центральную нервную систему, например, обладают антианксиолитической активностью, антиэпилептической активностью и тому подобной. Имеется также описание в Arzneim.-Forsch., 37 (4), 498-502 (1987), сообщающее, что определенные производные пиперазина имеют функцию ингибирования калмодулина.

Соединение, представленное формулой (1), является новым соединением, его соли и гидраты также являются новыми соединениями. Было показано, что это соединение, представленное формулой (1), и его соли могут проявлять сильное ингибирующее калмодулин действие и показывают также превосходное защитное действие на головной мозг на животных моделях с различными церебральными нарушениями. В результате этого ожидается использование этого соединения для предупреждения и лечения различных болезней, вызванных избыточной активацией калмодулина, и церебральных нарушений, вызванных ишемической болезнью головного мозга, дегенеративной болезнью головного мозга, травматической болезнью головного мозга, интоксикацией лекарственным средством, гипоксией и тому подобным.

Безводный гидрохлорид соединения формулы (1) можно получить путем проведения осаждения кристаллов свободного основания из смеси органического растворителя и хлористоводородной кислоты. Однако, было найдено, что кристаллы безводного соединения, полученные таким образом, содержат органический растворитель, используемый для осаждения кристаллов, и растворитель, содержащийся в кристаллах, невозможно легко удалить даже сушкой при нагревании при пониженном давлении. Например, при использовании этанола количество этанола, содержащегося в кристаллах, было высокое и находилось в широком диапазоне от 18000 до 33000 м.д. Было показано, что предсказание количества растворителя, содержащегося в кристаллах, и его регуляцию до заданного уровня трудно выполнить.

С другой стороны, когда во время осаждения кристаллов в качестве растворителя использовали метанол, полученный таким образом безводный гидрохлорид соединения формулы (1) также содержал метанол, но можно было удалить содержащийся метанол почти полностью, когда кристаллы сушили при нагревании (120^oС) при пониженном давлении в течение нескольких дней или более. Однако, безводный гидрохлорид, полученный удалением метанола таким образом, проявлял способность абсорбировать влагу как ответ на влажность окружающей среды при комнатной температуре (проявлял способность абсорбировать влагу, когда влажность высокая, но выделяет влагу, когда влажность низкая, смотри фиг. 1).

Таким образом, было обнаружено, что кристаллы безводного гидрохлорида соединения формулы (1) нельзя легко приготовить в составе фармацевтических препаратов, поскольку они вызывают появление разных проблем, так что они не подходят в качестве фармацевтического материала.

Описание изобретения Целью данного изобретения является обеспечивание гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазол, который свободен от вышеуказанных проблем и имеет превосходные характеристики как фармацевтический материал, имеющий высокую стабильность при хранении. Для достижения этой цели авторы данного изобретения провели интенсивное исследование.

В результате этого к нашему удивлению было найдено, что гидрат гидрохлорида 3-[2-[4-(3- хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5, 6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола не имеет недостатки его безводного гидрохлорида и полностью стабилен при хранении в обычных окружающих условиях. Этот гидрат имеет кристаллическую форму 3,5-гидрата дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1- пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола, представленного формулой (2): (иногда называемый здесь далее просто 3,5-гидратом дигидрохлорида).

В соответствии с этим, данное изобретение относится к кристаллу дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2- метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4- имидазолилметил)-1H-индазола, который по существу имеет следующие характеристики дифракции рентгеновских лучей (рентгенограмма).

Величина d параметра кристаллической решетки - Относительная интенсивность 28,1 - средняя 27,5 - средняя 27,0 - средняя
26,4 - средняя
25,6 - средняя
25,3 - сильная
24,7 - средняя
24,3 - сильная
22,0 - сильная
21,4 - слабая
20,9 - средняя
19,3 - очень слабая
17,8 - средняя
15,4 - средняя
13,8 - средняя
9,60 - очень сильная
9,09 - очень слабая
8,46 - средняя
Данное изобретение относится также к вышеупомянутому кристаллу, в котором кристалл дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2- метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола является 3,5-гидратом.

Данное изобретение относится также к способу получения 3,5-гидрата дигидрохлорида 3- [2-[4-(3-xлop-2-мeтилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6- диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола, который включает
а) обработку свободной формы 3-[2-[4-(3-xлop-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола хлористоводородной кислотой в присутствии воды или
b) обработку гидрата гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом, меньшим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола, водой и/или хлористоводородной кислотой, или
с) удаление воды и/или хлористоводородной кислоты из гидрата гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1- пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом большим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил) - 1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола, который нужно получить, или
d) обработку соли 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]-этил]-5,6 -диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола, не являющейся гидрохлоридом, водой и хлористоводородной кислотой.

Данное изобретение относится также к способу получения дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] - этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола, по существу имеющему следующие характеристики дифракции рентгеновских лучей (рентгенограмма).

Величина d параметра кристаллической решетки - Относительная интенсивность
28,1 - средняя
27,5 - средняя
27,0 - средняя
26,4 - средняя
25,6 - средняя
25,3 - сильная
24,7 - средняя
24,3 - сильная
22,0 - сильная
21,4 - слабая
20,9 - средняя
19,3 - очень слабая
17,8 - средняя
15,4 - средняя
13,8 - средняя
9,60 - очень сильная
9,09 - очень слабая
8,46 - средняя
который включает
а) обработку свободной формы 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6- диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола хлористоводородной кислотой в присутствии воды или
b) обработку гидрата гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом, меньшим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола, водой и/или хлористоводородной кислотой, или
c) удаление воды и/или хлористоводородной кислоты из гидрата гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6 -диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом больше, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] -этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола, который нужно получить, или
d) обработку соли 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]-этил]-5,6 -диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола, не являющейся гидрохлоридом, водой и хлористоводородной кислотой.

Данное изобретение относится к вышеуказанному способу получения, в котором кристалл гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2- метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)- 1H-индазола является 3,5-гидратом.

Данное изобретение относится также к вышеуказанному способу получения, в котором свободную форму 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6- диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола обрабатывают хлористоводородной кислотой в присутствии воды.

Данное изобретение относится также к вышеуказанному способу получения, в котором гидрат гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2- метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4- имидазолилметил)-1H-индазол, который является гидратом/ или гидрохлоридом, меньшим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2- [4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси- 1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола обрабатывают водой и/или хлористоводородной кислотой.

Данное изобретение относится также к вышеуказанному способу получения, в котором удаляют воду и/или хлористоводородную кислоту из гидрата гидрохлорида 3-[2-[4- (3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4- имидазолилметил)-1H-индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом большим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3- хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4- имидазолилметил)-1H-индазола, который нужно получить.

Данное изобретение относится также к вышеуказанному способу получения, в котором соль 3-[2-[4-(3-xлop-2- мeтилфeнил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4- имидазолилметил)-1H-индазол, которая не является гидрохлоридом, обрабатывают в присутствии воды и хлористоводородной кислоты.

С другой стороны, данное изобретение относится также к 3,5-гидрату дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-xлop-2-мeтилфeнил)-1- пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1- индазола;
вышеуказанному соединению, которое используют в терапии людей и животных;
вышеуказанному соединению, которое используют при лечении болезней, вызванных избыточной экспрессией калмодулина;
вышеуказанному соединению или вышеуказанному кристаллу, который используют при лечении болезней головного мозга;
использованию вышеуказанного соединения или вышеуказанного кристалла при приготовлении фармацевтических препаратов;
использованию вышеуказанного соединения или вышеуказанного кристалла при приготовлении фармацевтических препаратов, которые используют при лечении заболеваний головного мозга;
фармацевтическому препарату, который содержит 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель;
фармацевтическому препарату, который содержит кристаллы дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1- пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола, по существу имеющие следующие характеристики дифракции рентгеновских лучей (рентгенограмма).

Величина d параметра кристаллической решетки - Относительная интенсивность
28,1 - средняя
27,5 - средняя
27,0 - средняя
26,4 - средняя
25,6 - средняя
25,3 - сильная
24,7 - средняя
24,3 - сильная
22,0 - сильная
21,4 - слабая
20,9 - средняя
19,3 - очень слабая
17,8 - средняя
15,4 - средняя
13,8 - средняя
9,60 - очень сильная
9,09 - очень слабая
8,46 - средняя
и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель;
вышеуказанному фармацевтическому препарату, в котором кристалл дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1- пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола является 3,5-гидратом;
вышеуказанному фармацевтическому препарату, в котором препарат используют для лечения болезней, вызванных избыточной экспрессией калмодулина; и
вышеуказанному фармацевтическому препарату, в котором препарат используют для лечения болезней головного мозга.

Ниже данное изобретение описывается подробно.

К нашему удивлению было найдено, что 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола данного изобретения, представленный формулой (2), имеет следующие свойства. То есть гидрат не показывал изменения в его порошковой рентгенограмме или поддающемуся обнаружению содержания воды, когда относительная влажность изменялась в диапазоне от около 20% до около 80% при 25^oC (фиг. 2). С трудом были найдены изменения в его внешнем виде и не были найдены изменения в его составе (определено ЖХВР) в условиях сухого нагрева (50^oC, плотно герметизированная колба, 1 месяц) или условиях влажного нагрева (40^oC, влажность 75%, 1 месяц).

Из этих результатов очевидно, что 3,5-гидрат дигидрохлорида (представлен формулой (2)) соединения формулы (1) обладает превосходной стабильностью при хранении. Следовательно, это означает, что этот гидрат можно хранить в течение продолжительного периода времени без изменений. В частности, этот гидрат не абсорбирует молекулы воды, другие, чем те, которые содержатся как 3,5-дигидрат, так что количество активного ингредиента, содержащегося как фармацевтическое лекарственное средство, не изменяется во время хранения. Кроме того, было найдено, что он не содержит органический растворитель в его кристаллах подобно случаю безводной формы.

Кристаллы 3,5-гидрата дигидрохлорида формулы (2) можно характеризовать их порошковой рентгенограммой, например они демонстрируют спектр фиг. 3 и его характеристические пики.

3,5-Гидрат дигидрохлорида формулы (2) далее характеризуют его элементным анализом, который соответствует теоретической величине его молекулярной формулы C₂₆H₃₁ClN₆O₂ · 2HCl · 3,5 H₂О (молекулярная масса: 631,00).

Рассчитано: С 49,49%, H 6,39%; N 13,32%; Cl 16,86%.

Найдено: С 49,22%, H 6,38%; N 13,09%; Cl 16,85%.

Содержание воды 3,5-гидрата дигидрохлорида формулы (2) соответствует его теоретической величине при измерении методом Карла Фишера.

Рассчитано: 9,99%.

Найдено: 10,53%.

3,5-Гидрат дигидрохлорида формулы (2) характеризуется также термическим анализом фиг. 4.

3,5-Гидрат дигидрохлорида формулы (2) можно получить способом, выбранным из следующих способов.

а) Способ, в котором свободную форму 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола обрабатывают хлористоводородной кислотой в присутствии воды.

b) Способ, в котором гидрат гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2- метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4- имидазолилметил)-1H-индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом меньшим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4- (3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси -1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола, который нужно получить, обрабатывают водой или/и хлористоводородной кислотой.

с) Способ, в котором воду и/или хлористоводородную кислоту удаляют из гидрата гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил) - 1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом большим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил) -1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H- индазола, который нужно получить, например нейтрализацией, сушкой и подобным образом.

d) Способ, в котором соль 3-[2-[4-(3-хлор- 2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4- имидазолилметил)-1H-индазола, не являющегося гидрохлоридом, обрабатывают в присутствии воды и хлористоводородной кислоты. В этом случае, когда требуется, обработку можно проводить после получения соединения в свободной форме.

При проведении вышеуказанной обработки, если требует случай, можно использовать органические растворители. Наиболее обычными для использования растворителями являются спирты и, когда во внимание принимается токсичность, желателен этанол или пропанол, наиболее желателен этанол.

Проводить обработку - означает позволять соединению реагировать с хлористоводородной кислотой в присутствии воды, чтобы осуществить образование кристаллов предполагаемого гидрата гидрохлорида. Ее можно проводить в состоянии суспензии, но обычно желательно проводить обработку в растворе. В этом случае можно использовать стадию очистки, например добавлением активированного угля.

Когда нейтрализуют гидрохлорид, содержащий больше хлористоводородной кислоты, чем в случае дигидрохлорида, или кислотно-аддитивную соль, другую, чем гидрохлорид, соль можно нейтрализовать реакцией с гидроксидом, карбонатом, бикарбонатом, алкоксидом или подобным соединением щелочного металла в растворе. Следовательно, соединение в свободной форме можно получить обычно используемым способом, если необходимо, проводя экстракцию и подобные обработки.

В случае кристаллов, содержащих избыток хлористоводородной кислоты (хлористого водорода) или воды, может быть эффективным в некоторых случаях в зависимости от их свойств, получить сначала свободную форму и затем превратить ее в интересующее соединение, а не получать интересующие кристаллы нейтрализацией, сушкой и подобным образом.

Когда свободную форму кристаллов, содержащих меньше хлористоводородной кислоты, превращают в дигидрохлорид, хлористоводородную кислоту можно использовать в количестве, включенном в диапазон от равного эквивалента до 3 эквиваленттов, обычно в диапазоне от 1,5 до 2 эквивалентов. Количество воды, которое нужно использовать, приблизительно в 2-20 раз превышает массу кристаллов, которые нужно использовать, предпочтительно превышает массу кристаллов в 3-5 раз. (Когда 2 мл воды используют на 1 г неочищенных кристаллов, это означает превышение в 2 раза).

Предпочтительным способом получения 3,5-гидрата дигидрохлорида является способ, в котором подходящие количества 1N хлористоводородной кислоты и воды добавляют в соединение формулы (1) в свободной форме, смесь растворяют нагреванием и полученный таким образом однородный раствор затем охлаждают до комнатной температуры при перемешивании, тем самым осуществляя кристаллизацию целевого соединения.

3,5-Гидрат дигидрохлорида данного изобретения вследствие его растворимости в воде оказывает свое действие не только при его пероральном введении, но также при его парентеральном введении, в частности внутривенной инъекцией. Вследствие этого его можно вводить как пероральным, так и парентеральным способами.

Дозировка 3,5-гидрата дигидрохлорида данного изобретения может необязательно изменяться в зависимости от симптомов, возраста, массы и подобных параметров пациента. В общем, его доза для перорального введения может быть в диапазоне от 1 мг до 1000 мг, предпочтительно от 10 мг до 500 мг, в день для взрослого человека. Примеры его лекарственных форм включают таблетки, капсулы, порошки, гранулы и тому подобное. Их можно получить известными способами приготовления композиций вместе с обычными наполнителями, смазывающими веществами, связывающими веществами и подобными добавками. В случае парентерального введения доза может быть в диапазоне от 1 мг до 500 мг, предпочтительно от 10 мг до 250 мг, в день для взрослого человека, которую можно вводить подкожной или внутривенной инъекцией или капельным вливанием.

Фармацевтический препарат, который содержит дигидрохлорид, 3,5-гидрат данного изобретения, представленный формулой (2), когда его используют в комбинации с другими лекарственными средствами, будет оказывать дополнительное и синергическое действие при предупреждении и лечении разных болезней. Примеры таких лекарственных средств включают средство, улучшающее церебральное кровообращение (малеат цинепазина или подобное средство), средство, улучшающее церебральный метаболизм (идебенон, инделоксазин или подобное средство), антипсихотическое средство (тимиперон или подобное средство, имипламин или подобное средство, диазепам или подобное средство), средство для внутричерепной декомпрессии (глицерин или подобное средство), антигипотензивное лекарственное средство, сосудорасширяющее лекарственное средство (трапидил или подобное средство), жаропонижающее-аналгезирующее-противовоспалительное лекарственное средство, противовоспалительный стероид, противотромбоцитное средство (тиклопидин или подобное средство), антикоагулянт (гепарин или подобное средство), средство, индуцирующее фибринолиз (активатор тканевого плазминогена или подобное средство), мочегонное средство, противолипидемическое средство (пробукол или подобное средство), противоязвенное лекарственное средство, препарат искусственной крови, средство для лечения болезни печени, противораковое лекарственное средство и подобные средства.

Примеры получения
3,5-Гидрат дигидрохлорида данного изобретения можно приготовить в виде фармацевтических препаратов обычно известными способами. Эти способы иллюстративно описываются со ссылкой на следующие примеры технологии приготовления лекарственных средств, хотя данное изобретение не ограничивается этими примерами, как само собой разумеется. В примерах технологии приготовления лекарственных средств использовали рецепты, в которых применяли соединение, полученное в изобретательском Примере 3.

[Пример 1 приготовления]
(1) Соединение изобретательского Примера 3 10 г
(2) Лактоза 50 г
(3) Кукурузный крахмал 15 г
(4) Гидроксипропилцеллюлоза 8 г
(5) Натриевая соль карбоксиметилкрахмала 7 г
(6) Стеарат магния 1 г
Указанные выше компоненты (1), (2), (3) и (5) кладут в гранулирующую машину с псевдоожиженным слоем и равномерно смешивают, смесь превращают в гранулы, используя 6% водный раствор компонента (4) в качестве связывающего раствора. Их смешивают равномерно с компонентом (6) и используют в качестве порошка смеси для изготовления таблеток. Используя эту смесь, приготовляют 100 таблеток, каждая из которых имеет диаметр 8 мм и содержит 100 мг (1).

[Пример 2 приготовления]
(1) Соединение изобретательского примера 3 2 г
(2) 0,1 N хлористоводородная кислота 150 мл
(3) Глюкоза 50 г
(4) Дистиллированная вода для инъекционного использования - до баланса (смотри последующее)
Указанные выше компоненты (1), (2) и (3) смешивают и солюбилизируют и затем общий объем смеси устанавливают 1000 мл добавлением дистиллированной воды для инъекционного использования. Этот раствор подвергают стерильному фильтрованию, используя фильтр 0,2 мкм, и затем распределяют порциями по 10 мл в ампулы емкостью 10 мл.

Краткое описание чертежей
Фиг. 1 является графиком, показывающим изменения в массе безводного гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазол, нанесенные как функция влажности, фиг. 2 является графиком, показывающим изменения в массе 3,5-гидрата данного изобретения, нанесенные как функция влажности, фиг. 3 является порошковым рентгеновским спектром 3,5-гидрата данного изобретения и фиг. 4 является спектром термического анализа 3,5-гидрата данного изобретения.

Лучший способ осуществления изобретения
Данное изобретение далее подробно описывается со ссылкой на следующие примеры, хотя данное изобретение, как само собой разумеется, не ограничивается этими примерами.

[Ссылочный пример 1] Этил-5,6-диметокси-1-(1-тритил- 4-имидазолил) метил-1H-индазол-3-карбоксилат
Этил 5,6-диметоксииндазол-3-карбоксилат (250,2 г) суспендировали в диметилсульфоксиде (5000 мл) и суспензию смешивали с метоксидом лития (40,2 г) и перемешивали при комнатной температуре. После перемешивания 1 час при комнатной температуре в смесь в течение 10 минут добавляли по каплям раствор в диметилсульфоксиде (2000 мл) 4-хлорметил-1-тритилимидазола (447,8 г) при комнатной температуре. После перемешивания получаемой смеси как таковой при комнатной температуре в течение 2 часов, смешивания ее с метоксидом лития (4,2 г) и 4-хлорметил-1-тритилимидазолом (44,8 г) и затем перемешивания при комнатной температуре в течение 1 часа анализ тонкослойной хроматографией показывал, что пятно исходного материала почти исчезло на хроматограмме (хлороформ/этанол = 30/1). Когда реакционный раствор наливали в ледяную воду (30000 мл), которую перемешивали, происходило осаждение кристаллов. Кристаллы собирали вакуум-фильтрованием, промывали водой (2000 мл х 3) и затем сушили на воздухе. Их растворяли в хлороформе (10000 мл), полученный раствор сушили сульфатом натрия и фильтровали и затем растворитель выпаривали при пониженном давлении. Получаемый остаток разделяли и очищали на колонке с силикагелем (хлороформ/этанол = 50/1) и перекристаллизовывали из смеси хлороформ-изопропиловый спирт, получая 222,0 г бесцветных призматических кристаллов (точка плавления: 184-186^oC).

ИК (KBr) см^-1: 1704, 1496, 1268, 1146, 1132, 1092, 748, 700.

¹H ЯМР δ (м. д., CDCl₃): 1,21 (6H, д, J=5,9 Гц, Me от изо-PrOH), 1,46 (3H, т, J=7,3 Гц), 3,93 (3H, с), 3,97 (3H, с), 4,01 (1H, м, CH от изо-PrOH), 4,49 (2H, к, J=7,3 Гц), 5,61 (2H, с), 6,79 (1H, с), 7,03 (5H, м), 7,13 (1H, с), 7,28 (10H, м), 7,47 (1H, с), 7,51 (1H, с).

Элементный анализ для С₃₅H₃₂N₄O₄ · C₃H₈O:
Рассчитано: С 72,13%; H 6,37%; N 8,85%.

Найдено: С 71,53%; H 6,37%; N 8,70%.

[Ссылочный Пример 2] 5,6-Диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил) -метил-1H-индазол-3-метанол
Этил 5,6-диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол-3-карбоксилат (222,0 г) измельчали в форму порошка с использованием ступки и суспендировали в тетрагидрофуране (1300 мл) при комнатной температуре и суспензию охлаждали ледяной водой. В суспензию добавляли натрийбисметоксиэтоксиалюминийгидрид (3,4 М раствор в толуоле, около 250,0 мл) в течение 15 минут, затем перемешивали на ледяной бане. Через 30 минут анализ тонкослойной хроматографией показывал, что пятно исходного материала почти исчезло на хроматограмме (этилацетат/гексан = 2/1). Реакционный раствор смешивали с пересыщенным водным раствором сульфата натрия, перемешивали в течение 1 часа, смешивали с сульфатом натрия и затем фильтровали. В этом случае сульфат натрия на фильтре промывали горячим хлороформом (500 мл х 5). Фильтрат и промывной раствор объединяли и растворитель выпаривали при пониженном давлении, получая бесцветный твердый продукт (220,1 г). Его перекристаллизовывали из хлороформа, получая 181,0 г бесцветных призматических кристаллов (точка плавления: 115-120^oC (разлож.)).

ИК (KBr) см^-1: 3216, 3172, 3008, 2936, 1510, 1488, 1472, 1444, 1302, 1260, 1172, 1156, 1128, 1102, 1036, 1014, 836, 764, 746, 702, 678, 666, 636.

¹H ЯМР δ (м.д., CDCl₃): 3,91 (3H, с), 3,92 (3H, с), 2H,с), 5,44 (2H, с), 6,76 (1H, с), 6,95 (1H, с), 7,05 (5H, м), 7,26 (1H, с, CHCl₃), 7,28 (1H, с), 7,31 (10H,м), 7,46 (1H, с).

Элементный анализ для C₃₃H₃₀N₄O₃ · CHCl₃:
Рассчитано: С 62,83%; H 4,81%; N 8,62%.

Найдено: С 62,50%; H 4,63%; N 8,42%.

[Ссылочный пример 3] 3-Хлорметил-5,6-диметокси-1- (1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол
5,6-Диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол- 3-метанол (180,0 г) измельчали в форму порошка с использованием ступки и суспендировали в дихлорметане (1700 мл) при комнатной температуре. После суспендирования реакционный раствор перемешивали при охлаждении на ледяной бане. В эту суспензию в течение 5 минут добавляли по каплям 48,6 мл хлористого тионила. Через 1 минуту анализ тонкослойной хроматографией показывал, что пятно исходного материала почти исчезало на хроматограмме (хлороформ/этанол = 30/1). Реакционный раствор выливали в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (2000 мл) и экстрагировали хлороформом (5000 мл) и экстракт сушили сульфатом натрия, фильтровали и затем выпаривали при пониженном давлении, получая бесцветное твердое вещество (165,1 г). Это твердое вещество использовали в следующей реакции как таковое.

¹H ЯМР δ (м.д., CDCl₃): 3,95 (3H, с), 4,09 (3H, с), 4,83 (2H, с), 5,67 (2H, с), 7,02 (8H, м), 7,37 (10H, м), 7,88 (1H, шир.).

[Ссылочный пример 4] 5,6-Диметокси-1- (1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол-3-ацетонитрил
3-Хлорметил-5,6-диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол (165,0 г) суспендировали в диметилсульфоксиде (1200 мл) и перемешивали при комнатной температуре. В суспензию добавляли цианат калия (43,6 г), который измельчали в порошок с использованием ступки. После перемешивания реакционного раствора при 70^oC в течение 1 часа раствор становился однородным и прозрачным, тонкослойная хроматография (этилацетат/гексан = 2/1) показывала, что пятно исходного материала почти исчезало. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду (15000 мл), которую энергично перемешивали, и смесь перемешивали в течение 1 часа. Таким образом, осажденное твердое вещество собирали вакуум-фильтрованием, промывали водой (1000 мл х 3) и растворяли в хлороформе (5000 мл), получаемый раствор сушили сульфатом натрия и фильтровали, затем растворитель выпаривали при пониженном давлении. Полученный таким образом остаток разделяли и очищали на колонке с силикагелем (этилацетат), получая 108,7 г светло-коричневое твердое вещество. Это твердое вещество непосредственно использовали в следующей реакции.

¹H ЯМР δ (м.д., CDCl₃): 3,92 (3H, с), 3,94 (3H, с), 3,97 (2H, с), 5,42 (2H, с), 6,79 (1H, с), 7,00 (1H, с), 7,02 (1H, с), 7,06 (5H, м), 7,30 (10H, м), 7,46 (1H, с).

[Ссылочный пример 5] 5,6-Диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол-3- уксусная кислота
5,6-Диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол - 3-ацетонитрил (107,0 г) суспендировали в этаноле (1000 мл) при комнатной температуре. В суспензию добавляли 10N водный раствор едкого натрия (40,0 г едкого натра, получен из 100 мл воды), затем смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником. Через 6 часов после этого при помощи анализа тонкослойной хроматографии (этилацетат) наблюдали, что пятно исходного материала почти исчезло. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду (5000 мл). pH смеси устанавливали 3-4 добавлением 10% водного раствора хлористоводородной кислоты, происходило осаждение бесцветного твердого вещества. Его собирали фильтрованием и промывали водой (500 мл х 3). Полученное таким образом твердое вещество растворяли в хлороформе (5000 мл), получаемый раствор сушили сульфатом натрия и фильтровали и затем растворитель выпаривали при пониженном давлении. Полученное таким образом твердое вещество в количестве 134,0 г непосредственно использовали в следующей реакции.

¹H ЯМР δ (м.д., CDCl₃): 3,84 (3H, с), 3,87 (3H, с), 3,89 (2H, с), 5,43 (2H, с), 6,76 (1H, с), 6,88 (1H, с), 6,93 (1H, с), 7,03 (5H, м), 7,28 (10H, м), 7,48 (1H, с).

/Ссылочный пример 6/ 4-(3-Хлор-2-метилфенил)-1-[[5,6 -диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил)метил-1H-индазол-3-ил] ацетил]пиперазин
5,6-Диметокси-1-(1-тритил-4-имидазолил) метил-1H-индазол-3-уксусную кислоту (134,0 г) суспендировали в дихлорметане (1000 мл). В эту суспензию добавляли 2,2-дипиридилсульфид (63,5 г) и трифенилфосфин (75,6 г), затем смесь перемешивали при комнатной температуре (суспензия становилась однородным раствором). В этот раствор по каплям в течение 5 минут добавляли раствор 4-(3-хлор-2-метилфенил)пиперазина (60,7 г) в дихлорметане (200 мл), затем смесь перемешивали 5 часов при комнатной температуре. Тонкослойной хроматографией (этилацетат/гексан = 3/1) показывали, что пятно исходного материала почти исчезало. Дихлорметан из реакционного раствора выпаривали при пониженном давлении и полученный таким образом остаток смешивали с горячим этилацетатом и перемешивали до обнаружения осадка твердого вещества. Его собирали вакуум-фильтрованием, промывали этилацетатом (500 мл х 2) и затем сушили на воздухе. Получая 140,4 г бесцветного твердого вещества. Твердое вещество разделяли и очищали на колонке с силикагелем (хлороформ/этанол=30/1), получая 134,9 г бесцветного твердого продукта. Его перекристаллизовывали из этанола, получая 120,0 г бесцветных призматических кристаллов (т.пл. 103-105^oC).

ИК (KBr) см^-1: 1646, 1628, 1508, 1466, 1450, 1430, 1260, 750, 702.

¹H ЯМР δ (м.д., CDCl₃): 1,23 (1,2H, т, J=6,8 Гц, Me от EtOH), 2,28 (3H, с), 2,55 (2H, м), 2,73 (2H, м), 3,67 (4H,м), 3,71 (0,8H, к, J=6,8 Гц, CH₂ от EtOH), 3,90 (3H, с), 3,93 (3H, с), 4,03 (2H, с), 5,43 (2H, с), 6,68 (1H, с), 6,72 (1H, д, J=8,3 Гц), 6,90 (1H, с), 7,03 (7H, м), 7,14 (1H, с), 7,27 (10H, м), 7,41 (1H, с).

Элементный анализ для С₄₅H₄₃N₆О₃Cl·0,4EtOH·H₂О:
Рассчитано: С 70,10%; H 5,70%; N 10,70%; Cl 4,72%.

Найдено: С 70,02%; H 5,78%; N 10,60%; Cl 5,11%.

/Изобретательский пример 1/ 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1- пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазол
4-(3-Хлор-2-метилфенил)-1-[[[5,6-диметокси-1-(1-тритил-4- имидазолил)метил] индазол-3-ил]ацетил]пиперазин (120,0 г) суспендировали в тетрагидрофуране (1000 мл). В эту суспензию добавляли 1,0 М комплекса боран-тетрагидрофуран (800 мл) и затем смесь нагревали при кипячении с обратным холодильником. Через 90 минут анализ тонкослойной хроматографией (этилацетат) показал, что пятно исходного материала почти исчезло. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и смешивали с водой (30 мл) для разложения избытка реагента. После выпаривания тетрагидрофурана при пониженном давлении полученный таким образом остаток смешивали с концентрированной хлористоводородной кислотой (150 мл), водой (200 мл) и этанолом (40 мл) и перемешивали при 50^oC в течение 1 часа. Водный слой охлаждали до комнатной температуры, подщелачивали карбонатом калия и экстрагировали хлороформом (3000 мл) и органический слой сушили сульфатом натрия и фильтровали, растворитель затем выпаривали при пониженном давлении. Полученный таким образом остаток разделяли и очищали колоночной хроматографией с силикагелем (хлороформ/этанол = 40/1), получая бесцветный твердый продукт. Его перекристаллизовывали из смеси изопропиловый спирт-изопропиловый простой эфир, получая 71,0 г бесцветных призматических кристаллов (точка плавления: 143-144,5^oC).

ИК (KBr) см^-1: 1510, 1464, 1432, 1272, 1238, 1206, 1006.

¹H ЯМР δ (м.д., CDCl₃): 2,34 (3H, с), 2,78 (4H, м), 2,90 (2H, м), 2,97 (4H, м), 3,17 (2H, м), 3,90 (3H, c), 3,91 (3H, с), 5,45 (2H, с), 6,83 (1H, с), 6,84 (1H, с), 6,92 (1H, м), 7,00 (1H, с), 7,09 (2H, м), 7,52 (1H, с).

Элементный анализ для С₂₆H₃₁N₆Cl:
Рассчитано: С 63,09%; H 6,31%; N 16,98%; Cl 7,16%.

Найдено: С 62,93%; H 6,30%; N 16,88%; Cl 7,16%.

Изобретательский пример 2 /1,5-гидрохлорид 3-[2-[4-(3-Хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6- диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола (безводные кристаллы)
Порцию 60 г кристаллов 3-[2-[4-(3-xлop-2-мeтилфeнил)-1-пиперазинил]-этил] -5,6 -диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола (свободная форма) растворяли в 1000 мл этанола при нагревании. Получаемый раствор смешивали с 182,2 мл 1 N хлористоводородной кислоты и перемешивали в течение 20 минут и затем раствор выпаривали при пониженном давлении. Полученный таким образом остаток сушили при комнатной температуре в течение 12 часов при пониженном давлении в присутствии пентаоксида фосфора. Полученный таким образом порошок растворяли в 1300 мл безводного этанола при нагревании. После растворения раствор концентрировали до объема около 1000 мл нагреванием. Полученный таким образом концентрированный раствор самопроизвольно охлаждали при перемешивании и после добавления затравочных кристаллов далее самопроизвольно охлаждали при перемешивании до комнатной температуры. Осажденные таким образом кристаллы собирали фильтрованием и сушили нагреванием (60^oC) в течение около 12 часов при пониженном давлении в присутствии пентаоксида фосфора, получая 64 г бесцветных кристаллов (точка плавления: 226,5-228^oС).

ИК (KBr) см^-1: 2968, 2836, 2712, 2544, 2456, 1512, 1470, 1436, 1338, 1260, 1208, 1166, 1108, 1032, 1006, 862.

¹H ЯМР δ (м. д., CDCl₃): 2,32 (3H, с), 3,20-3,21 (3,5H, м), 3,40-3,52 (10H, м), 3,82, 3,86 (каждый 3H, с), 5,53 (2H, с), 7,08 (1H, дд), 7,19-7,25 (2H, м), 7,31-7,33 (3H, м), 8,36 (1H, с).

Анализом ВЭЖХ было подтверждено, что полученные в этом случае кристаллы содержали около 15000 м.д. остаточного этанола.

/Изобретательский пример 3/ 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2- [4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола
Порцию 4,95 г свободной формы 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил) -1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола смешивали с 20 мл 1N хлористоводородной кислоты и дистиллированной водой до общего объема 49,5 мл. Затем реакционный сосуд нагревали при наружной температуре 120^oC для кипячения смеси внутри сосуда с обратным холодильником, тем самым полностью растворяя кристаллы. Полученный таким образом раствор охлаждали до комнатной температуры при перемешивании мешалкой и затем перемешивание продолжали в течение всего дня и ночи. Осажденные таким образом кристаллы собирали фильтрованием и сушили на воздухе в течение 2 дней, получая 5,5 г бесцветных призматических кристаллов (точка плавления: 166-167^oC).

ИК (KBr) см^-1: 3400, 2850, 1625, 1505, 1460, 1425, 1245, 1150, 1010, 840.

¹H ЯМР (м. д., d₆-ДMCO) δ: 2,39 (3H, с), 3,30-3,80 (20H, м), 5,74 (2H, с), 7,15 (1H, дд), 7,28 (1H, c), 7,30 (1H, дд), 7,43 (1H, с), 7,52 (1H, с), 7,69 (1H, с), 9,13 (1H, с), 11,80 (1H, шир. с), 14,80 (1H, шир. с).

Элементный анализ для C₂₆H₃₁N₆O₂Cl·2HCl·3,5H₂O:
Рассчитано: С 49,41%; H 6,54%; N 13,30%; Cl 16,83%.

Найдено: С 49,15%; H 6,44%; N 13,29%; Cl 16,99%.

Данные порошковой рентгенограммы
Условия измерения:
Источник рентгеновских лучей: лучи Cu-K α (детекторная сторона, монохроматические лучи, излучаемые монохроматором)
Детектор: счетчик сцинтилляции
Напряжение рентгеновских лучей: 35 кВ Ток: 20 мА
Скорость сканирования: 2^o/мин
Угол, экранируемый образцом: 0,010^o
Щелевые системы:
Щель отклонения = 1,0^o Щель рассеяния = 1,0^o
Принимающая (аналитическая) щель = 0,15 мм
Аппаратура: Порошковый рентгеновский дифрактометр МХР-3V, изготовленный Маск Science
Характеристические пики рентгеновского спектра приводятся ниже.

Величина d параметра кристаллической решетки ( ) - относительная интенсивность
28,1 - средняя
27,5 - средняя
27,0 - средняя
26,4 - средняя
25,6 - средняя
25,3 - сильная
24,7 - средняя
24,3 - сильная
22,0 - сильная
21,4 - слабая
20,9 - средняя
19,3 - очень слабая
17,8 - средняя
15,4 - средняя
13,8 - средняя
9,60 - очень сильная
9,09 - очень слабая
8,46 - средняя
/Изобретательский пример 4/ 3,5-гидрата дигидрохлорида 3- [2-[4-(3-Хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола
Порцию 5,50 г кристаллов 1,5-гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6 -диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1H-индазола (безводный) смешивали с 5,0 мл 1N хлористоводородной кислоты и дистиллированной воды до общего объема 49,5 мл. Затем реакционный сосуд нагревали при наружной температуре 120^oC для кипячения смеси внутри сосуда с обратным холодильником, тем самым полностью растворяя кристаллы. Полученный таким образом раствор охлаждали до комнатной температуры при перемешивании мешалкой и затем перемешивание продолжали в течение всего дня и ночи. Осажденные таким образом кристаллы собирали фильтрованием и сушили на воздухе в течение 2 дней, получая 5,6 г бесцветных призматических кристаллов (точка плавления: 166-167^oC).

Полученные таким образом кристаллы показали такие же физические данные, какие получены в изобретательском примере 3.

Примеры фармакологических испытаний соединения данного изобретения приводятся ниже, в которых результаты получали в основном с использованием его безводной формы (ангидрида).

Что касается токсичности, то токсичной при одном пероральном введении была доза 200 мг/кг или более, серьезное побочное действие не наблюдали у крыс в испытании на токсичность при многократном пероральном введении на протяжении 10 дней и в испытании на токсичность при многократном введении внутривенной инъекцией на протяжении 10 дней.

В частности, серьезное влияние на гемодинамику и электрокардиограмму не наблюдали у собак и значительное влияние на центральную нервную систему не наблюдали у макак резус, даже при введении внутревенной инъекцией дозы 10 мг/кг. /Пример 1 фармакологического испытания/ Ингибирующее действие на калмодулин
Ингибирующее действие на калмодулин оценивали с использованием в качестве показателя ингибирующего влияния калмодулинзависимой фосфодиэстеразы (ФДЭ). Способ Thomson et al. ((Advances in Ceclic Nucleotide Research, 10, 69, 1979) модифицировали и использовали в этом испытании. То есть 50 мМ Трис-буфера (pH 7,5, содержит 5 мМ MgCl₂ и 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина), 1 мМ CaCl₂, [³H]-цГМФ]-(cGMP), калмодулин (КаМ, из бычьего головного мозга), КаМ-ФДЭ (калмодулинзависимая фосфодиэстераза, из бычьего головного мозга) и испытуемый образец смешивали и инкубировали при 30^oC в течение 10 минут. Смесь затем нагревали в течение 1 минуты на бане с кипящей водой для остановки реакции, смешивали со змеиным ядом (1 мг/мл) и затем подвергали 10-минутной реакции при 30^oC для проведения превращения 5'-ГИФ, образованного под действием ФДЭ, в гуанозин. Далее непрореагировавший цГМФ абсорбировали на ионообменной смоле (A G1-X8) и затем радиоактивность надосадочной жидкости, полученной центрифугированием, измеряли с использованием жидкостного счетчика сцинтилляции. Влияние ингибирования ФДЭ при расчете как величина IC₅₀ составляло 5,46 мкМ. С другой стороны, в качестве контрольного соединения использовали соединение W-7, показывающее величину 33,6 мкМ.

/Пример 2 фармакологического испытания/ Влияние на крысиную модель гипоксии в атмосфере азота
Это испытание проводили в соответствии со способом Albert Wauguier et al. (Japan J. Pharmacol., 38, 1-7 (1985)).

В 1 группе использовали всего 9-10 мышей, каждую мышь через 60 минут после перорального введения испытуемого лекарственного средства (30 мг/кг) помещали в прозрачный контейнер (вместимость 500 мл), снабженный выпускным отверстием для воздуха, и затем в контейнер вводили газообразный азот со скоростью 5,0 л/мин. Измеряли период времени от начала подачи газа до остановки дыхания. Когда контрольную группу брали как 100%, степень повышения была 15,1%.

/Пример 3 фармакологического испытания/ Изменения в нервных клетках гиппокампа на модели церебральной ишемии
Когда временную церебральную ишемию вызывают у песчанки, с этого времени нервные клетки гиппокампа начинают отмирать в течение нескольких дней, и такое изменение называют замедленным некрозом нервных клеток.

Следующее испытание проводили в соответствии со способом T.Kirino (Brain Res., 239, 57-69 (1982)). То есть каждую песчанку подвергали 5-минутной церебральной ишемии и затем умерщвляли для подсчета числа нервных клеток, оставшихся в области CAl гиппокампа.

Нервные клетки гиппокампа CAl в результате церебральной ишемии погибали почти полностью, но пероральное введение соединения (100 мг/кг), проведенное через 1 час после создания церебральной ишемии, показало явное защитное действие, направленное против некроза нервных клеток (см. табл. 1).

/Пример 4 фармакологического испытания/ Противоотечное действие на модели микросферической церебральной эмболы крыс.

Это испытание проводили в соответствии со способом Nobutaka Demura et al. (Neuroscience Res., 17, 23-30) 1983)).

При анестезии галотаном крысе Sic; Wis (около 300 г), которой заранее ввели канюлю в каудальную вену, рассекали шею для разрыва общей сонной артерии на левой стороне. Небную артерию отростка и внешнюю сонную артерию на той же стороне также разрывали и накладывали на них зажимы. Микросферы угля (50±10 мкм в диаметре) суспендировали в 20% декстране и инъецировали в общую сонную артерию на левой стороне для осуществления диспергирования микросфер в левом полушарии головного мозга через левую внутреннюю сонную артерию, общую сонную артерию сразу зажимали для остановки кровотечения из места, куда инъецировали микросферы, и затем артериальный зажим удаляли для возобновления циркуляции. С этого времени раствор каждого лекарственного средства непрерывно вводили при помощи инфузионного насоса из катетера, который был вставлен в каудальную вену.

Каждое животное умерщвляли обезглавливанием через 24 часа после операции и сразу после обезглавливания отрезали головной мозг для измерения массы (в сыром состоянии) левого и правого полушарий. Каждую ткань затем сушили в течение ночи при 150^oC для измерения ее массы в сухом состоянии и расчета содержания воды в каждом полушарии.

В качестве контрольной группы подготавливали и обрабатывали таким же образом группу для введения наполнителя (только 20% декстрана) (см. табл. 2).

Промышленная пригодность
Данным изобретением установлено, что 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1- (4-имидазолилметил)-1H-индазола является новым кристаллом. Этот кристалл характеризуется своей заметно постоянной стабильностью при хранении. Вследствие этого он полезен в качестве фармацевтического материала.

Формула изобретения

1. Кристаллический дигидрохлорид 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, который по существу имеет следующие характеристики дифракции рентгеновских лучей (рентгенограмма):
Величина d параметра кристаллической решетки - Относительная интенсивность
28,1 - средняя
27,5 - средняя
27,0 - средняя
26,4 - средняя
25,6 - средняя
25,3 - сильная
24,7 - средняя
24,3 - сильная
22,0 - сильная
21,4 - слабая
20,9 - средняя
19,3 - очень слабая
17,8 - средняя
15,4 - средняя
13,8 - средняя
9,60 - очень сильная
9,09 - очень слабая
8,46 - средняя
2. Кристалл по п.1, отличающийся тем, что кристаллический дигидрохлорид 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола представляет собой 3,5-гидрат.

3. Способ получения 3,5-гидрата дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, который включает обработку свободной формы 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола хлористоводородной кислотой в присутствии воды.

4. Способ получения 3,5-гидрата дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, который включает обработку гидрата гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом, меньшим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, водой и/или хлористоводородной кислотой.

5. Способ получения дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, по существу имеющего следующие характеристики дифракции рентгеновских лучей:
Величина d параметра кристаллической решетки - Относительная интенсивность
28,1 - средняя
27,5 - средняя
27,0 - средняя
26,4 - средняя
25,6 - средняя
25,3 - сильная
24,7 - средняя
24,3 - сильная
22,0 - сильная
21,4 - слабая
20,9 - средняя
19,3 - очень слабая
17,8 - средняя
15,4 - средняя
13,8 - средняя
9,60 - очень сильная
9,09 - очень слабая
8,46 - средняя
который включает обработку свободной формы 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола хлористоводородной кислотой в присутствии воды.

6. Способ получения дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, по существу имеющего следующие характеристики дифракции рентгеновских лучей:
Величина d параметра кристаллической решетки - Относительная интенсивность
28,1 - средняя
27,5 - средняя
27,0 - средняя
26,4 - средняя
25,6 - средняя
25,3 - сильная
24,7 - средняя
24,3 - сильная
22,0 - сильная
21,4 - слабая
20,9 - средняя
19,3 - очень слабая
17,8 - средняя
15,4 - средняя
13,8 - средняя
9,60 - очень сильная
9,09 - очень слабая
8,46 - средняя
который включает обработку гидрата гидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил] -5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, который является гидратом и/или гидрохлоридом меньшим, чем 3,5-гидрат дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил] этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола, водой и/или хлористоводородной кислотой.

7. Способ получения по п.5 или 6, отличающийся тем, что кристалл дигидрохлорида 3-[2-[4-(3-хлор-2-метилфенил)-1-пиперазинил]этил]-5,6-диметокси-1-(4-имидазолилметил)-1Н-индазола является 3,5-гидратом.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6