Способ получения плодных маток медоносной пчелы

 

Способ состоит в том, что используют криобиологические технологии в сохранении генофонда пчелиных для получения полноценной пчелиной семьи путем инструментального осеменения неплодной матки спермой трутней, длительно хранившейся в жидком азоте, что позволяет сохранять определенный запас генетически нужной спермы длительное время для быстрого использования.

Изобретение относится к области сельскохозяйственной энтомологии для получения полноценной пчелиной семьи путем осеменения неплодной матки спермой, длительно хранившейся в жидом азоте с использованием питательной среды для культивирования клеток насекомых C46, содержащей эмбриональную телячью сыворотку (ЭТС) и в качестве криопротектора диметилсульфоксид (ДМСО).

Ранее мы предложили метод хранения спермы трутней в жидком азоте, где выживаемость 80-100% спермиев трутней достигалась при замораживании смеси - сперма от 20 трутней с 0,15 мл среды C46, содержащей 15% ЭТС и 10% (ДМСО), с последующим центрифугированием и заменой среды на свежую без криопротектора (Какпаков В.Т., О.В.Кабашова, А.В.Бородачев, Какпакова Е.С. Криобанк спермы трутней медоносной пчелы. Пчеловодство, 1993, N 8, стр.4-6).

В качестве прототипа был использован способ получения плодных маток искусственным (инструментальным) осеменением дефростированной спермой трутней, предложенный Кафтаноглу и Пенгом (Kaftanoglu О., Peng Y.S.R. Preservation of honeybee spermatozoa in liquid nitrogen. J.Apicultural Res., 1984, vol. 23, N 3, pp. 157-163), которые получили рабочих пчел от маток, осемененных спермой, хранившейся в течение 359 дней. Однако воспроизводство потомства матками, оплодотворенными ею, оказывалось недостаточным для поддержания нормальной силы пчелиной семьи.

Цель изобретения - создать высокоэффективный способ получения плодных маток медоносной пчелы, включающий оплодотворение маток трутнями, получение расплода и воспитание его в семье, отличающийся тем, что маток осеменяют инструментально замороженной в жидком азоте, а затем оттаянной спермой трутней, при этом получают от трутней сперму, разбавляют ее питательной средой, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки и 10% диметилсульфоксида, и вводят маткам в количестве 8-10 мм³, после осеменения маток подсаживают в нуклеусы, в которых были одна рамка с расплодом, рамка с кормом и 200 г пчел, а затем переводят в семью.

Эта цель достигалась тем, что в отличие от прототипа на основе разработанного нами метода длительного хранения спермы в жидком азоте был создан криобанк спермы трутней основных пород пчел (Какпаков и др., 1993). В целях дальнейшего совершенствования технологии инструментального осеменения маток был разработан шприц большого объема, вмещающий сперму от 100 и более трутней, что позволяет отбирать ее для замораживания в объеме, необходимом для осеменения не менее десяти маток. Запаянные капилляры шприца можно использовать для транспортировки спермы на дальние расстояния.

Пример 1. С целью получения плодных маток неплодные матки медоносной пчелы приокского породного типа были осеменены криоконсервированной спермой, хранившейся в жидком азоте в течение 300 дней. Матки были разделены на две группы, поскольку они различались по возрасту и кратности осеменения. Из восьми неплодных маток четырнадцатидневного возраста однократно вводили 8 мм³ спермы. Маток подсаживали в нуклеусы, в которых были одна рамка с расплодом, рамка с кормом и 200 г пчел. На следующий день после искусственного осеменения погибла одна матка, а двух пчелы не приняли. Оставшиеся пять плодных маток благополучно работали в семьях. Эффективность около 62%.

Пример 2. Десять неплодных маток десятидневного возраста осеменяли инструментально двукратно 4 мм³ спермы. Маток подсаживали в такие же нуклеусы. В этой группе три матки погибли через два дня после искусственного осеменения, одна потерялась, а шесть маток посадили в нуклеусы. Таким образом в данной серии после искусственного осеменения спермой трутней, хранившейся в течение 300 дней при минус 196^oC, получено 11 маток, которые сформировали нормальные семьи. Эффективность оплодотворения 60%.

Пример 3. 26 неплодных маток были осеменены спермой, хранившейся 500 суток в жидком азоте. На седьмой день 24 матки приступили к яйцекладке. Восемь из них откладывали только трутневые яйца. При вскрытии оказалось, что сперматеки этих маток были без спермы, что связано, возможно, с методическими недостатками искусственного осеменения. Из оставшихся 16 маток через месяц после начала яйцекладки шесть маток с семьями были оставлены в зиму. Десять маток, которые откладывали яйца рабочих пчел, были отпрепарированы и подвергнуты детальному микроскопическому анализу. В результате исследований оказалось, что из десяти маток в сперматеке трех не было обнаружено сперматозоидов. Все шесть семей, оставленные в зиму с искусственно осемененными матками, хорошо прозимовали, но матки весной 1993 г. потерялись.

Пример 4. 23 матки были осеменены спермой, хранившейся в глубокой заморозке в течение 760 суток. 17 маток на десятый день приступили к яйцекладке. Через 15 дней при появлении первого печатного расплода установлено, что две откладывали только трутневые яйца. Остальные 15 маток, откладывавшие нормальные оплодотворенные яйца, были оставлены в семьях еще на один месяц. Оценку развития семей проводили по количеству расплода с помощью рамки сетки. Через месяц десять маток, в семьях которых площадь расплода оказалось менее 150 см², выбраковывали. Сперматеки препарированных маток замораживали для дальнейшей оценки числа выживших сперматозоидов. Остальные пять маток, имевшие в среднем по 300 мм² расплода и оцененные на "отлично" по пятибалльной системе, оставлены в зиму 1993 - 1994 г. (Эффективность 65%).

Пример 5. Ампулу со спермой, хранившейся в течение пяти лет в жидком азоте, оттаивали и инструментально осеменяли 10 неплодных пчелиных маток. У 9 маток были обнаружены сперматозоиды в сперматеке. Эффективность оплодотворения спермы, хранившейся в течение пяти лет в жидком азоте, 90%.

Формула изобретения

Способ получения плодных маток медоносной пчелы, включающий оплодотворение маток трутнями, получение расплода и воспитания его в семье, отличающийся тем, что маток осеменяют инструментально замороженной, а затем оттаянной спермой трутней, при этом получают от трутней сперму, разбавляют ее питательной средой, содержащей 15% эмбриональной телячьей сыворотки и 10% диметилсульфоксида, и вводят маткам в количестве 8 - 10 мм³, после осеменения маток подсаживают в нуклеусы, а затем переводят в семью.