Образование пептид/липидного комплекса путем совместной лиофилизации

 

Изобретение относится к области фармацевтики и касается лиофилизированного пептид/липидного продукта. Изобретение заключается в том, что образуют пептид/липидные везикулы и комплексы посредством совместной лиофилизации пептидов, предпочтительно тех, которые способны принимать амфипатическую альфа-спиральную конформацию, и одного или более липидов. Получают лиофилизированный пептид/липидный комплекс. Растворяют как пептиды, так и липиды, получая единственный раствор или два отдельных раствора. Изобретение обеспечивает получение стабильных пептид/липидных везикул и комплексов. 12 с. и 49 з.п.ф-лы, 1 табл., 8 ил.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)с

Формула изобретения

1. Способ получения лиофилизированного пептид/липидного продукта, который включает лиофилизацию солюбилизированного раствора, содержащего пептид или аналог пептида, которые способны принимать амфипатическую конформацию и липид, причем указанный липид растворяют в указанном растворе без применения детергента и где указанный продукт может быть регидратирован с образованием пептид/липидного комплекса.

2. Способ по п.1, где указанный пептид является белком.

3. Способ по п.1, где указанный пептид является белком, связывающим липид.

4. Способ по п.1, где указанный аналог пептида является аналогом АроА-I, АроА-II, АроА-IV, АроС-I, Арос-II, АроС-III или АроЕ.

5. Способ по п.1, где указанный липид является насыщенным липидом, ненасыщенным липидом или их смесями.

6. Способ по п.1, где указанный раствор приготовлен с использованием органического растворителя.

7. Способ по п.1, который далее включает отбор аликвот указанного раствора пептида/липида в отдельные контейнеры перед лиофилизацией с получением лекарственной формы, содержащей единицу дозы.

8. Способ по п.1, который далее включает стерилизацию указанного продукта перед, во время или после лиофилизации.

9. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения нарушений, связанных с дислипопротеинемиями, атеросклероза, септического шока, сердечно-сосудистых или инфекционных заболеваний, содержащая единицу дозы, включающая лиофилизированный пептид/липидный продукт, полученный по пп.1-8.

10. Способ по п.1, где указанный липид является природным липидом, синтетическим липидом или их смесью.

11. Способ по п.10, где указанный липид выбирается из группы, состоящей из простых эфиров фосфолипидов, фосфолипидов с короткими цепями, холестерина, производных холестерина, фосфатидилхолинов, фосфатидилэтаноламинов, фосфтидилсеринов, фосфатидилинозитов, сфинголипидов, фосфатидилглицеринов, ганглиозидов и цереброзидов.

12. Способ по п.10, где указанный липид выбирается из группы, состоящей из яичного фосфатидилхолина, фосфатидилхолина из соевых бобов, дипальмитоилфосфатидилхинолина, димиристоилфосфатидилхолина, дистеароилфосфтидилхолина, 1-миристоил-2-пальмитоилфосфатидилхолина, 1-пальмитоил-2-миристоилфосфатидилхолина, 1-пальмитоил-2-стеароилфосфатидилхолина, 1-стеароил-2-пальмитоилфосфатидилхолина, диолеоилфосфатидилхолина, диолеоилфосфатидилэтаноламина, дилауроилфосфатидилглицерина, дифосфатидилглицерина, димиристоилфосфатидилглицерина, дипальмитоилфосфатидилглицерина, дистеароилфосфатидилглицерина, диолеоилфосфатидилглицерина, димиристоилфосфатидной кислоты, дипальмитоилфосфатидной кислоты, димиристоилфосфатидилэтаноламина, дипальмитоилфосфатидилэтаноламина, димиристоилфосфатидилсерина, дипальмитоилфосфатидилсерина, сфингомиелина, дипальмитоилсфингомиелина, дистеароилсфингомиелина, фосфатидной кислоты, галактоцереброзида, дилаурилфосфатидилхолина, (1,3)-D-маннозил(1,3)диглицерида, аминофенилгликозида, 3-холестерил-6'-(гликозилтио)гексилэфирных гликолипидов и их смесей.

13. Способ по п.12, в котором указанный липид представляет собой 3-холестерил-6'-(гликозилтио)гексилэфирный гликолипид.

14. Способ по п.1, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 200:1.

15. Способ по п.14, в котором молярное отношение липид: пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 50:1.

16. Способ по п.15, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 5:1 до приблизительно 50:1.

17. Способ получения лиофилизированного пептид/липидного продукта, который может быть регидратирован с образованием пептид/липидного комплекса, указанный способ включает

(i) солюбилизацию, по меньшей мере, одного амфипатического пептида или амфипатического аналога пептида в первом растворителе с образованием первого раствора,

(ii) солюбилизацию, по меньшей мере, одного липида во втором растворителе без применения детергента с образованием второго раствора, причем указанный второй раствор является смешиваемым с указанным первым раствором,

(iii) объединение указанного первого раствора с указанным вторым раствором с образованием пептид/липидного раствора и

(iv) лиофилизацию указанного пептид/липидного раствора так, что образуется лиофилизированный пептид/липидный продукт.

18. Способ по п.17, в котором указанный пептид является белком.

19. Способ по п.17, в котором указанный пептид является белком, связывающим липид.

20. Способ по п.17, где указанный аналог пептида является аналогом АроА-I, АроА-II, АроА-IV, АроС-I, АроС-II, АроС-III или АроЕ.

21. Способ по п.17, где указанный липид является насыщенным липидом, ненасыщенным липидом или их смесями.

22. Способ по п.17, в котором первый и второй растворители одинаковы.

23. Способ по п.17, который далее включает отбор аликвот указанного раствора пептида/липида в отдельные контейнеры перед лиофилизацией с получением лекарственной формы, содержащей единицу дозы.

24. Способ по п.17, который далее включает стерилизацию указанного продукта перед, во время или после лиофилизации.

25. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения нарушений, связанных с дислипопротеинемиями, атеросклероза, септического шока, сердечно-сосудистых или инфекционных заболеваний, содержащая единицу дозы, включающая устойчивый лиофилизированный пептид/липидный продукт, полученный по п.17.

26. Способ по п.17, где указанный липид является природным липидом, синтетическим липидом или их смесью.

27. Способ по п.26, где указанный липид выбирается из группы, состоящей из простых эфиров фосфолипидов, фосфолипидов с короткими цепями, холестерина, производных холестерина, фосфатидилхолинов, фосфатидилэтаноламинов, фосфатидилсеринов, фосфатидилинозитов, сфинголипидов, фосфатидилглицеринов, ганглиозидов и цереброзидов.

28. Способ по п.26, где указанный липид выбирается из группы, состоящей из яичного фосфатидилхолина, фосфатидилхолина из соевых бобов, дипальмитоилфосфатидилхинолина, димиристоилфосфатидилхолина, дистеароилфосфатидилхолина, 1-миристоил-2-пальмитоилфосфатидилхолина, 1-пальмитоил-2-миристоилфосфатидилхолина, 1-пальмитоил-2-стеароилфосфатидилхолина, 1-стеароил-2-пальмитоилфосфитидилхолина, диолеоилфосфатидилхолина, диолеоилфосфатидилэтаноламина, дилауроилфосфатидилглицерина, дифосфатидилглицерина, димиристоилфосфатидилглицерина, дипальмитоилфосфатидилглицерина, дистеароилфосфатидилглицерина, диолеоилфосфатидилглицерина, димиристоилфосфатидной кислоты, дипальмитоилфосфатидной кислоты, димиристоилфосфатидилэтаноламина, дипальмитоилфосфатидилэтаноламина, димиристоилфосфатидилсерина, дипальмитоилфосфатидилсерина, сфингомиелина, дипальмитоилсфингомиелина, дистеароилсфингомиелина, фосфатидной кислоты, галактоцереброзида, дилаурилфосфатидилхолина, (1,3)-D-маннозил(1,3)диглицерида, аминофенилгликозида, 3-холестерил-6'-(гликозилтио)гексилэфирных гликолипидов и их смесей.

29. Способ по п.28, в котором указанный липид представляет собой 3-холестерил-6'-(гликозилтио)гексилэфирный гликолипид.

30. Способ по п.17, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 200:1.

31. Способ по п.30, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 50:1.

32. Способ по п.31, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 5:1 до приблизительно 50:1.

33. Пептид/липидный комплекс, полученный способом, включающим

(i) солюбилизацию одного или более амфипатического пептида или амфипатических аналогов пептидов и, по меньшей мере, одного липида в системе растворителей без применения детергента с образованием пептид/липидного раствора,

(ii) лиофилизацию указанного пептид/липидного раствора с образованием дегидратированного пептид/липидного продукта и

(iii) регидратацию указанного дегидратированного пептид/липидного продукта с образованием указанного пептид/липидного комплекса.

34. Пептид/липидный комплекс по п.33, где указанный пептид является белком, связывающим липид.

35. Пептид/липидный комплекс по п.33, где указанный пептид является аналогом АроА-I.

36. Пептид/липидный комплекс по п.33, где указанный липид является насыщенным липидом, ненасыщенным липидом или их смесями.

37. Пептид/липидный комплекс по п.33, имеющий диаметр от приблизительно 50 до приблизительно 120 ангстрем.

38. Пептид/липидный комплекс по п.33, где в указанном процессе используется система растворителей, состоящая из единственного растворителя.

39. Пептид/липидный комплекс по п.33, который практически равен по размеру липопротеинам высокой плотности.

40. Пептид/липидный комплекс по п.33, где указанный комплекс является стерильным.

41. Пептид/липидный комплекс по п.33, где указанный комплекс сформулирован в виде стерильной формы, содержащей единицу дозы.

42. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения нарушений, связанных с дислипопротеинемиями, атеросклероза, септического шока, сердечно-сосудистых или инфекционных заболеваний, содержащая единицу дозы, включающая устойчивый лиофилизированный пептид/липидный продукт, полученный по п.33 или 41.

43. Пептид/липидный комплекс по п.33, где указанный липид является природным липидом, синтетическим липидом или их смесью.

44. Пептид/липидный комплекс по п.43, где указанный липид выбирается из группы, состоящей из простых эфиров фосфолипидов, фосфолипидов с короткими цепями, холестерина, производных холестерина, фосфатидилхолинов, фосфатидилэтаноламинов, фосфатидилсеринов, фосфатидилинозитов, сфинголипидов, фосфатидилглицеринов, ганглиозидов и цереброзидов.

45. Пептид/липидный комплекс по п.44, где указанный липид выбирается из группы, состоящей из яичного фосфатидилхолина, фосфатидилхолина из соевых бобов, дипальмитоилфосфатидилхинолина, димиристоилфосфатидилхолина, дистеароилфосфатидилхолина, 1-миристоил-2-пальмитоилфосфатидилхолина, 1-пальмитоил-2-миристоилфосфатидилхолина, 1-пальмитоил-2-стеароилфосфатидилхолина, 1-стеароил-2-пальмитоилфосфатидилхолина, диолеоилфосфатттидилхолина, диолеоилфосфатидилэтаноламина, дилауроилфосфатидилглицерина, дифосфатидилглицерина, димиристоилфосфатидилглицерина, дипальмитоилфосфатидилглицерина, дистеароилфосфатидилглицерина, диолеоилфосфатидилглицерина, димиристоилфосфатидной кислоты, дипальмитоилфосфатидной кислоты, димиристоилфосфатидилэтаноламина, дипальмитоилфосфатидилэтаноламина, димиристоилфосфатидилсерина, дипальмитоилфосфатидилсерина, сфингомиелина, дипальмитоилсфингомиелина, дистеароилсфингомиелина, фосфатидной кислоты, галактоцереброзида, дилаурилфосфатидилхолина, (1,3)-D-маннозил(1,3)диглицерида, амино-фенилгликозида, 3-холестерил-6'-(гликозилтио)гексилэфирных гликолипидов и их смесей.

46. Пептид/липидный комплекс способа по п.45, где указанный липид представляет собой 3-холестерил-6'-(гликозилтио)гексилэфирный гликолипид.

47. Лиофилизированная композиция, полученная способом, включающим

(i) солюбилизацию амфипатического пептида или амфипатического аналога пептида и липидов системе растворителей без применения детергента с образованием пептид/липидного раствора,

(ii) лиофилизацию указанного солюбилизированного пептид/липидного раствора с образованием указанной лиофилизированной композиции.

48. Лиофиолизированная композиция по п.47, являющаяся стерильной.

49. Лиофиолизированная композиция по п.47, где пептид является пептидом, связывающим липид или аналогом АроА-I, АроА-II, АроА-IV, АроС-I, АроС-II, АроС-III или АроЕ.

50. Лиофилизированная композиция по п.47, где указанный амфипатический пептид или амфипатический аналог пептида способен принимать конформацию α-спирали.

51. Лиофиолизированная композиция по п.47, где используемая в способе система растворителей включает единственный растворитель.

52. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения нарушений, связанных с дислипопротеинемиями, атеросклероза, септического шока, сердечно-сосудистых или инфекционных заболеваний, содержащая единицу дозы, включающая устойчивый лиофилизированный пептид/липидный продукт, полученный по п.47.

53. Способ получения лиофилизированной пептид/липидной композиции, указанный способ включает (i) солюбилизацию, по меньшей мере, одного амфипатического пептида или амфипатического аналога пептида в первом растворителе с образованием первого раствора,

(ii) солюбилизацию, по меньшей мере, одного липида во втором растворителе без применения детергента с образованием второго раствора, причем указанный второй раствор является смешиваемым с указанным первым раствором,

(iii) объединение указанного первого раствора с указанным вторым раствором с образованием пептид/липидного раствора и

(iv) лиофилизацию указанного пептид/липидного раствора с образованием дегидратированной пептид/липидной композиции.

54. Способ по п.53, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 200:1.

55. Способ по п.54, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 50:1.

56. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения нарушений, связанных с дислипопротеинемиями, атеросклероза, септического шока, сердечно-сосудистых или инфекционных заболеваний, содержащая единицу дозы, включающая устойчивый лиофилизированный пептид/липидный продукт, полученный по п.53.

57. Способ получения пептид/липидного комплекса, указанный способ включает

(i) солюбилизацию, по меньшей мере, одного амфипатического пептида или амфипатического аналога пептида в первом растворителе с образованием первого раствора, (ii) солюбилизацию, по меньшей мере, одного липида во втором растворителе без применения детергента с образованием второго раствора, причем указанный второй раствор является смешиваемым с указанным первым раствором,

(iii) объединение указанного первого раствора с указанным вторым раствором с образованием пептид/липидного раствора,

(iv) лиофилизацию указанного пептид/липидного раствора с получением дегидратированный пептид/липидной композиции и

v) гидратацию высушенной пептид/липидной композиции с получением пептид/липидного комплекса.

58. Способ по п.57, в котором молярное отношение липид : пептид или молярное отношение липид : аналог пептида составляет от приблизительно 2:1 до приблизительно 200:1.

59. Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения нарушений, связанных с дислипопротеинемиями, атеросклероза, септического штока, сердечно-сосудистых или инфекционных заболеваний, содержащая единицу дозы, включающая устойчивый лиофилизированный пептид/липидный продукт, полученный по п.57.

60. Способ по п.17, 53 или 57, где указанный первый растворитель выбирается из группы, состоящей из воды, метанола, 1-бутанола и их смесей.

61. Способ по п.17, 53 или 57, где указанный второй растворитель выбирается из группы, состоящей из ксилола, бензола, метанола, хлороформа и их смесей.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43