Способ получения фармацевтически активных рекомбинантных белков

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения зрелого рекомбинантного белка дц-уАП. Способ заключается в культивировании линии эукариотических клеток, генетически трансформированных клонированной последовательностью кДНК предшественника, и включает в себя инкубацию указанной линии клеток в среде для культивирования клеток, в которую были добавлены алкановые кислоты, их производные или их соли, в течение периода времени, по меньшей мере, равного 24 часам. Способ делает возможной секрецию рекомбинантных белков в среду культивирования в их физиологически активной (зрелой) форме. Преимущество изобретения заключается в разработке способа, позволяющего получение активного фермента дц- уАП. 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

1. Способ получения двухцепочечного уАП (дц-уАП) в среде культивирования линии эукариотических клеток, генетически трансфицированных кДНК, кодирующей препроурокиназу человека, заключающийся в инкубации указанной линии клеток в среде для культивирования клеток, в которую добавлены алкановые кислоты, и/или их соли, и/или их производные, выбранные из масляной кислоты, бутирата натрия, пропионата натрия, бутирата магния, трибутирина и фенилбутирата, в течение периода времени, равного по меньшей мере 24 ч.

2. Способ по п.1, где двухцепочечный уАП является уАП ВММ.

3. Способ по п.1, где двухцепочечный уАП является уАП НММ.

4. Способ по п.1, где указанная линия эукариотических клеток является линией клеток млекопитающих, выбранной из НЕК-293, CV-1, COS, BSC-1, MDCK, A-431, CHO, BHK, CHO-Messi.

5. Способ по п.1, где указанный период времени составляет от 48 до 200 ч.

6. Способ по п.4, где указанная культура клеток не содержит сыворотки.

7. Способ по п.1, при котором указанную инкубацию проводят при температуре, равной или ниже 37°С.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38