Способ диагностики гипер- бета-эндорфинии в цереброспинальной жидкости
Изобретение относится к медицине, а именно к нейрофизиологии, и предназначено для экспресс-диагностики гипер--эндорфинии в цереброспинальной жидкости. Пробу ЦСЖ кристаллизуют путем высушивания при Т=+18-20°С в течение 1-1,5 часов. Препарат исследуют в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. При наличии в препарате кристаллов в виде зерен, сферолитов, дендриторазветвленных сферолитов, дендритов, лучистых агрегатов диагностируют гипер--эндорфинию. Способ позволяет упростить и повысить точность диагностики. 13 ил.
Изобретение относится к медицине, биологии, нейрофизиологии и может быть использовано для диагностики гипер--эндорфинии в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ).Эндорфины относятся к опиоидным пептидам, особой группе нейромедиаторов, обладающих морфиноподобным действием, регулирующих деятельность ЦНС, эндокринной, иммунной системы, сердечно-сосудистой, органов пищеварения. Наиболее активными являются -эндорфины, которые запускают цепь нейрофизиологических и нейрохимических процессов в различных стрессовых ситуациях, обеспечивают антиноцицептивный (антиболевой) эффект (Эндорфины. - М., 1981; Ю.Ф.Игнатов, А.Т.Качан, Ю.Н.Васильев. Акупунктурная аналгезия. - Л., 1990; Т.Л.Демина, А.Н.Бойко, А.Н.Росельс и др. Исследование клеточного иммунитета и системы опиатных пептидов у больных рассеянным склерозом. В жур.: Неврология и психиатрия. - 1990. - №2. - С.19-24).Доказана роль гиперэндорфинии в генезе психических и неврологических расстройств, нарушении мозгового кровообращения, в происхождении опухолей головного мозга, гипофиза, гипоталамуса, кишечника, в пристрастии к наркотикам (Е.О.Братин. Нейрохимические механизмы регуляции болевой чувствительности. - М., 1991; Л.В.Калюжный. Физиологические механизмы регуляции болевой чувствительности. - М., 1984; А.В.Леонов. Содержание опиоидных пептидов в плазме крови и цереброспинальной жидкости у больных ишемическим инсультом. Авт. реф. Канд. дис. М., 1987).Известны способы оценки опиатной - эндорфинной системы после электростимуляции головного мозга, кишечника, акупунктуры, при психических и эндокринных заболеваниях, электроакупунктуры, которые заключаются в определении уровня эндорфинов в ткани головного мозга, ЦСЖ, в ткани кишечника, в плазме, сыворотке крови (Терениус Л., Померанц Б., Вюстер М. и др. В кн.: Эндорфины. - М., 1981. - С.309-325, 344-349; Л.В.Калюжный. Физиологические механизмы регуляции болевой чувствительности. - М., 1984. - С.70-71, 170-171, 176-177, 153-178).Определение уровня эндорфинов в биологических тканях и жидкостях осуществляют способом жидкостной хроматографии, радиоиммунологическим, радиорецепторными тестами, кристаллоскопическим способом (Д.Мик, Т.Бохан. Использование жидкостной хроматографии под высоким давлением для изучения энкефалинов. В кн.: Эндорфины. - М., 1981. - С.148-154; А Кил X. с соавт. Биохимическое, фармакологическое и аналитическое исследование. В кн.: Эндорфины. - М., 1981. - С.131-142; Шварц Н. с соавт. Содержание эндорфинов в стриатуме, определяемое радиорецепторным и радиоиммунологическим методами. В кн.: Эндорфины. - М., 1981. - С.248-253; В.Н.Славнов, Г.В.Валуева, Е.В.Эпштейн и др. Радиоиммунологическое определение -эндорфина и -липотропина в крови. Журн. “Медицинская радиология” - 1982. - №4. - С.45-49; Л.В.Савина, С.А.Павлищук, В.Ю.Самсыгин. Способ определения гипер-бета-эндорфинемии. Патент Рос. Фед. №250111 - М., 2000).АналогОпределение опиатов (эндорфинов) хроматографическим способом.Этапы определения1. Подготовка проб, содержащих опиаты путем их экстракции органическими реактивами.2. Очистка пробы с последующим растворением остатка в растворителе или подвижной фазе.3. Расчет параметров градуированной характеристики, калибровка колонки.4. Определение количества элюирующих соединений с использованием детекторов.5. Помещение в хроматограф, разделение в его системе.6. Математические расчеты.Недостатки способа1. Трудное извлечение опиатов из биоматериала при помощи экстрагируемых веществ, нарушение нативности биоматериала, снижение достоверности результатов.2. Применение различных способов очистки пробы.3. Использование сложного устройства в виде хроматографа.4. Высокие материальные затраты.Все выше изложенное затрудняет широкое применение способа хроматографии.ПрототипКоличественное определение -эндорфина в ЦСЖ по содержанию Эндотелина-1 (ЕТ-1) иммуноферментным способом с использованием энзимосвязанного иммуносорбентного набора DSL-10-5100 ACTIVE ELISE (GENERAL PROTOCOL FOR РЕРТIDЕ ENZYME IMMUNOASSAY) Range: 0-25 ng/ml standard curve. PENINSULA LABORATORIES, INS. 601 Taylor Way. San Carlos, CA 94070. Internet web site: www.penlabs.com.: Enzyme Immunoassay Techniques, An Overview. Porstmann, T. and Kiessig, S.T.Journal of Ymmunological Methods, 150 (1992) 5-21.Способ осуществляют следующим образом:- сбор и подготовка образцов согласно общему протоколу иммуноферментного анализа пептидов;- ЦСЖ центрифугируют и замораживают в течение часа до - 70°С;- используют иммуноферментный набор DSL-10-5100 ACTIVE ELISE, который содержит образцы: стандарты контроля и образцы плазмы с биотинилованным анти-ЕТ антителом определенной специфичности, выращенные в колодцах микротитрования;- после промывают колодцы;- обрабатывают стрептовидином - меченным ферментом - пероксидазой хрена;- образцы выдерживают в термостате с субстратом тетраметилбенцидина, затем добавляют раствор, прекращающий окисление;- определяют степень энзиматического оборота субстрата измерением поглощения двойной волны при 450 и 620 nm (измеренное поглощение прямо пропорционально концентрации присутствующего ЕТ-1 в пробах);- используют набор стандартов ЕТ-1 для построения стандартной кривой поглощения и определения концентрации ЕТ в пробах;- строят стандартную кривую, которая имеет сигмовидную форму, показывающую взаимоотношение между концентрацией пептида и соответствующей абсорбцией;- определяют концентрацию пептида в пробе путем помещения оптимальной плотности пробы на ось Y стандартной кривой и построения диаграммы;- сопоставляют диаграммы и подсчитывают результаты с помощью компьютерной программы;- сравнивают полученные результаты с нормой.Недостатки способа:- нарушение нативности ЦСЖ (центрифугирование, замораживание до -70°С);- применение иммуноферментного набора, набора стандартов;- использование компьютерной программы;- трудоемкость исполнения;- высокие материальные затраты.Задачи предлагаемого изобретения:- повышение достоверности показателей контроля за стимуляцией эндорфинной системы;- повышение информативности;- упрощение способа приготовления пробы, сокращение стоимости диагностики;- экспресс-диагностика активации эндогенной опиатной системы по выбросу -эндорфина.Сущность изобретения заключается в том, что пробу ЦСЖ кристаллизуют путем высушивания при Т=+18-20°С в течение 1-1,5 часов и при условии наличия кристаллов в виде зерен, сферолитов, дендриторазветвленных сферолитов, дендритов, лучистых агрегатов при микроскопировании их в поляризованном свете с кварцевым компенсатором определяют гипер--эндорфинию.Способ осуществляют следующим образом1. В положении больного на левом боку с соблюдением правил асептики и антисептики под предварительной анестезией кожи 0,5% раствором новокаина 5,0 мл в промежутке между III и IV поясничными позвонками производят поясничный прокол.2. Для исследования берут 0,5-0,8 мл ЦСЖ.3. Тарированной пипеткой ЦСЖ в виде капель, каждая объемом 0,01-0,02 мл наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом.4. Сушат при Т=+18-20°С в течение 1-1,5 часов.5. Под микроскопом в поляризованном свете с кварцевым компенсатором изучают картину кристаллизации и при наличии в препарате зерен, сферолитов, дендриторазветвленных сферолитов, дендритов, лучистых агрегатов диагностируют гипер--эндорфинию.Нами предварительно были приготовлены модельные композиты (МК) из ЦСЖ здорового человека, обогащенной -эндорфином в различных концентрациях: 9,5 ng/ml, 10 ng/ml, 11 ng/ml, 12 ng/ml, 13 ng/ml, 15 ng/ml, 25 ng/ml, 50 и 60 ng/ml.В зависимости от концентрации -эндорфин кристаллизовался определенным образом в МК, фиг.1-5.На фиг.1а, б представлены кристаллограммы: зерна, концентрация -эндорфина 9,5-10 ng/ml.На фиг.2а, б представлены кристаллограммы в виде зерен и лучистых агрегатов (а, зерна, концентрация - 11 ng/ml), в виде сферолитов (концентрация - 12 ng/ml).На фиг.3а, б приведены кристаллограммы МК в виде дендриторазветвленных сферолитов (а, концентрация - 13 ng/ml) и дендритов (б, концентрация - 15 ng/ml).На фиг.4а, б приведены дендриторазветвленные сферолиты (концентрация - 25 ng/ml).На фиг.5а, б приведены кристаллограммы МК в виде лучистых агрегатов (а - концентрация - 50 ng/ml, б - концентрация - 60 ng/ml).Апробация способа подтверждена на 318 больных.Примеры.Пример 1, фиг.6. Б-ой Б., история болезни (ИБ) №1018, DS: Ишемический инсульт в бассейне левой средней мозговой артерии с моторной дисфазией, правосторонним умеренным гемипарезом. На фиг.6 приведена КГ ЦСЖ. Видны сферолиты.Технология. Б-ому произведена спинномозговая пункция (СМП), взято 0,5 мл ЦСЖ. Ее капли, каждая объемом 0,01 мл, нанесли на предметное стекло, каждую накрыли покровным. Препарат высушили в термостате при Т=+18°С на протяжении часа и изучили в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. Найдены сферолиты, которые совпали с КГ модельного композита.Одновременно в ЦСЖ иммуноферментным способом определили содержание -эндорфина оно оказалось повышенным и составило 12 ng/ml (норма 9,0±0,6 ng/ml). Гипер--эндорфиния в ЦСЖ подтвердилась.Пример 2, фиг.7. Б-ой Т., ИБ №218, DS: Инфаркт в лобно-височной области справа, левосторонний гемипарез. На фиг.7 приведены зерна, лучистый агрегат, дендрит, дендриторазветвленный сферолит.Технология. Б-ому Т. сделали СМП, на исследование взяли 0,6 мл ЦСЖ, капли объемом 0,02 мл нанесли на предметное стекло, покрыли покровным и высушили в термостате при Т=+19°С на протяжении 1,5 часа. Препарат изучили в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и сравнили с МК. Присутствуют зерна, лучистый агрегат, дендрит и дендриторазветвленный сферолит. Одновременно в ЦСЖ определили уровень -эндорфина, он оказался повышен и составил 14,5 ng/ml. Гипер--эндорфиния подтвердилась.Пример 3, Фиг.8. Б-ой У., ИБ №433, DS: Ишемический инсульт в вертебробазилярном бассейне справа, атактический синдром. На фиг.8 присутствуют зерна, сферолиты, дендриторазветвленные сферолиты.Технология. Б-ому У. сделали СМП, на исследование взяли 0,7 мл ЦСЖ, капли объемом 0,02 мл нанесли на предметное стекло, покрыли покровным и высушили в термостате при Т=+20°С на протяжении 1 часа. Препарат изучили в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и сравнили с МК. Присутствуют зерна, сферолиты и дендриторазветвленные сферолиты. Одновременно в ЦСЖ определили концентрацию -эндорфина, он оказался повышенный - 14,5 ng/ml, гипер--эндорфиния подтвердилась.Пример 4, фиг.9 Б-ой И., ИБ №1549, DS: Закрытая черепно-мозговая травма. Ушиб головного мозга средней степени тяжести. На фиг.9 присутствуют зерна, сферолиты, дендриторазветвленные сферолиты.Технология. Б-ому И. произведена СМП. Взято 0,8 мл ЦСЖ, ее капли, каждая объемом 0,01 мл, нанесли на предметное стекло, покрыли покровным и высушили в термостате при Т=+18°С на протяжении 1 часа, полученный препарат сравнили с МК, исследовав его в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. Найдены зерна, сферолиты и дендриторазветвленные сферолиты. Одновременно в ЦСЖ определили уровень -эндорфина, он оказался повышен и составил 29 ng/ml. Гипер--эндорфиния подтвердилась.Пример 5, фиг.10. Б-ая К., ИБ №214, DS: Опухоль гипофиза. На фиг.10 присутствуют дендриты, дендриторазветвленные сферолиты.Технология. Б-ой К. произвели СМП, взяли 0,6 мл ЦСЖ и в каплях (0,01 мл) нанесли на предметное стекло, покрыли покровным, высушили в термостате при Т=+19°С на протяжении 1 часа, образец сравнили с МК, исследовав его в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. Присутствуют дендриты, дендриторазветвленные сферолиты. Исследовали содержание -эндорфина, которое составило - 32 ng/ml. Гипер--эндорфиния подтвердилась.Пример 6, фиг.11. Б-ой Ц., №1129, DS: Последствия перенесенного ишемического инсульта в бассейне правой средней мозговой артерии с левосторонним гемипарезом, нарушением функции тазовых органов. Б-ому произвели сеанс акупунктуры. На фиг.11 видны зерна, дендриты, сферолиты, дендриторазветвленные сферолиты.Технология. Б-ому Ц. после сеанса акупунктуры произвели СМП, взяли на исследование 0,5 мл ЦСЖ, капли которой, объемом 0,02 мл каждая, нанесли на предметное стекло, покрыли покровным и высушили в термостате при Т=+20°С на протяжении 1 часа. Препарат исследовали в поляризованном свете с кварцевым компенсатором, сравнили с МК. Найдены зерна, сферолиты, дендриты, дендриторазветвленные сферолиты. В ЦСЖ определили уровень -эндорфинов, который был повышен - 27 ng/ml. Гипер--эндорфиния подтвердилась.Пример 7, фиг.12. Б-ой А., ИБ №113, DS: аденома гипофиза, акромегалия. На фиг.12 приведены зерна, сферолиты, дендриторазветвленные сферолиты, дендриты.Технология. Б-ому А. сделали СМП, взяли 0,8 мл ЦСЖ, которую в каплях, каждая объемом 0,02 мл, нанесли на предметное стекло, покрыли покровным и высушили в термостате при Т=+20°С на протяжении 1 часа. Образец исследовали в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и сравнили с МК. Видны зерна, сферолиты и дендриторазветвленные сферолиты, дендриты. Уровень -эндорфина, оказался высокий - 25 ng/ml. Гипер--эндорфиния подтвердилась.Пример 8, фиг.13. Б-ая О., ИБ №2196, DS: Климакс. Климактерический синдром периода менопаузы. Подозрение на микроаденому гипоталамуса. На фиг.13 видны лучистые агрегаты.Технология. Б-ой О. произвели СМП, взяли 0,8 мл ЦСЖ, которую в каплях, объемом 0,01 мл, нанесли на предметное стекло, покрыли покровным и высушили в термостате при Т=+18°С на протяжении 1,5 часа. Пробу исследовали в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и сравнили с МК. Присутствуют лучистые агрегаты. Уровень -эндорфина в ЦСЖ был равен 55 ng/ml. Гипер--эндорфиния подтвердилась. Преимущества предлагаемого способа:- упрощение операции подготовки биологического материала для исследования,- отсутствие применения сложных реагентов и технологических устройств,- экологическая выгода,- достоверность полученных результатов,- возможность экспресс-диагностики.Формула изобретения
Способ диагностики гипер--эндорфинии в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ), отличающийся тем, что пробу ЦСЖ кристаллизуют путем высушивания при Т=+18-20°С в течение 1-1,5 ч и при условии наличия кристаллов в виде зерен, сферолитов, дендриторазветвленных сферолитов, дендритов, лучистых агрегатов при микроскопировании их в поляризованном свете с кварцевым компенсатором определяют гипер--эндорфинию.РИСУНКИ
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13
Похожие патенты:
Способ оценки эффективности антибактериальной терапии c. pneumoniae у больных бронхиальной астмой // 2230319
Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, иммунологии, и предназначено для оценки эффективности антибактериальной терапии Chlamydophila pneumoniae у больных бронхиальной астмой
Способ оценки провоспалительной активности синовиальной жидкости при заболеваниях крупных суставов // 2229717
Изобретение относится к области медицины, в частности к ревматологии, ортопедии и травматологии
Изобретение относится к медицине (урологии) и ветеринарии
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может найти применение в онкологии, гастроэнтерологии и медицинской микробиологии
Изобретение относится к области медицины
Изобретение относится к области медицины, а именно, к оториноларингологии, и предназначено для диагностики сенсоневральной тугоухости
Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, и предназначено для определения и лечения заболеваний, сопровождающихся нарушениями микрофлоры в полости рта
Изобретение относится к химии и медицине, точнее к способам получения сорбента для определения гликозилированных белков крови
Изобретение относится к медицине, в частности к ортопедии, и может быть использовано для лечения больных хроническим остеомиелитом Способ включает анализ результатов биохимических, радионуклидных и рентгенологических исследований, при этом при биохимическом исследовании определяют фосфатазный индекс, системный индекс электролитов и системный индекс гликолиза, сопоставляют их с показателем степени накопления в костной ткани радиофармпрепарата и данными рентгенологических исследований и при значениях на момент завершения курса лечения: фосфатазного индекса более 13, системного индекса электролитов от 160 до 200, системного индекса гликолиза менее 50, степени накопления радиофармпрепарата от 160 до 180%, отсутствии у больного остаточных костных полостей, явлений остеосклероза и/или остеопороза судят о стойком купировании остеомиелитического процесса, при значениях: фосфатазного индекса менее 8, системного индекса электролитов более 200, системного индекса гликолиза более 70, степени накопления радиофармпрепарата от 180 до 200% на фоне явлений остеопороза и/или остеосклероза делают вывод о необходимости проведения дополнительного курса консервативного лечения, а при значениях: фосфатазного индекса от 8 до 13, системного индекса электролитов менее 160, системного индекса гликолиза от 50 до 70, степени накопления радиофармпрепарата более 220% на фоне остаточных костных полостей в сочетании с явлениями остеопороза и/или остеосклероза делают вывод о неудовлетворительном результате
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования исхода острой стадии ожоговой болезни
Изобретение относится к области медицины, в частности к челюстно-лицевой хирургии
Изобретение относится к области медицины
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования
Изобретение относится к области медицины, в частности к гастроэнтерологии, гепатологии, неврологии и общей терапии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики энцефалопатий
Изобретение относится к области медицины
Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике, и предназначено для прогнозирования течения острых кишечных инфекций у детей 1-3 лет
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для ускоренной диагностики степени тяжести хронического обструктивного бронхита
Изобретение относится к медицине и касается способа подготовки образца крови для выявления ДНК M.tuberculosis методом полимеразной цепной реакции