Производное пирролидинацетамида или его комбинация для лечения расстройств цнс

Предложено: применение леветирацетама и соответствующая фармацевтическая композиция для лечения биполярных расстройств, мании, мигрени на основе леветирацетама; фармацевтическая композиция для лечения эпилепсии, синдрома отмены алкоголя, тремора, биполярных расстройств, мании, обсессивно-компульсивного расстройства, панического состояния, беспокойства, депрессии, мигрени, головной боли, боли, ишемии и травмы головы на основе леветирацетама и по меньшей мере одного ингибитора нейрональных рецепторов ГАМК типа А; соответствущие способы лечения; способ селективного усиления терапевтического действия ингибитора нейрональных рецепторов ГАМК типа А; способ лечения пациента ингибитором нейрональных рецепторов ГАМК типа А, включающий совместное введение указанного ингибитора нейрональных рецепторов ГАМК типа А с левератирацета. Изобретение отличается тем, что выявлена возможность использовать леветирацетам для лечения хронической и невропатической боли в дозах гораздо ниже тех, что вызывают вторичные эффекты, также выявлено его свойство повышать активность ингибитора нейрональных рецепторов ГАМК типа А. 7 н. и 11 з.п.ф., 20 табл.

 

Данное изобретение относится к применению (S)-(-)-α-этил-2-оксо-1-пирролидинапетамида для приготовления лекарств для лечения и/или профилактики биполярных расстройств, мигрени, хронической или невропатической боли и к фармацевтической композиции, включающей (S)-(-)-α-этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид и по меньшей мере одно соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное GABA рецепторами.

(S)-(-)-α-этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид формулы

является известным и далее называется леветирацетамом (Международное наименование).

Применение леветирацетама в качестве защитного агента для лечения и предотвращения поражений центральной нервной системы (ЦНС) гипоксического и ишемического типа описано в патенте ЕР-В-0162036. Это соединение можно также применять при лечении эпилепсии, терапевтическое его применение показало, что его правовращающий энантиомер (R)-(-)-α-этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид, полностью лишен активности (А.J. GOWER et al., Eur. I Pharmacol., 222, (1992), 193-203). Последнее соединение описано также в патенте ЕР-В-0645139 в качестве агента для лечения тревожных состояний.

В ЕР-В-0162036, указанном выше, описаны также способы получения леветирацетама, которые требуют синтеза исходного реагента, получаемого разрешением соответствующего рацемата. В патенте GB 2225322 описан способ получения леветирацетама с использованием природной аминокислоты, которая уже имеет желательную стереохимическую конфигурацию, в качестве исходного продукта.

Теперь неожиданно было установлено, что леветирацетам обладает терапевтическими свойствами, которые делают его особенно пригодным при лечении и профилактике биполярных расстройств, мании, мигрени и хронической или невропатической боли. Эти виды активности не наблюдались у правовращающего энантиомера (R)-(+)-α-этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида.

Настоящее изобретение касается, таким образом, применения леветирацетама для приготовления лекарств для лечения биполярных расстройств, мании, мигрени и хронической или невропатической боли.

Настоящее изобретение касается также способа лечения мигрени, биполярных расстройств, мании, хронической или невропатической боли, включающего введение терапевтической дозы леветирацетама пациенту, нуждающемуся в таком лечении.

Термин "лечение", используемый в данной заявке, означает целебное лечение и профилактическое лечение.

Термин "целебное" означает здесь эффективность лечения осложнений (например, маниакальных периодов или депрессивных периодов в случае биполярных расстройств).

Термин "профилактическое" означает предотвращение возникновения или повторения маниакальных/депрессивных периодов, приступов мигрени или невропатической боли.

Термин "мигрень" означает расстройство, характеризующееся повторяющимися приступами головной боли, которые сильно отличаются друг от друга по интенсивности, частоте и продолжительности. Головная боль обычно бывает односторонней и часто связана с анорексией, тошнотой, рвотой, фонофобией и/или фотофобией. В некоторых случаях приступам головной боли предшествуют неврологические расстройства и ухудшение настроения или же эти приступы связаны с указанными нарушениями. Приступы мигрени могут длиться от 4 до примерно 72 часов. Международное общество изучения головных болей (IHS, 1988) классифицирует мигрень на следующие основные типы: мигрень с аурой (классическая мигрень) и мигрень без ауры (обычная мигрень). Мигрень с аурой состоит из периода головной боли и предшествующих ему характерных визуальных, сенсорных, речевых или моторных симптомов. В отсутствие таких симптомов головная боль называется мигренью без ауры.

Цифры о распространенности этого заболевания за 1 год зависят в основном от возраста и пола (Ferrari М. D. "Migraine" The Lancet (1998); 351:1043-1051 - SheffieldR. E. "Migraine prevalence: a literature review" Headache (1998); 38:595-601).

Десять процентов всего населения (6% мужчин и 15% женщин) страдают от приступов мигрени. Пики распространенности заболевания приходятся на возраст 35-50 лет у женщин и 25-35 лет у мужчин. У возрастной группы от 10 до 19 лет распространенность заболевания сильно зависит от возраста: пик приходится на возраст около 14-16 лет. До наступления полового созревания распространенность заболевания у юношей и девушек одинакова. Среди взрослых отношение числа женщин к числу мужчин составляет примерно 2,5:1. Данные о распространенности заболевания за год свидетельствуют, что мигрень без ауры встречается в 1,5-7 раз чаще, чем мигрень с аурой.

Методы лечения мигрени можно разделить на четыре типа: общие меры, абортивная терапия, методы облегчения боли и профилактические (Silberstein S. D. "Preventive treatment of migraine: an overview" Cephalalgia (1997); vol. 17, p. 67-72 -Diamond M. L. "Contemporary diagnosis and management ofheadache and migraine" (1998); First Edition. Handbooks in Health Care Co., Newtown, Pennsylvania, USA. Diener H.., Kaube H., Limmroth V. "A practical guide to the management and prevention of migraine", Drugs (1998); vol.56(5): p.811-824).

Общие меры могут включать регулярный сон, регулярный прием пищи, соблюдение диеты и т.д. Существует целый ряд агентов, используемых при абортивном лечении, от простых анальгетиков, таких как ацетилсалициловая кислота, не стероидные противовоспалительные средства (NSAID), эрготические соединения, антиемстики, до появившихся недавно агонистов серотонина (5-НТ) (триптановых соединений).

Средства для облегчения боли могут включать NSAIDs, наркотические анальгетики или терапевтические методы. Для хронических случаев используют целый ряд препаратов, применяемых для профилактики мигрени. Профилактическое лечение обычно предусматривает прием лекарств каждый день в течение ряда месяцев или лет. Его следует назначать пациентам, у которых бывает два или более приступов мигрени в месяц. Бета-адриноцепторные блокаторы - в основном пропранол, считаются эффективными для профилактики мигрени. Таким же эффективным является лекарство для лечения эпилепсии - дивальпрекс натрия. Другие соединения включают трицикпические антидепрессанты (амитриптилин), блокаторы кальциевых каналов (нифедипин, флунаризин, верапамил), NSAIDs (кетопрофен, напроксен), рибофлавин (витамин В₂) и 5-НТ антагонисты.

Традиционными теориями патогенеза мигрени являются вазогенная теория и нейрогенная теория. Ни одна из них не объясняет полностью все клинические явления, наблюдаемые во время приступа мигрени.

Современные взгляды на патофизиологию мигрени принимают во внимание как неврологические, так и сосудистые явления в начале приступа. Эндогенные нейрофизиологическис явления активируют тригеминоваскулярные волокна в стволе мозга с последующим периваскулярым высвобождением вазактивных нейропептидов. При проведении опытов на животных было установлено, что эти нейропептиды промотируют нейрогенный воспалительный ответ, состоящий из вазодилатапии и длительной плазменной транссудации. Кортикально распространяющаяся депрессия (CSD) описана как медленно распространяющиеся волны ингибирования кортикальных нейронов, что связано с клиническими симптомами ауры. Экспериментальная CSD может активировать тригемино-сосудистую систему в стволе мозга, создавая возможную связь между механизмами ауры и головной боли. Существуют некоторые данные о том, что 5-НТ действует как нейротрансмиттер и гуморальный медиатор в невральных и сосудистых компонентах мигрени.

Пациенты, страдающие мигренью, имеют системное нарушение 5-НТ-метаболизма.

Существует теория, что люди, склонные к мигрени, характеризуются пониженным порогом нейронной возбудимости, возможно, благодаря пониженной активности ингибирующего нейротранемиттера гамма-амино-масляной кислоты (GABA). GABA обычно снижает клеточное действие нейротрансмиттера серотонина (5-НТ) и глютамата, которые оба принимают участие в приступах мигрени.

Дивальпрекс натрия представляет собой стабильное координационное соединение, содержащее вальпроат натрия и вальпроевую кислоту в мольном отношении 1:1. Нарушенный GABA метаболизм наблюдается у пациентов, страдающих от мигрени, во время приступов мигрени были обнаружены изменения в уровнях цереброспинальной GABA. Полагают, что дивальпрекс натрия увеличивает содержание в мозгу гамма-аминомасляной кислоты (GABA), снижая ее разложение. Повышенная активность GABA систем может влиять на возникновение мигрени прямо или косвенно по целому ряду механизмов. Возможные косвенные механизмы включают снижение скорости серотонергических нейронов в дорсальной линии ядрышка.

Термин "вальпроат" означает вальпроевую кислоту и ее производные, такие как вальпромид, вальпроат пивоксил, вальпроат магния, дивальпрекс натрия, вальпроат натрия и полувальпроат натрия.

Известно, что вальпроат повышает эндогенные уровни энкефалина в мозгу, что играет решающую роль в процессе обезболивания.

Было установлено, что вальпроат снижает уровень возбудительных аминокислот в мозгу, затрагивая CSD Mathew NT and col., "Migraine prophylaxis with divalproex" Arch. Neurol. (1995); vol.52: p.281-286 - Welch KM, D'Andrea G., Tepley N., Barkley G., Ramadan N.M., "The concept of migraine as a state of central neuronal hyperexcitability" Neurol. Clin. (1990); vol.8: p.817-828).

Наиболее часто встречающиеся побочные эффекты, связанные с вальпроатом, представляют собой тошноту, рвоту, несварение, астению, сонливость, головокружение, тремор, потерю веса и алопецию. Поскольку большинство побочных эффектов связано с дозировкой, пациент и больной должны стремиться к самой низкой из возможных терапевтических доз.

Известно, что вальпроат связан с риском развития печеночной недостаточности, особенно у маленьких детей. Необходимо осуществлять исследование работы печени с регулярными интервалами. Сообщалось, что вальпроат имеет тератогенное действие, например, вызывая повреждение нервной трубки.

Тем не менее, предотвращение приступа мигрени предпочтительнее, чем ослабление приступа, так как профилактическое лечение легче переносится больными. Это особенно справедливо в более тяжелых случаях, когда пациенты страдают от частых приступов. Конечной целью в любом случае является полное избавление от приступов при продолжительном профилактическом лечении. До сих пор эта цепь достигалась только при применении вальпроата, но ценой проявления побочных эффектов, упомянутых выше, при наличии противопоказаний (например, взаимодействие с другими лекарствами, возможный порок развития).

Существует действительная необходимость в создании альтернативных средств и получении соединения с терапевтическим действием, более походящим для лечения и особенно для профилактического лечения этой патологии.

Для демонстрации особенной пригодности леветирацетама для лечения мигрени с хорошим терапевтическим действием проводились клинические испытания по методике, известной специалистам.

Такая активность является неожиданной вследствие того, что леветирацетам не оказывает прямого действия на GABA систему (Н. Klitgaard and col., "Evidence for a unique profile of levetiracetam in rodent models of seizures and epilepsy" European Journal of Pharmacology (1998); vol.353, p.191-206). Полагали, что имеет место GABA ингибирование, но обширные in vitro исследования не показали никакого значительного вытеснения лигандов, специфического для 55 различных сайтов связывания, включая различные системы рецепторов, сайты повторного поглощения, системы вторичных мессенджеров и канальные протеины (М. Noyer and col. "The novel antiepileptic drug levetiracetam (ucb L059) appears to act via a specific binding site in CNS membranes" European Journal of Pharmacology (1995), vol.286, p.137-146). Кроме того, леветирацетам не модулирует потоки хлоридов, индуцированных мусцимолом. Наконец, отсутствие действия на содержание GABA и ферментативные активности GABA трансаминазы и глутаминовой декарбоксилазы было установлено при нейрохимическом исследовании мозга мыши (G.J.Sills and col. "Neurochemical studies with the novel anticonvulsant levetiracetam in mouse brain" European Journal of Pharmacology (1997), vol.325, p.35-40). Вальпроат является единственным лекарством против эпилепсии, которое было одобрено из-за его эффективности при профилактическом лечении головной боли при мигрени, следовательно, не было оснований ожидать, что лекарство против эпилепсии, леветирацетам, с другим, до сих пор неизвестным видом активности, будет особенно пригодно для лечения мигрени.

По этим причинам полагают, что лечение или профилактическое лечение при помощи леветирацетама будет приводить к хорошим результатам, проявляющимся в уменьшении приступов и улучшении состояния и способности работать.

Термин "биполярные расстройства" поясняется ниже.

Биполярные расстройства классифицируются как нарушения настроения в соответствии с Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 4^th edition (Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-IV TM), American Psychiatry Association, Washington, DC, 1994). Биполярные расстройства характеризуются, в общем, спонтанно возникающими повторяющимися (а именно, по меньшей мере, двумя) приступами, во время которых сверхвозбудимость, активность и настроение больного значительно изменяются, в некоторых случаях это изменение заключается в улучшении настроения, увеличении энергии и активности (мания или гипомания), а в других случаях - в ухудшении настроения и снижении энергии и активности (депрессия).

Биполярные расстройства подразделяются на четыре основных категории DSM-IV (биполярное расстройство I, биполярное расстройство II, циклотимия и другие биполярные расстройства).

Характерный признак биполярного расстройства I состоит в клиническом течении болезни, характеризующейся одним или несколькими маниакальными приступами, чередующимися с одним или несколькими приступами депрессии.

Существенный признак биполярного расстройства II состоит в клиническом течении болезни, характеризующейся одним или несколькими приступами депрессии, сопровождающимися, по меньшей мере, одним приступом гипомании. При этом приступы мании или смешанные приступы не наблюдаются.

Циклотимия характеризуется многочисленными периодами гипоманиакальных симптомов, не характерными для маниакальных приступов, и периодами симптомов депрессии, не характерных для приступов депрессии.

Другие виды биполярных расстройств могут дополнять шизофрению, бред или другие психические расстройства. Если происходит очень быстрое изменение (в течение дней) маниакальных и депрессивных симптомов (например, несколько дней ярко выраженных маниакальных симптомов с последующими несколькими днями ярко выраженных депрессивных симптомов), которое не соответствует по минимальной длительности приступу мании или приступу депрессии, диагнозом являются биполярные расстройства, не названные выше.

Под приступом мании подразумевается четко выраженный период, в течение которого наблюдается ненормально и устойчиво повышенное экспансивное или раздраженное настроение с признаками ускоренной речи и психомоторного возбуждения.

Под гипоманией подразумевают менее выраженный приступ мании, являющийся не таким серьезным.

Смешанный приступ характеризуется периодом времени (по меньшей мере одна неделя), в течение которого почти каждый день наблюдаются как маниакальные, так и основные приступы депрессии.

В течение десятилетий лечение мании и маниакальных приступов биполярных расстройств, в основном, было направлено на применение солей лития. В последние годы неполное излечение и непереносимость, обусловленные длительным применением лития (Li⁺) при лечении биполярных расстройств, привело к необходимости создания альтернативных методов лечения. Клинические испытания показывают, что во время острой фазы биполярного расстройства до 40% пациентов не поддавались лечению при помощи лития (Gustavo et al., Anticonvulsant for treatment of manic depression; Current Drug Therapy, vol.56, N 8, 1989).

Во время испытаний наблюдался ряд проблем, связанных с длительным применением лития. Так, в 25% случаев во время лечения в течение более 2 лет наблюдались хроническая интерстипиальная нефропатия, полиурия, несахарный диабет или нефрогенный несахарный диабет. Далее, использование лития часто вызывает дизартрию, дрожание, атаксию, гипотиреоз (30% субъектов в первые 2 года) и импотенцию.

Один из альтернативных методов состоит в применении антиконвульсанта, вальпроата, который, как это было установлено, обладает антиманиакальной активностью, а также стабилизирует настроение. Однако полученные результаты не являются удовлетворительными и, более того, вальпроат приводит к появлению различных побочных эффектов. Обычные побочные эффекты вальпроата относятся к желудочно-кишечному тракту, проявляясь в возникновении тошноты, рвоты, анорексии и диареи, как указано в предыдущем параграфе.

Фармакологические испытания показали, что в терапевтически активных дозах вальпроат вызывает значительную гиперактивность при введении здоровым контрольным грызунам. Профилактическое применение вальпроата, таким образом, может вызвать у больных эффект, обратный желательному, и/или вызвать легкую гиперактивность после каждого приема таблетки. Точно также во время активного лечения вальпроат способен поддерживать состояние гиперактивности после того, как маниакальная фаза закончится. Наконец, это исследование показало трудности в подборе нужной дозы лития или вальпроата субъекту. Таким образом, в случае этих двух соединений небольшая передозировка имеет тенденцию снижать активность грызунов по сравнению с контрольными грызунами.

Поэтому действительно существует необходимость создания альтернатив литию или вальпроату для того, чтобы избежать многочисленных побочных эффектов и создать соединение с более подходящим для лечения вышеописанной патологии терапевтическим действием.

Неожиданно было установлено, что леветирацетам, в добавление к его активности вызывает только небольшую гиперактивность у контрольных крыс без всяких маниакальных симптомов. Следовательно, леветирапетам будет особенно пригоден для лечения мании.

Еще одним неожиданным преимуществом леветирацетама является нормализация уровня активности контрольных субъектов в отличие от лития и вальпроата.

Таким образом, в случае вальпроата и лития слишком высокая доза этих соединений может привести к пониженной активности по сравнению с нормальным состоянием пациента, чего необходимо избегать. Следовательно, леветирапетам обладает определенными преимуществами, так как он позволяет практикующему врачу более легко подобрать дозы пациенту, не рискуя вызвать побочные эффекты, заключающиеся в пониженной активности, из-за передозировки. Кроме того, сводятся к минимуму последствия ошибочного приема таблеток.

Наконец, с учетом вводимых терапевтических доз леветирапетам также имеет преимущество, так как эти дозы гораздо меньше доз, вызывающих побочные эффекты, а такие соединения, как вальпроат или карбамазепин имеют гораздо меньший интервал безопасности (А.J. Gower et al., Eur. J. Pharmacol., 22, p.193-203 (1992) - W. Loscher and D. Honack, Eur. J. Pharmacol., 232, p.147-158 (1993) - H. Klitgaard, A. Matagne, J. Gobert, E. Wulfert, Eur. J. Pharmacol., 353, р.191-206 (1998).

Этот неожиданный спектр свойств означает, что леветирацетам представляет особый интерес для производства лекарства для лечения биполярных расстройств. Это соединение имеет предел безопасности, недостижимый ранее для подобных терапевтических средств.

Термин "хроническая боль", используемый в данной заявке, означает болезнь, отличающуюся от острой боли. Обычно определяемая как боль, которая продолжается и после окончания обычного периода выздоровления, боль также считается хронической, когда больной осознает, что боль становится неотъемлемой частью его жизни в обозримом будущем. По всей видимости, большинство синдромов хронической боли включает невропатический компонент, который обычно поддается лечению труднее, чем острая соматическая боль.

Самыми яркими примерами синдрома невропатической боли являются диабетическая периферическая невропатия и невралгия при опоясывающем лишае. Первичный синдром соматической хронической боли характерен для пациентов с ревматоидным артритом или другими ревматическими заболеваниями. С другой стороны, самый распространенный синдром хронической боли, включающий боль, связанную с полученной травмой, часто связан с системами различных органов. Основной причиной хронической боли является рак, который способен проникать в ткани различных органов и повреждать ряд систем. Следовательно, большинство посттравматических и раковых больных страдают от боли, развивающейся как по соматическому, так и по невропатическому механизмам (Н. С. Hansen, MD "Treatment of chronic Pain With Antiepileptic Drugs: A New Era" South Medical Journal - Southern Medical Association (1999), 92(7), p.642-649).

Термин "невропатическая боль" означает боль, вызванную патологическим изменением в нерве, которая сигнализирует о наличии вредного раздражителя, когда нет такого узнаваемого раздражителя, давая начало ложному ощущению боли. Другими словами, оказывается, что включилась и не может отключиться болевая система. Это может относиться к периферическим или центральным (спинальным или мозговым) патологическим нервным поражениям или дисфункции нервной системы.

Невропатическая боль может проявляться как результат таких состояний, как повреждение нерва (например, хирургическая операция, несчастный случай, ампутация), травма, задевшая конечность (с очевидным повреждением нерва или без него), болезни, поражающие нервную систему, инфаркт, связанный с нервной системой, анормальная функция нерва, спинальные и корешковые болезненные ощущения.

Под повреждением нерва подразумевают такие состояния, как фантомная боль (боль в ампутированной конечности), боль в культе (боль в месте ампутации), фантомные безболезненные ощущения в ампутированной конечности, послеоперационные боли, таламический болевой синдром (боль после инсульта). Под травмой, затронувшей конечности, подразумеваются состояния, такие как рефлекторная симптоматическая дистрофия, каузалгия. Под болезнями, поражающими нервную систему, подразумеваются такие состояния, как диабетическая невропатия, другие виды невропатии, невралгия тройничного нерва (TN), невралгия при опоясывающем лишае (PHN), множественный склероз, невропатия, связанная со СПИД, невропатия, вызванная раком (после химиотерапии) (S.Troel, М.D.Jensen "Mechanisms of Neuropathic Pain" Pain 1996-An updated review, IASP Press, Seattle (1996), p.77-86).

Хроническая и/или невропатическая боль остаются синдромами боли, которые наиболее трудно поддаются лечению, поэтому существует необходимость в создании новых активных веществ.

В течение почти тридцати лет в лекарственном лечении хронической и невропатической боли был достигнут очень небольшой прогресс, поэтому оно остается ограниченным применением антидепрессантов, нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, местных анестетиков и антиконвульсантов.

Ряд антиконвульсантов, таких как вальпроат или карбамизепин, проявляют активность при лечении этих болезненных состояний, но другие, такие как пентобарбитал, не эффективны (H.L.Fields et al., Excitability Blockers, p.93-116 - H.С.Hansen MD ""Treatment of chronic Pain With Anticpileptic Drugs: A New Era" South Medical Journal - Southern Medical Association (1999), 92(7), p.642-649).

При применении карбамазепина следует применять меры предосторожности, так как разница между терапевтической дозой и дозой, вызывающей побочные эффекты, чрезвычайно мала. Кроме того, дозировка, вызывающая эти эффекты, зависит от пациента. Таким образом, практикующий врач должен быть чрезвычайно осторожным при подборе этих доз каждому индивидуальному больному. Побочные эффекты могут включать седативный эффект, атаксию, головокружение, затуманенное зрение, а также тошноту и рвоту. Кроме того, почти у 10% пациентов наблюдается легкая лейкопения (H.L.Fields et al., Excitability Blockers, p.93-116).

Карбамазепин, который относится к антиэпилептикам, является эталоном для фармакологических исследований в области лечения хронической и невропатической боли, обладает выраженной активностью в процессе ингибирования искусственновызванной боли или гипералгизии. Однако фармакологические исследования подтвердили, что кривая доза - активность не только возвращает болевое ощущение к контрольному пороговому значению (изменение гипералгезии), но и вызывает частичную десенсибилизацию у подвергаемых лечению субъектов (изменение нормального порогового ощущения). Поэтому при терапевтических дозах наблюдается антинопицептивный эффект, и животное больше не чувствует боли, ощущаемой в нормальном состоянии. Такая десенсибилизация может быть особенно нежелательной для пациента, Таким образом, если пациент, желающий уменьшить хроническую и невропатическую боль, примет слишком большую дозу карбамазепина, он будет ощущать частичную десенсибилизацию из-за более высокого порога чувствительности, он будет гораздо менее чувствителен к любому внешнему неблагоприятному воздействию, такому как тепло, раздражение или т.п. и рискует получить травмы или ожог.

Фармакологические исследования показали, что леветирацетам ведет себя неожиданно при лечении хронической или невропатической боли. В противоположность карбамазепину это вещество нормализует кривую доза/активность до контрольного порогового значения (то есть ответ до развития диабета). Таким образом, применение леветирацетама позволяет гораздо меньше рисковать в случае передозировки.

Кроме того, при использовании терапевтических доз леветирацетам можно использовать в дозах, гораздо меньших, чем те, которые вызывают вторичные эффекты, в то время как такие соединения, как карбамазепин, имеют гораздо более узкий интервал безопасных доз. Такое неожиданное сочетание свойств означает, что применение леветирацетама имеет большое значение для приготовления лекарства для лечения хронической и/или невропатической боли.

Настоящее изобретение предусматривает введение эффективной дозы леветирацетама при лечении биполярных расстройств, мигрени и хронической или невропатической боли. Доза, требующаяся согласно данному изобретению, должна быть довольно высокой для того, чтобы привести к облегчению биполярных расстройств, мигрени и хронической или невропатической боли. Фармкомпозипии, содержащие леветирацетам, могут вводиться, например, перорально или парентерально, например, внутривенно, внутримышечно или подкожно или внутриоболочечно.

Таким образом, настоящее изобретение касается также фармацевтической композиции для лечения биполярных расстройств, мании, мигрени и хронической или невропатической боли, включающей терапевтически эффективное количество леветирацетама и фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтические композиции, используемые для перорального введения могут быть твердыми или жидкими и могут быть, например, в виде таблеток, пилюль, драже, желатиновых капсул, растворов, сиропов и т.д.

Для этой цели леветирацетам можно применять в смеси с инертным разбавителем или нетоксичным фармацевтически приемлемым носителем, например, крахмалом или лактозой. Эти фармацевтические композиции могут также содержать связующее, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая смола или желатин, дезинтегрант, такой как альгиновая кислота, смазывающий агент, такой как стеарат магния, агент, улучшающий скольжение, такой как коллоидная двуокись кремния, подсластитель, такой как сахароза или сахарин, красящие вещества или ароматизатор, такой как перечная мята или метилсалипилат. Они также включают композиции с регулируемым выделением активного ингредиента.

Фармацевтические композиции, которые могут быть использованы для парентерального введения, представляют собой фармацевтические формы, известные для этого метода введения, и могут быть в виде водных или масляных растворов или суспензий, обычно содержащихся в ампулах, шприцах, стеклянных или пластиковых флаконах или контейнерах для инфузии. Кроме активного ингредиента эти растворы или суспензии могут также содержать стерильный разбавитель, такой как вода для инъекции, физиологический раствор, масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители, антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия, хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота, буферные агенты, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и агенты для регулирования осмомолярности, такие как хлорид натрия или декстроза.

Эти фармацевтические формы получают, применяя методы, используемые в фармацевтике.

Дневная доза активного ингредиента, вводимая пациенту, находится в широком интервале и зависит от различных факторов, таких как пол пациента, возраст, вес, состояние здоровья, а также метода введения. Так, количество активного ингредиента в композиции для перорального введения составляет, по меньшей мере, 5 вес.% и может быть до 80% от веса композиции.

Клинические исследования, проведенные с участием добровольцев, показали, что леветирацетам хорошо переносится при введении единичной дозы (до 5,000 г) и повторяющихся доз (1500 мг/день в течение 14 дней). Предварительные данные, полученные при исследовании переносимости, показывают, что больные эпилепсией хорошо переносят дозы до 4000 мг/день).

Перорально вводимые композиции предпочтительно содержат 50-300 мг, более предпочтительно 250-1500 мг леветирацетама на дозу.

В композициях для парентерального введения количество леветирацетама составляет 0,5 вес.% и может быть до 33% от веса композиции. Единица дозы предпочтительных парентеральных композиций содержит 1-400 мг леветирацетама.

Дневная доза леветирацетама может меняться в широких пределах и обычно составляет 5-70 мг/кг. Однако следует иметь в виду, что в конкретных случаях в зависимости от индивидуальных особенностей врач может подобрать особые дозировки.

Леветирацетам может применяться в отдельности или в сочетании с, по меньшей мере, еще одним фармацевтически активным ингредиентом для лечения указанных патологических состояний. Не ограничивающие объем изобретения примеры таких соединений, которые можно применять в сочетании с леветирацетамом, включают антивирусные агенты, антиспастические агенты (а именно, баклофен), противорвотные агенты, агенты, стабилизирующие настроение, анальгетики (а именно, аспирин, ибупрофен, парацетамол), наркотические анальгетики, местные анестетики, ориоидные анальгетики, соли лития, антидепрессанты (а именно, миансерин, флуоксетин, тразодон), трициклические антидепрессанты (а именно, имипрамин, дезипрамин), противосудорожные средства (а именно, вальпроат, карбамазепин, фенитоин...), антипсихотические средства (а именно, рисперидон, галоперидол), нейролептики, бензодиазепины (а именно, диазепам, клоназепам), фенотиазины (а именно, хлорпромазин), блокаторы кальциевых каналов, амфетамин, кпонидин, лидокаин, мексилетин, капсайцин, каффеин, кветиапин, антагонисты серотонина, β-блокаторы, антиаритмические средства, триптаны, производные спорыньи.

В частности, было обнаружено, что леветирацетам повышает активность соединений, индуцирующих невральное ингибирование, опосредованное рецепторами GABA_A, без обострения побочных эффектов. В результате этой неожиданной фармакологической селективности пациенты, подвергающиеся монотерапии с применением этих соединений и страдающие от побочных эффектов, могут получить более эффективное лечение при комбинированном введении этих соединений с небольшим количеством леветирацетама.

Таким образом, данное изобретение также относится к тому неожиданному факту, что леветирацетам, известный как антиэпилептик, является эффективным стимулятором противосудорожных средств и противоманиакальной активности вальпроата, клоназепама, хлордиозэпоксида, фенобарбитала и их фармацевтически приемлемых солей.

Примерами соединений, индуцирующих невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, являются следующие вещества: бензодиазепины, барбитураты, стероиды и противосудорожные агенты, такие как вальпроат, виагабатрин, тиагабин или их фармацевтически приемлемые соли.

Бензодиазепины включают 1,4-бензодиазепины, такие как диазепам и клоназепам, и 1,5-бензодиазепины, такие как клобазам. Предпочтительным соединением является клоназепам.

Барбитураты включают фенобарбитал и пентобарбитал. Предпочтительным соединением является фенобарбитал.

Предпочтительные противосудорожные средства включают вальпроевую кислоту, вальпромид, вальпроат пивоксил, вальпроат натрия, полувальпроат натрия, дивальпрекс, клоназепам, фенобарбитал, вигабатрин, тиагабин.

Предпочтительными соединениями являются вальпроевая кислота, вальпромид, вальпроат пивоксил, дивальпрекс, вальпроат натрия и полувальпроат натрия, еще более предпочтительным соединением является вальпроат натрия. Для лечения эпилепсии рекомендуемая начальная доза вальпроата для взрослого в Европе составляет 600 мг/день, эту дозу увеличивают на 200 мг с интервалом в 3 дня, пока не будет достигнут контроль над припадками или же дальнейшее увеличение дозы не приведет к проявлению побочных эффектов. Обычная доза равна 1-2 г/день (20-30 мг на кг веса пациента в день) при максимальной дневной дозе 2,5 г.

Дневная доза, рекомендуемая для детей весом более 20 кг, составляет 20-30 мг/кг/день. Для детей весом менее 20 кг рекомендуется доза 20 мг/кг/день; в случае когда требуется доза более 40 мг/кг/день, следует контролировать параметры клинической химии и гематологические показатели. Для пожилых людей дозы вальпроата должны быть меньше вследствие изменений фармакокинетических параметров. Для большинства пациентов терапевтическая концентрация вальпроата в плазме составляет 40-100 мкг/мл.

Количество активных ингредиентов (леветирацетам и соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами) в соответствии с этим аспектом изобретения будет меняться в зависимости от млекопитающего, которому вводят композицию, вида подвергаемой лечению болезни, наличия других активных ингредиентов и т.д. Обычно количество соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, и количество леветирацетама для данной композиции и данной дозированной формы можно легко определить рутинными методами.

Соответственно данное изобретение касается фармацевтической композиции, содержащей леветирацетам и, по меньшей мере, одно соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами.

Фармацевтическая композиция по данному изобретению содержит терапевтически эффективное количество соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, и терапевтически эффективное количество леветирацетама, предпочтительно в отношении 2-15.

Фармацевтические композиции согласно изобретению могут вводиться перорально или парентерально, как указано выше.

Композиции, содержащие уменьшенную дозу вальпроата, также представляют интерес.

Композиции по изобретению можно использовать для лечения эпилепсии и борьбы с припадками, для лечения депрессии, биполярных расстройств, хронической или невропатической боли и для лечения мигрени и других заболеваний, контролируемых при помощи соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами. Требуемая эффективная доза зависит от состояния больного и его индивидуальных характеристик.

В фармацевтических композициях по изобретению количество леветирацетама является, по меньшей мере, достаточным для возбуждения активности соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами.

Предпочтительная композиция содержит леветирацетам в количестве, по меньшей мере, достаточном для уменьшения количества соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами при сохранении нужного терапевтического эффекта.

Другая предпочтительная композиция содержит соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, в таком количестве, которое при введении отдельно не будет терапевтически эффективным, и леветирацетам в количестве, по меньшей мере, достаточном для получения необходимого терапевтического эффекта.

Как указано ниже в примере 4, повышение активности леветирацетама означает, что обычное эффективное количество соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, может быть уменьшено в 3-15 раз при сохранении желательного терапевтического эффекта. Например, обычное количество вальпроата при лечении эпилепсии равно 1-2,5 г в день, следовательно, можно снизить ежедневное количество вальпроата до 70-180 мг, предпочтительно 70-140 мг при введении его в сочетании с достаточным количеством леветирацетама получения терапевтического эффекта.

Достаточное количество леветирацетама может быть до 2,5 раз меньше, чем обычная эффективная доза при монотерапии.

Следовательно, фармацевтическая композиция по изобретению обладает хорошей активностью и уменьшенными побочными эффектами по сравнению с соединением, индуцирующим невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, такими как вальпроат, для контролирования припадков.

Данное изобретение касается также применения фармкомпозиции для лечения эпилепсии, синдрома отмены алкоголя, тремора, биполярного расстройства, мании, обсессивно-компульсивного расстройства, состояния паники, тревоги, депрессии, мигрени, головной боли, болевых синдромов, ишемии и травм головы.

Данное изобретение касается также способа лечения людей с применением фармацевтической композиции.

Данное изобретение касается также фармацевтической композиции для применения в качестве лекарственного средства для лечения указанных болезней.

Данное изобретение относится также к применению фармацевтической композиции, содержащей леветирацетам, для лечения пациента, которому вводят, по меньшей мере, одно соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, которое, будучи введенным отдельно, не оказывается терапевтически эффективным.

Данное изобретение касается также способа приготовления лекарственного средства, предназначенного для терапевтического применения при лечении указанной болезни, заключающегося в использовании фармацевтической композиции.

Данное изобретение касается также способов лечения людей с целью облегчения болезни путем введения фармацевтической композиции.

Данное изобретение касается также способов лечения людей путем введения количества леветирацетама, по меньшей мере, достаточного для снижения количества соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, необходимого для поддержания желательного терапевтического эффекта. Данное изобретение касается также способов лечения пациентов, которым вводят, по меньшей мере, одно соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, в количестве, которое, если это соединение вводится в отдельности, не является эффективным, заключающегося во введении млекопитающему терапевтически эффективного количества леветирацетама для лечения болезни, выбранной среди эпилепсии, синдрома отмены алкоголя, тремора, биполярного расстройства, мании, обсессивно-компупьсивного расстройства, панического состояния, беспокойства, депрессии, мигрени, головной боли, болевых синдромов, ишемии и травм головы.

Данное изобретение касается также способа лечения болезни, выбранной из эпилепсии, синдрома отмены алкоголя, тремора, биполярного расстройства, мании, обсессивно-компульсивного расстройства, панического состояния, беспокойства, депрессии, мигрени, головной боли, болевых синдромов, ишемии и травм головы, заключающегося во введении млекопитающему, страдающему от такого состояния, терапевтически эффективного количества композиции, которая описана выше.

Данное изобретение касается также способов лечения пациента, которому ввели неэффективное количество, по меньшей мере, одного соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, заключающихся во введении такому млекопитающему терапевтически эффективного количества леветирацетама.

Под неэффективным количеством понимают количество активного ингредиента, которое при введении одного этого ингредиента не является терапевтически эффективным.

Данное изобретение касается также способа селективной потенциации терапевтического эффекта соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, без усиления нежелательных побочных эффектов, связанных с его применением, который включает совместное введение вальпроата в количестве, которое при введении одного вальпроата не является терапевтически эффективным, и леветирацетама в количестве, эффективном для получения желательного терапевтического эффекта.

Под совместным введением понимают одновременное, раздельное или последовательное введение.

Показано, что леветирацетам обладает способностью эффективно потенцировать вальпроат, клоназепам, хлордиазепоксид и фенобарбитал на фармакологических моделях. Потенцирующее действие леветирацетама позволяет снизить количество вальпроата или его фармацевтически приемлемых солей и соответственно уменьшить нежелательные эффекты, связанные с применением вальпроата в терапии. Таким образом, пациенты, получающие облегчение симптомов болезни ценой возникновения нежелательных эффектов при монотерапии с применением вальпроата, теперь могут получить значительное облегчение при совместном введении небольшой дозы вальпроата и леветирацетама. То же наблюдается и при лечении с применением клоназепама, хлордиазепоксида и фенобарбитала.

Потенцирующее действие на вальпроат леветирацетама оценивали на двух различных моделях эпилепсии у животных: чувствительные к звукам мыши - модель генерализованной эпилепсии, и группа крыс - модель парциальных сложных припадков со вторичной генерацией. Исследовалось также ухудшение поведения. Оказывается, что леветирацетам потенцирует защиту от припадков, достигаемую при помощи вальпроата, клоназепама, хлордиазепоксида и фенобарбитала, но не вредные последствия, связанные с применением вальпроата, клоназепама, хлордиазепоксида и фенобарбитала. Модель изучения маниакального синдрома, используемая для оценки активности лекарств, представляет собой модель животных с гиперреактивностью, индуцированной смесью дексамфетамина и хлордиазепоксида, животными служат грызуны. Эта модель была использована для оценки антиманиакальных свойств леветирацетама и вальпроата, вводимых по отдельности или в сочетании, и показала сверхаддитивное взаимодействие между двумя лекарствами.

Применение комбинированной терапии может быть связано с изменившимся ответом и/или большей вероятностью появления нежелательных эффектов и большей токсичностью вследствие модификации плазмы и содержания лекарств в мозгу, то есть изменения фармакокинетических параметров. Фармакокинетическое исследование, проведенное с вальпроатом, диазепамом и фенобарбиталом по отдельности или в сочетании с леветирацетамом, показало, что имеет место постоянное отношение содержания в мозгу/в плазме. Этот факт показывает, что синергический эффект, наблюдаемый на фармакологических моделях между вальпроатом, клоназепамом, хлордиазепоксидом и фенобарбиталом и леветирацетамом, обусловлен не фармакокинетическими факторами.

Введение фармацевтической композиции по изобретению приводит к значительному уменьшению частоты и остроты заболеваний. При помощи фармацевтической композиции по изобретению можно снизить вероятность появления нежелательных побочных эффектов по сравнению с использованием с более высокой дозой соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, при достижении того же терапевтического эффекта.

Эффективность леветирацетама при лечении мигрени, биполярных расстройств и хронической или невропатической боли иллюстрируется нижеописанными фармакологическими испытаниями (Примеры 1-3). Потенцирующее действие леветирацетама на соединения, индуцирующие невральное ингибирование, опосредованное GABA_A рецепторами, особенно на антиэпилептики, иллюстрируется примерами 4-7.

Эти примеры иллюстрируют данное изобретение, никоим образом не ограничивая его объема.

Пример 1: Фармакологические данные при лечении биполярных расстройств.

Испытание в Y-образном лабиринте.

Увеличение моторной активности является частым симптомом маниакальных расстройств, оно часто используется в качестве модели маниакального синдрома у лабораторных животных. Гиперактивность могут вызвать большое разнообразие соединений или комбинации соединений, однако не все формы гиперактивности могут быть подавлены литием. Кроме того, не все испытания активности пригодны для наблюдений за воспроизводимой гиперактивностью.

Гиперактивность грызунов в симметричном Y-образном лабиринте, вызванная введением смеси дексамфетамина и хлордиазепоксида (DEX-CDP) была изучена целым рядом исследователей с целью выявления действия лития (Сох С. et al., "Lithium attenuates "manic" activity in rats" Nature (1971), vol.232, p.336-338 - Vale A.L. and Ratcliffe F., "Effect of lithium administration on rat brain 5-hydroxyindole levels in a possible animal model of mania" Psychopharmacol. (1987), vol.91, p.352-355) и недавно действие антиэпилептика "Вальпроат" (Сао В.J. and Peng N.A., "Magnesium valproate attenuates hyperactivity induced by dexamphetamin-chlordiazepoxide mixture in rodents" Eur. J. of Pharmacol. (1993), vol.237, p.177-181). Эти два соединения были использованы в клинике для лечения биполярных расстройств, а именно острой мании (см. Gelenberg A.J. and Hopkins H.S. "Report on efficacy of treatment for bipolar disorder" Psychopharmacol. Bull. (1993), vol.29, p.447-456) и значительно снизили гиперактивность, вызванную DEX-CDP у грызунов, в Y-образном лабиринте. Эта модель признана подходящей для изучения мании у животных.

Эффективность(S)-(-)-α-этил-2-оксо-1-пирролидинацетамида при лечении мании была изучена на вышеописанной модели на крысах, гиперактивность которых была индуцирована DEX-CDP. Были также испытаны и использованы в качестве эталонов литий и вальпроат.

В качестве животных использовали крыс-самцов Sprague-Dawley (OFA, IFFA, CREDO, Belgium) весом 210-290 г. Их помещали по 8 штук в клетки из нержавеющей стали. За день до эксперимента их помещали в макролоновые клетки (по 4 в клетку размером 38×27×15 см), в которых пол был покрыт опилками. Клетки помещали в камеру для передержки животных, снабженную кондиционером, освещаемую светом в течение 600-1800 часов. Вода и пища были доступны "ad libitum".

Устройство представляло собой Y-образный лабиринт (каждое ответвление имело длину 40 см и ширину 15 см, стенки имели толщину 35 см), изготовленный из плексигласа (Plexiglass), размещенный в слабо освещенной комнате (на уровне поля менее 5 люкс), и использовалось для измерения активности крыс. Активность определяли по числу попадания в ответвления лабиринта в течение 5 минут. Видеокамера была размещена на высоте 1 м над лабиринтом и соединена с монитором, расположенным в соседней комнате, где экспериментатор подсчитывал количество попадания крыс в ответвления лабиринта.

Инъекцию различных соединений крысам осуществляли в следующих условиях. 12,5 мг/кг хлордиазепоксида и 1,18 мг/кг D-амфетамина растворяли в физиологическом растворе (0,9%) и вводили одновременно подкожно за 35 минут до эксперимента в дозе 1 мл/кг. 17 и 54 мг/кг леветирацетама растворяли в физиологическом растворе (0,9%) и вводили внутрибрюшинно за 30 минут до эксперимента (таблица 3). 50, 100 и 200 мг/кг вальпроата натрия растворяли в водном физиологическом растворе (0,9%) и вводили внутрибрюшинно за 15 минут до эксперимента (таблица 2). 2 и 4 мэкв Li^-/KT в виде хлорида лития растворяли в физиологическом растворе (0,9%) и вводили внутрибрюшинно за 215 минут до эксперимента (таблица 1). Испытуемое лекарство вводили в количестве 5 мг/кг.

Действие различных лекарств изучали в отдельности. В каждом опыте животных помещали хаотично в различные группы (n=11 или 13 на группу). Во время опыта каждую крысу помещали в центре лабиринта и оценивали се активность по числу посещений ответвлений (индекс активности).

Для получения достоверной статистической информации результаты выражали как среднее в первой и третьей квартилях. Статистическая обработка проводилась с применением метода Kruskal-Wallis для контрольных образцов и соединений per se. Этот метод использовали также для сравнения действия смеси DEX-CDP и действия соединений на гиперактивность, вызванную смесью DEX-CDP.

В случае значительной разницы подсчитывали сравнительные данные ad hoc (для данного специального случая) по методу Kruskal-Wallis с применением методики, предложенной Siegel и Castellam (Non parametric statistics. McGraw Hill, second edition (1989)).

Сравнительные данные для контрольной группы н группами, получившими смесь DEX-CDP, получали, используя методику Mann-Whitney (Non parametric statistics. McGraw Hill, second edition (1989)).

Результаты этих фармакологических исследований представлены в таблицах 1-3. Введение смеси DEX-CDP вызвало значительную гиперактивность в каждом опыте.

Хлорид лития (таблица 1) значительно снижал гиперактивность, вызванную введением DEX-CDP в зависимости от дозы. Он даже снижал активность до уровня, меньшего, чем у контрольных крыс. Хлорид лития per se приводил к незначительному снижению активности негиперактивных контрольных крыс.

Таблица 1
Лечение	Число посещений	Р/смесь	Р/контроль
Контроль	26,5(25,5-28)	0,0005**	-
Смесь	45(39-48,5)	-	0,0005**
Смесь + хлорид лития 2 мэкв/кг	31,5(27-36)	НЭ	-
Смесь + хлорид лития 4 мэкв/кг	14(10,5-17,5)	<0,001*	<0,0001**
Хлорид лития 2 мэкв/кг	25(21-26,5)	-	НЭ
Хлорид лития 4 мэкв/кг	20(16-23)	-	НЭ

Действие хлорида лития на гиперактивность, вызванную введением смеси хлордиазепоксида и D-амфетаминав Y-образном лабиринте. Результаты выражены как среднее значение с Q₁ и Q₃ в скобках.

* Множественное сравнение по Kruskal-Wallis;

** методика Mann-Whitney; НЭ - незначительный эффект.

Р возможность значительной разницы

Р/смесь - возможность значительной разницы между испытуемой группой и группой, которой вводили смесь.

Вальпроат натрия (таблица 2) значительно понижал гиперактивность в дозе 200 мг/кг. Как и в случае хлорида лития вальпроат натрия имеет тенденцию вызывать гиперактивность у крыс. Наконец, было установлено, что вальпроат натрия per se снижал гиперактивность у контрольных крыс, сильно зависящую от дозы.

Таблица 2
Лечение	Число посещений	Р/смесь	Р/контроль
Контроль	25(24-28)	<0,0001**	-
Смесь	43(34-44)	-	<0,0001*
Смесь + вальпроат натрия 50 мг/кг	38(36-41)	НЭ	-
Смесь + вальпроат натрия 100 мг/кг	39(32-41)	НЭ	-
Смесь + вальпроат натрия 200 мг/кг	20(14-26)	<0,001*	<0,06**
Вальпроат натрия 50 мг/кг	28(24-31)	-	НЭ
Вальпроат натрия 100 мг/кг	34(32-36)	-	<0,05*
Вальпроат натрия 200 мг/кг	40(28-43)	-	<0,01*

Действие вальпроата натрия на гиперактивность, вызванную смесью хлордиазепоксида и D-амфетамина в Y-образном лабиринте. Результаты выражены как среднее значение с Q₁ и Q₃ в скобках.

* Множественное сравнение по KruskaI-Wallis;

** методика Mann-Whitney; НЭ - незначительный эффект.

Р - возможность значительной разницы

Р/смесь - возможность значительной разницы между испытуемой группой и группой, которой вводили смесь.

Леветирацетам (таблица 3) значительно понижал гиперактивность, вызванную смесью DEX-CDP в дозе 54 мг/кг. Леветирацетам per se вызывал только небольшую гиперактивность в дозе 17 мг/кг.

Анализ экспериментальных данных показал неожиданную нормализацию уровня активности у контрольных крыс, когда гиперактивным крысам (DEX-CDP) вводили самую высокую дозу леветирацетама.

Таблица 3
Лечение	Число посещений	Р/смесь	Р/контроль
Контроль	25(22-29)	<0,0001**	-
Смесь	40(36-48)	-	<0,0001**
Смесь + леветирацетам 17 мг/кг	36(32-38)	НЭ	-
Смесь + леветирацетам 54 мг/кг	26(12-33)	<0,001*	НЭ
Леветирацетам 17 мг/кг	31(29-33)	-	<0,05*
Леветирацетам 54 мг/кг	28(26-28)	-	НЭ

Действие леветирацетама на гиперактивность, вызванную смесью хлордиазепоксида и D-амфетамина, в Y-образном лабиринте. Результаты выражены как среднее значение с Q₁ и Q₃ в скобках.

* Множественное сравнение по Kruskal-Wallis;

** методика Mann-Whitney; НЭ - незначительный эффект.

Р - возможность значительной разницы

Р/смесь - возможность значительной разницы между испытуемой группой и группой, которой вводили смесь.

В совокупности эти результаты позволяют сделать вывод, что леветирацетам имеет неожиданную активность при лечении биполярных расстройств.

Пример 2: Фармакологические данные, полученные при лечении хронической или невропатической боли.

Для изучения активности леветирацетама в отношении хронической или невропатической боли заявитель провел ряд экспериментов, основанных на методике: " A method for measurement for analgesic activity on inflamed tissue; Arch. Int. Pharmacodyn., 1957, CXI, №4, p.409-419". По этой методике можно определить способность леветирацетама к коррекции гипералгезии, вторичной по отношению к индукции невропатической проблемы метаболитического происхождения у грызуна. Это исследование осуществляли на крысах, у которых искусственно был вызван диабет путем инъекции стрептозотоцина. Вызванная при этом невропатия дала возможность измерить коррекцию гипералгезии, вызванную применением леветирацетама.

Животными служили крысы-самцы Sprague-Dawley (Charles River, France) весом 250-280 г, у которых был вызван диабет через неделю после введения лекарства. Самцы Sprague-Dawley (200-220 г) получали одну внутрибрюшинную инъекцию стрептозопина (75 мг/кг, i.p.) (Zanosar®, Upjohn, France), растворенного в дистиллированной воде. Гипергликемия появилась через неделю после индукции, что подтверждалось определением количества глюкозы в крови (каудальная пункция) с применением реактивной полоски. Dextrostix (Ames) и колориметра (Ames Division, Miles Laboratoires, France). Животные с показателем более 14 мМ считались больными диабетом. Отбирались только животные с 15%-ным снижением порогового значения.

Эта модель была использована согласно COURTEDC et al., "Stpentozocin-induced diabetic rats. Behavioural evidence for a model of chronic pain" Pain(1993), vol.53,p.81-88. Исследование осуществляли с применением следующих соединений:

- леветирацетама (Laboratories UCB), растворенного в дистиллированной воде,

- карбамазепина (Sigma), растворенного в гидроксипропилметилцеллюлозе.

Как упоминалось выше, опыты, описанные ниже, осуществляли для стимулирования реакции животного на механический ноцицептивный стимул для задней лапы. Применяли повышенное давление, используя датчик аналгезии (Ugo Basile, type 7200), до появления писка, который считали болевым порогом, выраженным в граммах.

Методика эксперимента и измеряемые параметры были следующими. После определения базового порогового значения животные получали препараты (носитель, леветирапетам, 17, 54, 95,2 и 120 мг/кг, карбамазепин, 10 и 30 мг/кг, вводимые внутрибрюшинно (i.p.) с применением метода равных блоков, чтобы избежать хронобиологического влияния. Последствия лечения определяли в течение одного и того же промежутка времени. Пороговые значения реакции измеряли через 15, 30, 45, 60, 90 и 120 мин после введения лекарства. Все опыты осуществляли вслепую на 8 различных животных.

Таблица А Методы лечения.
Группа	Метод	Число обработанных крыс	Соединение (мг/кг)	Доза	Метод введения	Объем
1	Randall	56	Леветирацетам	17; 54; 95,2; 120	i.p.	2 мл/кг
	и
	Selitto	56	Карбамазепин	10; 30
			Наполнитель
No = число i.p. = внутрибрюшинно.

Результаты выражают в виде средних величин ± стандартная средняя ошибка (S.E.M.).

Доза, которая может преодолеть 50% гипералгезии, вызванной диабетом, определялась как "антигипералгезивная доза 50".

Статистическое сравнение осуществляли при помощи анализа двумя путями вариантности с последующим множественным сравнением по Fisher's PLSD с целью анализа временного эффекта.

Под нормальным животным заявитель подразумевает животное без вызванного диабета.

Изучение данных, полученных заявителем, показало следующее.

Появление диабета сопровождалось механической гипералгезией, наблюдавшейся у всех животных, что подтверждалось значительным снижением порога вокализации от 309,4 ± 15,2 г до 152,8 ± 8 г. Инъекция носителя изменяет пороги вокализации незначительно (таблица В).

В процессе этого исследования (таблица В) леветирацетам с дозой 120 мг/кг вызывал полную коррекцию гипералгезии, проявляющуюся в статистически значительном повышении пороговых значений вокализации максимально через 15 минут после инъекции и сохраняющуюся до 60 минут после инъекции. Это повышение пороговых значений, наблюдающееся и в случае 3 других доз, было также значительным в течение промежутка времени от 15 минут после инъекции до 45 минут для доз 95,2 и 54 мг/кг и 30 минут для дозы 17 мг/кг. Антигипералгезивная эффективная доза 50 составляла 35,1±1,8 мг/кг.

Карбамазепин, использовавшийся для контрольных опытов, вызывал полное изменение диабетической гипералгезии в случае двух доз (таблица В). Он проявлял антигипералгезивную активность через 15 минут после инъекции дозы 50 мг/кг, это действие сохранялось до 90 минут.

Доза 10 мг/кг вызывала полное изменение гипералгезии на 30-й минуте после инъекции, это действие сохранялось в течение 60 минут.

Эти данные также подтверждают, что активная доза карбамазепина, равная 30 мг/кг, изменяла пороговые значения до уровня, значительно превышающего уровень у нормальных животных (а именно, ответ до появления диабета), что может быть вредным в отношении переносимых болевых ощущений.

Следует отметить, что при дозе 30 мг/кг карбамазепин вызывал с замедленным эффектом (через 30 минут после инъекции) уменьшение спонтанной моторной активности (которую количественно не определяли), тем не менее, можно предположить, что при введении указанной дозы карбамазепин вызывает побочные эффекты, такие как сонливость, акинезию или атаксию.

В совокупности эти данные позволяют сделать вывод, что леветирацетам неожиданно является потенциальным лекарством для лечения и/или профилактики хронической или невропатической боли.

Пример 3. Фармакологические данные, полученные при лечении мигрени.

Для того чтобы показать эффективность и безопасность таблеток леветирацетама, вводимых перорально, для лечения мигрени проводили следующие клинические испытания.

Основной целью этого терапевтического исследования является оценка эффективности и безопасности леветирацетама, вводимого в дозе 750 мг дважды в день, для предотвращения возникновения мигрени с аурой или без нее, как это определено Headache Society (IHS) "Classification and diagnostic criteria for headache disorders, cranial neuralgias and facial pain"; Cephalalgia (1988), №8 (Suppl. 7), p.19-28.

Это исследование, проводимое в течение 18 недель, осуществляется с использованием мультицентра по типу работы с параллельными группами со случайным подбором животных, получающих, в том числе, плацебо. Исследование включало 4-недельный базовый период с введением "single-blind" ("одного слепого") плацебо, 12-недельный оценочный период с введением "double-blind" ("двойного слепого") лекарства и период после лечения, когда после последней дозы исследуемого лекарства больные проходят врачебный осмотр. Посещение врачей проводили в течение 4-х недель с перерывом ±1 неделя. Это исследование рандомизирует субъектов, испытывавших 3-8 приступов мигрени в течение 4-х недель во время базового периода с аурой или без ауры, как это определено IHS. Каждый рандомизированный субъект должен был испытывать приступы мигрени в течение более чем 1 года до испытаний и должен был иметь историю болезни с описанием болезни, по меньшей мере, в течение 3 месяцев. Это исследование охватывало 80 субъектов в 8 центрах.

Леветирацетам исследовали более длительное время (примерно 4 месяца) для того, чтобы достичь профилактического (превентивного) эффекта и/или супрессивного (подавляющего) эффектов лекарства. Пациентами являлись хронические больные, страдающие мигренью с диагностическими критериями, установленными IHS. Основной параметр эффективности профилактического лечения измеряли по снижению частоты приступов при сравнении 3-х месячного оценочного периода (лечение или леветирацетамом, или плацебо) с 4-х месячным базовым периодом (пациенты страдали 3-8 приступов в месяц). Дополнительные критерии эффективности включают частоту ответа (число пациентов в каждой группе с уменьшением частоты приступов на 50% или более), число дней без приступов мигрени и сила приступов мигрени в течение дня (MIDAS scale и Migrain Specific Quality of Life Questionnaire).

Пример 4: Взаимодействие леветирацетама и вальпроата в процессе предотвращения аутогенно вызванных клонических судорог и оценка вредных последствий при помощи вращающегося стержня.

Цель этого исследования состояла в оценке действия леветирацетама на противосудорожную активность вальпроата у чувствительных к звуку мышей, с использованием модели генетически модифицированных животных с рефлекторными приступами. В этой модели генерализованной эпилепсии припадки могут быть спровоцированы без электрического или химического стимулирования, а типы припадков, по меньшей мере частично, похожи по своему клиническому проявлению на припадки у людей (Loscher W., Schmidt D., Epilepsy Res. (1988), 2, 145-181; Buchhalter J. R., Epilepsia (1993), 34, S31-S41).

Самцы мышей, генетически чувствительных к звуку (15-29 г; N = 10), DBA линия, первоначально созданная Dr Lchmann в Лаборатории акустической физиологии (Париж), выращиваемые в UCB Pharma Sector с 1978, были подвергнуты индуцированию аудиогенных припадков, с одной стороны, и испытанию на вращающемся стержне (rotarod test), с другой стороны. Схема эксперимента состояла из одной группы, получающей носитель, второй группы, получающей только леветирацетам в дозе 5,5 мг/кг, и остальных групп, получающих различные дозы только вальпроата или его комбинации с леветирацетамом. Проводились также испытания только леветирацетама. Леветирацетам и вальпроат с объемной дозой 10 мг/кг веса вводились внутрибрюшинно за 60 и 30 минут соответственно до индуцирования аудиогенных припадков или изучения поведения на вращающемся стержне. Леветирацетам и вальпроат натрия растворяли каждый в 0,9%-ном физиологическом растворе с получением растворов с рН 6,4 и 6,2 соответственно.

Для индуцирования аудиогенных припадков мышей помещали в клетки по одному животному в клетку и затем в камеру, где можно регулировать звук. Через 30 секунд пребывания в камере включали на 30 секунд через громкоговорители акустический раздражитель (90 дБ, 10-20 кГц). В течение этого промежутка времени за мышами вели наблюдение, наблюдались три фазы припадков, а именно, хаотичный бег, клонические и тонические судороги. Подсчитывали количество мышей, у которых не наблюдались клонические судороги и эти данные использовались для определения противосудорожной активности.

Для испытания на вращающемся стержне мышей помещали на вращающийся стержень и животных, не способных удержаться на стержне в течение, по меньшей мере, 60 секунд, рассматривали как животных с анормальным поведением.

Ниже описаны методы подсчета и статистического анализа.

Ответ на лечение лекарственным препаратом выражали как количество животных без индуцированных судорог или с анормальным поведением на вращающемся стержне для каждой индивидуальной дозы. Когда для одного и того же соединения испытывали одинаковые дозы в независимых опытах, эти результаты оценивали по критерию Хи-квадрат (Chi-Square test) гомогенности соотношений и объединялись в случае незначительного изменения (Р >0,05).

Кривые доза - реакция для индивидуальных соединений представляли собой кривые в виде линейной регрессии в двойном логарифмическом масштабе LOGIT-LOG DOSE (дозы) с весовыми коэффициентами. Для оценки правильности построения кривой использовали критерий согласия Хи-квадрат. Когда доза леветирацетама, вводимого с вальпроатом, была сама по себе неактивной, использовали обычный LOGIT-LOG DOSE метод регрессии. Если доза леветирацетама оказывалась активной сама по себе, наблюдавшиеся соотношения для смеси корректировались путем извлечения действия леветирацетама по методу Abbott (Roberts M. and Boyce C.B.C., Methods in Microbiology (1972), Eds. Norris J.R. and Ribbons D.W. Academic Press. Vol.7A, 153-189) и по методу Bartholomew (Fleiss J.L., Statistical methods for rates and proportions. 2^nd edition. Eds. Wiley J. and Sons).

Для оценки комбинированного действия вальпроата и леветирацетама использовали две теоретические модели: аддитивную модель и независимую модель. Действие считается аддитивным, если замена части дозы одного лекарства другим в количестве, пропорциональном относительной активности лекарств, приводит к сохранению того же эффекта (Plummer J.L. and Short T.G., J. Pharmacol. Methods (1990), 23, 297-309). Независимая модель основана на различном действии двух лекарств (Chou Т.С. and Talalay P., Adv. Enz. Requl. (1984), 22, 27-55). В этих моделях возникают затруднения, когда наклоны (Hill-like коэффициенты) кривых доза - реакция различаются. Однако применяя принцип медиана-эффект, образующий теоретическую основу этих моделей, можно показать, что в ограниченных условиях, где р=0,5 (защита 50%), можно проигнорировать величину наклонов. Теоретические модели можно выразить следующим образом:

где V_m50 и L_m50 означают дозы вальпроата и леветирацетама, соответственно, в смеси, которая должна привести к 50%-ной защите; V₅₀ и L₅₀ означают ED₅₀ величины для вальпроата и леветирацетама соответственно, когда они испытываются в отдельности. По этим уравнениям доза вальпроата, рассматриваемая как ожидаемая величина, которая должна вводиться в сочетании с постоянной дозой леветирацетама для достижения 50%-ной защиты, может быть рассчитана по следующим уравнениям:

Эти рассчитанные дозы (ожидаемая V_m50) затем можно сравнить с наблюдавшимися дозами вальпроата, которые в комбинации с постоянной дозой леветирацетама вызывают эффект, соответствующий 50%-ной защите (наблюдавшаяся V_m50). В случае сверхаддитивного эффекта отношение ожидаемая V_m50/наблюдавшаяся V_m50 больше 1 и может рассматриваться как мера снижения дозы вальпроата в присутствии леветирацетама, необходимая для достижения 50%-ной защиты.

Использовался также альтернативный подход, "метод кривых непараллельные дозы - реакция" (Plummer J.L. and Short Т.О., J. Pharmacol. Methods (1990), 23, 297-309), который не ограничивает сравнение наблюдавшейся и предсказываемой реакций на конкретные условия, определяемые р=0,5, и учитывает различные наклоны кривых индивидуальная доза - реакция для двух соединений, которые должны комбинироваться. Соответственно ожидаемые реакции были определены для каждой испытанной смеси вальпроата с леветирацетамом и их сравнивали с наблюдавшимися реакциями, из этого сравнения можно предложить диагноз типа взаимодействия (аддитивность - сверхаддитивность - антагонизм) для различных уровней действия и доз. В случае достаточно большого числа испытанных комбинаций доз использовали приблизительный статистический метод для того, чтобы оценить значение результатов, основанный на соотношениях компонентов смесей, которые приводили к последовательным направленным расхождениям между наблюдавшимися и ожидаемыми реакциями: (двухсторонний биномный метод, рассматривающий случайные положительные и отрицательные разницы между наблюдавшимися и ожидаемыми результатами как нулевую гипотезу).

Изучения аудиогенных припадков привело к следующим результатам. Определенные по линеаризованной LOGIT - LOG DOSE регрессии параметры представлены в таблице хх1.

Таблица хх1.
	Вальпроат	Леветирацетам
ED50 (мг/кг)	122	10
Наклон	4,29	2,29

Из отношения доза - реакция, скорректированного по результатам одного леветирацетама, было установлено, что доза 5,5 г мг/кг леветирацетама обладает сама по себе значительной активностью: 20% животных были защищены этой дозой. Эта величина была принята во внимание для корректировки наблюдавшегося количества защищенных смесями животных, как указано выше. На основании полученной скорректированной кривой была определена доза вальпроата, которая в сочетании с 5,5 мг леветирацетама способна обеспечить защиту от аудиогенно-вызванных клонических судорог у 50% животных: наблюдавшаяся V_m50=3,9 мг/кг. Результаты, полученные на аддитивной и независимой теоретических моделях взаимодействия, представлены в таблице хх2 и могут интерпретироваться как сверхаддитивное взаимодействие. В присутствии леветирацетама достигали снижения дозы вальпроата, необходимой для защиты 50% животных против аудиогенно-вызванных клонических судорог в 9-14 раз. Этот результат можно интерпретировать как сверхаддитивное взаимодействие.

Таблица хх2.
	Ожидаемая	Наблюдавшаяся	Vm50ожидаем
	Vm50	Vm50	Vm50 наблюдаем.
Аддитивная модель	54,9	3,9	14,1
Независима модель	35,4	3,9	9,1

Ухудшение поведения в процессе теста на вращающемся стержне:

- Параметры, рассчитанные по линеаризованной регрессии LOGIT - LOG DOSE (дозы) представлены в таблице хх3.

Таблица хх3
	Вальпроат	Леветирацетам
ED50 (мг/кг)	178,5	360,7
Наклон	2,21	0,77

По отношению доза - реакция, скорректированному по результатам для одного леветирацетама, было установлено, что доза 5,5 мг/кг леветирацетама сама по себе имеет небольшую активность: 4% животных характеризовались ухудшенным поведением при осуществлении опыта на вращающемся стержне. Эта величина принималась во внимание при построении кривой, относящейся к реакции на вальпроат, вводимой в разных дозах в сочетании с леветирацетамом в виде кривой LOGIT - LOG DOSE (дозы). По этой скорректированной кривой определяли дозу вальпроата, вводимую в комбинации с 5,5 мг/кг леветирацетама, способную приводить к ухудшению поведения 50% животных при испытании на вращающемся стержне, эта доза V_m50=127,5 мг/кг. Ожидаемые величины V_m50 рассчитывались в соответствии с аддитивной и независимой теоретическими моделями и сравнивались с соответствующими наблюдавшимися дозами вальпроата (таблица хх4). Небольшое уменьшение дозы вальпроата, необходимой для ухудшения поведения на вращающемся стержне у 50% животных, наблюдалось в присутствии леветирацетама, что позволяет предположить о наличии умеренного сверхаддитивного взаимодействия.

Таблица хх4.
	Ожидаемая	Наблюдаемая	Vm50ожидаем
	Vm50	Vm50	Vm50 наблюдаем.
Аддитивная модель	175,8	127,5	1,38
Независимая модель	173,1	127,5	1,36

Можно сделать следующие выводы:

Эти опыты показали, что имеет место неожиданное сверхаддитивное взаимодействие в отношении защиты чувствительных к звуку мышей от аудиогенных клонических судорог при комбинированном введении вальпроата и леветирацетама. Незначительное сверхаддитивное взаимодействие при изучении поведения на вращающемся стержне можно исключить, но это взаимодействие является более дискретным, что показывает отношение ожидаемая V_m50/наблюдавшаяся V_m50, представленное в следующей таблице (таблица хх5).

Таблица хх5.
		Изучение аудиогенных судорог	Изучение поведения на вращающемся стержне
Vm50 ожидаем.	аддит. модель	14,1	1,4
Vm50 наблюдаем
Vm50 ожидаем.	независ. модель	9,1	1,4
Vm50 наблюдаем.

Терапевтическое количество вальпроата, вводимого чувствительным к звуку мышам, является небольшим благодаря минимальному разделению доз, защищающих от вызванных воздействием звука клонических судорог (ED₅₀=122 мг/кг) и ухудшения поведения при испытании на вращающемся стержне (TD₅₀=178 мг/кг). Однако сверхаддитивное взаимодействие, проявляющееся при защитном эффекте от клонических судорог, и незначительное взаимодействие, наблюдающееся при проведении эксперимента на вращающемся стержне, обеспечивают защиту от судорог при комбинированном введении вальпроата и леветирапетама, при этом преимущество такого введения заключается в том, что доза вальпроата и ухудшение поведения на вращающемся стержне могут быть значительно уменьшены (таблица хх6).

Таблица хх6.
Лечение, обеспечивающее у 50% животных защиту от аудиогенно вызванных судорог	Ухудшение поведения при испытании на вращающемся стержне
Вальпроат (122 мг/кг) + физиологический раствор	30%
Вальпроат (3,9 мг/кг) + леветирапетам (< 5,5 мг/кг)	0,1%

Подобные эксперименты проводили для того, чтобы оценить взаимодействие между леветирацетамом и другими GABA агентами, а именно, клоназепамом, хлордиазепоксидом и фенобарбиталом.

Леветирацетам усиливал противосудорожную активность, проявляемую кпоназепамом, хлордиазепоксидом и фенобарбиталом, у чувствительных к воздействию звука мышей.

Доза, необходимая для защиты 50% животных от аудиогенно-вызванных клонических судорог, значительно снижалась при введении 5,5 мг/кг леветирапетама с клоназепамом (фактор снижения 4,5-7,0), хлордиазепоксидом (фактор снижения 3,7-5,8) и фенобарбиталом (фактор снижения 3,5-5,5). Это сверхадпитивное взаимодействие не было связано с увеличением возможных вредных эффектов. По сравнению с вальпроатом ухудшение поведения при испытании на вращающемся стержне, вызванное клоназепамом, хлордиазепоксидом и фенобарбиталом, не изменялось при комбинированном лечении с введением 5,5 мг/кг леветирацетама.

Пример 5: Взаимодействие между леветирацетамом и вальпроатом при вторично генерализованных моторных припадках у крыс "amygdala" (с раздраженными миндалинами) и оценка вредных последствий при испытании на вращающемся стержне.

Цель этого исследования заключается в оценке фармакодинамического взаимодействия между вальпроатом и леветирапетамом в процессе предотвращения вторично генерализованных моторных припадков у крыс "amygdala". Эта модель предлагалась неоднократно для отражения сложных частичных припадков со вторичной генерализацией у людей (Loscher W. and al., Exp. Neurol. (1986), 93,211-226; McNamara J.D., Ann. of Neurol. (1984), 16 (suppl.) S72-S76).

В этой модели фокальное прижигание миндалин (amygdala) кроме электрическим током вызывает развитие судорог (последующие разряды) в миндалинах и сокращений в основном клонуса лица, наклонов головы, клонуса передних конечностей, происходят подъемы на задние лапы и судороги с вертикальной стойкой, падения, сопровождающиеся генерализованными клоничсскими припадками (Racine R.J., Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. (1972), 32,281-294).

Прижигание у самцов крыс Sprague Dawley (200-250 г) осуществляли по методу Loscher (Loscher W. and al., Exp. Neurol. (1986), 93, 211-226).

Леветирацетам и вальпроат с объемной дозой 5 мл/кг веса крысы вводили внутрибрюшинно за 60 и 30 минут соответственно до осуществления прижигания или начала наблюдения поведения крыс на вращающемся стержне. Леветирацетам (17,54 и 108 мг/кг) и вальпроат натрия (50,100,150,200 и 300 мг/кг) каждый растворяли в 0,9%-ном растворе NaCl с получением растворов с рН 5,9 и 6,3 соответственно. Контрольные крысы получали эквивалентную дозу соответствующего носителя.

При проведении экспериментов с прижиганием миндалин все животные, подвергшиеся этой процедуре (n=8), подвергались один раз воздействию раздражителя с теми же параметрами, которые использовались при прижигании, через 60 и 30 минут после внутрибрюшинного введения физиологического раствора. Через 2 дня начинали исследование действия лекарств. Действие раздражителя на поведение классифицировали по шкале Racine(Racine R.J., Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. (1972), 32, 281-294). Для каждой группы подсчитывали количество крыс, защищенных против вторично генерализованных моторных припадков (показатель 3,4 или 5), и использовали эти данные для характеристики противосудорожной активности.

Крысы с раздраженными миндалинами (n=8) подвергались также эксперименту на вращающемся стержне. Предварительно животным вводили внутрибрюшинно леветирацетам и вальпроат за 60 и 30 минут соответственно до испытаний. Только те животные, которые были неспособны удержаться на стержне после трех последовательных 1-минутных попыток, рассматривались как животные с ухудшенным поведением. Результаты анализировали, как описано в примере 1.

Результаты защиты от вторично генерализованных моторных припадков:

Параметры, рассчитанные с учетом линеаризованной LOGIT - LOG DOSE (дозы) регрессии приведены в таблице хх7.

Таблица хх7.
	Вальпроат	Леветирапетам
ED50 (мг/кг)	197	307
Наклон	5,38	0,88

По результатам, полученным для отношения доза - реакция, скорректированным с учетом результатов для одного леветирацетама, было установлено, что каждая из доз сама по себе является в значительной степени активной. Рассчитанное количество животных, защищенных при помощи этих трех доз одного леветирацетама, составило 7,18 и 28,5% соответственно. Эти данные принимали во внимание при корректировке наблюдавшегося количества животных, которым вводили смеси, как указано выше. По скорректированным кривым были определены (таблица хх8) дозы вальпроата, способные обеспечить защиту против вторично генерализованных моторных припадков у 50% животных в сочетании с 17,54 и 108 мг/кг леветирацетама соответственно.

Таблица хх8.
	Наблюдавшаяся Vm50 (мг/кг)
Вальпроат + 17 мг/кг леветирацетама	68,5
Вальпроат + 54 мг/кг леветирацетама	27,5
Вальпроат + 108 мг/кг леветирацетама	26,5

Дозы вальпроата, которые обеспечивают защиту от вторично генерализованных моторных припадков у 50% животных в сочетании с постоянными дозами леветирацетама, были рассчитаны для аддитивной и независимой теоретических моделей.

Результаты этих расчетов (ожидаемая V_m50) представлены в таблице хх9, причем для сравнения указаны соответствующие дозы вальпроата, обеспечивавшие 50%-ную защиту в сочетании с леветирацетамом (наблюдавшаяся V_m50). В присутствии леветирацетама можно в 3-5 раз снизить дозу вальпроата, необходимую для защиты 50% животных, этот результат можно рассматривать как сверхаддитивный.

Таблица хх9.
	Аддативная модель	Независимая модель
	Ожидаемая	Vm50 ожидаем.	Ожидаемая	Vm50 ожидаем.
	Vm50	Vm50 наблюдаем.	Vm50	Vm50 наблюдаем.
Вальпроат + леветирацетам 17 мг/кг	186	2,7	176,4	2,6
Вальпроат + леветирацетам 54 мг/кг	162	5,9	138	5,0
Вальпроат + леветирацетам 108 мг/кг	127,8	4,8	94,6	3,5

При испытании на вращающемся стержне наблюдалось следующее.

Рассчитанные по линейной регрессии LOGIT - LOG DOSE (дозы) данные для вальпроата представлены в таблице хх10. Ни одна из вводимых трех доз леветирацетама (108, 170 и 540 мг/кг) не влияла на поведение крыс с обработанными миндалинами в этом опыте и дозы леветирапетама, используемые с сочетании с вальпроатом (108, 170 и 540 мг/кг), рассматривались как неактивные.

Таблица хх10.
	Вальпроат
ED% (мг/кг)	205
Наклон	3,64

На основании результатов испытаний с применением этих двух постоянных доз леветирацетама: 108 и 170 мг/кг были построены независимые кривые LOGIT - LOG DOSE (дозы) вальпроата регрессии. Данные, рассчитанные в результате, приведены в таблице xx11.

Таблица хх11.
	Наблюдавшаяся Vm50 (мг/кг)
Вальпроат + 108 мг/кг леветирацетама	161
Вальпроат + 170 мг/кг леветирацетама	174

На кривых доза - реакция при использовании вальпроата в сочетании с леветирацетамом наблюдался небольшой сдвиг влево. Однако последовательного изменения действия смеси в зависимости от дозы не наблюдалось, как это можно было бы предвидеть при применении лекарства, вызывающего сверхаддитивный эффект.

Сравнение величин V_m50 для вальпроата, полученных на основе этих кривых доза - реакция, подтверждает этот вывод (205, 161 и 174 мг/кг для 0, 108 и 170 мг/кг для леветирацетама в сочетании с вальпроатом).

Можно сделать следующие выводы:

Это исследование позволило обнаружить неожиданное сверхаддитивное взаимодействие сочетания вальпроата и леветирацетама в процессе защиты от вторично генерализованных моторных припадков у крыс с раздраженными миндалинами. В противоположность этому не наблюдалось значительного взаимодействия в отношении нежелательных эффектов при испытании на вращающемся стержне. Хотя этого следовало ожидать, так как леветирацетам в указанных дозах был сам по себе неактивным при проведении этого опыта.

Терапевтическое отношение вальпроата для крыс с раздраженными миндалинами ограничено почти идентичными дозами, которые приводят к защите от вторично генерализованных моторных припадков (ED₅₀=197 мг/кг) и ухудшению поведения в опыте со вращающимся стержнем (TD₅₀=205 мг/кг). Однако сверхаддитивное взаимодействие при защите от вторично генерализованных моторных припадков и отсутствие значительного взаимодействия при испытании на вращающемся стержне позволяет осуществлять постоянный контроль за припадками после совместного введения вальпроата и леветирацетама, при этом преимущество заключается в том, что дозу вальпроата и ухудшение, полученное при проведении опыта на вращающемся стержне, можно значительно снизить (таблица хх12).

Таблица хх12.
Лечение, позволяющее защитить 50% крыс с раздраженными миндалинами от вторично генерализованных моторных припадков.	Ухудшение поведения в опыте на вращающемся стержне при том же лечении.
Вальпроат (197 мг/кг) + физиологический раствор	46%
Вальпроат (68,5 мг/кг) + леветирацетам (17 мг/кг)	2%
Вальпроат (27,5 мг/кг) + леветирацетам (54 мг/кг)	<0,1%
Вальпроат (27 мг/кг) + леветирацетам (108 мг/кг)	<0,1%

С другой стороны, сравнение кривой активности одного леветирацетама или его сочетания с вальпроатом позволяет сделать вывод, что применение комбинации двух лекарств представляет интерес, даже если применяются высокие дозы леветирацетама. Кривая доза - реакция для леветирацетама имеет очень небольшой наклон, что означает, что от конвульсий можно защитить 100% животных, но с применением очень высоких доз леветирацетама. Добавление небольшого количества вальпроата позволяет обеспечить защиту 100% животных при применении более приемлемых доз леветирацетама.

Пример 6. Ослабление гиперрактивности, вызванной смесью дексамфетамин - хлордиазепоксид у крыс.

Цель данного эксперимента состояла в изучении действия леветирацетама, вводимого в отдельности или в сочетании с вальпроатом, на гиперактивность, вызванную у крыс при введении смеси дексамфетамина - хлордиазепоксида (DEX-CDP) и оцениваемую в Y-образном лабиринте, этот опыт используется в качестве модели для изучения маниакальных состояний. Повышенная моторная активность является обычно симптомом маниакального состояния и, следовательно, часто используется как модель для изучения на животных в лаборатории. Известно, что для этой модели изучения мании являются активными литий, лекарство, одобренное FDA (Food and Drug Administration) для профилактики и лечения биполярных расстройств и маниакальных состояний, и вальпроат, показанный для лечения приступов мании, связанных с биполярными расстройствами (Vale A.L. and Ratcliffe F., Psychopharmacol. (1987), 91, 352-355; Сао В.J. and Peng N.A., Eur. J. Pharmacol. (1993), 237, 177-181).

Гиперактивность у самцов крыс Sprague-Dawley весом 210-290 г (n=13 или 15 на группу) индуцировали смесью дексамфетамина с хлордиазепоксидом, как описано Vale А.L. (Vale A.L. and Ratcliffe F., Psychopharmacol. (1987), 91, 352-355).

Хлордиазепоксид (12,5 мг/кг) и D-амфетамина сульфат (1,18 мг/кг) растворяли в физиологическом растворе (0,9%) и вводили совместно подкожно за 35 минут до испытания в дозе 1 мл/кг. Леветирацетам (17 мг/кг) растворяли в физиологическом растворе (0,9%) и вводили внутрибрюшинно за 30 минут до испытания. Вальпроат натрия (150 мг/кг) растворяли в физиологическом растворе (0,9%) и вводили внутрибрюшинно за 15 минут до испытания. Испытуемые лекарства вводили в дозе 5 мл/кг.

Каждую крысу помещали в центр Y-образного лабиринта (каждое ответвление имеет длину 40 см и ширину 15 см, толщина стенок составляет 35 см), изготовленного из графитизированного плексигласа. Индекс активности выражали как число посещений ответвлений лабиринта.

Результаты выражали как среднее в первой и третьей квартилях. Полные статистические данные были получены с использованием теста Kruskal Wallis для определения действия соединений per se, с одной стороны, и действия смеси соединений, индуцирующей гиперактивность, с другой стороны. В случае значительной величины множественные post hoc ("после этого") сравнения по методу Kruskal Wallis обрабатывали в компьютере по методу, предложенному Siegel и Castellan (Siegel S. и Castellan N.J., Non parametric Statistics (1989), Mac Graw Hill, Second Edition). Сравнение между контрольной группой и группой, получившей смесь DEX-CDP, проводили по методу Mann-Whitney.

Возможное взаимодействие между леветирацетамом и вальпроатом при изучении индуцированной смесью DEX-CDP гиперактивности оценивали путем сочетания неактивных доз леветирацетама (17 мг/кг) и вальпроата натрия (150 мг/кг) (таблица хах1). Комбинация 17 мг/кг леветирацетама и 150 мг/кг вальпроата приводила к появлению значительного эффекта против гиперактивности, вызванной смесью DEX-CDP. Действие этой комбинации было статистически значительным (р<0,05), в то время как действие одного леветирацетама (17 мг/кг) и одного вальпроата (150 мг/кг) не отличались от действия только смеси на группу животных. Животные, которым вводили комбинацию леветирацетама и вальпроата, не отличались по поведению от контрольных животных, которым не вводили смесь.

Таблица xax1.

Действие леветирацетама и вальпроата на гиперактивностъ, индуцированную смесью хлордиазепоксида с D-амфетамином, в Y-образном лабиринте.

Результаты выражены как среднее в Q1 и Q3 в скобках;

* Множественное сравнение по методу Kruskal Wallis;

** Метод Mann-Whitney;

NS - незначительный эффект;

Р - возможность значительной разницы;

Р/смесь: возможность/смесь DEX-CDP (возможность значительной разницы между испытанной группой и смесью).

Пример 7. Уровни в плазме и в головном мозгу - взаимодействие между леветирацетамом и вальпроатом в процессе предотвращения аудиогенного приступа у мышей.

Цель этого фармакологического исследования состоит в изучении возможного взаимодействия между леветирацетамом и вальпроатом.

Самцы генетически чувствительныхквоздействию звука мышей (17-30 г; N=10), линия DBA, первоначально выведенных Dr. Lehmann в Лаборатории акустической физиологии (Париж) и выращиваемых в UCB Pharma с 1978 г, были подвергнуты воздействию, индуцирующему аудиогенные приступы. Леветирацетам (5,4 мг/кг) и вальпроат натрия (166,2 мг/кг) вводили перорально, по отдельности или в сочетании, за 60 минут до индукции аудиогенных приступов. Для изучения аудиогенного приступа мышей помещали в клетки, по одной мыши в клетку, в камеру, находящуюся под воздействием звука. Через 30 секунд через громкоговорители воздействовали акустическим стимулятором (90 дБ, 10-20 кГц) в течение 30 секунд. В течение этого интервала за мышами вели наблюдение и фиксировали три фазы приступа, а именно, хаотический бег, клонические и тонические судороги.

У всех животных сразу же после приступа (через 1 час после введения лекарств) отбирали в микропробирки, обработанные гепарином, кровь методом кардиопункции под легкой анестезией при помощи двуокиси углерода. Образцы подвергали центрифугированию со скоростью 12000 об/мин в течение 5 минут, отделившуюся плазму переносили в микропробирки из полипропилена и хранили в замороженном виде при -20°С. Половину этих образцов использовали для определения концентрации леветирацетама, другую половину - для определения концентрации вальпроата. Содержание леветирацетама в плазме и в мозгу определяли метолом газовой хроматографии с определением массы. В случае вальпроата натрия использовали метод иммуноанализа с применением флуоресцентной поляризации.

Таблица хх13.
	Метод	Содержание
	обнаружения	плазма (мкг/кг)	мозг (мкг/кг)
Леветирапетам	ГХ-МС	0,02	0,4
Вальпроат	ИАФП	43,2	43,2

Для концентраций вальпроата и леветирацетама в плазме и мозгу и отношения содержания мозг/плазма рассчитывали среднее значение плюс стандартное отклонение. Статистический анализ проводили, используя статистическую программу STATGRAPHICS (версия 5.1). статистическую разницу между контрольными группами (леветирацетам или вальпроат натрия по отдельности) и испытуемой группой оценивали, используя Student's t-тест. Нормальность распределения и гомоскедастичность проверяли заранее, используя параметрический метод. Если он был неприменим, использовали U-метод Mann-Whitney. Концентрации леветирацетама в плазме в суб-опытах составляли примерно 4,3 мкг/мл. Концентрации при введении одного леветирацетама или его комбинации с вальпроатом не отмечались. Концентрация в мозгу составляла примерно 50% от величины концентрации в плазме. Отношение содержание в мозгу/содержание в плазме не менялось при введении комбинации с вальпроатом, это показало, что профиль распределения (то есть проникновение в мозг леветирацетама) не менялось в присутствии вальпроата. При введении комбинации вальпроата с леветирацетамом (таблица хх14) было получено 33%-ное снижение концентрации в плазме (статистически значительная величина). Однако соотношение содержание вальпроата в мозгу/содержание вальпроата в плазме не менялось. Это означает, что проникновение вальпроата не меняется при совместном введении с леветирацетамом.

Похожие тесты осуществляли для оценки возможного фармакокинетического взаимодействия между леветирацетамом и другими GABA агентами, а именно, диазепамом и фенобарбиталом.

Концентрации в плазме не менялись в зависимости от того, вводили ли один леветирацетам или его комбинацию с фенобарбиталом. При введении комбинации леветирацетама с диазепамом наблюдалось 22%-ное увеличение концентрации в плазме. Однако в случае фенобарбитала и вальпроата отношение содержания леветирацетама в мозгу/содержание леветирацетама в плазме не менялось, как и в случае комбинации с диазепамом. Это показывает, что профиль распределения леветирапетама не менялся в присутствии этих соединений. Более того, концентрация в плазме и отношение содержание в мозгу/содержание в плазме диазепама и фенобарбитала не менялись в зависимости от того, вводились ли эти лекарства в отдельности или в сочетании с леветирацетамом, это свидетельствует о том, что профиль распределения этих соединений не менялся в присутствии леветирапетама.

1. Применение леветирацетама для изготовления лекарственного средства для лечения биполярных расстройств, мании, мигрени и хронической или невропатической боли.

2. Фармацевтическая композиция для лечения биполярных расстройств, мании, мигрени и хронической или невропатической боли, содержащая терапевтически эффективное количество леветирацетама и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Фармацевтическая композиция для лечения эпилепсии, синдрома отмены алкоголя, тремора, биполярного расстройства, мании, обсессивно-компульсивного расстройства, панического состояния, беспокойства, депрессии, мигрени, головной боли, боли, ишемии и травмы головы, содержащая леветирацетам и, по меньшей мере, одно соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное ГАМК типа А рецепторами.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное ГАМК типа А рецепторами, выбрано из бензодиазепинов, 1,4-бензодиазепинов, 1,5-бензодиазепинов, барбитуратов, стероидов, вальпроата, вигабатрина, тиагабина или их фармацевтически приемлемых солей.

5. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что соединение, индуцирующее невральное ингибирование, выбрано из вальпроевой кислоты, вальпроата, вальпромида, вальпроата пивоксила, вальпроата натрия, полувальпроата натрия, дивальпрекса, клоназепама, хлордизепоксида, диазепама, клобазама, фенобарбитала, пентобарбитала, вигабатрина, тиагабина или их фармацевтически приемлемых солей.

6. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что она содержит соединение, индуцирующее невральное ингибирование, в количестве, которое при введении одного этого соединения не является терапевтически эффективным, и леветирацетам в количестве, достаточном для достижения желательного терапевтического эффекта.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что она содержит соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное ГАМК типа А рецепторами, в количестве, в 3-15 раз меньшем, чем обычные терапевтически эффективные дозы.

8. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что она содержит соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное ГАМК типа А рецепторами, и терапевтически эффективное количество леветирацетама в отношении 2-15.

9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.3-8, отличающаяся тем, что количество леветирацемата до 2,5 раз меньше, чем обычная эффективная доза при введении одного этого соединения.

10. Способ лечения болезни, выбранной из эпилепсии, синдрома отмены алкоголя, тремора, биполярного расстройства, мании, обсессивно-компульсивного расстройства, панического состояния, беспокойства, депрессии, мигрени, головной боли, боли, ишемии и травмы головы, включающий введение пациенту, страдающему от такой болезни, терапевтически эффективного количества композиции по пп.3- 9.

11. Способ лечения эпилепсии, синдрома отмены алкоголя, тремора, биполярного расстройства, мании, обсессивно-компульсивного расстройства, панического состояния, беспокойства, депрессии, мигрени, головной боли, боли, ишемии и травмы головы, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества леветирацетама, причем перед этим пациенту вводили по меньшей мере одно соединение, индуцирующее невральное ингибирование, опосредованное ГАМК типа А рецепторами, в количестве, которое при введении одного этого соединения не является терапевтически эффективным.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что терапевтически эффективное количество соединения, индуцирующего невральное ингибирование, опосредованное ГАМК типа А рецепторами, снижают примерно в 3-15 раз по сравнению с обычными терапевтически эффективными дозами.

13. Способ по п.11, отличающийся тем, что пациенту вводят вальпроат в количестве 70-180 мг, предпочтительно 70-140 мг.

14. Способ по п.11, отличающийся тем, что количество леветирацетама до 2,5 раз меньше, чем обычная эффективная доза при введении одного этого соединения.

15. Способ селективного усиления терапевтического действия ингибитора нейрональных рецепторов ГАМК типа А, включающий совместное введение указанного ингибитора в количестве, которое при введении одного этого соединения не является терапевтически эффективным, и леветирацетама в количестве, эффективном для достижения терапевтического эффекта.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что ингибитором нейрональных рецепторов ГАМК типа А является вальпроат.

17. Способ лечения пациента ингибитором нейрональных рецепторов ГАМК типа А, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества леветирацетама, причем пациенту до этого вводили неэффективное количество указанного ингибитора.

18. Способ по п.17, отличающийся тем, что количество леветирацетама до 2,5 раза меньше обычной дозы, эффективной при введении одного этого соединения.