Производные нафтиридина, способ их получения и применение
Изобретение относится к новым производным нафтиридина формулы (I) или к их солям
где R1 означает фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, включающей циангруппу, галоген, карбоксил, аминокарбонил и др.; R2 означает (С3-С8)циклоалкил, замещенный карбоксилом или (C1-C8) алкоксикарбонилом. Соединения формулы (I) и их соли обладают ингибирующей активностью в отношении изофермента 4 фосфодиэстеразы (PDE4) и могут быть использованы для приготовления лекарственного средства для лечения обструктивного или воспалительного заболевания дыхательных путей. 5 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл.
Настоящее изобретение относится к органическим соединениям, их получению и их применению в качестве фармацевтических препаратов.
В одном из аспектов настоящее изобретение обеспечивает соединения формулы I
в свободной форме или в виде соли, где
R1 означает одновалентную ароматическую группу, содержащую до 10 атомов углерода, и
R2 означает циклоалифатическую группу, содержащую до 8 кольцевых углеродных атомов.
"(С1-С8)алкил", как используется в контексте, означает (С1-С8)алкил с прямой или разветвленной цепью, который может означать, например, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил с прямой или разветвленной цепью, гексил с прямой или разветвленной цепью, гептил с прямой или разветвленной цепью или октил с прямой или разветвленной цепью. Предпочтительно (C1-C8)алкил означает (С1-С4)алкил.
"(C1-C8)алкоксигруппа", как используется в контексте, означает (C1-С8)алкоксигруппу с прямой или разветвленной цепью, которая может означать, например, метокси-, этокси-, н-пропокси-, изопропокси-, н-бутокси-, изобутокси-, втор-бутокси-, трет-бутоксигруппу, пентоксигруппу с прямой или разветвленной цепью, гексилоксигруппу с прямой или разветвленной цепью, гептилоксигруппу с прямой или разветвленной цепью или октилоксигруппу с прямой или разветвленной цепью. Предпочтительно (C1-C8)алкоксигруппа означает (С1-С4)алкоксигруппу.
"(С1-С8)алкилтиогруппа", как используется в контексте, означает (C1-С8)алкил-тиогруппу с прямой или разветвленной цепью, которая может быть, например, метилтио-, этилтио-, н-пропилтио-, изопропилтио-, н-бутилтио-, изобутилтио-, втор-бутилтио-, трет-бутилтиогруппой, пентилтиогруппой с прямой или разветвленной цепью, гексилтиогруппой с прямой или разветвленной цепью, гептилтиогруппой с прямой или разветвленной цепью или октилтиогруппой с прямой или разветвленной цепью. Предпочтительно (C1-С8)алкилтиогруппа означает (С1-С4)алкилтиогруппу.
"(С1-С8)галоидалкил", как используется в контексте, означает (С1-С8)алкил, как он определен выше, замещенный одним или несколькими атомами галоида, предпочтительно одним, двумя или тремя атомами галоида.
"(С1-С8)галоидалкоксигруппа", как используется в контексте, означает (C1-С8)-алкоксигруппу, как определено выше, замещенную одним или несколькими атомами галоида, предпочтительно одним, двумя или тремя атомами галоида.
"(С3-С8)циклоалкил", как этот термин используется в контексте, означает циклоалкил, содержащий от 3 до 8 кольцевых углеродных атомов, например моноциклическую группу, как, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил, любая из которых может быть замещена одной или несколькими, обычно одной или двумя, (C1-С4)алкильными группами, или бициклическую группу, как, например, бициклогептил или бициклооктил. Предпочтительно "(С3-С8)циклоалкил" означает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил или циклооктил.
"Ацил", как используется в контексте, означает алкилкарбонил, например (С1-С8)алкилкарбонил, где (С1-С8)алкил может быть одной из (С1-С8)алкильных групп, упомянутых выше, необязательно замещенной одним или несколькими атомами галогена; циклоалкилкарбонил, например (С3-С8)циклоалкилкарбонил, где (С3-С8)-циклоалкил может быть, например, циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом, циклогексилом, циклогептилом или циклооктилом; 5- или 6-членный гетероциклил-карбонил, содержащий в кольце один или два гетероатома, выбранные из азота, кислорода и серы, как, например, фурилкарбонил, тетрагидрофурилкарбонил, пирролидинилкарбонил, пиперидинилкарбонил или пиридилкарбонил; арилкарбонил, например (С6-С10)арилкарбонил, как, например, бензоил; или аралкилкарбонил, например (С6-С10)арил(С1-С4)алкилкарбонил, как, например, бензилкарбонил или фенилэтилкарбонил.
"(С1-С8)алкоксикарбонил", как используется в контексте, означает (С1-С8)-алкоксигруппу, как определено выше, связанную через ее атом кислорода с карбонильной группой.
"(С1-С8)галоидалкоксикарбонил", как используется в контексте, означает (С1-С8)галоидалкоксигруппу, как определено выше, связанную через ее атом кислорода с карбонильной группой.
"(С1-С8)гидроксиалкоксикарбонил" и "(С1-С8)алкокси(С1-С8)алкоксикарбонил", как они используются в контексте, означают (С1-С8)алкоксикарбонил, как определено выше, в котором (С1-С8)алкоксигруппа замещена гидроксилом или дополнительной (С1-С8)алкоксигруппой соответственно.
"Карбокси(С1-С8)алкоксигруппа", как используется в контексте, означает (С1-С8)алкоксигруппу, как определено выше, замещенную карбоксилом.
"Галоген" или "галоид", как используется в контексте, может быть фтором, хлором, бромом или иодом, предпочтительно это фтор, хлор или бром.
R1 может означать, например, фенил, необязательно замещенный одним или несколькими электроноакцепторными заместителями, предпочтительно выбранными из циангруппы, галогена, карбоксила, аминокарбонила, (С1-С8)галоидалкила или (С1-С8)-галоидалкоксигруппы, предпочтительно одним или двумя такими заместителями, и/или необязательно замещенный (С1-С8)алкилом, гидроксилом, (С1-С8)алкоксигруппой или (С1-С8)алкилтиогруппой, или R1 может быть гетероциклической ароматической группой, содержащей до 10 кольцевых атомов и от 1 до 4 кольцевых гетероатомов, предпочтительно выбранных из азота, кислорода и серы, например гетероциклической группой, как, например, фурил, тиенил, пирролил, имидазолил, пиразолил, фуразанил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, пиридил, пиримидил, пиридазинил, триазинил, индолил, изоиндолил или бензимидазолил, такая гетероциклическая группа может быть незамещенной или замещенной, например, как минимум, одним (С1-С8)алкилом, галогеном или (С1-С8)алкоксигруппой. Предпочтительные группы R1 включают (а) фенил, замещенный циангруппой, галогеном (в особенности, фтором или хлором), карбоксилом или (С1-С4)галоид-алкоксигруппой, и необязательно (С1-С4)алкилом или (С1-С4)алкоксигруппой, (б) фенил, замещенный (С1-С4)алкоксигруппой и (в) ароматическую гетероциклическую группу с 5 или 6 атомами в кольце и одним или двумя кольцевыми гетероатомами.
R2 может быть, например, (С3-С8)циклоалкильной группой, как, например, циклопропил, метилциклопропил, циклобутил, циклопентил, метилциклопентил, циклогексил, метилциклогексил, диметилциклогексил, циклогептил, бициклогептил или циклооктил, необязательно замещенной, как минимум, одним заместителем, выбранным из (С1-С8)алкила, (С1-С8)алкоксигруппы, карбоксила, (С1-С8)алкоксикарбонила, (С1-С8)галоидалкоксикарбонила, (С1-С8)гидроксиалкоксикарбонила, (С1-С8)-алкокси(С1-С8)алкоксикарбонила, аминокарбонила, (С1-С8)алкиламинокарбонила, ди((С1-С8)алкил)аминокарбонила, гидроксила, ацила или (С1-С8)алкила, необязательно замещенного гидроксилом, циангруппой, карбоксилом или (С1-С8)алкоксикарбонилом. Предпочтительно R2 означает (С5-С7)циклоалкил, замещенный (С1-С4)алкилом, карбоксилом, (С1-С8)алкоксикарбонилом или аминокарбонилом.
Предпочтительные соединения формулы I в свободной форме или в виде соли включают такие, где
R1 означает фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из циангруппы, галогена, карбоксила или аминокарбонила, и необязательно (С1-С8)алкоксигруппой, или R1 означает фенил, замещенный (С1-С4)алкоксигруппой, гидроксилом или (C1-С4)алкилтиогруппой, и
R2 означает (С3-С8)циклоалкил, необязательно замещенный, как минимум, одним заместителем, выбранным из (С1-С4)алкила, карбоксила, (C1-С8)алкоксикарбонила или аминокарбонила.
Другие предпочтительные соединения формулы I в свободной форме или в виде соли включают такие, где
R1 означает фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из циангруппы, галогена, карбоксила или аминокарбонила, в мета-положении к указанному нафтиридиновому кольцу и необязательно (С1-С4)алкоксигруппой в орто-положении к указанному нафтиридиновому кольцу, или R1 означает фенил, замещенный (С1-С4)алкоксигруппой в мета-положении к указанному нафтиридиновому кольцу, и
R2 означает (С5-С7)циклоалкил, необязательно замещенный, как минимум, одним заместителем, выбранным из карбоксила и (C1-С4)алкоксикарбонила.
Другие предпочтительные соединения формулы I в свободной форме или в виде соли включают такие, где
R1 означает фенил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циангруппы, (С1-С8)алкила, (С1-С8)алкилтиогруппы, -SO-(С1-С8)алкила, (С1-С8)алкоксигруппы и (С1-С8)галоидалкоксигруппы, или фенил, конденсированный с гетероциклическим кольцом, содержащим от 3 до 8 кольцевых атомов, из которых до 4 атомов могут быть углеродными атомами и до 4 атомов могут быть гетероатомами; и
R2 означает (С3-С8)циклоалкил, необязательно замещенный, как минимум, одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из карбоксила и карбокси(С1-С8)алкоксигруппы.
Кроме того, предпочтительные соединения формулы I в свободной форме или в виде соли включают такие, где
R1 означает фенил, необязательно замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циангруппы, (С1-С4)алкила, (С1-С4)алкилтиогруппы, -SO-(С1-С4)алкила, (С1-С4)алкоксигруппы и (С1-С4)галоидалкоксигруппы, или фенил, конденсированный с гетероциклическим кольцом, содержащим 5 или 6 кольцевых атомов, из которых до 4 атомов могут быть углеродными атомами и до 2 атомов могут быть гетероатомами; и
R2 означает (С5-С7)циклоалкил, необязательно замещенный, как минимум, одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из карбоксила и карбокси(С1-С4)алкоксигруппы.
Соединения, представленные формулой I, способны образовывать кислотно-аддитивные соли, в частности фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли. Фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений формулы I включают соли неорганических кислот, например галоидводородных кислот, как, например, фтористоводородная кислота, хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота или иодистоводородная кислота, азотной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, и органических кислот, например алифатических монокарбоновых кислот, как, например, муравьиная кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота, пропионовая кислота и масляная кислота, алифатических гидроксикислот, как, например, молочная кислота, лимонная кислота, винная кислота или яблочная кислота, дикарбоновых кислот, как, например, малеиновая кислота или янтарная кислота, ароматических карбоновых кислот, как, например, бензойная кислота, п-хлорбензойная кислота, дифенилуксусная кислота или трифенилуксусная кислота, ароматических гидроксикислот, как, например, о-гидроксибензойная кислота, п-гидроксибензойная кислота, 1-гидроксинафталин-2-карбоновая кислота или 3-гидроксинафталин-2-карбоновая кислота, и сульфокислот, как, например, метансульфокислота или бензолсульфокислота.
Такие соли могут быть получены из соединений формулы I с помощью известных методик получения солей.
Соединения формулы I, содержащие кислотные группы, например карбоксильные, также способны образовывать соли с основаниями, в частности с фармацевтически приемлемыми основаниями, такими, которые хорошо известны в данной области; такие подходящие соли включают соли металлов, особенно соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов, как, например, натриевые, калиевые, магниевые или кальциевые соли, или соли с аммиаком или с фармацевтически приемлемыми органическими аминами или гетероциклическими основаниями, как, например, этаноламины, бензиламины или пиридин. Такие соли могут быть получены из соединений формулы I с помощью известных методик получения солей.
Соединения формулы I в свободной форме или в виде соли могут существовать в стереоизомерных формах в соответствии с расположением остатков, присоединенных к циклоалифатическому кольцу. Изобретение охватывает и отдельные такие изомеры, то есть цис- и транс-изомеры, и их смеси. Там, где R1 или R2 содержат асимметрический атом углерода, соединения формулы I в свободной форме или в виде соли существуют в виде отдельных оптически активных изомерных форм или в виде их смесей, например в виде рацемических или диастереомерных смесей. Изобретение охватывает как отдельные оптически активные R- и S-изомеры, так и их смеси, например рацемические или диастереомерные смеси.
Конкретными особенно предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, описанные далее в примерах.
Настоящее изобретение также предоставляет способ получения соединений формулы I в свободной форме или в виде соли, который включает
(i) (А) взаимодействие соединения формулы II
необязательно защищенного, где R1 является таким, как определено ранее, и L является уходящим атомом или уходящей группой, например галогеном, или алифатической, или ароматической сульфонилоксигруппой, как, например, трифторметилсульфонилоксигруппа, с соединением формулы III
необязательно защищенного, где R2 является таким, как определено ранее, и Х является уходящим атомом или уходящей группой, которая реагирует с L в формуле II с образованием прямой связи между R2 и указанным нафтиридиновым кольцом, затем, если требуется, проводят снятие защиты;
(Б) реакцию соединения формулы I, где R2 означает циклоалкил, замещенный (С1-С8)алкоксикарбонильной группой, с целью превращения алкоксикарбонильной группы в карбоксильную группу;
(В) для получения соединений формулы I, где R2 является циклоалифатической группой, замещенной карбокси(С1-С8)алкоксигруппой, гидролиз соединения формулы I, где R2 является циклоалифатической группой, замещенной (С1-С8)-алкоксикарбонил(С1-С8)алкоксигруппой; или
(Г) для получения соединений формулы I, где R1 означает фенил, замещенный -SO-(С1-С8)алкилом, окисление соединения формулы I, где R1 означает фенил, замещенный (С1-С8)алкилтиогруппой; и
(ii) выделение продукта в свободной форме или в виде соли.
Там, где L в формуле II является ароматической сульфонилоксигруппой, Х может быть, например, группой YM-, где Y означает галоид, например иод, и М означает металл, например цинк или магний.
Вариант (А) способа может быть осуществлен, применяя известные методики для реакции уходящих атомов или групп или аналогичные, например, описанные далее в примерах. Там, где Х в формуле III означает YM-, соединение YMR2 может быть образовано in situ при реакции металла М и галогенида YR2, где М является цинком, такая in situ реакция обычно проходит в присутствии дибромэтана и триалкилсилил-галогенида, предпочтительно в растворителе, например в простом эфире, как, например, тетрагидрофуран (ТТФ), подходящими являются температуры реакции от 25 до 50°С. Реакция соединения 5 формулы II с YMR2 может быть осуществлена в присутствии катализатора из переходного металла, в частности катализатора, представляющего комплекс палладий-кетон, 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцена и галогенида четвертичного аммония, как, например, тетрабутиламмонийиодид, обычно в растворителе, например в смеси простого эфира, например, ТГФ, и N-метилпирролидона (NMP), подходящие температуры реакции лежат в пределах от 25 до 50°С. Если желательно уменьшить возможность протекания реакций с участием других функциональных групп, а не тех, которые участвуют в желаемой реакции, то такие функциональные группы могут быть защищены с помощью подходящих защитных групп.
Вариант (Б) способа может быть осуществлен с применением известных методик превращения алкоксикарбонильных групп в карбоксильные группы, например, путем гидролиза водными гидроокисями щелочных металлов, или аналогично тому, как описано в дальнейшем в примерах.
Вариант (В) способа может быть осуществлен с применением известных методик гидролиза сложных эфиров в карбоновые кислоты, например с помощью трифторуксусной кислоты или аналогично тому, как описано ниже в примерах.
Вариант (Г) способа может быть осуществлен с применением известных методик окисления сульфанильных групп в сульфинильные группы, например, используя озон или перекись водорода, или аналогично тому, как описано ниже в примерах.
Соединения формулы II могут быть получены, как описано в международной заявке на патент WO98/18796 или аналогично, например, как описано ниже в примерах. Соединения формулы III могут быть получены по известным методикам, например, in situ, как описано выше и (в примерах) ниже.
Там, где ссылаются на защищаемые функциональные группы или на защитные группы, последние могут быть выбраны в соответствии с природой функциональной группы, например, как описано в "Protective Groups in Organic Synthesis", T.W.Green и P.G.M.Wuts, изд-во John Wiley & Sons Inc, второе издание, 1991, в этой ссылке также описываются методики, подходящие для замены защитных групп водородом.
Соединения формулы I в свободной форме могут быть превращены в соли и наоборот общепринятым способом. Соединения в свободной форме или в виде соли могут быть получены в виде гидратов или сольватов, содержащих растворитель, использованный для кристаллизации. Соединения формулы I могут быть выделены из реакционных смесей и очищены обычным способом. Изомеры, как, например, энантиомеры, могут быть получены общепринятым способом, например, с помощью фракционной кристаллизации или асимметрического синтеза из соответствующим образом асимметрически замещенных, например, оптически активных, исходных веществ.
Соединения формулы I в свободной форме или в виде соли полезны в качестве фармацевтических препаратов. Соответственно изобретение также предоставляет соединение формулы I в свободной форме или в виде соли для применения в качестве фармацевтического средства. Соединения формулы I в свободной форме или в виде соли, упоминаемые в дальнейшем альтернативно как "вещества по изобретению", проявляют ингибирующую активность в отношении изофермента циклической нуклеотидной фосфодиэстеразы (PDE), селективную для изофермента типа 4. Вещества по изобретению обладают противовоспалительными свойствами, свойствами против повышенной реактивности дыхательных путей и бронхорасширяющими свойствами. Они также обладают иммуноподавляющей активностью и ингибирующей секрецию TNF-α активностью. Фармакологическая активность может быть продемонстрирована с помощью следующих способов исследования, например, представленных ниже:
Анализ ингибирования изофермента PDE4
Клонирование: Конструкции по технологии GATEWAY с фланкирующей последовательностью кДНК PDE4, содержащие кодирующие участки трех изоферментов, человеческого PDE4A, человеческого PDE4B и человеческого PDE4D, генерируют с помощью полимеразной цепной реакции (PCR) и перемещают в бифункциональный вектор pDONOR-201 согласно GATEWAY. Дополнительно для облегчения очистки белка с помощью PCR вводится 6-гистидиновая метка по концевому карбоксилу каждой из конструкций. После проверки последовательностей конструкции PDE4 перемещают в экспрессионный вектор pDEST-8 согласно GATEWAY. Позитивные рекомбинанты отбирают и перемещают в штамм DH10Bac E.coli и продуцированную бакмиду искусственно вводят в клетки SF21, используя технологию Вас-То-Вас (Invitrogen Life Technologies). Позитивные продукты трансфекции отбирают и применяют с целью генерации вирусных культур с высоким титром для использования при экспрессии белка.
Экспрессия PDE4: Клетки Sf21 выращивают до плотности 2Х106 клеток/мл и заражают человеческими PDE4A, PDE4B или PDE4D3, содержащими бакуловирус, до множественности заражения (m.o.i.) 1 в течение 72 часов. Инфицированные клетки собирают путем центрифугирования при 1,400 g в течение 4 минут при 4°С и осадок из клеток замораживают при -80°С. Клетки насекомых Sf21 (Spodoptera frugiperda 21) регулярно сохраняются при плотностях между 3Х105 и 3Х106 клеток/мл в не содержащей сыворотки среде (SF00) (Invitrogen Life Technologies). Клетки Sf21 (1X109) повторно суспендируют в 100 мл холодного (4°С) буфера для лизиса (50 мМ Na2HPO4, 200 мМ NaCl, 10 мМ имидазол). Клетки инкубируют на льду в течение 30 минут, затем центрифугируют при 15,000 g в течение 20 минут при 4°С.
Очистка PDE4: 6-Гистидин-меченые белки PDE4 выделяют из неочищенных клеточных лизатов с использованием осуществляемой периодическим способом очистки с помощью Ni-NTA (никелевая соль нитрилотриуксусной кислоты) (QIAGEN). Смолу с Ni-NTA сначала предварительно промывают для удаления этанольного консерванта и уравновешивают буфером для лизиса. Прибавляют клеточный лизат (10 мл 50% суспензии смолы с Ni-NTA на 50 мл лизата) и осторожно вращают в перемешивающем устройстве при 4°С в течение 1-2 часов. Образец затем центрифугируют при 1,000 g в течение 5 минут при 4°С, используя стендовую центрифугу Денли. Надосадочную жидкость удаляют и смолу промывают три раза 50 мл охлажденного до температуры льда буфера для промывки (50 мМ Na2HPO4, 300 мМ NaCl и 20 мМ имидазол), затем центрифугируют при 1,000 g в течение 5 минут при 4°С. 6-Гистидин-меченый белок вымывают со смолы с помощью 3×5 мл буфера для элюирования, охлажденного до температуры льда (50 мМ NaH2PO4, 300 мМ NaCl, 250 мМ имидазол) и собирают путем центрифугирования при 1,000 g в течение 5 минут при 4°С. Надосадочные жидкости затем объединяют перед обменом буфера и концентрируют, используя концентратор VivaScience, 20 мл 5К 0,2 мкМ. Образцы в аликвотных количествах хранят при -20°С.
Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE): Образцы очищенного PDE4 анализируют с помощью SDS-PAGE, используя мини-гели (Novex), градиент 8-16%, и образцы денатурируют при 100°С в восстанавливающем буфере (62 мМ трис-HCl с рН 6,8, 10% глицерина, 3% додецилсульфата натрия, 5% 2-меркаптоэтанола, 0,02% бромфенола синего) в течение 3 минут перед загрузкой. Также загружают стандарты с определенной молекулярной массой, предварительно окрашенные красителем Novex SeeBlue. Гели работают при постоянном токе в 25 мА. Гели окрашивают с помощью красителя кумасси синего (GelCode Colloidal Coomassie G-250) (Pierce) согласно методике производителя.
Анализ путем вестерн-блотирования: Образцы анализируют на гелях Novex, градиент 8-16%, как описано выше. Затем гель влажным подвергают блотированию на мембрану из поливинилиденфторида Millipore Immobilon-P, применяя способ переноса в резервуаре с помощью буфера для переноса, содержащего 25 мМ трис-HCl, рН 8,8, 192 мМ глицин, 15% метанола, при 80 мА в течение 16 часов. Иммунозондирование осуществляют в буфере TTBS (20 мМ трис-HCl с рН 7,6, 0,9% (мас./об.) NaCl, 0,05% (об./об.) тритона Х-100, 0,5% (мас./об.) казеина) с моноклональным антителом против 6 гистидина (QIAGEN) при разбавлении 1:1000. В качестве вторичного антитела (Sigma A9919) применяют конъюгат противомышиного иммуноглобулина G со щелочной фосфатазой при разбавлении 1:10000 и белки обнаруживают с помощью субстрата 5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат/нитротетразолий голубой (BCIP/NBT), приготовленного из таблеток (Sigma) в соответствии с методикой производителя.
Анализ PDE4: Исследование основывается на технологии анализа эффекта сцинтилляционной близости (SPA), разработанного фирмой Amersham Pharmacia Biotech. Фермент разбавляют буфером для разбавления фермента (10 мМ трис-НС1, рН 7,5, содержащий 1 мМ этилендиаминтетрауксусную кислоту) для обеспечения гидролиза 10-30% общего количества субстрата во время анализа. Ферментативная реакция начинается при прибавлении 10 мкл разбавленного фермента к 80 мкл субстрата (0,1 мкКи [3H]-цАМФ, 1 мкМ цАМФ) и 10 мкл раствора ингибитора в 96-ячеечный планшет для титрования. После 30-60 минут инкубирования при комнатной температуре реакцию останавливают путем прибавления 50 мкл шариков фосфодиэстеразы для SPA (20 мг/мл). Через 30 минут содержимое планшета центрифугируют (3000 g, 10 минут) и проводят подсчет (Packard TopCount).
Исходные растворы ингибитора готовят в 100%-ном диметилсульфоксиде (ДМСО) и разбавляют ДМСО/водой для обеспечения 10 концентраций для охватывания диапазона ингибирования 0-100%. Концентрация ДМСО сохраняется постоянной и составляет 1% (об./об.) в течение анализа.
Концентрацию, при которой происходит 50%-ное ингибирование (IC50), определяют общепринятым способом из кривых зависимости ингибирования от концентрации. В рамках группы изоферментов PDE4 вещества по изобретению обычно проявляют селективность при ингибировании изофермента PDE4D относительно PDE4A, PDE4B и PDE4C. Соединения из примеров 1, 3, 10, 12, 14 и 15 имеют значения IC50 38, 9, 25, 21, 57 и 9 нМ соответственно для ингибирования PDE4D в приведенном выше анализе.
Принимая во внимание ингибирование веществами по изобретению связывания PDE4, вещества по изобретению являются полезными для лечения состояний, опосредствованных PDE4, в частности воспалительных состояний. Лечение в соответствии с изобретением может быть симптоматическим или профилактическим.
Соответственно вещества по изобретению полезны при лечении воспалительных или обструктивных заболеваний дыхательных путей, приводя в результате к уменьшению поражения тканей, снижению повышенной реактивности бронхов, коррекции или развития болезни. Воспалительные или обструктивные заболевания дыхательных путей, к которым применимо настоящее изобретение, включают астму любого типа или происхождения, включая как врожденную (неаллергическую) астму, так и приобретенную (аллергическую) астму, легкую астму, астму средней тяжести, тяжелую астму, бронхиальную астму, вызванную нагрузкой астму, профессиональную астму и астму, вызванную бактериальной или вирусной инфекцией. Понятно, что лечение астмы охватывает лечение больных, например, в возрасте моложе 4 или 5 лет, у которых проявляются симптомы затрудненного дыхания с присвистом и которым ставят диагноз или которые диагностируются как "младенцы или дети младшего возраста со свистящим дыханием", это установленная категория больных особого медицинского внимания и теперь часто идентифицируемая как ранние астматики или астматики в начальной стадии болезни (Для удобства на это особое астматическое состояние ссылаются как на "синдром дышащих со свистом детей младшего возраста".)
Об эффективности профилактики при лечении астмы свидетельствуют уменьшенная частота или тяжесть симптоматического приступа, например острого астматического приступа или приступа бронхостеноза, улучшенная легочная функция или положительная динамика в случае повышенной реактивности дыхательных путей. Об этом может также свидетельствовать уменьшенная потребность в другой симптоматической терапии, то есть терапии, предназначающейся для ограничения или остановки развития симптоматического приступа, когда он происходит, например противовоспалительной (например, кортикостероидами) или терапии с помощью бронхорасширяющих средств. Польза профилактики при астме может, в частности, быть очевидной для больных, склонных к "утренней глубокой пальпации". "Утренняя глубокая пальпация" является узнаваемым астматическим синдромом, обычным для существенного процента астматиков и характеризующимся астматическим приступом, например, между примерно 4 и 6 часами утра, то есть во время, обычно существенно отдаленное от любой проведенной симптоматической терапии астмы.
Другие воспалительные или обструктивные заболевания и состояния дыхательных путей, к которым применимо настоящее изобретение, включают острое поражение легкого (ALI), острый респираторный дистресс-синдром у взрослых (ARDS), хроническое обструктивное легочное заболевание, заболевание дыхательных путей или легкого (COPD, COAD или COLD), включая хронический бронхит или связанную с этим одышку, эмфизему, а также обострение повышенной реактивности дыхательных путей в результате другой лекарственной терапии, в частности терапии другим вдыхаемым лекарственным средством. Изобретение также применимо для лечения бронхита любого вида и происхождения, включая, например, острый, арахидный, катаральный, крупозный, хронический или гнойный туберкулезный бронхит. Другие воспалительные или обструктивные заболевания дыхательных путей, к которым применимо настоящее изобретение, включают пневмокониоз (воспалительное, обычно профессиональное, заболевание легких, часто сопровождающееся обструкцией дыхательных путей, хроническое или острое, и вызываемое частым вдыханием различной пыли) любого вида или происхождения, включая, например, алюминоз, антракоз, асбестоз, халикоз, птилоз, сидероз, силикоз, табакоз и биссиноз.
Учитывая противовоспалительную активность веществ по изобретению, их влияние на повышенную реактивность дыхательных путей и их характеристики в отношении ингибирования изоферментов фосфодиэстеразы, в частности, в качестве селективных ингибиторов типа 4, вещества по изобретению полезны для лечения, в частности, профилактического лечения, обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей. Таким образом, при продолжительном и регулярном применении в течение длительных периодов времени вещества по изобретению полезны для обеспечения улучшенной защиты против рецидива бронхостеноза или другого симптоматического приступа, являющегося следствием обструктивного или воспалительного заболевания дыхательных путей, или для регулирования, улучшения или изменения базального статуса такого заболевания.
Принимая во внимание их бронхорасширяющую активность, вещества по изобретению полезны в качестве бронхорасширяющих средств, например, для лечения хронического или острого бронхостеноза, например для симптоматического лечения обструктивного или воспалительного заболевания дыхательных путей.
Принимая во внимание их активность в качестве селективных ингибиторов высвобождения TNF-α, вещества по изобретению также полезны для понижающей регуляции или ингибирования высвобождения TNF-α, например, при лечении заболеваний или состояний, в которые вовлечено высвобождение TNF-α или высвобождение играет промежуточную роль, например, заболеваний или состояний, имеющих этиологию, включающую или заключающую в себе патологическое, например, нежелательное избыточное или нерегулируемое высвобождение TNF-α, в частности, для лечения кахексии или эндотоксинового шока и для лечения СПИД [сравните Sharief и др. Mediators of Inflammation, 1, 323-338 (1992)], лечения кахексии, связанной с патологическим высвобождением TNF-α или уровнями TNF-α в сыворотке крови любого происхождения, включая кахексию, являющуюся следствием, например, бактериального, вирусного или паразитарного, заражения или недостаточности или ухудшения гуморальной или другой функции организма, например почечной функции, лечения злокачественной, малярийной и вызванной глистами кахексии, кахексии в результате дисфункции гипофиза, щитовидной железы или вилочковой железы, а также обусловленной уремией кахексии и, в частности, лечения связанной со СПИД кахексии, то есть кахексии, вытекающей из или связанной с заражением вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ).
Способ по изобретению также применим для лечения септического шока, например состояний шока в результате бактериального заражения. В этом отношении следует отметить, что настоящее изобретение обеспечивает способ лечения септического шока как такового, а также состояний, вытекающих из или симптоматических для септического шока, например респираторный дистресс-синдром у взрослых (ARDS).
Вещества по изобретению далее применимы для лечения заболевания в результате заражения ВИЧ, например СПИД, например, для уменьшения интенсивности симптомов заболевания или регулирования прогрессирования такого заболевания.
Принимая во внимание показатели веществ по изобретению, относящиеся к ингибированию изоферментов PDE и/или ингибированию высвобождения TNF-α, а также их иммунодепрессивную активность, вещества по изобретению также полезны в качестве иммунодепрессивных средств, например, для лечения аутоиммунных заболеваний, в частности, для лечения аутоиммунных заболеваний, в которые вовлечены воспалительные процессы или которые включают воспалительный компонент или этиологию, или в качестве противовоспалительных средств для лечения воспалительных заболеваний, в частности для лечения воспалительных заболеваний, в которые вовлечены аутоиммунные реакции или которые включают аутоиммунный компонент или этиологию. Примеры таких заболеваний, к которым применимо настоящее изобретение, включают аутоиммунные гематологические нарушения (например, гемолитическая анемия, апластическая анемия, чистая эритроцитарная анемия или тромбоцитопения неясного происхождения), системную красную волчанку, полихондрит, склеродермию, гранулематоз Вегенера, дерматомиозит, хронический активный гепатит, тяжелую миастению, синдром Стивенса-Джонсона, синдром мальабсорбции неясного происхождения, аутоиммунное воспалительное заболевание кишечника (например, язвенный колит и болезнь Крона), эндокринную офтальмопатию, болезнь Грейвса, саркоидоз, альвеолит, хронический аллергический пневмонит, рассеянный склероз, первичный билиарный цирроз печени, юношеский диабет (сахарный диабет типа I), увеит (передний и задний), кератоконъюнктивит высушивающий и весенний кератоконъюнктивит, интерстициальный фиброз легких, псориатический артрит и гломерулонефрит (с и без нефротического синдрома, например, включая нефротический синдром неясного происхождения или нефропатию с минимальными изменениями), а также воспалительные и/или гиперпролиферативные кожные заболевания, как, например, псориаз, атонический дерматит, пузырчатку и, в частности, контактный дерматит, например аллергический контактный дерматит.
Вещества по изобретению особенно полезны для лечения артрита и других ревматических или воспалительных заболеваний, особенно для лечения ревматоидного артрита.
В качестве иммунодепрессантов вещества по изобретению, кроме того, полезны для предупреждения отторжения трансплантата, например для поддержания аллогенных трансплантатов органов или им подобных, например трансплантатов почки, печени, сердца, сердца-легкого, кишки, костного мозга, кожи или роговичного трансплантата.
Принимая во внимание показатели в отношении ингибирования изоферментов PDE, в частности характеристики в качестве селективных ингибиторов типа 4, вещества по изобретению, кроме того, полезны для лечения заболеваний, включающих снижение кальция в тканях, в частности дегенеративных заболеваний костей и суставов, включающих снижение кальция, особенно остеопороза. В этой связи они, кроме того, полезны для лечения аллергических воспалительных заболеваний, как, например, ринит, конъюнктивит, атопический дерматит, крапивница и аллергические заболевания желудочно-кишечного тракта; в качестве вазодилататоров, например, для лечения стенокардии, гипертензии, ишемии/поражения реперфузии, застойной сердечной недостаточности и деменции в результате множественных инфарктов; и для лечения других состояний, когда показано ингибирование PDE 4, например депрессии, состояний и заболеваний, характеризующихся ухудшенной познавательной функцией, включая болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и удар.
Вещества по изобретению также полезны в качестве дополнительных терапевтических средств в комбинации с другими лекарственными веществами, как, например, противовоспалительные, бронхорасширяющие, антигистаминные или иммунодепрессивные лекарственные средства, в особенности для лечения воспалительных заболеваний, например обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей, аутоиммунных заболеваний или отторжения трансплантата, таких заболеваний, как упомянутые выше, например, в качестве потенциаторов терапевтической активности упомянутых лекарственных средств или в качестве средств для уменьшения требующейся дозировки или возможных побочных эффектов таких лекарственных средств. Вещество по изобретению может быть смешано с другим лекарственным средством в определенной фармацевтической композиции или оно может быть введено отдельно, до, одновременно или после другого лекарственного средства. Такие противовоспалительные лекарственные средства включают стероиды, в частности глюкокортикостероиды, как, например, будезонид, бекламетазон, флутиказон, циклезонид или мометазон, антагонисты LTB4, как, например, те, которые описаны в патенте США №5451700, и антагонисты LTD4, как, например, монтелукаст и зафирлукаст, агонисты допаминовых рецепторов, как, например, каберголин, бромокриптин, ропинирол и 4-гидрокси-7-[2-[[2-[[3-(2-фенилэтокси)пропил]сульфонил]этил]амино]этил]-2(3Н)-бензотиазолон и его фармацевтически приемлемые соли (хлоргидрат, представляющий виозан® - AstraZeneca). Такие бронхорасширяющие лекарственные средства включают антихолинергические или антимускариновые средства, в частности бромид ипратропия, бромид окситропия и бромид тиотропия, и β2-агонисты адренорецепторов, как, например, сальбутамол, тербуталин, сальметерол и, особенно, формотерол и их фармацевтически приемлемые соли, и соединения (в свободной форме или в виде соли, или в сольватированной форме) формулы I из международной заявки на патент WO 00/75114 согласно РСТ, на этот документ здесь ссылаются, предпочтительно это соединения из примеров упомянутой заявки, особенно соединение формулы
и его фармацевтически приемлемые соли. Дополнительные терапевтические антигистаминные лекарственные вещества включают гидрохлорид цетиризина, ацетаминофен, фумарат клемастина, прометазин, лоратидин, дезлоратидин, дифенилгидрамин и гидрохлорид фексофенадина. Дополнительные терапевтические иммунодепрессивные лекарственные средства включают, например, циклопептидные, циклопептолидные или макролидные лекарственные вещества, например лекарственные вещества, относящиеся к классу циклоспоринов, например циклоспорины А или G, лекарственные вещества такролимус (также известное как FK 506), аскомицин и рапамицин и различные известные представители тех же классов и производные.
Комбинации веществ по изобретению и стероидов, β2-агонистов или антагонистов LTD4 могут быть, например, использованы для лечения COPD или, в частности, астмы. Комбинации веществ по изобретению и антихолинергических или антимускариновых средств, ингибиторов PDE4, агонистов допаминовых рецепторов или антагонистов LTB4 могут быть применены, например, при лечении астмы или, в частности, COPD. Комбинации веществ по изобретению и иммунодепрессивных лекарственных препаратов могут быть применены для лечения любого заболевания или состояния, требующего подавляющего иммунитет лечения, как описано выше.
Другие полезные дополнительные терапевтические комбинации веществ по изобретению включают комбинации с ингибиторами PDE3, такими как раскрываемые в международной заявке на патент WO 00/66123, например ревизинон, ци-лостамид, амипизон, сигуазодан, карбазеран, беморадан, мотапизон и, в особенности, милринон, эноксимон и пимопендан, особенно для лечения состояний, характеризующихся острой или хронической обструкцией сосудов и/или бронхов, и/или острого или хронического воспаления, например острого обструктивного бронхита, бронхиальной астмы или COPD.
В соответствии с вышеизложенным настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения заболевания, опосредствованного PDE4, который включает введение субъекту, в частности человеку, при необходимости такого лечения эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, как описано выше. Согласно другому аспекту изобретение обеспечивает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, как описано выше, для использования при приготовлении лекарственного средства для лечения заболевания, опосредствованного PDE4.
В соответствии с вышеизложенным настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения воспалительного заболевания, в частности обструктивного или воспалительного заболевания дыхательных путей, который включает введение субъекту, в частности человеку, при необходимости такого лечения эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, как описано выше. Согласно другому аспекту изобретение обеспечивает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль, как описано ранее, для использования при приготовлении лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания, в частности обструктивного или воспалительного заболевания дыхательных путей.
Вещества по изобретению могут быть введены любым подходящим способом, например перорально, например, в виде таблетки или капсулы; парентерально, например, внутривенно; могут быть нанесены местно на кожу, например, при лечении псориаза; могут вводиться через нос, например, при лечении ринита, или с помощью ингаляции, в частности, при лечении обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей.
В другом аспекте настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию, включающую в качестве активного ингредиента соединение формулы I в свободной форме или в виде его фармацевтически приемлемой соли, необязательно вместе с фармацевтически приемлемым для этого разбавителем или носителем. Такие композиции могут быть получены с применением общепринятых разбавителей или наполнителей и методик, известных для получения галеновых препаратов. Так, пероральные лекарственные формы могут включать таблетки, капсулы и лекарственные формы с контролируемым высвобождением, как, например, инкапсулированные или матричные растворяющиеся формы, готовые лекарственные формы, использующие систему осмоса, или готовые формы на основе ионообменной смолы. Готовые формы для местного применения могут быть в виде кремов, мазей, гелей или систем чрескожной доставки, например пластырей. Композиции для ингаляции могут включать аэрозольные или другие тонко измельченные готовые формы, или готовые формы в виде сухих порошков.
Когда композиция заключает в себе готовую лекарственную форму в виде аэрозоля, она предпочтительно содержит, например, гидрофторалкановый (HFA) газ-вытеснитель, как, например, HFA 134а или HFA227 или их смесь, и может содержать один или несколько сорастворителей, известных в данной области, как, например, этанол (до 20% по массе) и/или одно или несколько поверхностно-активных веществ, как, например, олеиновая кислота или сорбитантриолеат, и/или одно или несколько средств, увеличивающих объем при растворении, например лактозу.
Когда композиция заключает в себе готовую форму в виде сухого порошка, она предпочтительно содержит, например, соединение формулы I с диаметром частиц до 10 микрон и с желаемым распределением частиц по размеру, необязательно вместе с разбавителем или носителем, как, например, лактоза, и соединение, помогающее защищать продукт от ухудшения качества под действием влаги.
Когда композиция заключает в себе распыляемую лекарственную форму, она предпочтительно содержит, например, соединение формулы I, либо растворенное, либо суспендированное, в носителе, содержащем воду, сорастворитель, как, например, этанол или пропиленгликоль, и стабилизатор, который может быть поверхностно-активным веществом.
Изобретение также включает (А) соединение формулы I, как описано выше, в свободной форме или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, в форме для ингаляции; (Б) вдыхаемое лекарственное средство, включающее такое соединение в форме для ингаляции вместе с фармацевтически приемлемым носителем в форме для ингаляции; (В) фармацевтический продукт, включающий такое соединение в форме для ингаляции, вместе с устройством для ингаляции и (Г) устройство для ингаляции, содержащее такое соединение в форме для ингаляции.
Дозировки, применяемые при практическом использовании изобретения, конечно варьируются в зависимости, например, от конкретного, подвергающегося лечению состояния, от желаемого эффекта и способа введения. Обычно подходящие дневные дозировки для перорального введения составляют от 0,5 до 200 мг, в то время как подходящие дневные дозировки для введения путем ингаляции составляют от 0,1 до 10 мг.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами. 6-Амино-8-бром-1,7-нафтиридин, используемый в примерах, получают, как описано в международной заявке на патент WO98/18796.
Пример 1: Этиловый эфир 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]-циклогексанкарбоновой кислоты
6-Амино-8-(3-цианфенил)1,7-нафтиридин
К смеси тетрагидрофурана (ТГФ) (80 мл) и 2 н. карбоната натрия (34 мл, водный) прибавляют 6-амино-8-бром-1,7-нафтиридин (4,007 г), трифенилфосфин (0,37 г) и 3-цианфенилборную кислоту (3,23 г). Смесь дегазируют трижды под аргоном и затем прибавляют бис(дибензилиденацетон)палладий(0) (0,4 г), и смесь дегазируют еще три раза под аргоном. Смесь нагревают при 80°С под аргоном в течение 16 часов, затем охлаждают и фильтруют. Смесь разбавляют этилацетатом и промывают 2 н. гидроокисью натрия, затем соляным раствором. После высушивания над сульфатом натрия органический слой выпаривают и суспендируют в диэтиловом эфире. Полученный таким образом твердый осадок является указанным в заглавии соединением, его отфильтровывают. Тпл 182-184°С. МС высокого разрешения (МСВР) [М+Н]+найдено =247,1.
6-Трифторметансульфонил-8-(3-цианфенил)-1,7-нафтиридин - Соединение А
К раствору 6-амино-8-(3-цианфенил)-1,7-нафтиридина (4,058 г) в диметилформамиде (ДМФА) (22 мл) под аргоном при 0°С прибавляют трифторметан-сульфокислоту (11 мл). Смесь перемешивают при 0°С в течение 10 минут и затем медленно прибавляют нитрит натрия (2,26 г). Затем баню для охлаждения удаляют и смесь перемешивают при комнатной температуре 3 часа. Полученную в результате смесь разбавляют этилацетатом и промывают водой, 2 М гидроокисью натрия и опять водой. Органический слой сушат над сульфатом натрия, затем концентрируют в вакууме и очищают с помощью колоночной хроматографии, элюируя толуолом: ацетоном 10:0,5, получают указанное в заглавии соединение. Тпл 102-104°С. МС(m/е)=380,1.
Этиловый эфир 4-иодциклогексанкарбоновой кислоты - Соединение Б
К холодному (0°С) перемешиваемому раствору этилового эфира 4-гидрокси-циклогексанкарбоновой кислоты (1,0 г, 5,80 ммоля) в СН2Cl2/CCl4 1:2 (52 мл) прибавляют трифенилфосфин (1,82 г, 6,96 ммоля), имидазол (473 мг, 6,96 ммоля) и иод (1,79 г, 7,08 ммоля). Реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Реакцию останавливают путем прибавления насыщенного раствора тиосульфата натрия (около 50 мл) и перемешивают до тех пор, пока раствор не станет прозрачным. Слои разделяют и водный слой экстрагируют хлористым метиленом (3×30 мл). Объединенные органические фазы промывают тиосульфатом натрия (30 мл), соляным раствором (30 мл), сушат безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают при пониженном давлении до маслянистого твердого вещества. Очищают с помощью сухой флэш-хроматографии, используя силикагель с фракцией диоксида кремния 15-40, элюируют 3% этилацетатом/ изогексаном, получают указанное в заглавии соединение в виде прозрачного бесцветного масла.
Этиловый эфир 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты
В колбу загружают активированную цинковую пыль (742 мг, 11,13 ммоля), ТГФ (1,80 мл) и 1,2-дибромэтан (25 мкл, 0,284 ммоля). Суспензию кипятят с обратным холодильником 3 минуты и затем ей дают охладиться перед прибавлением триметилсилилхлорида (29 мкл, 0,227 ммоля). Смесь перемешивают 15 минут, затем прибавляют соединение Б (1,60 г, 5,67 ммоля) и смесь перемешивают при 35°С в течение 1,5 часов. Во вторую колбу загружают Pd(дибензилиденацетон)2 (101 мг, 0,176 ммоля), 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (98 мг, 0,176 ммоля), N-метил-пирролидинон (NMP) (3 мл): ТГФ (1 мл), йодистый тетрабутиламмоний (2,79 г, 7,56 ммоля) и соединение А (956 мг, 2,52 ммоля) и содержимое прибавляют в первую колбу при 35°С. Реакционную смесь перемешивают 2 часа, затем реакцию останавливают путем прибавления воды (15 мл) и перемешивают 10 минут. Затем прибавляют этилацетат (40 мл) и перемешивают 5 минут. Слои разделяют и органический слой промывают 5%-ной лимонной кислотой (25 мл), водой (2×25 мл) и соляным раствором (40 мл), сушат безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают до вязкого масла коричневого цвета. Очищают с помощью сухой флэш-хроматографии, используя силикагель с фракцией диоксида кремния 15-40, элюируют 30% этилацетатом/изогексаном, получают указанное в заглавии соединение в виде смолистого вещества оранжевого цвета. MH+ 386,0.
Пример 2: 4-[8-(3-Цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Раствор гидроокиси лития (6,5 мг, 0,155 ммоля) в воде (160 мкл) прибавляют к раствору этилового эфира 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (60 мг, 0,155 ммоля) в NMP (0,16 мл). После завершения реакции реакционную смесь разбавляют водой и промывают этилацетатом (5 мл). Водный слой подкисляют 5%-ной лимонной кислотой и продукт экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат над насыщенным раствором соли (10 мл) и безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Очищают с помощью флэш-хроматографии, используя силикагель с фракцией диоксида кремния 40-63 и элюируя 1,5% СН3ОН: 0,5% СН3СООН: дихлорметаном, получают указанное в заглавии соединение. МН+ 357,0. Тпл 179,8-180,3.
Пример 3: Калиевая соль 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]-циклогексанкарбоновой кислоты
4-[8-(3-Цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновую кислоту (24 мг, 0,067 ммоля) растворяют в метаноле (около 2 мл) и прибавляют безводный карбонат калия (4,6 мг, 0,035 ммоля). Суспензию обрабатывают ультразвуком 15 минут или до растворения карбоната калия. Выпаривание метанола и последующее растирание полученной в результате соли и с этилацетатом, и с диэтиловым эфиром и затем сушка приводят к указанному в заглавии соединению. МН+ 357,0 (исходная кислота). Тпл>250°С.
Пример 4: 4-[8-(3-Карбамоилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Гидроокись натрия (4М, 0,5 мл) прибавляют к раствору этилового эфира 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (65 мг, 0,168 ммоля) в NMP/СН3ОН/Н2О (0,50 мл, 8:1:1) и раствор перемешивают в течение ночи. Раствор подкисляют водной 5%-ной лимонной кислотой и экстрагируют этилацетатом (3×10 мл). Органический слой сушат над насыщенным раствором соли, безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают при пониженном давлении до смолистого вещества желтого цвета. Очищают с помощью препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим контролем (колонка: Xterra ms c8 5 мкм 19×50 мм), получают указанное в заглавии соединение. МН+ APCI (химическая ионизация при атмосферном давлении) 376,0.
Пример 5: 3-[6-(4-Карбоксициклогексил)-[1,7]нафтиридин-8-ил]бензойная кислота
Это соединение получают по методике, аналогичной описанной в примере 4, очищают с помощью препаративной ВЭЖХ с масс-спектрометрическим контролем (колонка: Xterra ms c8 5 мкм 19×50 мм), получают указанное в заглавии соединение. MH+ APCI 377,1.
Пример 6: Этиловый эфир 4-[8-(5-фтор-2-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты
Это соединение получают по методике, аналогичной описанной в примере 1, из 8-(5-фтор-2-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-илового эфира трифторметансульфокислоты в качестве исходного вещества. МН+ APCI 409,0.
Пример 7: 4-[8-(5-Фтор-2-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Это соединение получают по методике, аналогичной описанной в примере 2, из продукта из примера 6, продукт очищают с помощью препаративной ВЭЖХ с масс-спектрометрическим контролем (колонка: Xterra ms c8 5 мкм 19×50 мм), получают указанное в заглавии соединение в виде смолы желтого цвета. МН+ 381,1.
Пример 8: Натриевая соль 4-[8-(5-фтор-2-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил] циклогексанкарбоновой кислоты
Это соединение получают по методике, аналогичной описанной в примере 3, из продукта из примера 7, применяя безводный карбонат натрия. МН+ 381,1 (данные для исходной кислоты).
Примеры 9-19
С помощью методик, аналогичных описанным в соответствующих примерах выше, и используя соответствующие исходные вещества, получают соединения формулы I, приведенные в таблице вместе с масс-спектрометрическими характеристиками (МС:APCI МН+). Соединения получают в свободной форме, кроме примера 11, где соединение выделяют в виде калиевой соли.
| Таблица | |||
| Пример № | R1 | R2 | MC |
| 9 |  |  | 368,6 |
| 10 |  | | 362,9 |
| 11 |  |  | 388,184 |
| 12 |  | | 350,6 |
| Пример № | R1 | R2 | MC |
| 13 |  | | 367,0 |
| 14 |  | | 417,65 |
| 15 |  | | 379,05 |
| 16 |  | | 395,87 |
| 17 |  | | 347,06 |
| 18 |  | | 386,8 |
| 19 |  | | 407,16 |
| 20 | | | 377,12 |
| 21 | | | 381,16 |
| 22 |  | | 333,71 |
Пример 10: 4-[8-(3-Метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Гидроокись калия (2М, 0,9 мл) прибавляют к раствору этилового эфира 4-[8-(3-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (230 мг, 0,6 ммоля) в ТГФ/этаноле (6 мл: 2 мл) и нагревают при 80°С в течение 3 часов. Раствор затем разбавляют этилацетатом (120 мл) и экстрагируют водой. С помощью 1М HCl устанавливают в водном слое рН 4, выпадает белый осадок, который экстрагируют дихлорметаном (ДХМ). Дихлорметановый слой промывают водой, затем сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют до получения желаемого продукта. Тпл 209-212°С. Масс-спектрометрия положительных ионов с ионизацией при атмосферном давлении (МС (АР+)) 362,9.
Этиловый эфир 4-[8-(3-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты
Это соединение получают способом, аналогичным способу получения этилового эфира 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты, из 8-(3-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-илового эфира трифторметансульфокислоты. Очистка с помощью хроматографии с последующим растиранием с диэтиловым эфиром приводит к твердому веществу белого цвета. МС (АР+) 391,0.
8-(3-Метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-иловый эфир трифторметансульфокислоты
Это соединение получают способом, аналогичным способу получения соединения А. МС (TOF ES+) (времяпролетная МС положительных ионов с ионизацией электрораспылением) 384,97.
Пример 11: Калиевая соль {4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]-циклогексилокси} уксусной кислоты
Карбонат калия (10,1 мг, 0,074 ммоля) в воде (1 мл) прибавляют к раствору {4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексилокси}уксусной кислоты (59 мг, 0,15 ммоля) в метаноле (6 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 минут, фильтруют и концентрируют. Продукт подвергают лиофилизации из воды (×3), затем сушат при 40°С в вакууме в течение 18 часов. Перекристаллизация из дихлорметана/диэтилового эфира приводит к продукту с tпл 148-150°С (разл.), МС (ES+) [M+H]+ 388, 1635.
{4-[8-(3-Цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексилокси}уксусная кислота
Трифторуксусную кислоту (ТФК) (2 мл) прибавляют к раствору трет-бутилового эфира {4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексилокси} уксусной кислоты (182 мг, 0,41 ммоля) в дихлорметане (2 мл) при 0°С. Раствор перемешивают при комнатной температуре 1 час, концентрируют и подвергают азеотропной перегонке с толуолом (×3). Очищают с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя 7%-ным метанолом в дихлорметане, получают продукт. МС (ES+) [М+Н]+ 388,04.
трет-Бутиловый эфир {4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил] циклогексилокси} уксусной кислоты
Прибавляют 1,2-дибромэтан (12 мкл) к суспензии цинковой пыли (589 мг, 9,0 ммолей) в тетрагидрофуране (0,9 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником 3 минуты, затем ей дают охладиться до комнатной температуры. Прибавляют триметилсилилхлорид (15 мкл) и смесь перемешивают при комнатной температуре 30 минут. С помощью шприца прибавляют трет-бутиловый эфир (4-иодциклогексилокси)-уксусной кислоты (цис:транс=примерно 1:1) (680 мг, 2,0 ммоля) в ТГФ (1 мл) и смесь нагревают при 40°С в течение 2 часов. Прибавляют раствор Bu4NI, т.е. иодистого тетрабутиламония, (1,1 г, 3,0 ммоля), Pd(dba)2, т.е. палладий-дибензилиденацетон (40 мг, 0,07 ммоля), dppf, т.е. 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (39 мг, 0,07 ммоля), и соединение А (372 мг, 1,0 ммоль) в ТГФ(2 мл)/NMP(2 мл) и смесь нагревают при 40°С в течение 18 часов, затем смеси дают охладиться до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и фильтруют через целит. Фильтрат промывают насыщенным водным раствором хлористого аммония (х1), 10%-ной водной лимонной кислотой (х1), водой (х1) и соляным раствором (х1), сушат (MgSO4), фильтруют и концентрируют. Очистка с помощью хроматографии на силикагеле, элюирование 30%-ным этилацетатом в изогексане приводят к продукту в транс-форме. МС (ES+) [М+Н]+ 444,10.
трет-Бутиловый эфир (4-иодциклогексилокси)уксусной кислоты
Трифенилфосфин (1,18 г, 4,49 ммоля), имидазол (0,31 г, 4,49 ммоля) и иод (1,14 г, 4,49 ммоля) прибавляют к раствору трет-бутилового эфира (4-гидроксициклогексил-окси)уксусной кислоты (цис: транс=примерно 1:1) (0,86 г, 3,74 ммоля) в смеси CH2Cl2 (10 мл)/CCl4 (20 мл) при 0°С. Баню для охлаждения удаляют и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 18 часов. Прибавляют насыщенный водный раствор тиосульфата натрия (10 мл) и смесь перемешивают 15 минут. Слои разделяют и водный слой повторно экстрагируют дихлорметаном (х3). Объединенные органические экстракты промывают соляным раствором (х1), сушат сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Очистка с помощью хроматографии на силикагеле с элюированием 5%-ным этилацетатом в изогексане приводит к нужному продукту.
Пример 12: 4-[8-(3-Фторфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Гидроокись лития (1М (водн.), 24,3 мл, 24,3 ммоля) прибавляют к раствору этилового эфира 4-[8-(3-фторфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (4,60 г, 12,14 ммоля) в тетрагидрофуране/метаноле (40 мл: 20 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Органические растворители удаляют при выпаривании, затем водный остаток разбавляют водой и подщелачивают до рН 9 с помощью 1М гидроокиси калия. Водный слой затем промывают этилацетатом (3х). Водный слой подкисляют до рН 4 с помощью 1М HCl и получают белый осадок, который экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный слой затем сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют, получают желаемый продукт в виде пенообразного вещества желтого цвета. Дальнейшее растирание с 1М HCl приводит к продукту в виде порошка бледно-желтого цвета (2,153 г). МС (АР+) 350,6.
Этиловый эфир 4-[8-(3-фторфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты
Это соединение получают аналогично соединению, представляющему этиловый эфир 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты, из 8-(3-фторфенил)-[1,7]нафтиридин-6-илового эфира трифторметансульфокислоты. Очистку проводят с помощью хроматографии с последующим растиранием с диэтиловым эфиром, получают твердое вещество белого цвета. МС (АР) 378,98.
8-(3-Фторфенил)-[1,7]нафтиридин-6-иловый эфир трифторметансульфокислоты
Это соединение получают аналогично соединению А. МС (TOF ES+) 372,87.
Пример 14: 4-[8-(3-Трифторметоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Прибавляют гидроокись калия (2М (води.), 2,5 мл) к раствору этилового эфира 4-[8-(3-трифторметоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (250 мг, 0,56 ммоля) в этиловом спирте (10 мл) и перемешивают при 45°С в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляют водой и подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН 3. Смесь перемешивают 2 часа, затем фильтруют и осадок на фильтре промывают водой, получают продукт в виде порошка белого цвета (218 мг). МС (АР+) 417,65.
Этиловый эфир 4-[8-(3-трифторметоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]-циклогексанкарбоновая кислота
Это соединение получают аналогично соединению, представляющему этиловый эфир 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты, из 8-(3-трифторметоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-илового эфира трифторметансульфокислоты. Очистка с помощью хроматографии с последующим растиранием с диэтиловым эфиром приводит к твердому веществу белого цвета. МС (АР+) 445.
8-(3-трифторметоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-иловый эфир трифторметансульфокислоты
Это соединение получают аналогично соединению А. МС (TOF ES+) 438,3.
Пример 15: 4-[8-(3-Метилсульфанилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Прибавляют гидроокись лития (168 мг, 1,76 ммоля) в воде (1,7 мл) к раствору этилового эфира 4-[8-(3-метилсульфанилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (650 мг, 1,6 ммоля) в ТГФ (3,2 мл) под аргоном. Прибавляют метанол для поддерживания растворения (4 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 часов. Смесь упаривают досуха, затем распределяют между этилацетатом и водой. Водный слой подкисляют до рН 2, затем экстрагируют этилацетатом и сушат над сульфатом магния. Упаривание приводит к смолообразному веществу зеленого цвета, которое повторно выпаривают из метанола, затем дихлорметана/диэтилового эфира, получают пенообразное вещество желтого/зеленого цвета. Пенообразное вещество растирают с гексаном: диэтиловым эфиром 3:1, с гексаном: диэтиловым эфиром 2:1, со смесями этилацетат/гексан/диэтиловый эфир и, наконец, с диэтиловым эфиром: этанолом 5:1, получают твердое вещество не совсем белого цвета. Вещество затем перекристаллизовывают из этанола, получают указанное в заглавии соединение. Тпл 177,6-178,2, МС (АР+) 379,05.
Этиловый эфир 4-[8-(3-метилсульфанилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]-циклогексанкарбоновой кислоты
Это соединение получают способом, аналогичным способу получения этилового эфира 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты из аналогичного исходного сырья. МС (АР+) 407,2.
Пример 16: 4-[8-(3-Метансульфинилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновая кислота
Раствор 4-[8-(3-метансульфанилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты (30 мг, 0,079 ммоля) в тетрагидрофуране (1,4 мл) охлаждают в бане с солью/льдом и прибавляют оксон (14,5 мг, 0,024 ммоля) в воде (0,5 мл). Через 15 минут реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и после дополнительных 30 минут прибавляют еще оксон (14,5 мг). Смесь разбавляют этилацетатом/водой и водный слой экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические слои промывают соляным раствором, затем сушат над сульфатом магния. Фильтрация с последующим упариванием приводит к пенообразному веществу, состоящему из указанного в заглавии соединения и 4-[8-(3-метансульфонилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты. МС (АР+) 395,87.
Примеры 9, 13, 17, 18 и 22
Соединения из этих примеров получают по методике, аналогичной описанной в примере 10, и они могут быть выделены либо в виде свободной кислоты, либо в виде соли, например калиевой соли.
Примеры 19, 20 и 21
Соединения из этих примеров получают по методике, аналогичной описанной в примере 11, и они могут быть выделены либо в виде свободной кислоты, либо в виде соли, например калиевой соли.
(57) 1. Соединение формулы I
в свободной форме или в виде соли,
где R1 означает фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, включающей циангруппу, галоген, карбоксил, аминокарбонил, (С1-С8)алкил, (С1-С8)алкилтиогруппу, -S(=О)-(С1-С8)алкил, (C1-C8)алкоксигруппу и (С1-С8)алоидалкоксигруппу, и фенил, конденсированный с гетероциклическим кольцом, имеющим 5 или 6 кольцевых атомов, из которых 1 или 2 атома могут быть кислородами; и
R2 означает (С3-С8)циклоалкил, замещенный карбоксилом или (С1-С8) алкоксикарбонилом.
2. Соединение по п.1, в котором
R1 означает фенил или фенил, замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из группы, включающей галоген, циангруппу, карбоксил, аминокарбонил, (С1-С4)алкил, (С1-С4)алкилтиогруппу, -S(=О)-(С1-С4)алкил, (С1-С4)алкоксигруппу и (С1-С4)галоидалкоксигруппу, или фенил, конденсированный с гетероциклическим кольцом, содержащим 5 или 6 кольцевых атомов, из которых 1 или 2 атома могут быть кислородами; и
R2 означает (С5-С8)циклоалкил, замещенный карбоксилом или (C1-C4) алкоксикарбонилом.
3. Соединение по п.1, которое является этиловым эфиром 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты, 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислотой, калиевой солью 4-[8-(3-цианфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты, 4-[8-(3-карбамоилфенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислотой, 3-[6-(4-карбоксициклогексил)-[1,7]нафтиридин-8-ил]бензойной кислотой, этиловым эфиром 4-[8-(5-фтор-2-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислоты, 4-[8-(5-фтор-2-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил]циклогексанкарбоновой кислотой или натриевой солью 4-[8-(5-фтор-2-метоксифенил)-[1,7]нафтиридин-6-ил] циклогексанкарбоновой кислоты.
4. Соединение по п.1, в котором R1 и R2 являются такими, как приведенные в следующей таблице:
5. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении изофермента PDE4 и включающая соединение по любому из пп.1-4, вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.
6. Применение соединения по любому из пп.1-4 для приготовления лекарственного средства для лечения состояния, опосредствованного PDE4.
7. Применение соединения по любому из пп.1-4 для приготовления лекарственного средства для лечения обструктивного или воспалительного заболевания дыхательных путей.
8. Способ получения соединения формулы I в свободной форме или в виде соли, который включает
(i)(А) взаимодействие соединения формулы II
не обязательно в защищенной форме,
где R1 является таким, как определено в п.1, L означает уходящий атом или уходящую группу,
с соединением формулы III
не обязательно в защищенной форме,
где R2 является таким, как определено в п.1, и Х является уходящим атомом или уходящей группой, которая реагирует с L соединения формулы II с образованием прямой связи между R2 и указанным нафтиридиновым кольцом, с последующим снятием защиты, если требуется, или
(Б) реакцию соединения формулы I, где R2 означает циклоалкил, замещенный (С1-С8)алкоксикарбонильной группой, с целью превращения алкоксикарбонильной группы в карбоксильную группу,
(В) гидролиз соединения формулы I, где R2 является циклоалифатической группой, замещенной (С1-С8)-алкоксикарбонил(С1-С8) алкоксигруппой, для получения соединений формулы I, где R2 является циклоалифатической группой, замещенной карбокси(С1-С8)алкоксигруппой, или
(Г) окисление соединения формулы I, где R1 означает фенил, замещенный (С1-С8)алкилтиогруппой, для получения соединений формулы I, где R1 означает фенил, замещенный -SO-(C1-C8)алкилом, и
(ii) выделение продукта в свободной форме или в виде соли.
Приоритет от 05.11.2001 согласно заявке 01265511.5 установлен по пп.1-7 формулы изобретения;
Приоритет от 05.11.2001 и 30.04.2002 согласно заявкам 01265511.5 и 0209882.0 установлен по п.8 формулы изобретения.
