Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий

Изобретение относится к области биотехнологии. В качестве антигенов вакцина содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей. Выращивание их проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³, смешивают в равных соотношениях. Вакцина содержит формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0, суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0, суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0, глюкоза 2,0-1,0, формалин 2,0-1,5, гидроокись алюминия остальное. Вакцина высокоиммуногенна, высокоспецифична, безвредна. 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88, 09К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; протеи, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; клебсиелл, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916 от 17.06.93, МКИ А61 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами, для нутрий не применяется.

Известна вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099084 от 30.09.94, МКИ А61 39/125, 39/135). Данная вакцина содержит в качестве антигена суспензию штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ № К-ДЕП с титром 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл в культуральной среде, суспензию клеток штаммов Pasteurella multosida ВГНКИ №6011, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в равных соотношениях общим содержанием 2,5-3,0 млрд микробных клеток в 1 мл питательной среды глюкозу, формалин, гидроокись алюминия и сапонин. Данная вакцина применяется для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Сырье получают путем культивирования штаммов возбудителей стрептококкоза и пастереллеза нутрий в питательной среде с низкой активностью. Использование сапонина в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.), длительность иммунитета только 6 месяцев. Эта вакцина не обеспечивает защиту против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий.

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности вакцины для профилактики колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, путем введения новых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияния.

Решение задачи достигается тем, что вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, включающая инактивированные антигены, адъювант, в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³, смешивают в равных соотношениях, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
колибактериоза Escherichia coli,
выделенного из местного эпизоотического
очага в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
сальмонеллеза Salmonella typhimurium,
выделенного из местного эпизоотического
очага в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя энтерококковой
инфекции Streptococcus fecalis,
выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	24,0-29,0
глюкоза	2,0-1,0
формалин	2,0-1,5
гидроокись алюминия	остальное.

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

При раздельном культивировании чистых культур возбудителей и добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование баксырья формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших нутрий, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает защиту животных сразу от трех опасных инфекционных болезней колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: формолквасцовая вакцина против паратифа (сальмонеллеза) телят ТУ 46-21-166-75, утверждено 10.05.75 г. инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 28.03.80 г.; вакцина против паратифа (сальмонеллеза) поросят ТУ 46-21-952-74, утверждено 15.07.74 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 23.10.96 г.; ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главньм управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г. представлены все необходимые сведения о микроорганизмах рода Salmonella и рода Streptococcus. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.

Методы выделения чистой культуры возбудителя колибактериоза и характеристика описаны в «Методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 г. №13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ, описана характеристика эшерихий в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., М.: Колос, 1995, стр.196-201, а также в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: Колос, 2001, на стр.219-222.

Методы выделения и характеристика сальмонелл описаны в методических указаниях «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». М.: ВО «Агропромиздат», 1990 г., а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А. М.: - Колос, 1995, стр.201-204. В «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: Колос, 2001, на стр.222-231.

Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., М.: Колос, 1995, стр.90-95.

Предложенная вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по колибактериозу, сальмонеллезу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по колибактериозу, сальмонеллезу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах вакцину вводят однократно, внутримышечно в область бедра, молодняку с 45-дневного возраста по 1,0 см³, а взрослым животным по 1,5 см³, В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с 2-месячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см³, вторая - в дозе 1,5 см³. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Приведено пять примеров содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 см³ вакцины.

Пример 1.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 66,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя колибактериоза
Escherichia coli, выделенного
из местного эпизоотического
очага в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	22,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза
Salmonella typhimurium, выделенного
из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	22,0
суспензия клеток чистой культуры возбудителя
энтерококковой инфекции Streptococcus
fecalis, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	22,0
глюкоза	0,5
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример 2.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 72,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя колибактериоза
Escherichia coli, выделенного из
местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	24,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза
Salmonella typhimurium, выделенного
из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	24,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя энтерококковой
инфекции Streptococcus fecalis,
выделенного из местного эпизоотического
очага в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	24,0
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий обладает достаточной иммуногенной активностью.

Пример 3.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 84,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя колибактериоза
Escherichia coli, выделенного из
местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	28,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза
Salmonella typhimurium, выделенного
из местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	28,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя энтерококковой
инфекции Streptococcus fecalis, выделенного
из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	28,0
глюкоза	1,7
формалин	1,3
гидроокись алюминия	остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий обладает незначительной иммуногенной эффективностью.

Пример 4.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 87,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя колибактериоза
Escherichia coli, выделенного из
местного эпизоотического очага в
питательной среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	29,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза Salmonella
typhimurium, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной среде

с титром 4-5 млрд.

микробных клеток в 1 см3	29,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя энтерококковой инфекции
Streptococcus fecalis, выделенного из
местного эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	29,0
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий обладает высокой иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица 1).

Пример 5.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 90,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры
возбудителя колибактериоза Escherichia
coli, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	30,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя сальмонеллеза Salmonella
typhimurium, выделенного из местного
эпизоотического очага в питательной среде
с титром 4-5 млрд
микробных клеток в 1 см3	30,0
суспензия клеток чистой культуры
возбудителя энтерококковой инфекции
Streptococcus fecalis, выделенного из
местного эпизоотического очага в

питательной среде с титром 4-5 млрд

микробных клеток в 1 см3	30,0
глюкоза	2,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное.

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий обладает иммуногенной активностью, у отдельных животных на месте введения препарата вызывает слабое раздражение.

Таблица 1 Сравнительная оценка эффективности вакцины
Вакцина	Доза вакцины в см3	Метод введения	Иммунобиологические свойства
Кол-во нутрий в опыте (гол)	Наличие поствакцинальных осложнений	Длительность иммунитета (мес.)	Защита в (%)
По прототипу	двукратно 1-ая доза 1,0 см3 2-ая доза 2,0 см3	Внутримышечно	1500	Угнетение, хромота, отказ от корма в течение 2-3 суток	6	60-70
По предлагаемому способу	1,0 см3	Внутримышечно	1500	нет	9	90-100

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.

Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий, включающая инактивированные формалином антигены и гидроокись алюминия, отличающаяся тем, что в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды и выделения чистых культур возбудителей, выращивание которых проводят раздельно в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см³, а затем смешивают в равных соотношениях, при этом вакцина содержит компоненты при следующем соотношении, мас.%:

суспензия клеток чистой
культуры возбудителя колибактериоза
Escherichia coli, выделенного
из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток чистой
культуры возбудителя
сальмонеллеза Salmonella typhimurium,
выделенного из местного
эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	24,0-29,0
суспензия клеток чистой
культуры возбудителя энтерококковой
инфекции Streptococcus fecalis,
выделенного из местного
эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд микробных клеток в 1 см3	24,0-29,0
глюкоза	2,0-1,0
формалин	2,0-1,5
гидроокись алюминия	остальное