Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий
Владельцы патента RU 2301680:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанскиий государственный аграрный университет (RU)
Изобретение относится к ветеринарной медицине. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенных из суспензии, приготовленной из пораженных органов павших нутрий из местного эпизоотического очага, выращенных раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой с концентрацией микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см3 и смешанных в равных соотношениях. Также вакцина содержит формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 - 38,0-41,5; суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 - 38,0-41,5; глюкоза 2,0-1,0; формалин 2,0-1,5; гидроокись алюминия - остальное. Вакцина безвредна, обладает высокой специфичностью и эффективностью. 1 табл.
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.
Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88,09, К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; протеи, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; клебсиелл, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916, от 17.06.93, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами, для нутрий не применяется.
Известна вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099084 от 30.09.94, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина содержит в качестве антигена суспензию штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП с титром 2,5-3,0 млрд. микробных клеток в 1 мл в культуральной среде, суспензию клеток штаммов Pasteurella multosida ВГНКИ №6011, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в равных соотношениях общим содержанием 2,5-3,0 млрд. микробных клеток в 1 мл питательной среды глюкозу, формалин, гидроокись алюминия и сапонин. Данная вакцина применяется для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Сырье получают путем культивирования штаммов возбудителей стрептококкоза и пастереллеза нутрий в питательной среде с низкой активностью. Использование сапонина в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.)
Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности вакцины для профилактики стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий, путем введения новых культур возбудителей, выделенных из эпизоотического очага, компонентов, исключая отрицательное и побочное влияния.
Решение задачи достигается тем, что вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий, включающая инактивированные антигены, адъювант, в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см3, смешивают в равных соотношениях, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза | |
| Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой | |
| инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| глюкоза | 2,0-1,0 |
| формалин | 2,0-1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно на мясопептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.
При раздельном культивировании чистых культур возбудителей и добавлении в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации получают концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд. в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование баксырья формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших нутрий, позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает защиту животных сразу от двух опасных инфекционных болезней стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.
Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: формолквасцовая вакцина против паратифа (сальмонеллеза) телят ТУ 46-21-166-75, утверждено 10.05.75, инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 28.03.80; вакцина против паратифа (сальмонеллеза) поросят ТУ 46-21-952-74, утверждено 15.07.74, инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 23.10.96; ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90, инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.
Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990, Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А. М.: Колос, 1995, стр.90-95.
Предложенная вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.
Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по стрептококкозу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по стрептококкозу и энтерококковой инфекции нутрий хозяйствах вакцину вводят однократно, внутримышечно в область бедра, молодняку с 45-дневного возраста по 1,0 см3, а взрослым животным по 1,5 см3. В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с двухмесячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см3, вторая - в дозе 1,5 см3. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.
К факторам, обусловливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.
Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.
Пример 1.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 75,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза | |
| Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 37,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой | |
| инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 37,5 |
| глюкоза | 0,5 |
| формалин | 1,0 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий обладает слабой иммуногенной активностью.
Пример 2.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 76,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0 инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза | |
| Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 38,0 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой | |
| инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 38,0 |
| глюкоза | 1,0 |
| формалин | 1,0 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий обладает иммуногенной активностью.
Пример 3.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 80,0 с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза | |
| Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 40,0 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой | |
| инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 40,0 |
| глюкоза | 1,7 |
| формалин | 1,3 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза энтерококковой инфекции нутрий обладает незначительной иммуногенной эффективностью.
Пример 4.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 83,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза | |
| Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 41,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой | |
| инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 41,5 |
| глюкоза | 1,0 |
| формалин | 1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий обладает иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица).
Пример 5.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза нутрий Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 85,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза | |
| Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 42,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя энтерококковой | |
| инфекции Streptococcus fecalis, выделенного из местного | |
| эпизоотического очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд. микробных клеток в 1 мл | 42,5 |
| глюкоза | 2,0 |
| формалин | 1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий обладает слабой иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.
| Таблица Сравнительная оценка эффективности вакцины | ||||||
| Вакцина | Доза вакцины, см3 | Метод введения | Иммунобиологические свойства | |||
| Кол-во нутрий в опыте (гол.) | Наличие поствакцинальных осложнений | Длительность иммунитета (мес.) | Защита (%) | |||
| По прототипу | двукратно 1-ая доза 1,0 см3 2-ая доза 2,0 см3 | Внутримышечно | 1500 | Угнетение, хромота, отказ от корма в течение 2-3 суток | 6 | 60-70 |
| По предлагаемому способу | 1,0 см3 | Внутримышечно | 1500 | нет | 9 | 90-100 |
Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.
Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий, содержащая в качестве антигенов суспензию клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, выделенных из суспензии, приготовленной из пораженных органов павших нутрий из местного эпизоотического очага, выращенных раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см3 и смешанных в равных соотношениях, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, | |
| выделенного из местного эпизоотического | |
| очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. | |
| микробных клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| энтерококковой инфекции Streptococcus fecalis, | |
| выделенного из местного эпизоотического очага | |
| в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных | |
| клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| глюкоза | 2,0-1,0 |
| формалин | 2,0-1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
