Способ анализа гемоглобина и система для его осуществления

Настоящее изобретение относится к способу анализа гемоглобина и системе для осуществления этого анализа. В частности, настоящее изобретение относится к способу определения гемоглобина в неизменной цельной крови, а также к системе, которая может быть использована при этом определении. В изобретении описан способ количественного определения гемоглобина в неразбавленной негемолизированной цельной крови, который включает в себя следующие операции: использование одноразовой капиллярной кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее чем 1 мм, заполнение указанной кюветы пробой неизмененной цельной крови, проведение первого измерения поглощения на длине волн в диапазоне 490-520 нм непосредственно на пробе в кювете, дополнительное проведение второго измерения поглощения и обработка результатов первого и второго измерений поглощения для определения концентрации гемоглобина в пробе, причем операция обработки включает в себя компенсацию светорассеяния в пробе, при этом указанная компенсация зависит от результата второго измерения поглощения. Описана также система для осуществления указанного способа. Изобретение обеспечивает: создание быстрого количественного способа определения гемоглобина в неизмененной цельной крови; создание способа определения гемоглобина в неизмененной цельной крови, который может быть осуществлен в одноразовой микрокювете; создание кюветы с капиллярным впуском и без активных реагентов и гемолитического вещества для определения гемоглобина в неизмененной цельной крови; создание способа обработки результатов измерения поглощений для определения гемоглобина в неизмененной цельной крови; создание системы для осуществления способов определения гемоглобина в неизмененной цельной крови. 3 н. и 18 з.п. ф-лы, 5 ил.

 

Область изобретения

Изобретение относится к способу анализа гемоглобина и системе для осуществления этого анализа. В частности, настоящее изобретение относится к способу определения гемоглобина в неизмененной цельной крови, а также к системе, которая может быть использована при этом определении.

Предпосылки к созданию изобретения

Одноразовая кювета для отбора пробы жидкости, смешивания пробы с реагентом и прямого проведения оптических анализов пробы, смешанной с реагентом, уже описана в патенте США №4088448. Эта известная кювета имеет различные достоинства, так как она упрощает процедуру отбора проб, снижает число принадлежностей и существенно повышает точность анализа за счет того, что процедура анализа становится независимой от профессиональных навыков оператора, производящего анализ. Конструкция кюветы, которая основана на этом же принципе и улучшает характеристики текучести, раскрыта в патенте США №5674457.

Одноразовая кювета, выполненная в соответствии с указанными патентами, в настоящее время широко используется для измерения содержания гемоглобина (для Hb определения) в неразбавленной цельной крови. Полость кюветы предварительно обрабатывают реагентом для того, чтобы после отбора пробы крови в кювету разрушались (распадались) стенки красных кровяных клеток (эритроцитов) и начиналась химическая реакция. Результат реакции позволяет произвести Hb определение за счет измерения поглощения непосредственно через прозрачные стенки кюветы, которая в зоне измерения, именуемой также оптическим окном, имеет заданное и точно определенное расстояние между внутренними поверхностями противоположных плоских стенок. Способ измерения основан на модифицированном способе определения азидмет (azidmet) гемоглобина в соответствии с публикацией Vanzetti, G., Am. J. Lab. & Clin. Med. 67, 116 (1966).

Спектрофотометрические измерения производят на длинах волн 570 и 880 нм. Этот способ количественного измерения, который основан на сухой химии, пользуется значительным успехом, о чем можно судить по статье von Schenck et al in Clinical Chemistry, vol 32, No 3, 1986, так как этот способ дает одинаковые или даже более высокие результаты по сравнению с результатами, полученными при помощи унифицированных мокрых способов определения Hb. Использованный реагент включает в себя дезоксихолат натрия, который производит гемолиз красных кровяных клеток, а также азид натрия и нитрит натрия, которые преобразуют гемоглобин в азидметгемоглобин.

Принимая во внимание гигроскопические свойства использованных реагентов, срок годности при хранении кювет ограничен, и требуется производить хранение кювет в герметичных упаковках, содержащих сушильный агент. Еще более тревожным является тот факт, что в странах с влажным климатом кювета должна быть использована в течение всего нескольких минут после извлечения из упаковки, так как в противном случае реагенты разрушаются и точность измерения снижается до неприемлемой.

Однако проблемы, возникающие в результате гигроскопических свойств использованных реагентов, могут быть устранены, так как было обнаружено, что эти реагенты не обязательно должны быть использованы, как это показано в находящейся на одновременном рассмотрении заявке PCT SE 01/01442, в соответствии с которой первое измерение поглощения проводят в диапазоне длин волн 490520 нм, непосредственно на пробе в микрокювете. Однако в соответствии с этой патентной публикацией необходимо, чтобы до проведения измерения был проведен гемолиз крови. Таким образом, полость кюветы должна содержать гемолитическое средство для разрушения красных кровяных клеток и освобождения гемоглобина, содержащегося в этих клетках. Необходимость использования гемолитического средства при проведении фотометрических измерений поглощения гемоглобина в пробе крови также раскрыта, например, в патенте США №5064282 (Artel).

Количественные способы оптического определения гемоглобина в цельной крови без использования гемолитического средства известны, однако все эти способы являются относительно сложными. Это в первую очередь зависит от негомогенности (неоднородности) крови за счет высокой концентрации красных кровяных клеток, следствием чего является рассеяние света при взаимодействии с частицами негомогенных проб крови. В результате этого свет не проходит в прямом направлении через пробу, а отклоняется в диапазоне углов рассеяния. Другим фактором, который создает проблемы, является то, что кровь может содержать до пяти различных разновидностей гемоглобина. В качестве патентных публикаций, рассматривающих указанные проблемы, можно привести, например, патент США №6262798 (Shepherd) и публикацию WO 01/53806 (Radiometer).

В соответствии с патентом США №6262798 необходимо использовать множество длин волн для того, чтобы обеспечить правильное измерение. Тот факт, что необходимо множество длин волн, делает спектрофотометр сравнительно сложным. Длины волн выбирают по их способности различать разновидности гемоглобина при минимальном рассеянии и при максимальном поглощении. В этом патенте также раскрыто использование широкого датчика (фотоприемника), который снижает проблему рассеяния в диапазоне измерения.

В публикации WO 01/53806 раскрыто устройство, которое особенно хорошо подходит для оптических измерений на цельной крови. Это устройство содержит абсорбционный светофильтр или интерференционный светофильтр, который производит коррекцию вариаций чувствительности фотоприемника и эффективной оптической длины пути, которые наблюдаются при изменении уровня рассеяния. В этом устройстве использован широкий фотоприемник для приема рассеянного света, проходящего через абсорбционный светофильтр или интерференционный светофильтр.

Авторы настоящего изобретения совершенно неожиданно обнаружили, что точное определение полного количества гемоглобина в цельной крови может быть сделано не только без использования гемолитического вещества, но также и без использования множества длин волн, как это показано в патенте США №6262798, или без специального абсорбционного или интерференционного светофильтра, который обеспечивает коррекцию вариаций чувствительности фотоприемника и эффективной оптической длины пути, что наблюдается при изменении уровня рассеяния, как это показано в публикации WO 01/53806. В качестве наиболее близкого аналога следует рассматривать патент США №6262798

Задачи настоящего изобретения

Первой задачей настоящего изобретения является создание быстрого количественного способа определения гемоглобина в неизмененной цельной крови.

Второй задачей настоящего изобретения является создание способа определения гемоглобина в неизмененной цельной крови, который может быть осуществлен в одноразовой микрокювете.

Третьей задачей настоящего изобретения является создание кюветы с капиллярным впуском и без активных реагентов и гемолитического вещества для определения гемоглобина в неизмененной цельной крови.

Четвертой задачей настоящего изобретения является создание способа обработки результатов измерения поглощений для определения гемоглобина в неизмененной цельной крови.

Пятой задачей настоящего изобретения является создание системы для осуществления способов определения гемоглобина в неизмененной цельной крови.

Указанные ранее и другие задачи настоящего изобретения будут более ясны из последующего детального описания со ссылкой на сопроводительные чертежи.

Сущность изобретения

В соответствии с первым аспектом настоящего изобретения предлагается способ определения гемоглобина, который содержит следующие операции:

использование одноразовой капиллярной кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее чем 1 мм,

заполнение указанной кюветы пробой неизмененной цельной крови,

проведение первого измерения поглощения на длине волн в диапазоне 490-520 нм непосредственно на пробе в кювете,

дополнительное проведение второго измерения поглощения и

обработка результатов первого и второго измерений поглощения для определения концентрации гемоглобина в пробе, причем операция обработки включает в себя компенсацию светорассеяния в пробе, при этом указанная компенсация зависит от результата второго измерения поглощения.

В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предлагается способ определения концентрации гемоглобина в пробе неразбавленной негемолизированной цельной крови по результату первого измерения поглощения в пробе, произведенного на длине волн в диапазоне 490-520 нм, и по результату второго измерения поглощения в пробе. Указанный способ предусматривает: проведение обработки результатов первого и второго измерений поглощения для определения концентрации гемоглобина в пробе, причем операция обработки предусматривает компенсацию светорассеяния в пробе, при этом указанная компенсация зависит от результата второго измерения поглощения.

В соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения предлагается система для количественного определения гемоглобина в неразбавленной негемолизированной цельной крови, которая включает в себя:

средство для излучения света на первой длине волн в первом диапазоне 490-520 нм и на второй длине волн во втором диапазоне,

держатель кюветы, выполненный с возможностью введения в него капиллярной кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее чем 1 мм и содержит пробу неизмененной цельной крови,

датчик для обнаружения света, проходящего через пробу, при первом измерении поглощения для света в указанном первом диапазоне и при втором измерении поглощения для света в указанном втором диапазоне и

блок обработки для проведения обработки результатов первого и второго измерений поглощения для того, чтобы определить концентрацию гемоглобина в пробе, причем обработка предусматривает компенсацию светорассеяния в пробе, при этом указанная компенсация зависит от результата второго измерения поглощения.

Совершенно неожиданно авторы настоящего изобретения обнаружили, что количественные определения гемоглобина могут быть легко осуществлены не только без таких химических реагентов, как азид натрия и нитрит натрия, но и без гемолитического вещества, непосредственно на неизмененной, то есть неразбавленной и негемолизированной, цельной крови. Так как неизмененная цельная кровь содержит клетки крови, в пробе имеется существенное светорассеяние. Таким образом, можно ожидать, что количественное определение гемоглобина в неразбавленной негемолизированной цельной крови потребует измерения и анализа рассеянного света. В соответствии с настоящим изобретением предлагается производить определение гемоглобина при помощи двух измерений поглощения, без необходимости количественного определения коэффициентов рассеяния компонентов крови или без физического снижения воздействий рассеянного света на результаты измерений. Совершенно неожиданно было обнаружено, что за счет компенсации уровня поглощения пробы при помощи второго измерения поглощения легко можно учесть эффект светорассеяния. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением обеспечивается простое определение гемоглобина, которое требует проведения только двух измерений поглощения.

Таким образом, было установлено, что в соответствии с настоящим изобретением гигроскопические реагенты могут быть исключены. Более того, было обнаружено, что может быть сокращено время, необходимое для проведения аналитического определения. Следует иметь в виду, что при проведении большого объема анализов, например, в клиниках и в банках крови, временной аспект является очень важным.

В контексте настоящего изобретения термин "измерение поглощения" следует понимать как измерение, связанное с поглощением в пробе. При проведении измерения поглощения интенсивность светового потока после взаимодействия с пробой (после прохождения через пробу) сравнивают с интенсивностью светового потока, освещающего пробу (подводимого к пробе). Измеренный свет соответствует коэффициенту пропускания пробы. Свет, который не доходит до фотоприемника (датчика), считают поглощенным. Таким образом, результаты измерений коэффициента пропускания могут быть использованы вместо коэффициента поглощения. Так как коэффициент пропускания является обратно пропорциональным коэффициенту поглощения, то за счет измерения пропускания можно определять поглощение. Однако измеренное поглощение не только соответствует свету, который был действительно поглощен в пробе, но и свету, который был рассеян в пробе и не поступил на фотоприемник.

Кроме того, термин "определение" следует понимать как измерение, не обязательно позволяющее получать абсолютно точное значение концентрации гемоглобина в пробе. Таким образом, концентрацию гемоглобина "определяют" с разумным допустимым пределом погрешности, так что полученный результат просто свидетельствует о величине концентрации, но не обязательно дает ее абсолютное значение.

Краткое описание чертежей

Далее изобретение будет описано более подробно в качестве примера со ссылкой на сопроводительные чертежи, на которых:

фиг.1 - блок-схема способа в соответствии с настоящим изобретением,

фиг.2 - схематичный график оптической плотности гемоглобина,

фиг.3 - схематичный вид системы в соответствии с настоящим изобретением,

фиг.4A - график предварительной оценки способа в соответствии с настоящим изобретением, при сравнении с используемой в настоящее время микрокюветой HemoCue,

фиг.4B - график предварительной оценки способа в соответствии с настоящим изобретением, при сравнении с международным эталонным способом.

Подробное описание изобретения

Обратимся теперь к рассмотрению фиг.1, со ссылкой на которую теперь будет описан способ определения гемоглобина в соответствии с настоящим изобретением. Прежде всего, при проведении операции 1, одноразовую капиллярную кювету заполняют пробой неизмененной цельной крови. Таким образом, получают пробу для проведения анализа. Затем, при осуществлении операции 2, проводят первое измерение поглощения пробы на длине волн в диапазоне 490-520 нм. После этого, при осуществлении операции 3, проводят второе измерение поглощения пробы. Второе измерение поглощения проводят на длине волн в диапазоне 650-1200 нм. Это второе измерение поглощения используют для компенсации светорассеяния в пробе, как это обсуждается далее более подробно. Наконец, при осуществлении операции 4, проводят обработку результатов измерений с использованием заданного алгоритма определения концентрации гемоглобина в пробе.

В качестве одноразовой микрокюветы, применяемой в соответствии с настоящим изобретением, может быть использована микрокювета такого типа, которая описана в патенте США №4088448 или преимущественно в патенте США №5674457, которые включены в данное описание в качестве ссылки. Кювета может быть определена как единый корпус, имеющий по меньшей мере одну полость с оптическим окном (с зоной измерений), причем две плоские или изогнутые поверхности, обращенные к полости, установлены на заданном расстоянии друг от друга и, следовательно, определяют заданную оптическую длину пути. Это расстояние между поверхностями, ограничивающими зону измерений, является критическим параметром для обеспечения надлежащей оптической длины пути при измерении гемоглобина. Оптическая длина пути должна быть меньше чем 1 мм для того, чтобы интенсивность светового потока, проходящего через пробу в кювете, была достаточна для определения гемоглобина в пробе. В соответствии с предпочтительным вариантом это расстояние составляет менее чем 0,2 мм, предпочтительно от 0,05 до 0,2 мм. Расстояние между внутренними поверхностями опоры полости предпочтительно составляет около 0,1-2 мм, что позволяет пробе эффективно входить в полость за счет капиллярной силы через впускное отверстие полости, которое сообщается с внешней стороной корпусного элемента. Более того, полость имеет заданный фиксированный объем, который составляет ориентировочно менее чем 25 мкл. Никакие активные добавки, такие как реагенты или гемолитические вещества, не требуются для определения по способу в соответствии с настоящим изобретением.

Кюветы в соответствии с настоящим изобретением могут быть изготовлены из любого подходящего материала, который обеспечивает жесткие пределы допуска. Преимущественно, кювету изготавливают при помощи литьевого формования из прозрачного полимерного материала.

Для того чтобы преодолеть проблемы, связанные с капиллярным заполнением кюветы, может потребоваться предварительная обработка внутренних поверхностей кюветы, чтобы придать этим поверхностям гидрофильную характеристику. Это может быть осуществлено за счет покрытия поверхностей соответствующим детергентом, таким как Brij 35. Другой возможностью является выбор гидрофильного материала для изготовления кюветы. Критической характеристикой способа в соответствии с настоящим изобретением является то, что определение поглощения должно быть проведено на длине волн в диапазоне 490-520 нм, предпочтительно в диапазоне 500-510 нм, более предпочтительно 506 нм. Второе компенсирующее измерение поглощения обычно проводят на длине волн в диапазоне 650-251200 нм, предпочтительно в диапазоне 850-910 нм, более предпочтительно в диапазоне 860-900 нм.

Измерения поглощений производят непосредственно на цельной крови в пробе, при этом кровь является неизмененной (неразбавленной и негемолизированной).

В диапазоне длин волн 490-520 нм поглощения пяти различных форм гемоглобина, а именно окси-, деокси-, карбокси-, мет- и сульфгемоглобина, являются аналогичными и существенными. Таким образом, поглощение в этом диапазоне длин волн будет зависеть только незначительно от распределения между различными формами гемоглобина в крови. Отметим, что на 506 нм разность поглощательностей окси- и деоксигемоглобина близка к нулю. Так как эти формы гемоглобина являются преобладающими в нормальной крови, то поглощение окси- и деоксигемоглобина может быть преимущественно использовано для определения коэффициента поглощения, чтобы найти связь измеренного поглощения с концентрацией гемоглобина при 506 нм. Таким образом, сделаны некоторые допущения относительно содержаний различных форм гемоглобина в пробе крови. Следовательно, определение гемоглобина не будет очень точным или обработка результатов измерения должна быть изменена, если измерения проводят на пробе крови, имеющей сильно отличающееся распределение форм гемоглобина. Более того, измерения позволяют определять только полную концентрацию гемоглобина, а не концентрации специфических форм гемоглобина.

Второе измерение поглощения проводят на такой длине волн, где поглощение света в крови является существенно меньшим. Такое измерение поглощения, предпочтительно, может быть проведено на длине волн в диапазоне 650-1200 нм. Различия между измерениями поглощения затем считают вызванными поглощением гемоглобина.

Светорассеяние изменяется при изменении концентрации гемоглобина в пробе, однако следует иметь в виду, что светорассеяние зависит не только от концентрации гемоглобина. Светорассеяние вызвано взаимодействием света с частицами в крови, такими как красные кровяные клетки, белые кровяные клетки, тромбоциты, липиды и другие макромолекулы. В соответствии с настоящим изобретением было совершенно неожиданно обнаружено, что эффект светорассеяния может быть связан с результатом второго измерения поглощения, что объясняется далее со ссылкой на график фиг.2. На фиг.2 сплошной линией схематично показано измеренное поглощение в первой пробе, имеющей высокую концентрацию гемоглобина. Поглощение включает в себя как истинное поглощение, так и рассеянный свет, который не доходит до датчика. Пунктирной линией на фиг.2 схематично показано измеренное поглощение во второй пробе, имеющей низкую концентрацию гемоглобина. Следует иметь в виду, что схематический график на фиг.2 только подчеркивает основные характеристики поглощения проб цельной крови и не иллюстрирует поглощение реальных проб. Как это показано на фиг.2, разность поглощения для первой пробы между первой длиной волн при 506 нм и второй длиной волн при 880 нм, главным образом, равна соответствующей разности поглощения для второй пробы. Следовательно, если концентрацию гемоглобина определять непосредственно по разностям измеренных поглощений, то может быть получен ошибочный результат по меньшей мере для одной из проб. Таким образом, необходима компенсация светорассеяния, причем в соответствии с настоящим изобретением нашли, что компенсация уровня поглощения позволяет учитывать светорассеяние и позволяет осуществлять простое определение гемоглобина.

Было эмпирически установлено, что за счет использования компенсации, которая является пропорциональной уровню поглощения, может быть получено правильное значение концентрации гемоглобина.

В соответствии с изложенным выше результаты измерений поглощения должны быть обработаны для определения концентрации гемоглобина в пробе. Эта обработка может быть осуществлена по заданному алгоритму. Этот алгоритм рассчитывает концентрацию гемоглобина в соответствии с описанной выше схемой.

Компенсация светорассеяния преимущественно зависит от результата второго измерения поглощения. Функция компенсации может быть определена путем проведения измерений поглощения на наборе проб крови, имеющих известные концентрации гемоглобина. Эти измерения поглощения проводят в предложенной схеме измерения. При этом компенсацию светорассеяния, необходимую для получения правильных результатов, сравнивают со значениями второго измерения поглощения. Указанным образом может быть найдена функция второго измерения поглощения, которая дает компенсацию, позволяющую найденным концентрациям гемоглобина иметь допустимый предел погрешности.

В упрощенной модели компенсация является линейно зависимой от результата второго измерения поглощения по меньшей мере в диапазоне результата второго измерения поглощения. Этот диапазон результата второго измерения поглощения может включать в себя типичные значения второго измерения поглощения, которые получены в специфической схеме измерения.

Обработка позволяет определять концентрацию гемоглобина в пробе за счет вычисления по следующей формуле:

[Tot Hb]=(Abs₁-Abs₂)·k+F(Abs₂),

в которой [Tot Hb] представляет собой полную концентрацию гемоглобина в пробе, Abs₁ представляет собой измеренную оптическую плотность для первого измерения поглощения, Abs₂ представляет собой измеренную оптическую плотность для второго измерения поглощения, k представляет собой калибровочный коэффициент, который зависит от схемы измерения, а F(Abs₂) является функцией, которая зависит от измеренной оптической плотности второго измерения поглощения. Калибровочный коэффициент k может быть специфическим для каждого средства измерения, использованного для определения гемоглобина. Компенсирующая функция F(Abs₂) может иметь постоянную часть, которая зависит от поверки каждого средства измерения, и переменную часть, которая зависит от результата второго измерения поглощения и которую находят в соответствии с описанным выше. В данном случае переменная часть может быть равна нулю для результата второго измерения поглощения, который находится в центре диапазона результатов второго измерения поглощения.

Обратимся теперь к рассмотрению фиг.3, на которой показана система для осуществления описанного выше способа. Система содержит средство 10 для излучения света на первой длине волн в первом диапазоне 490-520 нм и на второй длине волн во втором диапазоне 650-1200 нм. Это средство 10 для излучения света может быть реализовано при помощи комбинации источника света, излучающего на нескольких длинах волн или в широком диапазоне длин волн, со светофильтрами. Таким образом, источник света выполнен с возможностью излучения света как на первой длине волн, так и на второй длине волн. Использование светофильтра для испускаемой длины волн позволяет производить избирательный контроль в одном из этих диапазонов. Альтернативно, первый и второй источники света могут быть использованы для излучения первой и второй длин волн, соответственно. В качестве источников света могут быть использованы светоизлучающие диоды. Затем, путем включения и выключения двух источников света, средство 10 для излучения света может производить избирательный контроль излучения света на первой или на второй длине волн.

Первая длина волн, излучаемая при помощи средства 10 для излучения света, предпочтительно лежит в диапазоне 500-510 нм, более предпочтительно равна 506 нм. Более того, вторая длина волн, излучаемая при помощи средства 10 для излучения света, предпочтительно лежит в диапазоне 850-910 нм, более предпочтительно в диапазоне 860-900 нм.

Система также содержит держатель 12 кюветы, выполненный с возможностью введения в него капиллярной кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее чем 1 мм и содержит пробу неизмененной цельной крови. При установке кюветы в держатель 12 необходимо правильно расположить оптическое окно так, чтобы оно было освещено светом от источника света. Держатель кюветы, предпочтительно, предназначен для установки в него кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее чем 0,2 мм, более предпочтительно в диапазоне 0,05-0,2 мм.

Свет, который проходит через пробу, поступает на фотоприемник (датчик) 14, при этом первое измерение поглощения производят для света в первом диапазоне, а второе измерение поглощения производят для света во втором диапазоне.

Система также содержит блок 16 обработки, предназначенный для обработки результатов первого и второго измерений поглощения, чтобы найти концентрацию гемоглобина в пробе в соответствии с описанным выше алгоритмом.

Система может быть преимущественно выполнена в виде фотометра, который содержит средство 10 для излучения света, держатель 12 кюветы и фотоприемник 14. Фотометры, которые годятся для осуществления указанных измерений, могут быть получены путем модификации фотометров, с использованием светофильтров соответствующей длины волн и светоизлучающих диодов. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения фотометр измеряет оптическую плотность на двух длинах волн, а встроенный микропроцессор рассчитывает, в соответствии с программируемым алгоритмом, полную концентрацию гемоглобина в крови. Таким образом, не требуется никакой абсорбционный или интерференционный светофильтр, обеспечивающий коррекцию вариаций чувствительности фотоприемника и эффективной оптической длины пути, как это раскрыто в публикации WO 01/53806.

В последнем случае блок 16 обработки встроен в фотометр. Однако блок 16 обработки может быть также и подключен к фотометру и, следовательно, выполнен в виде отдельного устройства. Например, может быть использован компьютер, подключенный к фотометру.

Фотоприемник 14 может быть устроен таким образом, чтобы принимать главным образом только прямо падающий свет, так как рассеянный свет принимать не нужно. Это означает, что фотоприемник 14 принимает свет, который находится главным образом внутри диаметра луча света, освещающего пробу и непосредственно проходящего через пробу. Само собой разумеется, что некоторая доля света может рассеиваться, все еще находясь внутри этого диаметра. В соответствии с предпочтительным вариантом диаметр зоны обнаружения фотоприемника 14 обычно составляет около 2 мм. Фотоприемник 14 преимущественно расположен на расстоянии менее 10 мм от держателя пробы. Это приводит к тому, что фотоприемник принимает только тот свет, который рассеивается под малыми углами.

Далее приведены примеры, не имеющие ограничительного характера, которые поясняют способ в соответствии с настоящим изобретением.

Было обнаружено, что период времени, который требуется для проведения анализа крови при использовании способа в соответствии с настоящим изобретением, ориентировочно на 30 секунд короче по сравнению с известным и широко применяемым в настоящее время способом определения гемоглобина в микрокюветах HemoCue. Это позволяет снизить полное время определения гемоглобина, что может быть полезно в сильно загруженных больницах или в других ситуациях, когда делают такие анализы крови. Другое преимущество заключается в том, что не используют кювету, которая содержит активные реагенты или гемолитические средства. Таким образом, хранение кювет может производиться в помещениях с различной температурой и влажностью, что делает обращение с кюветами ранее их использования намного проще.

Предварительное сравнение нового способа со способом HemoCue показано на фиг.4A. Это сравнение проведено в лабораторных условиях. Можно видеть, что совпадение результатов, полученных обоими способами, является очень хорошим.

Спектроскопические измерения поглощения проводят ориентировочно на длине волн 570 нм для известного способа и ориентировочно на 505 нм для нового способа. Для того и другого способов компенсирующие измерения проводили ориентировочно на длине волн 880 нм.

Кроме того, второе сравнение нового способа со стандартным способом ICSH показано на фиг.4B. Можно видеть, что совпадение результатов, полученных обоими способами, является очень хорошим.

Несмотря на то, что были описаны некоторые предпочтительные варианты осуществления изобретения, совершенно ясно, что они не носят ограничительного характера, причем в настоящее изобретение специалистами в данной области могут быть внесены изменения и дополнения, которые не выходят однако за рамки приведенной далее формулы изобретения.

1. Способ количественного определения гемоглобина в неразбавленной негемолизированной цельной крови, который включает в себя следующие операции: использование одноразовой капиллярной кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее 1 мм, заполнение указанной кюветы пробой неизмененной цельной крови, проведение первого измерения поглощения на длине волн 490-520 нм непосредственно на пробе в кювете, дополнительное проведение второго измерения поглощения на длине волн, отличающихся от первых длин волн, и при которых поглощение преимущественно меньше, чем при первых длинах волн, и обработка результатов первого и второго измерений поглощения для определения концентрации гемоглобина в пробе, причем операция обработки включает в себя компенсацию светорассеяния в пробе, при этом указанная компенсация зависит от результата второго измерения поглощения, в котором указанную обработку, определяющую концентрацию гемоглобина в пробе, вычисляют по следующей формуле:

[Tot Hb]=(Abs₁-Abs₂)·k+F(Abs₂),

в которой [Tot Hb] представляет собой полную концентрацию гемоглобина в пробе, Abs₁ представляет собой измеренную оптическую плотность для первого измерения поглощения, Abs₂ представляет собой измеренную оптическую плотность для второго измерения поглощения, k представляет собой калибровочный коэффициент, который зависит от схемы измерения, a F(Abs₂) является функцией, которая зависит от измеренной оптической плотности второго измерения поглощения.

2. Способ по п.1, в котором первое измерение поглощения проводят на длине волн 500-510 нм, более предпочтительно 506 нм.

3. Способ по п.1 или 2, в котором второе измерение поглощения проводят на длине волн 650-1200 нм, более предпочтительно 850-910 нм, наиболее предпочтительно 860-900 нм.

4. Способ по п.1, в котором измерение поглощения проводят на фотометре без абсорбционного светофильтра или без интерференционного светофильтра, что обеспечивает коррекцию вариаций чувствительности фотоприемника и эффективной оптической длины пути.

5. Способ по п.1, в котором указанная кювета имеет оптическую длину пути менее 0,2 мм.

6. Способ по п.5, в котором указанная кювета имеет оптическую длину пути 0,05-0,2 мм.

7. Способ определения концентрации гемоглобина в пробе неразбавленной негемолизированной цельной крови по результату первого измерения поглощения в пробе, произведенного на длине волн 490-520 нм, и по результату второго измерения поглощения в пробе на длине волн, отличающихся от первых длин волн, и при которых поглощение преимущественно меньше, чем при первых длинах волн, причем указанный способ предусматривает проведение обработки результатов первого и второго измерений поглощения для определения концентрации гемоглобина в пробе, в котором операция обработки предусматривает компенсацию светорассеяния в пробе, причем указанная компенсация зависит от результата второго измерения поглощения, в котором указанную обработку, определяющую концентрацию гемоглобина в пробе, вычисляют по следующей формуле:

[Tot Hb]=(Abs₁-Abs₂)·k+F(Abs₂),

в которой [Tot Hb] представляет собой полную концентрацию гемоглобина в пробе, Abs₁ представляет собой измеренную оптическую плотность для первого измерения поглощения, Abs₂ представляет собой измеренную оптическую плотность для второго измерения поглощения, k представляет собой калибровочный коэффициент, который зависит от схемы измерения, a F(Abs₂) является функцией, которая зависит от измеренной оптической плотности второго измерения поглощения.

8. Способ по п.7, в котором первое измерение поглощения проводят на длине волн 500-510 нм, более предпочтительно на длине волн 506 нм.

9. Способ по п.7 или 8, в котором второе измерение поглощения проводят на длине волн 650-1200 нм, более предпочтительно 850-910 нм, наиболее предпочтительно 860-900 нм.

10. Система для количественного определения гемоглобина в неразбавленной негемолизированной цельной крови, которая включает в себя средство для излучения света на первой длине волн в первом диапазоне 490-520 нм и на второй длине волн во втором диапазоне, при которой поглощение света предпочтительно меньше, чем при первой длине волн, держатель кюветы, выполненный с возможностью введения в него капиллярной кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее 1 мм и содержит пробу неизмененной цельной крови, фотоприемник для обнаружения света, проходящего через пробу, при первом измерении поглощения для света в указанном первом диапазоне и при втором измерении поглощения для света в указанном втором диапазоне и блок обработки для проведения обработки результатов первого и второго измерений поглощения для определения концентрации гемоглобина в пробе, причем обработка предусматривает компенсацию светорассеяния в пробе, при этом указанная компенсация зависит от результата второго измерения поглощения, и в которой указанную обработку, определяющую концентрацию гемоглобина в пробе, вычисляют по следующей формуле:

[Tot Hb]=(Abs₁-Abs₂)·k+F(Abs₂),

в которой [Tot Hb] представляет собой полную концентрацию гемоглобина в пробе, Abs₁ представляет собой измеренную оптическую плотность для первого измерения поглощения, Abs₂ представляет собой измеренную оптическую плотность для второго измерения поглощения, к представляет собой калибровочный коэффициент, который зависит от схемы измерения, a F(Abs₂) является функцией, которая зависит от измеренной оптической плотности второго измерения поглощения.

11. Система по п.10, в которой указанное средство для излучения света, держатель кюветы и фотоприемник предусмотрены в фотометре.

12. Система по п.11, в которой указанный блок обработки встроен в фотометр.

13. Система по п.11, в которой указанный блок обработки подключен к фотометру.

14. Система по п.10, в которой область обнаружения фотоприемника имеет размер, позволяющий фотоприемнику принимать только главным образом прямо падающий свет.

15. Система по п.14, в которой фотоприемник расположен на расстоянии менее 10 мм от держателя пробы.

16. Система по п.10, в которой указанное средство для излучения света содержит единственный источник света, который излучает свет на первой длине волн и излучает свет на второй длине волн.

17. Система по п.10, в которой средство для излучения света содержит первый источник света, который выполнен с возможностью излучения света на первой длине волн, и второй источник света, который выполнен с возможностью излучения света на второй длине волн.

18. Система по п.10, в которой первая длина волн излучается при помощи средства для излучения света в диапазоне 500-510 нм, более предпочтительно равна 506 нм.

19. Система по п.10, в которой вторая длина волн излучается при помощи средства для излучения света в диапазоне 650-1200 нм, более предпочтительно в диапазоне 850-910 нм, наиболее предпочтительно в диапазоне 860-900 нм.

20. Система по п.10, в которой держатель кюветы выполнен с возможностью введения в него кюветы, которая имеет оптическую длину пути менее 0,2 мм.

21. Система по п.20, в которой держатель кюветы выполнен с возможностью введения в него кюветы, которая имеет оптическую длину пути 0,05-0,2 мм.