Способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин
Владельцы патента RU 2342660:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для прогнозирования нарушений фертильности у мужчин. Сущность способа: у мужчин путем проточной цитометрии спермы исследуют соотношение лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+. При его значениях менее 0,71 и более 1,20 прогноз фертильности признается неблагоприятным. Использование способа позволяет повысить точность прогнозирования результатов консервативного лечения бесплодия у мужчин. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики и лечения мужского бесплодия.
По данным литературы классическим методом оценки мужской фертильности является лабораторная оценка концентрации, морфологии и подвижности сперматозоидов по детально разработанным критериям ВОЗ [WHO laboratory manual for the examination of human sperm and semen-cervical mucus interaction. - WHO, 4-th edn.: Cambridqe univerciti pres; 1999. - 128 p.]. Однако механистическая трактовка клинической спермограммы далеко не всегда соответствует реальному состоянию мужской фертильности. Известны случаи бесплодия при нормозооспермии [Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 1. Андрология и генитальная хирургия. 2001, № 1, С.72-77]. Кроме того, констатация состоявшихся нарушений спермограммы свидетельствует об уже произошедших процессах и не имеет большого прогностического значения на практике.
Божедомов В.А. с соавт. (2001) [Божедомов В.А., Лоран О.Б., Сухих Г.Т. Этиология и патогенез мужского аутоиммунного бесплодия. Часть 2. Андрология и генитальная хирургия. 2001, № 1, С.78-87] предлагал использовать в качестве прогностического критерия определение относительного количества подвижных сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами (АСАТ). По их мнению, негативный прогноз фертильности констатируется при превышении указанным показателем уровня в 10%. В качестве методов детекции сперматозоидов, покрытых АСАТ, предлагалось применение проточной цитофлуорометрии или MAR (mixer agglutination reaction) [Jager S., Kremer J., van Sloshteren-Draaisma T.A simple method of screening for antisperm antibodies in the human male. Int. J. Fertil. - 1978. - V.23. - P.12-21]. Однако нарушение фертильности вследствие появления АСАТ в сперме является частной причиной мужского бесплодия, встречается при ряде заболеваний и не носит универсального характера.
По мнению Fujisawa М. и Ishikawa Т. (2003) [Fujisawa M, Ishikawa T. Soluble forms of Fas and Fas ligand concentrations in the seminal plasma of infertile men with varicocele. J. Urol. 2003 Dec; 170 (6 Pt 1): 2363 - 5], ключевым физиологическим регулятором, лимитирующим размер популяции герминативных клеток в яичке, является апоптоз. Имеется высокая достоверная корреляция между апоптозом спермы и мужским бесплодием. Наиболее распространенный метод идентификации клеток, вступивших на путь апоптоза, состоит в обнаружении свободных 3-ОН концов в разорванных молекулах фрагментированной ДНК с помощью терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (TdT). Известный по сокращенному названию TUNEL (TdT-mediated nick end labeling), этот метод дает возможность определять апоптотические клетки не только in vivo, но и подсчитывать их в суспензиях с помощью проточной цитофлуорометрии или радиометрии [Gavrivlly Y., Shrman Y., Bensasson S.A. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation. J. Cell. Biol. - 1992, vol.119, p.493-501].
Этот способ был избран в качестве прототипа.
Предлагаемый способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин основан на иммунологическом исследовании спермы и заключается в вычислении специального индекса, рассчитываемого как отношение относительного количества лимфоцитов эякулята с фенотипом CD25+ к лимфоцитам с фенотипом CD95+, определяемых методом проточной цитометрии с помощью моноклональных антител анти-СD25 и анти-СD95.
Технический результат предлагаемого способа заключается в повышении точности прогнозирования результатов консервативного лечения бесплодия у мужчин на основе анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+ в эякуляте. Позитивный прогноз мужской фертильности констатируется при значении данного соотношения от 0,71 до 1,20. При выходе показателя за указанные пределы прогноз фертильности неблагоприятен.
Предлагаемый способ использован в процессе обследования 24 мужчин, обратившихся по поводу бесплодного брака. Результаты исследований сведены в таблицу.
После применения предлагаемого способа прогнозирования мужского бесплодия, точный прогноз результатов лечения был определен у всех обратившихся, причем прогноз, установленный на основании анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+и CD95+ в эякуляте (заявляемый способ), совпал с прогнозом, базирующимся на основании контрольного обследования пациентов после лечения.
Новизна предлагаемого способа заключается в том, что впервые на основании анализа соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+и CD95+ в эякуляте предлагается способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин.
Примеры из практики клинического применения способа.
Пример 1
Больной Ж., 32 года.
Жалобы на бесплодие в браке, периодические умеренные боли в промежности, мошонке, нижних отделах живота.
Из анамнеза: Бесплодный брак в течении 2 лет, ранее не лечился. Супруге 28 лет, гинекологически здорова, ранее беременностей не имела.
Объективно: Гиперстеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы без особенностей.
Осмотр per rectum: Простата нормальных размеров и формы, несколько тестоватой консистенции, умеренно болезненная при пальпации.
УЗИ простаты, мочевого пузыря, семенных пузырьков и мошонки: Мочевой пузырь с ровным внутренним контуром, физиологической емкости. Простата с четкими контурами, размеры 28×40×34 мм, неравномерно повышенной эхоплотности, однородной структуры, междолевая бороздка выражена. Семенные пузырьки симметричны, размеры: левый 11 мм, правый 9 мм, содержимое их гомогенно. Яички находятся в мошонке, с ровными четкими контурами, структура яичек однородна, эхоплотность равномерная. Размеры яичек: правое 37×20 мм, левое 39×23 мм.
Мазок из уретры:
Лейкоциты 1-2-0 в поле зрения
Эпителий полиморфный - ++
Tr - не выявлено
Gn - не выявлено
Секрет простаты:
Лейкоциты: 20-25 в поле зрения,
Эритроциты - нет
Лецитиновые зерна - ++
| Спермограмма: | |
| Объем эякулята | 3,5 мл |
| Вязкость | N |
| Лейкоциты | Единичные |
| Сперматогенный эпителий | 1% |
| Количество сперматозоидов в 1 мл | 150000000 |
| Подвижность категории А | 0% |
| Подвижность категории В | 40% |
| Подвижность категории С | 35% |
| Подвижность категории D | 25% |
| Патологические формы | 75% |
| Иммунограмма эякулята. | |
| Показатель | Лимфоциты, % |
| CD25+ | 8,2 |
| CD95+ | 8,86 |
| CD25+/CD95+ | 0,93 |
ПЦР: Инфекций, передающихся половым путем, не выявлено.
Бактериологический анализ секрета простаты:
Sthaemolit. - <102 - КОЕ\мл.
Клинический диагноз: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия.
Пациенту назначено стандартное лечение по поводу хронического простатита категории III-A (ципрофлоксацин, нимесулид, доксазозин, эскузан, массаж простаты).
| Контрольная спермограмма (через 3 месяца после лечения): | |
| Количество спермы | 5 мл |
| Вязкость | N |
| Лейкоциты | Единичные |
| Сперматогенный эпителий | 2% |
| Количество сперматозоидов в 1 мл | 155000000 |
| Подвижность категории А | 15% |
| Подвижность категории В | 38% |
| Подвижность категории С | 30% |
| Подвижность категории D | 17% |
| Патологические формы | 71% |
Из эпикриза:
Больной Ж., д-з: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия. После проведенного курса лечения достигнута положительная динамика показателей спермограммы.
Из катамнеза: через 8 мес после завершения курса лечения в семейной паре наступило спонтанное зачатие.
Пример 2
Больной К., 29 лет.
Жалобы на бесплодие в браке, периодические умеренные боли в промежности и мошонке, учащение мочеиспусканий.
Из анамнеза: Бесплодный брак в течении 2,5 лет, ранее не лечился. Супруге 27 лет, гинекологически здорова, ранее беременностей не имела.
Объективно: Нормостеник, физическое развитие удовлетворительное, оволосение по мужскому типу. Наружные половые органы развиты правильно, без особенностей.
Осмотр per rectum: Простата умеренно увеличена, несколько тестоватой консистенции, болезненная при пальпации.
УЗИ простаты, семенных пузырьков и мошонки: Простата с четкими контурами, размеры 35×36×34 мм, неравномерно повышенной эхоплотности, однородной структуры, междолевая бороздка выражена. Семенные пузырьки симметричны, размеры:
левый 10 мм, правый 8 мм, содержимое их гомогенно. Яички находятся в мошонке, с ровными четкими контурами, структура яичек однородна. Размеры яичек: правое 35×22 мм, левое 34×23 мм.
Мазок из уретры:
Лейкоциты 1-2-0 в поле зрения
Эпителий полиморфный - ++
Tr - не выявлено
Gn - не выявлено
Секрет простаты:
Лейкоциты: 20-25-30 в поле зрения,
Эритроциты - нет
Лецитиновые зерна - ++
| Спермограмма: | |
| Объем эякулята | 3,5 мл |
| Вязкость | N |
| Лейкоциты | Единичные |
| Сперматогенный эпителий | 1% |
| Количество сперматозоидов в 1 мл | 145000000 |
| Подвижность категории А | 5% |
| Подвижность категории В | 30% |
| Подвижность категории С | 40% |
| Подвижность категории D | 25% |
| Патологические формы | 76% |
ПЦР: Инфекций, передающихся половым путем, не выявлено.
Бактериологический анализ секрета простаты:
St.epidermid. - <102 - КОЕ\мл
| Иммунограмма эякулята. | |
| Показатель | Лимфоциты, % |
| CD25+ | 7,91 |
| CD95+ | 3,05 |
| CD25+/CD95+ | 2,59 |
Клинический диагноз: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия.
Пациенту назначено стандартное лечение по поводу хронического простатита категории III-A (ципрофлоксацин, доксазозин, эскузан, свечи с индометацином, массаж простаты).
Из эпикриза:
Больной К., д-з: Хронический простатит (категория III-A), первичное бесплодие, астенозооспермия. После проведенного курса лечения несмотря на клиническое улучшение, не достигнута положительная динамика показателей спермограммы.
| Контрольная спермограмма (через 3 месяца после лечения): | |
| Количество спермы | 4 мл |
| Вязкость | N |
| Лейкоциты | Единичные |
| Сперматогенный эпителий | 2% |
| Количество сперматозоидов в 1 мл | 153000000 |
| Подвижность категории А | 5% |
| Подвижность категории В | 28% |
| Подвижность категории С | 32% |
| Подвижность категории D | 35% |
| Патологические формы | 77% |
Из катамнеза: через 12 мес. после завершения курса лечения зачатие не наступило. Рекомендована консультация врача-репродуктолога для решения вопроса о направлении семейной пары на ВРТ.
| Таблица 1 | |||
| Способ прогнозирования нарушений фертильности у мужчин. Величина соотношения CD25+/CD95+ в эякуляте у наблюдаемых мужчин и взаимосвязь этого показателя с результатами лечения. | |||
| № | CD25+/CD95+ | Характеристика спермограммы после лечения | Фертильность |
| 1 | 0,28 | без изменений | бесплодный брак |
| 2 | 0,42 | ухудшение | бесплодный брак |
| 3 | 0,45 | ухудшение | бесплодный брак |
| 4 | 0,48 | без изменений | бесплодный брак |
| 5 | 0,50 | без изменений | бесплодный брак |
| 6 | 0,52 | без изменений | бесплодный брак |
| 7 | 0,65 | без изменений | бесплодный брак |
| 8 | 0,71 | улучшение | фертилен |
| 9 | 0,73 | улучшение | фертилен |
| 10 | 0,74 | улучшение | фертилен |
| 11 | 0,76 | улучшение | фертилен |
| 12 | 0,84 | улучшение | фертилен |
| 13 | 0,88 | улучшение | фертилен |
| 14 | 0,92 | улучшение | фертилен |
| 15 | 0,93 | улучшение | фертилен |
| 16 | 1,00 | улучшение | фертилен |
| 17 | 1,20 | улучшение | фертилен |
| 18 | 1,22 | без изменений | бесплодный брак |
| 19 | 1,36 | ухудшение | бесплодный брак |
| 20 | 1,63 | ухудшение | бесплодный брак |
| 21 | 1,77 | без изменений | бесплодный брак |
| 22 | 2,04 | без изменений | бесплодный брак |
| 23 | 2,48 | ухудшение | бесплодный брак |
| 24 | 3,75 | без изменений | бесплодный брак |
Способ прогнозирования мужского бесплодия путем проточной цитометрии спермы, отличающийся тем, что исследуют соотношения лимфоцитов с фенотипом CD25+ и CD95+ в эякуляте, и при его значениях менее 0,71 и более 1,20 прогноз фертильности признается неблагоприятным.
