Способ оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения цнс у доношенных новорожденных детей
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и касается способа оценки степени тяжести гипоксического поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде. Способ заключается в определении среднего количественного значения ДНК в ядрах лимфоцитов методом плоидометрии в 1, на 3, с 5 по 7, с 28 по 30 сутки жизни ребенка. Исходя из полученных данных, дифференцируют легкую, среднюю, тяжелую степень, а также отсутствие гипоксического поражения ЦНС. Использование способа позволяет оценить с высокой точностью и специфичностью степень тяжести гипоксического поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде и прогнозировать состояние здоровья ребенка после окончания неонатального периода.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для клинической диагностики степени тяжести гипоксического поражения центральной нервной системы у доношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде и прогнозирования состояния здоровья ребенка после окончания неонатального периода.
Актуальность заявленного способа определяется частотой перинатальных поражений головного мозга гипоксически-ишемического генеза (47%), прогрессирующим ростом частоты церебральных нарушений у новорожденных, ведущей их ролью в формировании инвалидности с детства, влиянием на последующее нервно-психическое и соматическое развитие детей, сохраняющимися трудностями в диагностике и терапии данной патологии (Барашнев Ю.И. Гипоксическая энцефалопатия: гипотезы патогенеза церебральных расстройств и поиск методов лекарственной терапии. // Росс. Вестник перинатологии и педиатрии. - 2002. - № 1. - С.6-13.). Прогнозирование степени тяжести этих нарушений является сложным, технически трудоемким процессом в раннем неонатальном периоде. Ранняя диагностика этой патологии требует наличия объективных и надежных количественных маркеров и необходима для возможности более быстрого выбора правильной тактики лечения детей.
Взаимосвязь иммунных реакций энергетического метаболизма на фоне гипоксической энцефалопатии у новорожденных может быть исследована на единой информационной модели, которой является лимфоцит периферической крови.
Известен способ диагностики перинатальных гипоксических поражений головного мозга у доношенных детей грудного возраста путем комплексной оценки результатов клинического обследования, биохимического и цитохимического исследования крови, а именно: определение в лимфоцитах периферической венозной крови уровней териотропного гормона (ТТГ), свободного тироксина (Т4 своб.), кортизола и сукцинатдегидрогеназы (СДГ), α-глицерофосфатдегидрогеназы (α-ГФДГ), кислой фосфатазы (КФ). Диагноз: перинатальное гипоксическое поражение головного мозга устанавливали, если одновременно отмечалось по отношению к норме повышение уровня ТТГ, снижение Т4своб. и кортизола, активация СДГ, снижение активности α-ГФДГ, повышение активности КФ. При чем о степени тяжести гипоксического поражения судят по количественному от нормы отклонению исследуемых показателей: чем отклонение больше, тем выше степень степени тяжести гипоксического поражения головного мозга (Измайлова Т.Д., Петричук С.В. и др. «Изменения адаптации и их коррекция у детей грудного возраста с постгипоксическими изменениями ЦНС». // Педиатрия, 2002, № 1, с.27...30).
Недостаток известного способа состоит в том, что он применяется, начиная с первого месяца жизни ребенка, и не позволяет проводить раннюю диагностику в первые дни жизни после рождения. Кроме того, известный способ трудоемкий, так как диагностика перинатальных гипоксических поражений головного мозга осуществляется путем комплексной оценки результатов клинического обследования, биохимического и цитохимического исследования крови.
Известен способ оценки степени тяжести перинатального гипоксического поражения ЦНС у новорожденных методом иммуноферментного анализа с определением содержания интерлейкина IL-1β, где моделью исследования также являются иммунокомпетентные клетки-лимфоциты (патент РФ № 2291443, G01N 33/68, G01N 33/53, 10.01.2007).
Недостатки известного способа в относительной его специфичности, в связи с тем, что определяют содержание только интерлейкина IL-1β, а так же с кратковременным присутствием в крови цитокинов, что требует быстрого проведения исследования после забора крови. Последнее повышает трудоемкость способа и снижает его достоверность, а следовательно, снижает прогностическое значение способа. Для проведения исследования требуется достаточно большой объем крови (до 3 мл).
Известен способ оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей, в котором степень тяжести оценивают по содержанию провоспалительных и противоспалительных цитокинов и изменению концентрации нейроспецифической енолазы (NSE). Для чего определяют цитокиновый профиль (IL-1β, IL-4, TNFα, IL-6) и концентрацию NSE в сыворотке периферической венозной крови и в ликворе. Исследования проводят в 1, 3, 7 сутки и с 14 по 21 сутки. Степень тяжести гипоксического перинатального поражения оценивают по величине отклонения исследуемых параметров от нормы (Н.Е.Громада «Клинико-диагностическое значение цитокинов и нейроспецифической енолазы у новорожденных с перинатальным гипоксическим поражением ЦНС» // Тезисы докладов медународного научного конгресса «Бехтерев - основоположник нейронаук: творческое наследие, история и современность», 2007 г., с.99).
Наиболее близким к предлагаемому является способ оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей, в котором исследуют популяцию лимфоцитов, а именно анализируют показатели активности митохондриальных ферментов в популяции лимфоцитов: сукцинатдегидрогеназы (СДГ), глутаматдегидрогеназы, α-глицерофосфатдегидрогеназы (α-ГФДГ), лактатдегидрогеназы, малатдегидрогеназы. Кроме того, определяют состояние клеточного звена иммунитета с учетом общего количества лейкоцитов и субпопуляций лимфоцитов CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, CD95, CD25, и исследуют уровень иммуноглобулинов А, М, G, интерлейкинов-4, -6, -1β, фактора некроза опухолей (ФНО-α) в сыворотке крови. Исследования проводят в 1 сутки жизни, в 3 сутки, затем с 5 по 6 сутки, и затем с 28 по 30 сутки. Степень тяжести гипоксического перинатального поражения оценивают по величине отклонения исследуемых параметров от нормы (Н.Е.Громада, О.П.Ковтун «Иммунные нарушения и биоэнергетическая недостаточность у детей с перинатальными гипоксическими поражениями центральной нервной системы и их коррекция». // Российский вестник перинатологии и педиатрии, 2007, 1, с.26-30).
Приведенные выше оба известных способа оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей имеют ряд существенных недостатков. Основной недостаток - это сложность выполнения. В результате ухудшается воспроизводимость известных способов и снижается достоверность результатов исследования гипоксического поражения в динамике, что, в свою очередь, снижает прогностическое значение способов. Это объясняется следующим. Определение цитокинов и популяций клеток требует тщательной обработки материала, а так же хранения при заданной постоянной температуре. Кроме того, трудность определения цитокинов заключается так же в мимолетности и нестабильности их присутствия в опыте. В результате быстрого разрушения цитокинов нужны условия для стабилизации исследуемого материала и хранения клеток. При исследовании митохондриальных ферментов требуется немедленное выполнение реакции, так как в этом случае исследуемый материал длительно хранить нельзя. Кроме того, необходимость и сложность соблюдения правил выполнения способов снижает и точность количественной оценки конечных результатов. Трудности при воспроизводимости и снижение точности количественной оценки в известных способах снижает их достоверность, следовательно, снижает прогностическое значение.
Кроме того, в выявленных известных способах оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей для диагностики используют критерии, которые применяют и для диагностики других заболеваний, что снижает специфичность известных способов, а следовательно, и их прогностическое значение.
Предлагаемое изобретение «Способ оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей» решает задачу создания соответствующего способа, осуществление которого обеспечивает возможность достижения технического результата, заключающегося в повышении прогностического значения, за счет обеспечения специфичности, улучшения условий воспроизводимости способа, повышения достоверности и упрощения.
Сущность изобретения состоит в том, что в способе оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей, в котором у новорожденного исследуют популяцию лимфоцитов периферической крови в 1 сутки, на 3 сутки, с 5 по 7 сутки и с 28 по 30 сутки жизни, новым является то, что исследование выполняют методом плоидометрии, для чего определяют среднее количественное значение ДНК в ядрах лимфоцитов, при этом, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 1039 до 1064, на 3 сутки от 775 до 804, с 5 по 7 сутки от 1202 до 1237 и с 28 по 30 сутки от 2698 до 2753, то констатируют тяжелую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 2231 до 2273, на 3 сутки от 1942 до 1980, с 5 по 7 сутки от 2544 до 2583 и с 28 по 30 сутки от 2975 до 3004, то констатируют среднюю степень тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 3039 до 3092, на 3 сутки от 2835 до 2874, с 5 по 7 сутки от 4014 до 4203 и с 28 по 30 сутки от 3346 до 3395, то констатируют легкую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если количество ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 3211 до 3253, на 3 сутки от 2937 до 2964, с 5 по 7 сутки от 3340 до 3377 и с 28 по 30 сутки от 3421 до 3458, то констатируют отсутствие гипоксического перинатального поражения ЦНС.
Технический результат достигается следующим образом.
Известен способ диагностики онкологического заболевания методом плоидометрии, в соответствии с которым измеряют содержание ДНК в ядрах клеток ростковых зон нормального эпителия и новообразований, при этом выполняют плоидометрию лимфоцитов в тех же срезах или подсаженных к опухолям в блок лимфотических узлов (Г.Г.Автондилов «Введение в количественную патологическую морфологию». М.: Медицина, 1980, с.173...175).
Методология и способ исследования разработаны и усовершенствованы в течение 2-х десятилетий Г.Г.Автандиловым. Плоидометрия использована автором в дифференциальной патогистологической диагностике стадий канцерогена, динамики атеросклеротического процесса, ишемической болезни сердца, функционального состояния гепатоцитов. Использованы компьютерные микротелефотометрические автоматизированные системы с математическим моделированием гистопатологического процесса.
Результаты проведенного патентно-информационного поиска показали, что исследования с применением плоидометрии с целью оценки степени тяжести гипоксии у новорожденных ранее не проводились.
Лимфоцит является самой важной клеткой, отвечающей за иммунитет. Многочисленные исследования показали, что гипоксия является пусковым механизмом в цепи иммунологических состояний у новорожденных. Мозг имеет автономную иммунную систему. Эта система функционирует на уровне лимфоидных клеток спинномозговой жидкости (Т и В-лимфоциты, их популяции), клеток естественных киллеров, моноцитов, на уровне гуморальных факторов биологически активных веществ (цитокины, медиаторы, пептиды). Это обуславливает возможность исследования на единой информационной модели клетки - лимфоцит взаимосвязи иммунных реакций и энергетического метаболизма на фоне гипоксической энцефалопатии у новорожденных. В заявленном способе исследуют популяцию лимфоцитов периферической крови, при чем исследование выполняют методом плоидометрии, для чего определяют среднее количественное значение ДНК в ядрах лимфоцитов. Поскольку исследуют популяцию лимфоцитов периферической крови в 1, 3, 5...7, 28...30 сутки жизни, то, по сути, способ контролирует степень зрелости лимфоцитов по количеству ДНК в ядре при дефиците кислорода в крови, что обуславливает его специфичность и достоверность. Это объясняется тем, что указанные сутки для новорожденного являются реперными физиологическими точками, в которых фиксируют транзиторное состояние крови: 1 сутки - контрольный замер, в 3 сутки количество лимфоцитов в крови снижается, с 3 по 5 их количество нарастает, с 5 по 7 - их количество не изменяется, затем количество лимфоцитов нарастает и устанавливается в промежутке от 28 до 30 суток. Исследование ядра лимфоцита в указанные сутки жизни новорожденного позволяют проследить динамику тяжести гипоксического поражения ЦНС, что повышает прогностическое значение способа. Кроме того, исследование ядра лимфоцита в последние сутки (с 28 по 30) первого месяца жизни ребенка позволяет сделать достоверный прогноз о состоянии здоровья ребенка, а врачу принять соответствующее решение о необходимости дальнейшего лечения, что так же повышает прогностическое значение заявленного способа.
Поскольку в заявленном способе среднее количественное значение ДНК определяют в ядрах лимфоцитов у ребенка с гипоксическим перинатальным поражением ЦНС, это делает заявленный способ специфичным, так как позволяет исследовать только конкретное заболевание: степень гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей, что повышает прогностическое значение заявленного способа, а так же повышает его достоверность. Кроме того, поскольку в заявленном способе в качестве критерия оценки состояния степени тяжести гипоксического поражения ребенка используют среднее количественное значения ДНК в ядрах лимфоцитов, это обеспечивает возможность непосредственно в данный момент времени, т.е. в режиме реального времени, получить информацию о степени зрелости лимфоцитов при дефиците кислорода в крови. Это, в отличие от прототипа, где используемые критерии оценки в сочетании дают возможность только опосредованно судить о состоянии организма, повышает специфичность заявленного способа, а так же повышает его прогностическое значение.
Для заявленного способа, в основе которого лежит плоидометрия популяции лимфоцитов, лимфоцит является материалом для исследования, что очень удобно и упрощает способ, так как кровь может храниться достаточно долго, а сам лимфоцит всегда стабильно в ней присутствует. Кроме того, это обеспечивает воспроизводимость способа, что повышает его достоверность. При этом, поскольку в способе для оценки степени тяжести гипоксии используют только один критерий: определяют среднее количественное значение ДНК в ядрах лимфоцитов, - это так же упрощает способ.
Опытным путем авторами установлено: если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 1039 до 1064, на 3 сутки от 775 до 804, с 5 по 7 сутки от 1202 до 1237 и с 28 по 30 сутки от 2698 до 2753, то констатируют тяжелую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 2231 до 2273, на 3 сутки от 1942 до 1980, с 5 по 7 сутки от 2544 до 2583 и с 28 по 30 сутки от 2975 до 3004, то констатируют среднюю степень тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 3039 до 3092, на 3 сутки от 2835 до 2874, с 5 по 7 сутки от 4014 до 4203 и с 28 по 30 сутки от 3346 до 3395, то констатируют легкую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если количество ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 3211 до 3253, на 3 сутки от 2937 до 2964, с 5 по 7 сутки от 3340 до 3377 и с 28 по 30 сутки от 3421 до 3458, то констатируют отсутствие гипоксического перинатального поражения ЦНС.
Из полученных результатов видно, что чем ниже показатели средних величин количества ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов периферической крови новорожденных, тем тяжелее церебральные нарушения. Это можно подтвердить предположением:
вероятно, в условиях гипоксии нарушена трансформация пролимфоцитов в полноценные лимфоциты (иммунокомпетентные клетки), участвующие в иммунных реакциях и процессах клеточного энергетического метаболизма ЦНС.
Математические расчеты показали высокую достоверность полученных количественных результатов: р<0,05, что обеспечивает специфичность способа и повышает его достоверность. Так же математический расчет показал высокую точность способа - 97,7%, чувствительность - 100% и специфичность - 90,9%. Все эти характеристики способа повышают прогностическое значение заявленного способа.
Предлагаемый способ является объективным количественным методом исследования и позволяет не только достоверно определить степень гипоксии новорожденного, но и, в силу своего прогностического значения, позволяет принять правильное решение при лечении данного заболевания ребенка по окончании первого месяца его жизни.
Таким образом, из вышеизложенного следует, что заявленный способ оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей при осуществлении обеспечивается достижение технического результата, заключающегося в повышении прогностического значения, за счет обеспечения специфичности, улучшения условий воспроизводимости способа, повышения достоверности и упрощения.
Способ оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей осуществляют следующим образом. Исследуют популяцию лимфоцитов периферической крови в 1, на 3, с 5 по 7, с 28 по 30 сутки жизни. Исследование выполняют методом плоидометрии, для чего определяют среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов периферической крови. При этом, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 1039 до 1064, на 3 сутки от 775 до 804, с 5 по 7 сутки от 1202 до 1237 и с 28 по 30 сутки от 2698 до 2753, то констатируют тяжелую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 2231 до 2273, на 3 сутки от 1942 до 1980, с 5 по 7 сутки от 2544 до 2583 и с 28 по 30 сутки от 2975 до 3004, то констатируют среднюю степень тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 3039 до 3092, на 3 сутки от 2835 до 2874, с 5 по 7 сутки от 4014 до 4203 и с 28 по 30 сутки от 3346 до 3395, то констатируют легкую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если количество ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сутки составляет от 3211 до 3253, на 3 сутки от 2937 до 2964, с 5 по 7 сутки от 3340 до 3377 и с 28 по 30 сутки от 3421 до 3458, то констатируют отсутствие гипоксического перинатального поражения ЦНС.
Для определения количества ДНК в ядрах лимфоцитов методом плоидометрии осуществляли забор периферической крови в объеме 0,5 мл, в 1 сутки, на 3 сутки, с 5 по 7 сутки и с 28 по 30 сутки жизни в стерильные стандартные пробирки. Кровь обрабатывали фиксатором Cytospin Collection Fluid (США) в разведении 1:1. Далее проводилось центрифугирование 0,5 мл крови с одновременным изготовлением мазков в автоматизированной системе Cytospin-3 (США) на стандартных стеклах Shandon (США) толщиной 1 мм в течение 5 мин при режиме 1000 об/мин с малым ускорением. После центрифугирования готовые мазки высушивались и окрашивались в автомате Shandon Linistain GLX (США) по методу Фельгена для селективного выявления ДНК в ядрах лимфоцитов. Препараты просматривались при помощи микроскопа Nikon Eclipse Е-400 (Япония) с использованием окуляра 10х и объектива 100х/1.25 с масляной иммерсией. Изображения препаратов выводились на монитор микроскопа с помощью цифровой телекамеры Mintron 62W1P и программы ASUS Digital VCR выводились в компьютер Pentium-4, сохранялись в виде файлов формата JPEG и анализировались с применением программы Adobe Photoshop 6.0.
Среднее количество ДНК вычислялось денситометрически с построением гистограмм в относительных единицах - пикселах. В каждом препарате вычисления производились не менее чем по 25 ядрам, определяли средние величины, минимальное и максимальное значение относительных единиц.
Математическая обработка результатов исследования позволила установить пределы колебаний показателей среднего количества ДНК в ядрах лимфоцитов, с высокой степенью достоверности характеризующих степень тяжести поражения ЦНС.
Авторами было обследовано 114 доношенных новорожденных нормотрофиков обоего пола (мальчиков - 59, девочек - 55), со средней массой тела 3400±24,08 г, ростом 51,4±0,4 см. Из исследования исключены новорожденные с ЗВУР (задержкой внутриутробного развития), врожденными пороками развития и дети с инфекционными гнойно-воспалительными заболеваниями.
Проводили плоидометрию лимфоцитов в 1 сутки, на 3 сутки, с 5 по 7 сутки и с 28 по 30 сутки жизни.
Все дети были разделены на группы: 1-я группа (23 ребенка) - гипоксическая энцефалопатия I степени (легкая степень); 2-я группа (23 ребенка) - гипоксическая энцефалопатия II степени тяжести (средней); 3-я группа (23 ребенка) - гипоксическая энцефалопатия III степени тяжести (тяжелой); 4-я группа (45 детей) - контрольная (здоровые).
В контрольной группе средние величины количества ДНК в ядрах лимфоцитов крови (в относительных единицах) составили в 1 сутки составляет от 3211 до 3253, на 3 сутки от 2937 до 2964, с 5 по 7 сутки от 3340 до 3377 и с 28 по 30 сутки от 3421 до 3458.
У новорожденных I-я группы с легкой степенью гипоксического поражения ЦНС отмечалось снижение средних величин количества ДНК в лимфоцитах крови: в 1 сутки составляет от 3039 до 3092, на 3 сутки от 2835 до 2874, с 5 по 7 сутки от 4014 до 4203 и с 28 по 30 сутки от 3346 до 3395.
У новорожденных 2-ой группы с гипоксическим поражением ЦНС II ст.тяжести при заборе крови: в 1 сутки составляет от 2231 до 2273, на 3 сутки от 1942 до 1980, с 5 по 7 сутки от 2544 до 2583 и с 28 по 30 сутки от 2975 до 3004.
У детей с гипоксической энцефалопатией III степени тяжести показатели средних величин ДНК в лимфоцитах крови были сниженными: в 1 сутки составляет от 1039 до 1064, на 3 сутки от 775 до 804, с 5 по 7 сутки от 1202 до 1237 и с 28 по 30 сутки от 2698 до 2753.
Пример 1.
Ребенок К., 2 дня.
От 1-ой беременности, протекавшей без особенностей, от первых срочных родов в 39 недель беременности, длительность родов 8 часов 30 мин. Безводный период 5 часов 30 мин. Родилась девочка 3600 г, длина 51 см, окружность головы 35 см, окружность груди 33 см, оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. Неврологический статус при рождении без особенностей. В 1-е сутки жизни содержание ДНК в ядрах лимфоцитов (средние величины) - 3041 снижено по сравнению с нормой, на 3-и сутки - 2836.
На 2-е сутки отмечался непостоянный тремор в руках, иногда вздрагивание, снижение мышечного тонуса в руках (незначительное), непостоянный спонтанный рефлекс Моро. При определении средних величин количества ДНК в ядрах лимфоцитов на 5-е сутки выявлена нормализация показателей - 3368 (соответствовали показателям группы здоровых детей); на 28 день жизни показатели соответствовали норме - 3450. Клинические данные свидетельствуют о гипоксической энцефалопатии легкой степени. По данным нейросонографии (НСГ) патологии не выявлено. К 5-му дню неврологические симптомы исчезли. Ребенок выписан домой. Динамическое наблюдение в неонатальном периоде в течение 28 дней жизни и далее показало, что ребенок практически здоров.
Пример 2.
Ребенок А., 2 дня.
Диагноз: Гипоксическое поражение ЦНС II степени тяжести, гипертензионный синдром. Перивентрикулярный отек. Ребенок родился от 3-ей беременности, с оценкой по шкале Апгар 6-7 баллов. При рождении состояние оценивалось как средне-тяжелое. Ребенок от 1-х родов (в анамнезе 2 мед. аборта), в 40 недель беременности, длительность родов - 6 часов 40 мин., безводный период - 8 часов. Родился мальчик с массой тела 3200 г, длина 50 см, окружность головы 34 см, окружность груди - 32 см. Тремор конечностей со 2-х суток, спонтанный Моро, мышечный тонус снижен в руках, в ногах повышен в проксимальных отделах во флексорах. Сухожильные рефлексы высокие. На НСГ (3-и сутки) - перивентрикулярный отек с 2-х сторон. На 5-е сутки расхождение сагитального шва с 0,5 до 2 см. При поступлении в отделение патологии новорожденных: НСГ: МПЩ - 3 см, ПРБЖ S=4 мм, Д=4 мм. Расширение вен глазного дна. Показатели средних величин количества ДНК в ядрах лимфоцитов (метод плоидометрии) в 1-е сутки - 2233, на 3-и - 1948, на 7-е сутки - 2545, на 28 день жизни - 2980, что соответствует средней степени тяжести энцефалопатии.
Заключение: гипоксическая энцефалопатия средней степени тяжести подтверждается клиническими данными и НСГ.
Пример 3.
Ребенок И, 21 день, мальчик, от 3-й беременности. Беременность протекала на фоне гестоза средней тяжести, ожирения II ст. Роды в срок, первичная слабость родовой деятельности, неэффективность стимуляции. Безводный период 11 часов. Операция Кесарево сечение. Оценка по шкале Апгар на 1-ой минуте - 3 балла, на 5-ой минуте - 5 баллов. Через 20 минут взят на ИВЛ на фоне РДС. На ИВЛ находился 2-е суток. Масса тела при рождении - 3200 г, рост - 51 см. В 1 сутки жизни показатели средних величин ДНК в ядрах лимфоцитов крови - 1040, на 3 сутки - 801, что соответствует тяжелой степени гипоксического поражения ЦНС. В роддоме проведена терапия в палате реанимации. Переведен на II этап выхаживания, на 7-е сутки (показатели средних величин ДНК в ядрах лимфоцитов крови - 1203). НСГ: перивентрикулярный отек II степени, ВЖК II ст. слева. Состояние средней тяжести по неврологической симптоматике: синдром угнетения, гипорефлексия, снижение рефлекса сосания, патологическая глазная симптоматика: синдром Грефе, горизонтальный нистагм.
Показатели средних величин количества ДНК в ядрах лимфоцитов на 28-е сутки не нормализовались: 2714.
Диагноз: Перинатальное поражение ЦНС гипоксически-геморрагического генеза, тяжелой степени, острый период, синдром угнетения; ВЖК II степени слева.
Из клинических примеров следует, что применение в заявленном способе диагностики плоидометрии лимфоцитов позволяет не только объективно оценить степень тяжести перинатального гипоксического поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей, но и, проследив в динамике развитие гипоксического поражения в первом месяце жизни ребенка, получить прогноз о дальнейшем состоянии ребенка.
Способ оценки степени тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС у доношенных новорожденных детей, в котором у новорожденного исследуют популяцию лимфоцитов периферической крови в 1 сут, на 3 сут, с 5 по 7 сут и с 28 по 30 сут жизни, отличающийся тем, что исследование выполняют методом плоидометрии, для чего определяют среднее количественное значение ДНК в ядрах лимфоцитов, при этом, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сут составляет от 1039 до 1064, на 3 сут от 775 до 804, с 5 по 7 сут от 1202 до 1237 и с 28 по 30 сут от 2698 до 2753, то констатируют тяжелую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сут составляет от 2231 до 2273, на 3 сут от 1942 до 1980, с 5 по 7 сут от 2544 до 2583 и с 28 по 30 сут от 2975 до 3004, то констатируют среднюю степень тяжести гипоксического перинатального поражения ЦНС, если среднее количественное значение ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сут составляет от 3039 до 3092, на 3 сут от 2835 до 2874, с 5 по 7 сут от 4014 до 4203 и с 28 по 30 сут от 3346 до 3395, то констатируют легкую степень гипоксического перинатального поражения ЦНС, если количество ДНК в ядрах исследуемой популяции лимфоцитов в 1 сут составляет от 3211 до 3253, на 3 сут от 2937 до 2964, с 5 по 7 сут от 3340 до 3377 и с 28 по 30 сут от 3421 до 3458, то констатируют отсутствие гипоксического перинатального поражения ЦНС.
