Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте
Владельцы патента RU 2361214:
Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" (RU)
Изобретение относится к медицине. Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте заключается в нанесении ожога на 10% поверхности кожи животного, заборе крови и определении в гемолизате эритроцитов коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ка. В случае, если значение Ка при ожоге ниже показателя Ка здоровых животных, судят о снижении детоксикационной функции печени. Изобретение позволяет сделать вывод о детоксикационной функции печени. 1 табл.
Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к способам диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.
В качестве прототипа выбран способ оценки функционального состояния печени, заключающийся в определении в крови количества альфа-глобулинов (А), альбуминов (В), бета-глобулинов (С) и определении по формуле диагностического критерия - коэффициента функционального состояния печени новорожденных телят крупного рогатого скота по формуле: Кфсп=А / (А+В+С) (см. патент РФ №2305844, G01N 33/68, 2007 г.).
Однако известный способ является длительным, субъективным и не дает возможности ранней диагностики снижения детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте.
Задача предлагаемого изобретения - раннее выявление нарушения детоксикационной функции печени при ожогах.
Поставленная задача решается за счет того, что в способе, включающем забор крови, в гемолизате эритроцитов измеряют оптическую плотность в течение 1 минуты при длине волны 340 нм и вычисляют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka (мкмоль/мин2) и, если показатель Ka у крыс с ожогом ниже величины Ka здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте осуществляют следующим образом. Исследования выполнены на 15 половозрелых крысах линии Вистар - самцах массой 180 - 200 г. Контрольная группа представлена животными, не подвергшимися ожогу. Животным опытной группы под тиопенталовым наркозом (30 мг/кг массы) наносят ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час после ожога после декапитации собирают вытекающую из шейных сосудов кровь, стабилизируют ее цитратом натрия (3,8%) в соотношении 9:1, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин, отделяют плазму от эритроцитов. Эритроцитарную массу промывают в 5 мл физиологического раствора. После осаждения (10 мин при 3000 об/мин) удаляют физиологический раствор с 10-15% поверхностно расположенных эритроцитов. Отмытые эритроциты гемолизируют в дистиллированной воде в соотношении 1:40. Затем в спектрофотометрическую кювету помещают 2,8 мл 0,1 М глицин-щелочного буфера (pH 10), 0,05 мл 18 мМ ацетальдегида, 0,1 мл 0,8 мМ окисленного никотинамидадениндинуклеотида (НАД) и добавляют в смесь 0,05 мл гемолизата крови. Содержимое кюветы (3мл) быстро перемешивают, измеряют величину его оптической плотности при 340 нм с интервалом 15 сек в течение 1 минуты и определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka (мкмоль/мин2) по формуле:
, где
3 - объем пробы в кювете в мл;
106 - коэффициент пересчета моль в мкмоль;
60 - 60 секунд;
6,22×106 - коэффициент молярной экстинкции для восстановленного НАД;
t - время измерения, мин;
ΔE1 - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек.;
ΔE2 - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин;
Ka эритроцитов крови интактных животных принимают за норму, которая составляет 1,70±0,01 мкмоль/мин2. Если показатель Ka у животных с ожогом ниже величины Ka здоровых крыс, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени при ожогах.
Результаты исследования коэффициента каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции в гемолизате эритроцитов и печени представлены в таблице.
| Таблица | ||||
| Коэффициент каталитической эффективности (Ka; мкмоль/мин2) альдегиддегидрогеназной реакции в эритроцитах и печени в норме и при ожоге | ||||
| № животного | Интактные животные | Опытная группа животных, подвергшихся ожогу | ||
| Эритроциты | Печень | Эритроциты | Печень | |
| 1 | 1,65 | 1,98 | 1,38 | 1,23 |
| 2 | 1,77 | 1,87 | 1,37 | 1,25 |
| 3 | 1,69 | 1,81 | 1,38 | 1,19 |
| 4 | 1,71 | 1,86 | 1,35 | 1,15 |
| 5 | 1,67 | 1,75 | 1,32 | 1,27 |
| 6 | 1,64 | 1,76 | 1,35 | 1,25 |
| 7 | 1,76 | 1,78 | 1,34 | 1,30 |
| 8 | 1,68 | 1,83 | 1,31 | 1,24 |
| 9 | 1,68 | 1,79 | 1,33 | 1,25 |
| 10 | 1,60 | 1,71 | 1,34 | 1,19 |
| 11 | 1,79 | 1,75 | 1,33 | 1,19 |
| 12 | 1,68 | 1,69 | 1,36 | 1,26 |
| 13 | 1,67 | 1,78 | 1,37 | 1,19 |
| 14 | 1,76 | 1,65 | 1,30 | 1,19 |
| 15 | 1,69 | 1,77 | 1,32 | 1,22 |
| M±m | 1,70±0,01 | 1,79±0,02 | 1,34±0,01* | 1,23±0,01* |
| Примечание: * - различия достоверны по сравнению с интактными животными (р<0,01) |
Из таблицы видно, что коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka в эритроцитах здоровых крыс составил 1,70±0,01 мкмоль/мин2 и идентичен Ka печени интактных крыс. Ka в печени интактных крыс равен 1,79:1:0,02 мкмоль/мин2. При термической травме коэффициент каталитической эффективности эритроцитов снижен и составил 1,34±0,01 мкмоль/мин2, в печени Ka соответственно тоже понижен и равен 1,23±0,01 мкмоль/мин2. Поэтому на основании изучения коэффициента каталитической эффективности эритроцитов можно судить о коэффициенте каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции и соответственно о детоксикационной функции печени животных.
Пример конкретного выполнения исследования.
Беспородной белой крысе (самец массой 200 г., в таблице №5) наносят под тиопенталовым наркозом ожог пламенем на 10% поверхности тела. Через час собирают кровь из шейных сосудов и готовят гемолизат эритроцитов, 0,05 мл которого помещают в спектрофотометрическую кювету и измеряют величину оптической плотности при длине волны 340 нм (E340) в течение 1 минуты с интервалом 15 секунд:
| Время | 0 | 15 сек | 30 сек | 45 сек | 1 мин |
| E340 | 0,100 | 0,114 | 0,125 | 0,142 | 0,155 |
Рассчитывают величину оптической плотности при 340 нм: ΔE1 - величина оптической плотности, измеренная за 30 сек, ΔЕ2 - величина оптической плотности, измеренная за 1 мин.
После этого рассчитывают коэффициент каталитической эффективности альдегид дегидрогеназной реакции по формуле:
Таким образом,
что свидетельствует о снижении детоксикационной функции печени.
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте простой и быстрый в исполнении, не требует дорогостоящего оборудования и большого количества биологического материала.
Способ диагностики детоксикационной функции печени при ожогах в эксперименте путем исследования крови, отличающийся тем, что в гемолизате эритроцитов определяют коэффициент каталитической эффективности альдегиддегидрогеназной реакции Ka, и если значение Ka при ожоге ниже показателя Ka здоровых животных, делают вывод о снижении детоксикационной функции печени.
