Способ активации роста клеток в питательной среде
Владельцы патента RU 2413003:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к активации роста клеток в питательной среде животных и человека, и может быть использовано в клеточной терапии. Культуру клеток обрабатывают в питательной среде акустическим звуком интенсивностью 20-60 дБ с определенной частотой в течение 10 мин. В качестве частоты активации предлагается 50 Гц для клеток печени человека и 2000 Гц для клеток почек свиньи. Изобретение позволяет ускорить рост клеток в питательной среде, при этом обрабатывается несколько образцов клеточных культур одновременно, а жизнеспособность обработанных клеток по сравнению с контролем увеличивается. 1 табл.
Изобретение относится к области биологии, ее разделу цитологии.
Известны химические способы биохимической активации клеточных линий, как правило импортные и дорогостоящие [1].
Известны способы физического повышения ростовой активности клеточных линий путем их электромагнитной обработки [2]. К недостаткам способов относится их сложность, заключающаяся в необходимости использования специальной аппаратуры.
Целью предлагаемого изобретения является упрощение способа активации роста клеточных линий.
Указанная цель достигается способом активации роста клеточных линий животных и человека, заключающимся в их обработке в питательной среде акустическим звуком интенсивностью 20 - 60 дБ с определенной частотой в течение 2-10 мин. В качестве частоты активации предлагается 50 Гц для клеток печени человека и 2000 Гц для клеток почек свиньи.
Предлагаемый способ отличается простотой и эффективностью при низкой себестоимости.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
Стерильную суспензию клеток печени человека (КПЧ - Chang Liver) в питательной среде Игла озвучивают (динамик, присоединенный к ГНЧ-1) с частотой 50 Гц и интенсивностью 20-40 дБ в течение 10 мин. После этого ее помещают в термостат при 37°С на 3 суток. В процессе роста (на 2-3 сутки) микроскопическим методом в камере Горяева (после окрашивания 0,4% раствором трипанового синего) оценивают жизнеспособность и определяют индекс пролиферации клеток. Данные по отношению к контролю (без озвучивания) см. в таблице.
Пример 2
Способ по примеру 1. Стерильную суспензию клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ) в питательной среде ДМЕМ озвучивают с частотой 2000 Гц и интенсивностью 40-60 дБ в течение 10 мин. Через 3 дня, т.е. после образования монослоя, определяют индекс пролиферации и жизнеспособность (по примеру 1). Данные см. в таблице.
В таблице приведены данные индекса пролиферации (ИП) и жизнеспособности клеток (Ж) по отношению к контролю (клетки без озвучивания).
| Индекс пролиферации и жизнеспособность клеточных линий КПЧ и СПЭВ | ||||
| Пример | ИП | ИП, % к контролю | Ж, % | Ж, % к контролю |
| 1 | 1,25 | 121 | 94 | 104,5 |
| 2 | 1,66 | 166 | 88 | 101,5 |
Из таблицы следует, что предлагаемый способ при очевидной простоте, низкой стоимости и возможности одновременной обработки нескольких образцов, в частности нескольких клеточных линий, отличается достаточно высокой эффективностью в плане заметного ускорения роста клеток, увеличения их жизнеспособности.
Литература
1. Дьяконов Л.П., Ситькова В.И. Животная клетка в культуре. М. 2000. с.59.
2. Подчерняева Р.Я., Мезенцева М.В. Нетрадиционные подходы к изучению экспериментальной гриппозной инфекции. В кН. Биомедицина XXI века. Достижения и перспективы направления развития. М.: РАЕН. 2008. с.308.
Способ активации роста клеток в питательной среде, включающий обработку культуры клеток акустическим звуком интенсивностью 20-60 дБ в течение 10 мин с частотой активации 50 Гц для клеток печени человека и 2000 Гц для клеток почек свиньи.
