Средство, обладающее антидепрессивным, анксиолитическим и ноотропным действием
Владельцы патента RU 2437659:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский государственный педагогический университет им. А.И. Герцена" (РГПУ им. А.И. Герцена) (RU)
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине. Предлагается применение N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона структурной формулы (1) в качестве средства, обладающего антидепрессивным, анксиолитическим и ноотропным действием. Это малотоксичное соединение (ЛД50 2263,88 мг/кг) обладает высокой антидепрессивной, анксиолитической и ноотропной активностью, эффект которой не сопровождается гипноседативными явлениями или снижением умственной и физической работоспособности. Показано антидепрессивное и анксиолитическое действие соединения уже при однократном применении, что отличает его от большинства известных антидепрессантов, для развития эффекта которых требуется не менее, чем недельный прием. 7 табл.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и касается производных 2-пирролидона, проявляющих антидепрессивную, анксиолитическую и ноотропную активность.
В качестве средств, обладающих анксиолитическим и антидепрессивным действием, чаще всего используют производные бенздиазепинов. Однако наличие у этих средств большого количества побочных эффектов ограничивает их применение, в частности у работающих, у детей и пожилых людей.
Среди производных 2-пирролидона наиболее известны лекарственные средства пирацетам (2-оксо-1-пирролидинацетамид) и фенотропил или карфедон (N-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидон). Пирацетам - ноотропное средство, которое не обладает анксиолитической и антидепрессивной активностью. Фенотропил (N-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидон) обладает широким спектром активности:
гипотензивной (SU №797219), антигипоксической активностью (Ю.Г.Бобков и др. Фармакологическая характеристика нового фенильного аналога пирацетама - 4-фенилпирацетама // Бюл. Экспер. Биологии и медицины. 1983. ХСУ. С.50-53), ноотропной (RU №2050851), RU антиишемической (Евраз. патент №002380), антидепрессивной (RU №2232578), нейротропной-нейромодуляторной (RU №2329804). Однако это лекарственное средство имеет ряд ограничений к применению, в частности из-за его способности вызывать психомоторное возбуждение, ажитацию, нарушение сна (Фенотропил - инструкция по применению, http;www.rlsnet.ru).
Рост психоневрологических заболеваний при увеличивающейся доле пограничных психических расстройств, сопровождающихся когнитивным дефицитом, тревожно-депрессивной симптоматикой, астеноневротическими проявлениями и снижением физической и умственной работоспособности, делает актуальным поиск и разработку новых высокоэффективных и малотоксичных нейропсихотропных лекарственных средств с широким спектром активности, позволяющим осуществлять фармакологическую коррекцию совокупности симптомов психоневрологических заболеваний без полипрагмазии, безопасных при длительном применении, в том числе работающими лицами. При этом следует учитывать, что для современных лекарственных средств, применяемых в неврологической практике, важными критериями являются:
- эффективность и широта терапевтического спектра (возможность и целесообразность применения при различных формах патологии);
- безопасность;
- широта дозового диапазона, то есть разрыва между минимально терапевтической и минимально токсической дозами.
Известно, что одним из наиболее продуктивных путей поиска психотропных веществ является модификация структуры уже известных средств, позволяющая повысить эффективность, снизить токсичность, расширить спектр фармакологического действия.
В ряду производных 2-оксо-1-пирролидинилацетамидов описан N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона (Берестовицкая В.М., Зобачева М.М., Новиков Б.М., Васильева О.С., Усик Н.В., Александрова С.М., Тюренков И.Н. 2-Оксо-1-пирролидинилацетамиды: методы получения и строение. // Азотистые гетероциклы и алкалоиды. Материалы международной конференции «Химия и биологическая активность азотистых гетероциклов и алкалоидов». Москва. 9-12 октября 2001 г., 229-233. /Под редакцией Карцева В.Г., Толстикова Г.А. Москва. «Иридиум-Пресс»). Препаративный метод получения этого соединения не описан. Биологическая активность его не известна.
Задача изобретения - получить высокоэффективное и малотоксичное лекарственное средство на основе N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона, обладающее антидепрессивной, анксиолитической и ноотропной активностью, расширить ассортимент подобных средств.
Поставленная задача реализуется применением производного 2-пирролидона - N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидон следующей структурной формулы:
в качестве средства, обладающего антидепрессивным, анксиолитическим и ноотропным действием.
Лекарственное средство на основе N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона содержит его эффективную дозу, фармакологически приемлемые носители и целевые добавки.
Технический результат предлагаемого изобретения состоит в том, что предлагаемое средство малотоксично и способно проявлять комплексное влияние на функциональное состояние ЦНС.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами:
Пример 1
Получение N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона (КМФП) состоит из двух стадий и заключается во взаимодействии 4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона с этилхлорацетатом и последующим аминировании полученного продукта.
4-(n-Метоксифенил)-1-этоксикарбонилметил-2-пирролидон. В четырехгорлую колбу, снабженную мешалкой, насадкой Дина-Старка, термометром и капельной воронкой, вносят 4.45 мл ДМСО и 6.8 мл бензола. При интенсивном перемешивании добавляют 1.34 г (0.007 моль) 4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона и 1.08 г (0.019 моль) гидроксида калия. Смесь нагревают до 80-85°С, при этой температуре отгоняется азеотроп бензол÷вода. Затем реакционную массу охлаждают до 70-75°С и через капельную воронку к образовавшейся калиевой соли 4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона порциями прибавляют 1.9 мл (0.018 моль) свежеперегнанного этилового эфира монохлоруксусной кислоты, поддерживая температуру реакционной массы 90-95°С. После прибавления всего количества монохлорацетата смесь выдерживают 2 часа при температуре 80-85°С. Затем реакционную массу охлаждают, добавляют двойной (к объему реакционной массы) объем воды, органический слой отделяют, водный - экстрагируют бензолом (3×20 мл). Органический слой и бензольные вытяжки объединяют, растворитель упаривают при пониженном давлении. Выделяют 1.5 г (81%) маслообразного 4-(n-метоксифенил)-1-этоксикарбонилметил-2-пирролидона.
Найдено, %: С 64.90, 64.91; Н 6.91, 6.90; N 4.99, 4.98. C15H19NO4. Вычислено, %: С 64.97; Н 6.91; N 5.05.
N-Карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидон. В двугорлую колбу, снабженную мешалкой, вносят 0.83 г (0.003 моль) 4-(n-метоксифенил)-1-этоксикарбонилметил-2-пирролидона и 30 мл 25%-ного водного аммиака. Выдерживают реакционную массу при интенсивном перемешивании в течение 20 часов. Кристаллический продукт отфильтровывают и сушат на воздухе. Получают 0.70 г (89%) 1-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона с т.пл. 117-118°С (из этанола).
Найдено, %: С 59.29, 59.41; Н 6.52, 6.51; N 15.93,15.94. C13H17N3O3. Вычислено, %: С 59.30; Н 6.51; N15.96.
Спектр ЯМР1Н, CDCl3. δ, м.д: 3.79, 6.88, 7.13 (n-метоксифенил); 2.57, 2.83 (C3H2); 3.49, 3.60 (C5H2); 3.81 (C4H), 4.01 (NCH2); 5.81, 6.32 (NH2). ИК-спектр, KBr, v, см-1: 1695 (C=O); 3485,3415(NH2).
Далее приводятся примеры, иллюстрирующие эффективность N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона (КМФП).
Для изучения анксиолитической, антидепрессивной и ноотропной активности (КМФП) применены методы выявления поведенческой активности животных, представляющие собой набор психофармакологических экспериментальных стандартных тестов:
- «открытое поле» (ОП) (Хаунина Р.А., Лапин И.П. 1976 г., Воронина Т.А. 1982; Гельман В.Я., Кременевская С.И., 1990);
- «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ) (Pellow S. et al., 1985);
- «условный рефлекс пассивного избегания» (УРПИ) (Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П., 1991; Воронина Т.А., Островская Р.У., 2005);
- «экстраполяционное избавление» (ТЭИ) (Бондаренко Н.А. и др., 2003);
- «методика конфликтной ситуации» (вариант Vogel) (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2000);
- «подвешивание мышей за хвост» (ПМХ) (Steru L. et al., 1985);
- «методика принудительного плавания по Порсолт» (Porsolt R.D. et al., 1977).
Обработка полученных данных проводилась с использованием статистических методов оценки результатов исследования, которые позволяют оценить степень фармакологической эффективности.
В работе были использованы белые беспородные крысы линии Вистар обоего пола массой 180-220 г и белые беспородные мыши самцы массой 20-25 г, содержавшиеся в условиях лабораторного вивария, в течение не менее двух недель до начала эксперимента, на стандартном пищевом рационе, при свободном доступе к воде, при естественном световом режиме. Эксперименты проводились в одно и то же время суток. Приводимые в таблицах значения показателей представляют собой среднестатистическую оценку результатов измерения параметров с учетом принятых уровней достоверности (р<0,05; р<0,01).
Острая токсичность N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона, оцениваемая по выживаемости белых мышей через 24 ч после внутрижелудочного введения средства, имеет следующее усредненное значение показателя ЛД50 2263,88 мг/кг (стандартная ошибка ЛД50 397,52). Вещество относится к малотоксичным, что позволяет классифицировать его как малоопасное. Для сравнения, острая токсичность фенотропила N-карбамоилметил-4-фенил-2-пирролидон) составляет 800 мг/кг.
Изучение антидепрессивного действия
Влияние вещества на выраженность депрессивного поведения у животных выполнено с использованием двух классических моделей стрессиндуцированной депрессии: «Теста подвешивания мышей за хвост» и «Теста неизбегаемого принудительного плавания по Порсолту».
Тест «Подвешивание мышей за хвост» (Таблица 1)
Эксперимент проводился в камере размером 60×20×20 см, разделенной на два отсека. За 45 минут (время развития пика фармакологической активности) до проведения эксперимента животным вводился исследуемый КМФП. Мышь подвешивали за хвост на лейкопластыре на расстоянии 1,5 см от кончика хвоста. Расстояние от пола до носа животного составляло 10 см. В течение 6 минут регистрировали суммарную длительность иммобилизации (неподвижное зависание) одновременно у двух животных. Иммобилизация (показатель поведенческого отчаяния) является клиническим признаком депрессии. Снижение длительности иммобилизации у животных опытных групп по сравнению с контролем расценивалось как наличие антидепрессивных свойств у вещества).
Тест «Принудительного неизбегаемого плавания» (Таблица 2)
Эксперимент проводился в стеклянном бассейне диаметром 32 см и высотой 50 см, заполненном водой (температура 21-24°С) до уровня, при котором животное не может касаться дна задними лапами. Крыс на 15 минут помещали в бассейн, затем отсаживали в обогреваемую клетку на 30 минут и возвращали в виварий. Через 24 часа, за 45 минут до начала повторного тестирования животным вводили исследуемый КМФП и помещали их в бассейн. В течение 300 сек регистрировали латентный период иммобилизации, общее время нахождения крысы в состоянии иммобилизации (животное пассивно плавает в воде со слегка поднятой головой), продолжительность активного плавания (животное активно двигает всеми четырьмя конечностями) и количество прыжков из воды (животное совершает рывок всем телом, пытаясь выбраться из воды). Увеличение латентного периода иммобилизации, снижение ее длительности, увеличение продолжительности активного плавания и количества прыжков у животных опытных групп по сравнению с контролем свидетельствует о наличии у исследуемого вещества антидепрессивного эффекта.
Результаты выполненных экспериментов на моделях стрессиндуцированной депрессии показали, что КМФП при однократном введении крысам (как самцам, так и самкам) проявляет выраженное антидепрессивное действие. Под влиянием КМФП в тестах «неизбегаемого принудительного плавания по Порсолту» и «подвешивания мышей за хвост» статистически значимо увеличивался латентный период до развития иммобильности и уменьшалось суммарное время иммобилизации у животных (Таблицы 1 и 2). В тесте «неизбегаемого принудительного плавания но Порсолту» под действием исследуемого вещества статистически достоверно повышались количество прыжков у животных и суммарная продолжительность активного плавания (Таблица 2). Кроме этого, антидепрессивный эффект данного вещества подтверждают результаты теста экстраполяционного избавления, в котором под влиянием КМФП статистически значимо уменьшалась выраженность поведенческого коррелята депрессии - длительность иммобилизации как у самцов, так и самок крыс (Таблица 7). Антидепрессивные свойства КМФП превышают аналогичный эффект фенотропила.
Изучение анксиолитического действия
Изучение анксиолитической активности проводили с использованием тестов «Открытое поле», «Приподнятый крестообразный лабиринт», а также модели «Конфликтной ситуации по Vogel», вызванной столкновением оборонительного и пищевого рефлексов.
Тест «Открытое поле» (Таблица 3)
Методика открытого поля используется для изучения влияния вещества на показатели спонтанного индивидуального поведения животных (двигательную, ориентировочно-исследовательскую активность и эмоциональный статус) и выявления анксиолитических свойств.
Эксперимент проводился в квадратной камере размером 80×80 см и высотой 60 см. Пол камеры разделен черной краской на 25 равных квадратов размером 5×5 см с выделением центральной зоны поля. Пол камеры оснащен 16 отверстиями диаметром и глубиной 3 см. Камера освещалась лампой мощностью 90 Лк, расположенной над центром поля на высоте 150 см. Крысу помещали в центр камеры хвостом к экспериментатору и наблюдали за ее поведением в течение 3 минут. В тесте регистрировали: число пересеченных квадратов на периферии, число пересеченных ярко освещенных квадратов, количество вертикальных стоек, количество заглядываний в отверстия, количество уринаций и дефекаций, число актов и суммарную продолжительность груминга. Количество пересеченных квадратов характеризует спонтанную двигательную активность животных, сумма стоек и заглядываний в отверстия - суммарную ориентировочно-исследовательскую активность. Число посещений центральной ярко освещенной зоны (аверсивной для норных грызунов) свидетельствует об уровне тревожности животного (чем меньше тревожность - тем их больше, и наоборот). Увеличение числа таких актов под действием испытуемых веществ свидетельствует об их анксиолитической активности. Поведение животного при умывании и чистке (груминг) отражает степень его эмоционального напряжения: частый кратковременный (до 5 сек) - тревожное состояние, редкий и продолжительный - состояние комфорта. Вегетативные показатели стресса (число болюсов дефекации и уринаций) также характеризуют эмоциональное напряжение животных (Таблица 3).
При однократном введении КМФП животным перед изучением их индивидуального поведения в тесте «отрытое поле» в группе испытуемых животных статистически значимо повышалось количество пересеченных квадратов (двигательная активность), число стоек и заглядываний в отверстия (ориентировочно-исследовательская активность), что указывает на наличие у заявляемого вещества активирующего эффекта, сопоставимого с эффектом фенотропила. Кроме этого, при введении КМФП крысам статистически достоверно увеличивалось число посещений центральной ярко освещенной зоны (аверсивной для норных грызунов), уменьшалось число актов кратковременного (менее 5 сек) «тревожного» груминга и повышалась его продолжительность, что свидетельствует о комфортном эмоциональном состоянии животных.
Таким образом, установлено, что соединение КМФП (25 мг/кг) не оказывает статистически значимого влияния на показатели спонтанного индивидуального поведения как самцов, так и самок крыс в тесте «отрытое поле», что выгодно отличает его от фенотропила, вызывающего психомоторное возбуждение. Кроме того, данное вещество, в отличие от диазепама, не вызывает седации у животных, что также расширяет возможность его клинического применения (Таблица 3).
Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт» (Таблица 4)
Методика приподнятого крестообразного лабиринта используется для изучения влияния вещества на выраженность эмоциональной реакции страха и тревоги у испытуемых животных и выявления анксиолитической активности. Она основана на предпочтении грызунами темных нор, естественного страха нахождения на открытых площадках и падения с высоты.
Эксперимент проводился в установке (лабиринте), состоящей из центральной площадки размером 10×10 см, от которой крестообразно расходятся под прямым углом четыре рукава размерами 50×10 см каждый. Два противоположных рукава открытых, без стенок и два закрытых, темных, ограниченных по бокам окрашенными в темный цвет бортами высотой 40 см. Пол установки окрашен в белый цвет. Лабиринт приподнят над уровнем пола на 80 см. Тестируемое животное помещали на центральную площадку лабиринта мордочкой к открытому рукаву и в течение 3 минут вели наблюдение за ним. В тесте регистрировали: время пребывания животных на центральной площадке, в открытых и закрытых рукавах, количество стоек в закрытых и открытых рукавах, число свешиваний с открытых рукавов и количество заходов в центральную зону, открытые и закрытые рукава. Пересечение крысой границ какого-либо отсека задними лапами определялось как заход животного в отсек лабиринта. Увеличение времени нахождения в светлых рукавах, числа заходов в них, вертикальных стоек в открытых рукавах и свешиваний с них свидетельствуют о наличии анксиолитического эффекта у исследуемого вещества. Продолжительность пребывания на центральной площадке позволяет оценить скорость принятия решения животным. Общая двигательная активность оценивается по общему числу заходов в открытые, закрытые рукава и центр лабиринта.
В тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» при однократном введении КМФП статистически достоверно увеличивает у испытуемых животных (как самцов, так и самок крыс) продолжительность пребывания в открытых рукавах, не оказывая при этом статистически значимого влияния на количество выходов из них (Таблица 4). Таким образом, в тесте приподнятого крестообразного лабиринта анксиолитический эффект вещества КМФП сопоставим с действием фенотропила.
Тест «Методика конфликтной ситуации» (вариант Vogel) (Таблица 5)
Методика конфликтной ситуации (вариант Vogel) применяется для изучения влияния вещества на поведение животных на модели создания у них состояния беспокойства и страха с использованием электрического раздражителя, подавляющего питьевые рефлексы.
Эксперимент проводился в камере размером 27.5×27.5×45.0 см, снабженной электродным полом. На стенке камеры, на высоте 5 см над электродным полом располагалась поилка (сосуд с соском). Перед проведением теста в течение 48 часов животных не ограничивали в потреблении корма и лишали приема воды. Затем у животных вырабатывали навык взятия воды из поилки: крысу помещали в камеру на 10 минут, где она находила воду и начинала пить. На следующий день после обучения навыку, за 45 минут (время развития пика их фармакологической активности) до проведения эксперимента животным вводились исследуемые вещества. Далее крысу помещали в камеру на 10 минут, и через 10 секунд после начала питья каждое взятие воды наказывалось электроболевым раздражением (1 мА). В тесте регистрировали латентный период первого наказуемого подхода к поилке и число наказуемых взятий воды из поилки. Уменьшение латентного периода и увеличение числа наказуемых взятий воды указывает на подавление чувства тревоги и страха и свидетельствует, что изучаемое вещество обладает анксиолитическим действием (Таблица 5).
В тесте конфликтной ситуации (вариант Vogel) при однократном введении КМФП статистически значимо увеличивалось число наказуемых взятий воды из поилки и уменьшался латентный период до первого наказуемого взятия воды (Таблица 5). Таким образом, испытуемый КМФП обладает анксиолитическими свойствами и по выраженности анксиолитического эффекта в тесте конфликтной ситуации соединение статистически значимо превосходит фенотропил (25 мг/кг), но уступает бензодиазепиновому транквилизатору диазепаму (1 мг/кг).
Изучение ноотропного действия
Методики выработки условного рефлекса пассивного избегания (УРПИ) и экстраполяционного избавления (ТЭИ) у животных позволяют быстро оценить влияние вещества на их обучаемость, формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его нарушения.
Тест «Условная реакция пассивного избегания» (УРПИ) (Таблица 6)
Обучение животных проводилось в установке, состоящей из двух смежных отсеков, один из которых размером 60×40×40 см, открытый сверху и ярко освещенный (90 Лк). Другая камера с электрифицированным полом меньшего размера (15×15×15 см), затемненная, закрытая со всех сторон и имеет отверстие (8×8 см) для сообщения с большим отсеком. Эксперимент выполнялся в два этапа: выработка у животных условного рефлекса пассивного избегания и воспроизведение памятного следа в динамике через 24 часа, 7 и 14 суток.
Во время обучения тестируемое животное помещали на середину площадки освещенного отсека, хвостом к отверстию в темный отсек. В течение трех минут за животным велось визуальное наблюдение. После каждого захода в темный отсек животному наносили электроболевое раздражение (40 В, 3 импульса по 1 сек, с интервалом 0,5 сек); животных, не заходящих в темную камеру за это время, из опыта исключали. На этапе обучения животных регистрировали следующие показатели: время от момента помещения животного в середину площадки до первого захода в темный отсек (латентный период первого захода) и количество заходов в него.
Эксперимент воспроизведения памятного следа выполнялся следующим образом: обученное животное помещали на середину площадки освещенного отсека, хвостом к отверстию в темный отсек и в течение трех минут вели визуальное наблюдение за животным. После каждого захода в темный отсек животному не наносили электроболевую стимуляцию. На этом этапе регистрировали следующие показатели: латентный период первого захода, количество заходов в него и общее время нахождения животного в темном отсеке. В эксперименте сравнивали латентный период первого захода животных в темный отсек и количество заходов в него в тесте воспроизведения памятного следа с аналогичными показателями при обучении. Увеличение латентного периода и уменьшение числа заходов указывают на обученность животного и сохранность в памяти информации об аверсивности темного отсека (Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П., 1991). Общее время нахождения в темном отсеке, регистрируемое при воспроизведениях навыка, также отражает сохранность памятного следа у животного - чем меньше времени животное проводит в темном отсеке, тем лучше оно помнит о нанесенном ему здесь электроболевом раздражении (Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П., 1991).
При однократном введении КМФП перед обучением в группе испытуемых животных на всех этапах воспроизведения навыка избегания (статистически значимо через 7 и 14 суток после обучения) наблюдались увеличение латентного периода захода животных в темный отсек, уменьшение количества заходов в него и времени пребывания в нем по отношению к контролю (Таблица 6). Такое положительное влияние КМФП на обучаемость и память животных, замедление угасания памятного следа в динамике свидетельствуют о наличии ноотропного действия у заявляемого вещества.
Тест «экстраполяционного избавления» (Таблица 7)
Обучение животных проводилось в стеклянном прямоугольном аквариуме размером 39×21×25 см, заполненном водой с температурой 16-18°С на 17,5 см. Аквариум содержал стеклянный цилиндрический колпак диаметром 9 см и высотой 18,5 см, края которого погружались в воду на 2,5 см. Эксперимент выполнялся в два этапа: выработка у животных условного рефлекса избавления и проверка сохранности навыка экстраполяционного избавления в динамике через 24 часа, 7 и 14 суток.
Во время обучения тестируемое животное помещали в аквариум под колпак. В течение трех минут за ним велось визуальное наблюдение. Животные подныривали под края колпака и избавлялись, таким образом, от аверсивной водной среды. Не решившие задачу животные из опыта исключались. На этапе обучения животных регистрировали следующие показатели: время от момента погружения животного в воду до начала активного плавания (латентный период двигательной активности), время иммобилизации (животное пассивно плавает в воде со слегка поднятой головой, все четыре конечности неподвижны), количество прыжков в колпаке (активные попытки выпрыгнуть из воды) и время от момента погружения животного в воду до подныривания под края колпака (латентный период подныривания)
Эксперимент воспроизведения навыка экстраполяционного избавления у животных выполняли следующим образом: обученное животное помещали в аквариум под колпак. В течение трех минут за ним велось визуальное наблюдение. При оценке когнитивных функций регистрировали наиболее значимые показатели: латентный период двигательной активности (характеристика скорости ориентировочных реакций); латентный период подныривания (показатель способности к экстраполяции, чем меньше значение показателя, тем выше скорость решения экстраполяционной задачи). В эксперименте сравнивали показатели, определяющие степень обученности животного и состояние памяти: латентный период подныривания животного при обучении и воспроизведении навыка экстраполяционного избавления (чем значительнее он уменьшается при воспроизведении навыка, тем больше обученность животного и сохраннее памятный след).
При однократном введении животным перед обучением навыку экстраполяционного избавления в группе испытуемых животных статистически значимо на этапах воспроизведения навыка через 24 часа, 7 и 14 суток после обучения наблюдалось уменьшение времени решения экстраполяционной задачи и числа животных, не нашедших выход из аверсивной ситуации (Таблица 7). Кроме этого, при введении КМФП животным статистически значимо уменьшался латентный период двигательной активности - показатель, характеризующий скорость ориентировочных реакций у животных (Таблица 7). Такое положительное влияние КМФП на когнитивные функции у животных свидетельствует, что он обладает ноотропными свойствами. По выраженности ноотропного эффекта предлагаемое вещество статистически значимо уступает фенотропилу.
Проведенные исследования показывают, что производное 2-пирролидона-N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидон обладает выраженным антидепрессантным действием в сочетании с анксиолитической активностью и ноотропными свойствами. Антидепрессивное и анксиолитическое действия отчетливо проявляются в эксперименте уже при однократном применении КМФП, что отличает его от большинства известных антидепрессантов, для развития эффекта которых требуется не менее чем недельный прием.
N-Карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидон обладает оригинальным спектром фармакологической активности: сочетание выраженных антидепрессивного и анксиолитического эффектов с ноотропным действием определяет для него собственную нишу терапевтического применения определенными группами пациентов с тревожно-депрессивными расстройствами. Важным преимуществом предлагаемого средства перед многими антидепрессантами, используемыми на сегодняшний день в медицинской практике, является способность его оказывать клинически значимый эффект уже после однократного применения, тогда как большинство известных антидепрессантов для развития эффекта требуют курсового (минимум двухнедельного применения). Кроме того, N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидон в отличие от целого ряда применяемых антидепрессантов (в частности, трициклических) не нарушает память, внимание, а напротив, положительно влияет на когнитивные функции, что предполагает возможность его применения работающими лицами. Анксиолитический эффект КМФП не сопровождается гипноседативными явлениями, нарушением памяти и внимания, снижением физической и умственной работоспособности, что выгодно отличает его от многих транквилизаторов, в частности бензодиазепинового ряда.
Лекарственное средство, содержащее в качестве действующего вещества N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидон, в зависимости от выбранных носителей и целевых добавок, может быть изготовлено в любой твердой или жидкой лекарственной форме.
Таким образом, предлагаемое средство проявляет выраженное антидепрессантное действие в сочетании с анксиолитической активностью и ноотропными свойствами, оно безопасно, что предполагает возможность длительного применения, в частности и у работающих пациентов.
| Таблица 1 | ||||||
| Тест «Подвешивание мышей за хвост» | ||||||
| Регистрируемые показатели | Значения показателей М±m | |||||
| Контроль | фенотропил | КМФП | ||||
| самцы | самки | самцы | самки | самцы | самки | |
| Латентный период иммобилизации, сек. | 22±1,81 | - | 52,3±3,44** | - | 40,1±2,43** | - |
| Суммарная длительность иммобилизации, сек. | 187,1±5,71 | - | 136,2±9,23** | - | 150,2±11,64** | - |
| Обозначения: | ||||||
| * - р<0,05; ** -р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных; | ||||||
| # - р<0,05; ## - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с группой животных, получавших фенотропил (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений; критерий χ2). |
| Таблица 2 | ||||||
| Тест «Методика принудительного плавания по Порсолт» | ||||||
| Регистрируемые показатели | Значения показателей М±m | |||||
| Контроль | фенотропил | КМФП | ||||
| самцы | самки | самцы | самки | самцы | самки | |
| Латентный период иммобилизации, сек | 60±3,64 | 52,2±4,36 | 105±9,22* | 21,4±4,38* | 94,8±10,29* | 86,2±6,28**# |
| Суммарная длительность иммобилизации, сек | 52,2±5,34 | 84,6±9,26 | 37±3,9* | 46±5,48* | 24,6±2,32**# | 29,2±3,17**# |
| Число прыжков из воды | 4±0,32 | 5,4±1,2 | 10,2±1,53* | 2,6±0,75 | 8,6±0,93* | 8±1,3# |
| Суммарное время активного плавания, сек | 150,6±13,4 | 141,6±10,26 | 197±3,39** | 174,6±12,84 | 206,8±13,42** | 186,8±10,55* |
| Суммарное время пассивного плавания, сек | 97,2±5,24 | 73,8±8,41 | 82,6±4,65 | 96,2±13,97 | 68,6±6,15*# | 67,4±8,68 |
| Обозначения: | ||||||
| * - р<0,05; ** - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных; | ||||||
| # - р<0,05; ## - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с группой животных, получавших фенотропил (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений; критерий χ2). |
| Таблица 3 | ||||||
| Тест «Открытое поле» | ||||||
| Регистрируемые показатели | Значения показателей М±m | |||||
| Контроль | фенотропил | КМФП | ||||
| самцы | Самки | самцы | самки | самцы | самки | |
| Число пересеченных квадратов | 27,83±2,21 | 25±2,41 | 40,66±3,24* | 40±3,63* | 22,16±2,52# | 19,6±3,25 |
| Сумма вертикальных стоек и заглядываний в отверстия | 12,83±1,77 | 9,2±0,73 | 21,23±2,24* | 16,8±1,32* | 10,66±0,84# | 6,4±1,99# |
| Число посещений ярко освещенной зоны | 0,33±0,21 | 0,4±0,24 | 1,67±0,42* | 1,2±0,2 | 0,83±0,3 | 0,6±0,27 |
| Число фекальных болюсов | 2,5±0,56 | 3,6±0,51 | 2,33±0,42 | 1,8±0,66 | 1±0,37 | 3,4±0,57 |
| Число актов кратковременного груминга (<5 сек) | 4,16±0,94 | 4,6±0,68 | 1,83±0,6 | 2,6±0,6 | 3±0,68 | 3,4±0,91 |
| Продолжительность груминга, сек | 7,5±2,59 | 11,8±1,66 | 9,16±1,01 | 18±1,58* | 6,83±1,25 | 10,2±2,58# |
| Обозначения: | ||||||
| * - р<0,05; ** - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных; | ||||||
| # - р<0,05; ## - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с группой животных, получавших фенотропил (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений; критерий χ2). |
| Таблица 4 | ||||||
| Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт» | ||||||
| Регистрируемые показатели | Значения показателей М±m | |||||
| Контроль | фенотропил | КМФП | ||||
| самцы | самки | самцы | самки | самцы | самки | |
| Число заходов в открытые рукава | 1,17±0,17 | 1,2±0,2 | 2,5±0,43* | 3±0,45* | 1,33±0,21 | 1,4±0,24 |
| Время, проведенное в открытых рукавах, сек | 29,5±2,79 | 24,6±3,03 | 51±5,65* | 39±4,17* | 48,33±4,08* | 39±4,24* |
| Время, проведенное в центральной зоне, сек | 11,33±1,74 | 20,4±2,11 | 6,16±0,87* | 7,6±1,36* | 5,33±1,15* | 16,6±2,36 |
| Число вертикальных стоек в открытых рукавах | 0,33±0,21 | 0,4±0,24 | 0,5±0,22 | 1±0,45 | 0,66±0,21 | 0,2±0,2 |
| Число свешиваний в открытых рукавах | 2±0,82 | 0,6±0,4 | 2,5±0,67 | 1,8±0,37 | 2,33±0,49 | 1±0,45 |
| Суммарное число переходов между рукавами лабиринта | 4,17±0,48 | 5,2±0,2 | 7±0,45* | 9±0,84* | 3,83±0,4 | 6±1,05 |
| Обозначения: | ||||||
| * - р<0,05; ** - р<0,01 - достоверностъ различий по сравнению с группой животных; | ||||||
| # - р<0,05; ## - p<0,01 - достоверность различий по сравнению с группой животных, получавших фенотропил (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений; критерий χ2). |
| Таблица 5 | ||||||
| Тест «Методика конфликтной ситуации» (Vogel) | ||||||
| Регистрируемые показатели | Значения показателей М±m | |||||
| Контроль | фенотропил | КМФП | ||||
| самцы | Самки | самцы | самки | самцы | самки | |
| Латентный период первого наказуемого подхода к поилке, сек | 25±2,66 | 20±2,88 | 12,8±2,92* | 20,4±3,08 | 2,4±0,93**# | 2,2±0,58**## |
| Число наказуемых подходов к поилке | 4,6±1,63 | 5,6±1,6 | 6,2±1,16 | 7,8±1,77 | 16,2±2,35*# | 4,6±1,21 |
| Обозначения: | ||||||
| * - р<0,05; ** - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных; | ||||||
| # - р<0,05; ## - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с группой животных, получавших фенотропил (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественны сравнений; критерий χ2). |
| Таблица 6 | ||||||
| Тест «Условная реакция пассивного избегания» (УРПИ) | ||||||
| Регистрируемые показатели | Значения показателей М±m | |||||
| контроль | фенотропил | КМФП | ||||
| самцы | самки | самцы | самки | самцы | самки | |
| Латентный период первого захода в темный отсек, сек (обучение) | 14,83±2,83 | 14,4±3,75 | 16±2,87 | 12,4±3,5 | 6,67±1,05*# | 23,4±2,77 |
| Число заходов в темный отсек (обучение) | 1,17±0,17 | 1,2±0,2 | 1,17±0,17 | 1,2±0,2 | 1,17±0,17 | 1,2±0,2 |
| Латентный период первого захода в темный отсек, сек (воспроизведение через 24 часа) | 134,83±30 | 180±0 | 180±0 | 180±0 | 165,83±14,17 | 175,2±4,8 |
| Число заходов в темный отсек (воспроизведение через 24 часа) | 0,5±0,34 | 0 | 0 | 0 | 0,17±0,17 | 0,4±0,24 |
| Латентный период первого захода в темный отсек, сек (воспроизведение через 7 дней) | 69,67±22,6 | 113,2±27,54 | 164,83±15,17* | 147,6±5,4 | 153,33±17,06* | 162±18 |
| Число заходов в темный отсек (воспроизведение через 7 дней) | 0,83±0,17 | 1±0,45 | 0,17±0,17 | 0,2±0,2 | 0,33±0,21 | 0,4±0,4 |
| Латентный период первого захода в темный отсек, сек (воспроизведение через 14 дней) | 40,33±13,84 | 86±27,79 | 144,83±22,24* | 159,2±12,8 | 129,33±22,68* | 119,6±37,18 |
| Число заходов в темный отсек (воспроизведение через 14 дней) | 1,33±0,21 | 1,4±0,6 | 0,33±0,21* | 0,4±0,24 | 0,5±0,22 | 0,8±0,49 |
| Обозначения: | ||||||
| * - р<0,05; ** - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контрольной группой животных; | ||||||
| # - р<0,05; ## - р<0,01 - достоверность различий по сравнению с группой животных, получавших фенотропил (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений; критерий χ2). |
Применение N-карбамоилметил-4-(n-метоксифенил)-2-пирролидона следующей структурной формулы:
в качестве средства, обладающего антидепрессивным, анксиолитическим и ноотропным действием.
