Способ обнаружения лизина в смеси -аминокислот

Авторы патента:

Чернова Римма Кузьминична (RU)

Пысина Мария Валерьевна (RU)

Гаврилова Юлия Юрьевна (RU)

G01N33/15 - медицинских препаратов

Владельцы патента RU 2484460:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского" (RU)

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам обнаружения биологически активного соединения - лизина, в сложных смесях. Технический результат заключается в упрощении, ускорении и удешевлении процедуры определения лизина при сохранении высоких метрологических параметров методики определения. Указанный технический результат достигается тем, что способ обнаружения лизина в смеси α-аминокислот, за исключением смеси, содержащей цистеин и пролин, включает приготовление ацетатно-аммиачного буферного раствора с рН 3,06, к которому добавляют 0,1% раствор лизина в таком количестве, чтобы в конечном готовом растворе его содержание было от 0,0004 до 0,008%; 0,2% водный раствор нингидрина в таком количестве, чтобы содержание нингидрина в конечном готовом растворе было от 0,01 до 0,03%; последующий нагрев полученного раствора на водяной бане при 95-105°С в течение 15-25 мин; добавление цетилпиридиния хлорида в количестве, обеспечивающем его содержание в растворе в концентрации после критической концентрации мицеллообразования - 0,1-0,4%; последующее измерение спектра поглощения полученного раствора; обнаружение лизина в растворе по наличию максимума на длине волны λ_max=480 нм. 1 табл., 11 ил.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам обнаружения биологически активного соединения - лизина, в сложных смесях. L-Лизин - незаменимая аминокислота, которую живой организм может получить только с пищей. Лизин является основой для построения белков живых организмов. При недостатке лизина расстраивается весь белковый обмен. Лизин влияет на прочность и эластичность связок и сухожилий, способствует усвоению кальция и его встраиванию в костную ткань, участвует в синтезе антител, гормонов, ферментов. Препараты, содержащие лизин, применяют для обогащения кормов и пищевых продуктов, парентерального питания больных. В связи с этим востребованы избирательные доступные методы экспресс-диагностики лизина в смесях аминокислот, для подтверждения подлинности препаратов. Для 20 незаменимых α-аминокислот известно немного таких реакций (таблица). Как следует из таблицы, высокоизбирательные реакции на лизин, позволяющие идентифицировать эту аминокислоту в смеси других α-аминокислот, не известны. Идентификацию лизина, наряду с другими α-аминокислотами можно провести методом высокоэффективной жидкостной хроматографии или капиллярного электрофореза, что требует дорогостоящего оборудования, высококвалифицированных специалистов, предварительной стадии дериватизации аминокислот и в связи с этим практически недоступно для рядовых клинических и химико-аналитических лабораторий, а также экономически не выгодно в том случае, если требуется подтвердить наличие в смеси лишь одной аминокислоты - лизина. В связи с этим актуально изыскание простого, дешевого, высокоизбирательного и надежного теста на лизин.

Реакции, используемые для идентификации α-аминокислот
Реакция	Реактивы	Определяемая аминокислота	Окраска
Эрлиха	Диазотированная сульфаниловая кислота в щелочном растворе	Гистидин, тирозин	Красная
Адамкевича-Гопкинса	Глиоксиловая кислота в конц. H₂SO₄	Триптофан	Сине-фиолетовая
Сакагучи	α-нафтол и гипобромит натрия	Аргинин	Красная
Нитропруссидная	Щелочь и нитропруссид натрия	Цистеин, метионин	Красная
Салливана	1,2-Нафтохинон-4-сульфонат натрия и бисульфит натрия	Цистеин	Красная
Ксантопротеиновая (Мульдера)	Кипящая конц. HNO₃	Фенилаланин, тирозин	Желтая
Фолина	Фосфомолибденово-вольфрамовая кислота	Тирозин, триптофан	Синяя
Фоля	Кипячение с NaOH и CH₃COONa	Цистеин, цистин	Черная
Шульце-Распайля	Фруктоза в сильнокислой среде	Триптофан	Вишнево-красная
Миллона	Раствор нитратов ртути (I) и (II) в HNO₃ с примесью HNO₂	Тирозин	Красная
Мульдера	Кипящая конц. HNO₃ и 30%-ный NaOH	Тирозин (мешает триптофан)	Оранжевая

Известен способ определения лизина в водном растворе (см. патент на изобретение RU 2299433, G01N 31/16, G01N 27/48). Способ характеризуется тем, что готовят водный раствор лизина с концентрацией 0,01-0,1 мг/мл, добавляют к нему высаливатель - кристаллический сульфат лития в количестве 25 мас.%, раствор перемешивают, затем добавляют смесь гидрофильных растворителей, которую готовят из 50-60 мас.% изопропилового спирта и 40-50 мас.% этилацетата, экстракт отделяют, определяют в нем содержание лизина путем потенциометрического титрования экстракта, строят дифференциальную кривую зависимости потенциала среды от объема титранта, степень извлечения (R, %) лизина рассчитывают по формуле: R=D100/D+r, где D - коэффициент распределения лизина между смесью растворителей и водно-солевым раствором, r - соотношение равновесных объемов водной и органической фаз. Достигается возможность определения лизина в водном растворе с применением высаливателя и смеси гидрофильных растворителей.

Однако способ относится к водному раствору одного лизина при отсутствии других аминокислот и таким образом не является избирательным. Приводимый патент ориентирован не на избирательную идентификацию лизина в смеси аминокислот, а на возможность выделения из водного раствора путем экстракции лизина, как и других α-аминокислот, гидрофильными растворителями. Таким образом, поставленная задача в данном патенте не решается.

Известен способ определения содержания свободных аминокислот - лизина и/или метионина в кормовых средствах (см. патент на изобретение RU 2263307, МПК G01N 33/02, С12Р 13/08, С12Р 13/12). Способ определения содержания свободных аминокислот в кормовых средствах заключается в отборе пробы анализируемого кормового средства, приготовлении ее раствора, определении содержания аминокислот в приготовленном анализируемом растворе, расчете содержания аминокислоты в анализируемом кормовом средстве по полученным данным. Аминокислоту в приготовленном растворе превращают в ее дансильное производное путем взаимодействия с раствором дансилхлорида, а содержание аминокислоты в анализируемом растворе определяют методом капиллярного электрофореза по содержанию в нем ее дансильного производного.

Однако метод сложен, малодоступен в силу дороговизны, требует высокой квалификации специалиста, его использование экономически неоправданно для серийных анализов объектов на содержание лизина.

Наиболее близким к заявленному является колориметрический способ определения доступного лизина в пищевых продуктах (см. заявку на изобретение RU 2009112437, C12Q 1/04). Способ включает приготовление навесок проб исследуемого пищевого продукта, причем первая проба содержит гистидин + аргинин + лизин, а вторая - гистидин + аргинин. Навески проб продукта помещают в конические колбы, приливают в каждую колбу дистиллированную воду и оставляют на 9-10 мин, проводят блокирование свободных С-аминогрупп лизина, добавляют в обе пробы раствор красителя «Оранж-Ж» с последующим вычислением содержания доступного лизина в продукте. Блокирование свободных С-аминогрупп лизина проводят уксусным ангидридом. Навеску первой пробы берут в количестве 15 мг гистидин + аргинин + лизин, а второй 15 мг гистидин + аргинин, во вторую колбу вносят 0,4 см³ уксусного ангидрида и помещают ее на лабораторный встряхиватель на 14-15 мин. Обработку первой и второй пробы проводят одновременно, добавляют по 40 см³ раствора красителя «Оранж-Ж», встряхивают в течение 85-90 мин, затем содержимое колб фильтруют через стеклянные фильтры, отбирают пипеткой по 1 см³ каждого фильтрата и вносят в мерные цилиндры, доводят объем в цилиндрах по 75 см³ дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Затем растворы проб колориметрируют, обрабатывают данные результатов, находящиеся в пределах от 0,2 до 0,6 единицы оптической плотности, на основании которых по градуировочному графику устанавливают количество несвязанного красителя в ммолях при рН 2,2 и вычисляют массовую долю доступного лизина в мг/100 г продукта.

Однако данный способ также не решает поставленную задачу избирательного обнаружения лизина в неизвестном растворе, содержащем наряду с лизином и другие аминокислоты. В данном способе содержание лизина должно быть заранее известно, что является весьма частной задачей и не предполагается в заявленном способе.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка доступного клиническим и производственным лабораториям простого, экспрессного, дешевого и экологически чистого способа идентификации и определения содержания лизина в смесях α-аминокислот, основанного на особых условиях лизина с нингидрином в присутствии ПАВ.

Технический результат заключается в упрощении, ускорении и удешевлении процедуры определения лизина при сохранении высоких метрологических параметров методики определения.

Для решения поставленной задачи использовали специфику взаимодействия лизина с нингидрином, при определенных условиях. Данный подход основан на специфике взаимодействия лизина с нингидрином в кислой среде, отмеченной авторами данного изобретения. Поставленная задача решается тем, что для избирательного обнаружения лизина применяют композицию, состоящую из буферного ацетатно-аммиачного раствора рН 3,06, 0,2% водного раствора нингидрина и 0,01М цетилпиридиния хлорид (ЦПХ), а также подбора определенных условий: t° нагревания = 100°С, время нагрева, равное 20 мин.

Указанный технический результат достигается тем, что вначале готовят раствор, содержащий:

CH₃COOH - от 0,6 до 0,9%,

NH₃·H₂O - от 0,002 до 0,004%,

исследуемый лизинсодержащий раствор - от 0,0004 до 0,008%,

нингидрин - от 0,01 до 0,03%,

вода - остальное.

Затем нагревают полученный раствор на водяной бане при 95-105°С в течение 15-25 мин. В результате нагревания происходит химическая реакция, приводящая к образованию оранжевого окрашивания выпадению осадка. Для растворения осадка добавляют ЦПХ в количестве, обеспечивающем его содержание в растворе в концентрации после ККМ (критической концентрации мицелообразования) - 0,1-0,4%. После этого измеряют спектр поглощения полученного раствора и по наличию максимума на длине волны λ_max=480 нм делают вывод о присутствии лизина в растворе.

Изобретение иллюстрируется чертежами, где на фиг.1 приведен электронный спектр поглощения системы ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-нингидрин-ЦПХ, на фиг.2 показан электронный спектр поглощения системы ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин (свежеприготовленный) - нингидрин - ЦПХ: 1-1 мл лизина, 2-0,5 мл лизина, 3-0,1 мл лизина, на фиг.3 представлен электронный спектр поглощения системы ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-нингидрин-ЦПХ: 1-4,2 мл нингидрина (0,2%), 2-1,4 мл нингидрина (0,2%), на фиг.4 изображен электронный спектр поглощения системы ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 4,75) - лизин - нингидрин, на фиг.5 приведен электронный спектр поглощения системы ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - гистидин-нингидрин, на фиг.6 показан электронный спектр поглощения системы ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - аргинин-нингидрин, на фиг.7 изображен продукт реакции смеси ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-гистидин-аргинин-нингидрин - ЦПХ, на фиг.8 представлен электронный спектр поглощения продукта реакции смеси ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-гистидин-аргинин-нингидрин-ЦПХ, на фиг.9 приведен электронный спектр поглощения продукта реакции смеси ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - цистеин-нингидрин-ЦПХ и электронный спектр поглощения продукта реакции смеси ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - пролин-нингидрин-ЦПХ, на фиг.10 показан электронный спектр поглощения продукта реакции смеси ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-гистидин-аргинин-нингидрин-ЦПХ: 1-19,86 мкг/л; 2-29,84 мкг/л; 3-39,71 мкг/л; 4-49,64 мкг/л; 5-59,57 мкг/л, на фиг.11 представлен градуировочный график смеси ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-гистидин-аргинин-нингидрин-ЦПХ.

Реакцию проводили следующим образом: к 15 мл ацетатно-аммиачного буферного раствора рН 3,06 добавляли 1,25 мл 0,1% раствора лизина и 2,8 мл 0,2% водного раствора нингидрина. Нагревали на водяной бане при температуре 100°С в течение 20 минут. В ходе этой реакции образовался осадок. С целью растворения осадка, добавляли 2,5 мл 0,1М ЦПХ. Раствор после нагревания становился оранжевым. Затем раствор охлаждали, разбавляли в мерной колбе ацетатно-аммиачным буферным раствором до 25 мл и регистрировали спектр поглощения. Буферный раствор, для идентификации лизина, готовится следующим образом: 99,3 мл 2Н раствора СН₃СООН смешивается с 59,7 мл 2Н раствора NH₃·H₂O и доводится в мерной колбе дистиллированной водой до 1 литра. Буферный раствор имеет рН 3,06. В качестве реагента применяется специально приготовленный раствор нингидрина:

Исследовалось также взаимодействие других α-аминокислот, гистидина и аргинина в ацетатно-аммиачном буферном растворе (рН 3,06), они не дают окрашивания, следовательно, не реагируют в данных условиях.

Пример 1. Была установлена минимально фиксируемая концентрация лизина. Для этого поочередно в систему ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-нингидрин-ЦПХ, добавляли 1 мл, 0,5 мл и 0,1 мл 0,1% раствора лизина (фиг.2).

Как следует из фиг.2, интенсивность снижается по мере уменьшения концентрации лизина. При добавлении 0,1 мл лизина поглощение продукта реакции обнаружить не удается. Предел обнаружения составил 3,94 мкг/л.

Пример 2. Исследовалось влияние концентрации нингидрина в системе на аналитический эффект. Для этого в систему ацетатно-аммичный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-нингидрин-ЦПХ поочередно прибавляли 4,2 мл и 1,4 мл 0,2% водного раствора нингидрина (фиг.3).

Как следует из фиг.3, увеличение концентрации нингидрина приводит к увеличению оптической плотности от 0,15 до 0,38, что повышает чувствительность реакции.

Пример 3. Система лизин-нингидрин-ацетатно-аммиачный буферный раствор исследовалась нами также и при рН 4,75. Реакцию проводили аналогично: к 15 мл ацетатно-аммиачного буферного раствора рН 4,75 добавляли 1,25 мл 0,1% раствора лизина и 2,8 мл 0,2% водного раствора нингидрина. Нагревали на водяной бане при температуре 100°С в течение 20 минут. Раствор после нагревания становился красно-оранжевым. Затем раствор охлаждали, разбавляли в мерной колбе ацетатно-аммиачным буферным раствором до 25 мл и регистрировали спектр поглощения (фиг.4).

Как следует из фиг.4, в спектре наблюдается наличие трех полос поглощения с λ=400 нм, 563 нм и ранее наблюдаемой полосой с λ_max=480 нм. Отсюда следует вывод: лизин образует с нигидрином при рН 4,75 два окрашенных продукта (λ_max=480 нм и λ_max=563 нм). Наличие второго продукта мешает количественному определению лизина, однако качественная идентификация еще возможна.

Пример 4. Исследовалось взаимодействие другой основной α-аминокислоты, гистидина в ацетатно-аммиачном буферном растворе (рН 3,06), согласно следующей методике: к 15 мл ацетатно-аммиачного буферного раствора рН 3,06 добавляли 1,25 мл 0,1% раствора гистидина и 2,8 мл 0,2% водного раствора нингидрина. Нагревали на кипящей водяной бане в течение 20 мин. Раствор после нагревания становился бледно-желтым. Затем раствор охлаждали, разбавляли в мерной колбе ацетатно-аммиачным буферным раствором до 25 мл и регистрировали спектр поглощения (фиг.5).

Как следует из фиг.5, спектр поглощения системы ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - гистидин-нингидрин не обнаруживает заметного поглощения в области 400-700 нм и, следовательно, не мешает обнаружению лизина.

Пример 5. Исследовалась возможность протекания реакции аргинина в ацетатно-аммиачном буферном растворе (рН 3,06) согласно следующей методике: к 15 мл ацетатно-аммиачного буферного раствора рН 3,06 добавляли 1,25 мл 0,1% раствора аргинина и 2,8 мл 0,2% водного раствора нингидрина (водяная баня, 20 мин). Раствор после нагревания оставался бесцветным (фиг.6).

Из полученных данных следует, что при данных условиях аргинин не мешает обнаружению лизина.

Пример 6. Избирательное определение лизина и его идентификация в смеси с двумя другими основными аминокислотами: к 13 мл ацетатно-аммиачного буферного раствора рН 3,06 прибавляли 1,25 мл 0,1% раствора аргинина, 1,25 мл 0,1% раствора лизина, 1,25 мл 0,1% раствора гистидина и 2,8 мл 0,2% нингидрина. Нагревали на водяной бане в течение 20 минут при температуре 100°С. Затем раствор охлаждали и добавляли 2,5 мл 0,1 М ЦПХ, доводили в мерной колбе ацетатно-аммиачным буферным раствором до 25 мл и регистрировали спектр поглощения. Образующийся оранжевый продукт реакции с λ_max=480 нм свидетельствует о присутствии лизина в смеси (фиг.7).

Как следует из фиг.8, спектр поглощения состоит из одной полосы с λ=480 нм, что является характерной полосой поглощения для лизина.

Пример 7. Исследовалась возможность протекания реакции остальных из 20 аминокислот в ацетатно-аммиачном буферном растворе (рН 3,06) согласно следующей методике: к 15 мл ацетатно-аммиачного буферного раствора рН 3,06 добавляли 1,25 мл 0,1% раствора аминокислоты (пролин, цистеин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота, аспарагин, метионин, глутамин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, серин, треонин, тирозин, триптофан, глицин, аланин, валин) и 2,8 мл 0,2% водного раствора нингидрина (водяная баня, 20 мин). Растворы после нагревания оставались бесцветными. Исключение составили пролин и цистеин, образовывалось оранжевое окрашивание (фиг.9).

Данные две аминокислоты являются мешающими.

Пример 8. Для построения градуировочного графика в систему ацетатно-аммиачный буферный раствор (рН 3,06) - лизин-нингидрин-ЦПХ, раствор лизина поочередно добавляли 0,5 мл (19,86 мкг/л), 0,75 мл (29,84 мкг/л), 1 мл (39,71 мкг/л), 1,25 мл (49,64 мкг/л), 1,5 мл (59,57 мкг/л) и регистрировали спектры поглощения (фиг.11).

Наличие линейной зависимости и ее повторяемость свидетельствуют о стабильности данных, полученных с помощью предлагаемого способа идентификации, а также свидетельствует о пригодности применения полученной линейной зависимости максимума в спектре поглощения от концентрации лизина для количественного определения лизина.

Способ обнаружения лизина в смеси α-аминокислот, за исключением смеси, содержащей цистеин и пролин, включающий приготовление ацетатно-аммиачного буферного раствора с рН=3,06, к которому добавляют 0,1%-ный раствор лизина в таком количестве, чтобы в конечном готовом растворе его содержание было от 0,0004 до 0,008%; 0,2%-ный водный раствор нингидрина в таком количестве, чтобы содержание нингидрина в конечном готовом растворе было от 0,01 до 0,03%; последующий нагрев полученного раствора на водяной бане при 95-105°С в течение 15-25 мин; добавление цетилпиридиния хлорида в количестве, обеспечивающем его содержание в растворе в концентрации после критической концентрации мицеллообразования, 0,1-0,4%; последующее измерение спектра поглощения полученного раствора; обнаружение лизина в растворе по наличию максимума на длине волны λ_max=480 нм.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтическому анализу лекарственного растительного сырья, и описывает способ количественного определения полисахаридов в траве видов рода фиалка, включающий измельчение сырья, водную экстракцию полисахаридного комплекса при нагревании, внесение реагента, фильтрацию и определение содержания полисахаридов по формуле, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют траву фиалки одноцветковой, водную экстракцию проводят в течение 1 часа при соотношении сырье:экстрагент, как 1:50, экстракт фильтруют и к фильтрату, в соотношении 1:1, добавляют 8%-ную хлористоводородную кислоту, выдерживают в течение 2-х часов на кипящей водяной бане, после чего охлаждают и нейтрализуют до pH=6,5-7,0, затем добавляют 1%-ный раствор пикриновой кислоты и 20%-ный раствор карбоната натрия, взятые в соотношении 1:3, полученную смесь выдерживают на водяной бане в течение 30 минут, после чего фильтруют и фильтрат спектрофотометрируют в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при длине волны =460±2 нм, а определение количественного содержания полисахаридов проводят в пересчете на глюкозу по формуле.

Способ определения производных нитрофурана, пиразола, изоникотиновой кислоты, тиоаминокислот в лекарственных формах // 2479840

Изобретение относится к химическим способам анализа, в частности к определению производных нитрофурана, пиразола, изоникотиновой кислоты, тиоаминокислот в лекарственных формах.

Способ определения содержания озона в озонированной перфторуглеродной эмульсии // 2478953

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания озона в озонированной перфторуглеродной эмульсии путем фотометрического измерения количества йода, выделяющегося в результате воздействия озона озонированной эмульсии на раствор йодистого калия с крахмалом, где перед проведением определения предварительно готовят реакционный раствор, содержащий йодистый калий и крахмал, из которого приготовляются подготовительный анализируемый и подготовительные калибровочные растворы, содержащие одинаковое количество йодистого калия и крахмала; к подготовительному анализируемому раствору приливается определенный объем озонированного перфторана, а к подготовительным калибровочным растворам последовательно добавляются такой же объем неозонированного перфторана и титрованный раствор йода в йодистом калии в количестве, необходимом для построения калибровочного графика; приготовленные растворы оставляют стоять в защищенном от света месте при температуре 20°С; растворы фотометрируют на фотоколориметре или спектрофотометре на длине волны 610 нм, следя за ходом изменения оптической плотности во времени до момента совпадения хода кривых калибровочных и исследуемого растворов; строят калибровочный график и вычисляют содержание озона в анализируемой эмульсии.

Способ ретроспективного обнаружения ксенобиотиков при допинговом контроле спортсменов // 2478207

Изобретение относится к хроматографическому анализу различных химических соединений и может быть использовано в медицине, биологии, экологии и, в особенности, при допинговом контроле.

Способ получения тест-объекта из клеток роговицы эмбриональных цыплят для оценки цитотоксичности лекарственных средств // 2471185

Изобретение относится к медицине и описывает способ получения тест-объекта для оценки цитотоксичности лекарственных средств, включающий использование роговицы эмбриональных цыплят и клеточной технологии, причем выделяют роговицу эмбрионов цыплят 7-14 дней гестации, которую измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С, при оценке цитотоксичности лекарственных средств замороженный материал подвергают медленной разморозке, переносят в центрифужную пробирку и трехкратно отмывают в растворе NaCl 0,9%, а затем измельчают клеточные элементы до получения гомогенной клеточной суспензии, осаждают строму в центрифуге, надосадок, содержащий клетки роговицы, переносят в стерильную пробирку и вновь осаждают клетки, супернатант удаляют, а к осадку, содержащему роговичные клетки, добавляют 1 мл раствора NaCl 0,9% и ресуспендируют, в полученной суспензии считают цитоз и определяют жизнеспособность клеток по окрашиванию их ДНК-флуорохромами на проточном цитофлюориметре, затем раствором NaCl 0,9% суспензию клеток роговицы доводят до концентрации 5,0·105 клеток в 1 мл и переносят в культуральные флаконы и добавляют исследуемые препараты, для контроля в один из флаконов добавляют NaCl 0,9%, дальнейшую инкубацию проводят в культуральных флаконах в СO2 инкубаторе в течение суток, далее суспензии клеток переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют для осаждения клеток и отбирают по 1 мл суспензии каждого опыта для исследования цитотоксичности по окрашиванию клеток ДНК-флуорохромами, цитотоксичность исследуемых веществ оценивают на проточном цитофлюориметре.

Сорбцинно-флуоресцентный способ определения доксициклина в лекарственных препаратах // 2471184

Изобретение относится к аналитической химии применительно к экспресс-анализу лекарственных препаратов, преимущественно для обнаружения и количественного определения активнодействующего вещества.

Мембрана ионоселективного электрода для определения цефалоспориновых антибиотиков в лекарственных и биологических средах // 2469304

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в контрольно-аналитических, клинических лабораториях для определения концентрации цефалоспориновых антибиотиков.

Сопряженный с g-белком рецептор, имеющий измененное сродство к лигандам, и его применение // 2468035

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к исследованию рецептору, сопряженному с G-белком, и может быть использовано в медицине. .

Способ количественного определения антиоксиданта коэнзима q10 в субстанции методом циклической вольтамперометрии // 2454660

Изобретение относится к фармацевтической химии и может быть использовано для количественного определения антиоксиданта коэнзима Q10 в субстанции. .

Способ количественного определения цефалоспориновых антибиотиков в биосредах // 2445624

Изобретение относится к диагностике, в частности к способу количественного определения цефалоспориновых антибиотиков в жидкости ротовой полости и в цельной крови.

Способ выбора предпочтительного лечебного препарата и оценки эффективности его использования при реабилитации больного // 2485503

Изобретение относится к медицине

Способ определения концентрации аскорбиновой кислоты // 2486509

Изобретение относится к аналитической химии, к области фармации и может быть использовано для количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственных препаратах

Способ фотоэлектроколориметрического определения сульфаниламидных препаратов // 2488110

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для фотоэлектроколориметрического определения сульфаниламидных препаратов - стрептоцида, сульфадимезина, этазола, сульфалена, фталазола, сульфатиазола, сульфадиметоксина, сульфамонометоксина в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях

Способ количественного определения содержания кальция в жидких экстрактах из лекарственного растительного сырья // 2488818

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакогнозии и фармации, конкретно к способу определения содержания кальция в жидких экстрактах из растительного сырья

Способ кулонометрического определения содержания воды в таблеточной массе // 2488819

Изобретение относится к области медицины и описывает способ определения содержания воды в таблеточной массе при промышленном производстве таблеток путем кулонометрического титрования, где в основе лежит взаимодействие воды, содержащейся в исследуемом образце, с кулонометрическим титрантом - электрогенерированным йодом, который образуется при электролизе органического или неорганического йодида (например, СН3I или KI), входящего в состав фонового электролита при постоянной силе тока 50 мА в течение времени, определяемого биопотенциометрически по достижению конечной точки титрования, содержание воды (X, г) в аликвоте исследуемого образца рассчитывается по формуле, и параллельно проводят определение воды в растворителе и по известным формулам рассчитывают содержание воды в таблеточной массе

Способ определения содержания аскорбиновой кислоты // 2490628

Изобретение относится к области аналитической химии и биохимической клинической лабораторной диагностики и может быть использовано для определения содержания аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале

Способ извлечения кофеина из водного раствора // 2490629

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и может быть использовано для извлечения пуриновых алкалоидов из водных сред с целью их последующего определения

Способ количественного определения производных бигуанидов // 2492471

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для количественного определения лекарственных веществ - производных бигуанидов: глибутида, метформина, прогуанила ГХ, пиклоксидина и хлоргексидина в субстанциях в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях

Способ определения биологической активности вещества // 2492472

Изобретение относится к области биологии, медицины, ветеринарии и может быть использовано для проведения исследования биологической активности веществ в биологии, медицине и ветеринарии

Способ отбора анальгетических средств // 2504771

Настоящее изобретение относится к биологии и медицине и описывает способ отбора анальгетических средств, который позволяет осуществлять поиск биологически активных веществ с анальгетическим действием в рядах NH-замещенных антраниловых кислот (1), ариламидов NH-замещенных антраниловых кислот (2), ариламидов N-ацил-N-алкенил(алкил)антраниловых кислот (3), амидов и гидразидов NH-ацил(галоген)антраниловых кислот (4), имеющих общий фрагмент: карбонил, фенильный радикал и вторичная или третичная аминогруппы, у которых определяют параметры электронной структуры молекул соединений и выбирают дескрипторы: энергия Хартри-Фока (ЕHF), полная тепловая энергия (EТЕРМ), заряды на атомах азота (qN), углерода (qC) и кислорода (qO), затем с помощью трехпараметровых уравнений рассчитывают анальгетическую активность (ААрасч.) и отбирают соединения, у которых теоретически рассчитанная АА равна или превосходит таковую препарата сравнения, выбранные соединения синтезируют и подтверждают расчетные данные экспериментально на лабораторных животных (ААэксп.). Способ экономически выгоден, так как позволяет проводить экспериментальные скрининговые исследования на животных не на всем объеме синтезированных веществ, а только тех, АА которых равна или превосходит аналог по действию. 9 табл., 3 пр.