Способ моделирования хронической интоксикации формалином в токсикологическом эксперименте

Авторы патента:

A61P43/00 - Лекарственные средства для специфических целей, не указанные в группах A61P 1/00-A61P 41/00

Владельцы патента RU 2564761:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Пятигорский государственный научно-исследовательский институт курортологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГБУ ПГНИИК ФМБА России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной токсикологии, и может быть использовано для моделирования хронического токсического поражения печени. Для этого самцам-крысам в течение 50 дней вводят через день, per os, шприцем 10%-ный раствор формалина (CH₂O) из расчёта 0,2 мл на 100 г массы животного. Способ обеспечивает создание модели, по сроку моделирования и картине поражения в патогенезе приближенной к клиническому течению хронического процесса в печени за счёт развития структурных и функциональных изменений в гепатоцитах под действием вводимого химического вещества. 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной токсикологии, и может быть использовано для изучения способов формирования и прогрессирования хронических изменений в печени, возникающих в эксперименте, под действием химических повреждающих факторов.

Одним из таких факторов является формальдегид. Источниками хронического воздействия формальдегида на организм человека являются сточные воды, дождевая вода, воздух, где концентрация его паров находится на уровне 0,01 мг/м³ и выше. Использование формальдегида в производстве смол в качестве бактерицидного и бальзамического средства, фунгицида в качестве промежуточных продуктов при производстве химических веществ и как компонента конечного использования потребительских товаров придает этому веществу определенное токсикологическое значение. В связи с этим для изучения механизмов формирования хронического неинфекционного заболевания печени и возможности профилактики и лечения возникающих при этом патологических изменений, требуются адекватные экспериментальные модели, приближенные к реальным клиническим патологиям.

У крыс при действии химических веществ и разбалансированном питании наблюдаются различные метаболические, и в том числе дислипидемические нарушения, поэтому для моделирования патологии печени и развития различных типов дислипидемий эти животные наиболее пригодны. Наиболее часто при моделировании гепатита, цирроза печени, жирового гепатоза и др. заболеваний печени инициатором повреждений является токсический фактор [1-4].

Известны способы моделирования токсического гепатита и цирроза печени крыс в течение 5-7 месяцев, путем помещения животного в клетку с открытым резервуаром, наполненным 70%-ным раствором формалина (заявка на пат. RU 94026117. Способ создания модели гепатита и цирроза печени млекопитающих. Бояринов Г.А., Смирнов В.П., Кауров Я.В. и др., опубл. 27.08.1996). Хроническая токсическая гепатопатия моделируется у крыс ежедневным введением 50% раствора 2,4-дихлорфенола на оливковом масле внутрижелудочно, через зонд, в течение трех недель в дозе 5 мг на 100 г массы тела животного (пат. RU 2343556. Способ моделирования хронической токсической гепатопатии. Ибаттулина Р.Б., Мышкин В.А., Бакиров А.Б., опубл. 10.01.2009), а также путем ежедневного однократного введения через зонд в желудок раствора хлорида кобальта 2 мг/мл (в пересчете на металл) в дозе 0,1 мг на 100 г крысы в течение месяца (пат. RU 2440621. Способ моделирования хронической токсической гепатопатии. Брин В.Б., Митциев А.К., Митциев К.Г. и др., опубл. 20.01.2012).

Недостатками перечисленных выше способов моделирования токсической гепатопатии, жировой дистрофии и цирроза печени являются длительность создания экспериментальной патологической модели - 7 месяцев, высокая токсичность используемого летучего вещества - формальдегида и хлорида кобальта, введение веществ зондом, что при неумелом обращении часто приводит к перфорации желудка и гибели животных. Введение четыреххлористого углерода осуществляется в растворителе и подкожно, что не физиологично, так как многократное подкожное введение масляного раствора химического вещества вызывает некробиотические изменения на месте введения и очень медленно достигает органа-мишени. Основным временным показателем для создания экспериментальных моделей хронического поражения токсическими веществами является длительность от 20 дней до 4 месяцев, ингаляторно или per os, что ближе к реальным условиям и соблюдается при нашем варианте моделирования.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ инициации токсического поражения печени путем перорального введения 40% этилового спирта в дозе 14 мл/кг в течение 60 дней (Доркина, Е.Г. Гепатопротекторные свойства флавоноидов: автореферат диссертации на соискание уч. зв. док. биол. наук: 14.03.06 / Доркина Елена Григорьевна. - Волгоград, 2010. - 45 с.).

Недостатками данного способа являются введение 40% этанола зондом и длительность создания экспериментальной патологической модели - 60 дней.

Техническим результатом предлагаемого способа является решение задачи, заключающейся в создании модели хронического токсического поражения печени введением 10% раствора формалина (CH₂O), который вводится шприцем в течение 50 дней, который по сроку моделирования приближен к клиническому течению хронического процесса в печени по сравнению с картиной поражения в патогенезе в прототипе, где животным вводился зондом 40% этиловый спирт в течение 60 дней. Преимущества предлагаемой модели хронического поражения печени в том, что она легко воспроизводима, доступна, химическое вещество вводится перорально, моделирование осуществляется в более короткие сроки, с соответствующей картиной поражения в патогенезе, которая приближена к клиническому течению хронического процесса в печени за счет развития структурных и функциональных изменений в гепатоцитах под действием химического вещества.

Указанный технический результат достигается тем, что используют 10% раствор формалина (CH₂O), который вводят крысам-самцам через день, per os, шприцем, из расчета 0,2 мл на 100 г массы животного, в течение 50 дней, с последующим проведением лабораторных тестов и исследованием печени.

Для достижения адекватности предлагаемой модели изучено 30 крыс-самцов линии Вистар массой тела 180-250 г, разделенных на группы. Первую группу представляли 10 интактных животных. 20 крысам, представляющим вторую группу, в течение 50 дней, через день, per os, шприцем вводили 10% раствор формалина, из расчета 0,2 мл на 100 г массы тела животного. Для третьей группы, составляющей 10 животных, инициировалось токсическое поражение путем введения 40% этилового спирта в дозе 14 мл/кг, в течение 60 дней по способу прототипа.

На 60-й в прототипе и 50-й день моделирования способа животных декапитировали с последующим проведением лабораторных тестов и патоморфологическим исследованием печени. Изучали содержание в сыворотке крови аспартатаминотрансферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) в (Ед/л), холестерина (X) в (ммоль/л), холестерина липопротеидов низкой плотности (ХЛПНП) и холестерина липопротеидов высокой плотности (ХЛПВП) в (ммоль/л), триглицеридов (ТГ) в (ммоль/л), креатинина (КР) в (мкмоль/л) и щелочной фосфатазы (ЩФ) в (МЕ/л).

Способ осуществляется следующим образом.

Группе животных в течение 50 дней, через день, per os шприцем вводили 10% раствор формалина (CH₂O) из расчета 0,2 мл на 100 г массы животного. Воспроизведение модели констатировали по изменению патоморфологических и гистологических признаков, и биохимических показателей: содержание в сыворотке крови аспартатаминотрансферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) в (Ед/л), холестерина (X) в (ммоль/л), холестерина липопротедидов низкой плотности (ХЛПНП) и холестерина липопротеидов высокой плотности (ХЛПВП) в (ммоль/л), триглицеридов (ТГ) в (ммоль/л), креатинина (КР) в (мкмоль/л) и щелочной фосфатазы (ЩФ) в (МЕ/л).

Приготовление формалина (CH₂O) производится путем разведения формальдегида в воде до концентрации 10%.

Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов (ОИМДФФ) Пятигорского ГНИИ курортологии. Объектом исследований послужили 40 крыс-самцов линии Вистар, с массой тела 190-219 г, разделенные на 3 группы - интактные, с моделью прототипа и с моделью хронической интоксикации 10% раствором формалина. По истечении срока эксперимента сравнивали полученную картину как патоморфологических, так и саногенетических реакций в системах, контролирующих метаболические реакции.

Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.

Интактная крыса-самец линии Вистар №3, масса тела 200 г. Дополнительных воздействий не получала. Исследование животного осуществлено одновременно с животными опытной группы. Содержание в крови ACT - 96,8 Ед/л, АЛТ - 80,2 Ед/л, Х - 2,7 ммоль/л, ТГ - 0,9 ммоль/л, ХЛПНП - 2,2 ммоль/л, ХЛПВП - 1,1 ммоль/л, КР 83,2 мкмоль/л, ЩФ 482,0 МЕ/л.

Крыса-самец линии Вистар №14, масса тела 208 г. Ежедневно, 1 раз в сутки, перорально вводили 40% этиловый спирт в дозе 14 мл/кг, в течение 60 дней по способу прототипа. Содержание в крови ACT - 190,3 Ед/л, АЛТ - 80,1 Ед/л, Х - 0,7 ммоль/л, ТГ - 1,3 ммоль/л, ХЛПНП - 2,5 ммоль/л, ХЛПВП - 0,6 ммоль/л, КР 53,2 мкмоль/л, ЩФ 489,0 МЕ/л. Результат расценен как хроническое токсическое поражение.

Крыса-самец линии Вистар №23, масса тела 195 г. В течение 50 дней, через день, per os, шприцем вводили 10% раствор формалина, из расчета 0,2 мл на 100 г массы тела животного. Содержание в крови ACT - 180,2 Ед/л, АЛТ - 105,4 Ед/л, Х - 1,5 ммоль/л, ТГ - 1,8 ммоль/л, ХЛПНП - 2,8 ммоль/л, ХЛПВП - 0,7 ммоль/л, КР 60,0 мкмоль/л, ЩФ 600,0 МЕ/л. Результат расценен как хроническое токсическое поражение.

Из представленной таблицы следует, что увеличение содержания ACT; АЛТ; (Р<0,001) в сыворотке крови указывают на усиление степени поражения печени и свидетельствуют о повреждении гепатоцитов, значительное снижение показателя X (Р<0,001), а также повышение ХЛПНП, ТГ (Р<0,05) и снижение ХЛПНП (Р<0,01) указывают на снижение синтетической функции печени, нарушения липидного обмена, а незначительное повышение уровня щелочной фосфатазы (Р<0,001) и снижение уровня креатинина(Р<0,001), на развитие холестаза.

Для подтверждения достоверности полученных изменений биохимических показателей дополнительно проведены гистологические исследования, для чего изучены микропрепараты.

Группа 1: Микроскопическая картина печени интактных животных без патологии. Балочное строение печени не нарушено на долю соединительной ткани приходится 0,5%. В единичных гепатоцитах выявлено наличие жировой дистрофии.

Группа 2: При гистологическом исследовании препаратов печени 20 отравленных крыс отмечается незначительное нарушение структуры паренхимы печени при более выраженных дистрофических изменениях гепатоцитов.

При хронической формалиновой интоксикации наблюдаются следующие морфологические изменения структуры печени: гепатоциты набухшие, локализованы преимущественно в перипортальной зоне, цитоплазма их мутная, границы клеток не четкие, ядра также набухшие (гидропическая дистрофия). Гепатоциты содержат овальные ядра с хорошо просматриваемыми ядрышками. В части гепатоцитов более выраженные изменения за счет увеличения в объеме клеток, цитоплазма их прозрачная (балонная дистрофия). В межбаллочном пространстве и в области соединений ткани триад неравномерное скопление лимфоцитов. Определяется дискомплексация печеночных балок, незначительная пролиферация соединительной ткани в портальных трактах с проникновением фиброзных тяжей вглубь долек. Отдельные клетки очень крупные, представляют собой сплошную вакуоль. Центральные дольковые вены расширены, полнокровны.

Таким образом, получена модель хронической интоксикации печени, вызванной пероральным введением формалина, выражающаяся в усилении дегенеративных процессов в печени, подтверждаемых повышением трансаминаз в сыворотке крови, сопровождаемая развивающейся креатининемией, снижением синтетической функции печени и развитием холестаза. Предлагаемый способ моделирования является достаточно информативным, близок к реальной клинической картине и показывает эффективность его использования в эксперименте.

Способ моделирования хронического токсического поражения печени применением формалина, отличающийся тем, что используют 10%-ный раствор формалина (CH₂O), который вводят крысам-самцам, через день, per os, шприцем, из расчета 0,2 мл на 100 г массы животного, в течение 50 дней.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, токсикологии, и может быть использовано для изучения формирования и прогрессирования изменений печени, возникающих под действием токсико-химических повреждающих факторов.

Способ лечения ишемических нарушений печени // 2563796

Изобретение относится к медицине, экспериментальной хирургии и может быть использовано для лечения, коррекции и профилактики последствий ишемического воздействия на печень в условиях временного ее выключения из кровообращения.

Способ ферримагнито-термохимиотерапии злокачественных опухолей комбинациями магнитоуправляемых нанопрепаратов с визуализацией онкогенеза, определением терапии, предпочтительной в режиме реального времени, и мониторингом результатов лечения в эксперименте // 2563369

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при ранней диагностике и лечении опухолей, индуцированных в эксперименте. Для раннего МРТ выявления опухолей, инвазий и метастазов животному вводят комбинации МРТ-негативных контрастных нанопрепаратов с позитивными МРТ контрастными препаратами.

Способ моделирования пролиферативной витреоретинопатии у крыс // 2563368

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной офтальмологии, и предназначено для получения модели пролиферативной витреоретинопатии. Для этого в полость стекловидного тела глаза крысы вводят 2 мкл изотонического раствора, содержащего 0,5 мкг - 0,5 мг конканавалина А.

Способ определения степени устойчивости к гипобарической гипоксии мелких лабораторных животных // 2563059

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использовано для определения степени устойчивости мелких лабораторных животных к острой гипобарической гипоксии.

Способ моделирования зубчатой аденомы толстой кишки // 2562878

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной онкологии, и может быть использовано в качестве модели опухоли толстой кишки. Для этого крысе в просвет общего желчного протока вводят пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,03-0.05 мл.

Способ моделирования комбинированного воздействия обедненным ураном // 2561295

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной токсикологии. И может быть использовано при исследовании механизмов токсического действия урана на функциональное состояние почек и других органов и систем при комбинированном воздействии.

Способ торможения роста лимфосаркомы плисса в эксперименте // 2561294

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальным исследованиям в онкологии, и может быть использовано для оценки противоопухолевого действия наночастиц (НЧ) металлов.

Способ моделирования фибромиомы матки // 2561000

Изобретение относится к медицине, к экспериментальной онкологии и может быть использовано в качестве модели фибромиомы матки. Моделирование проводят на самках кролика весом 3-4 кг введением серотонина.

Способ моделирования абсцесса печени // 2560778

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной гнойной хирургии, и может быть использовано для моделирования абсцесса печени. Для этого крысе линии Wistar под ультразвуковым контролем проводят чрескожную пункцию печени в определенной точке.

Способ лечения веррукозной формы лейкоплакии слизистой оболочки полости рта // 2564432

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для лечения веррукозной формы лейкоплакии слизистой оболочки полости рта. Для этого за 30 минут перед проведением криодеструкции под слизистую оболочку очага лейкоплакии вводят 0,5 мл 1% раствора никотиновой кислоты с помощью туберкулинового шприца.

Производные карбоновой кислоты, содержащие 2,5-замещенное оксазолопиримидиновое кольцо // 2564018

Изобретение относится к оксазолопиримидиновым соединениям формулы I в любой из его стереоизомерных форм или его физиологически приемлемой соли, где А выбирают из NH, О и S; X выбирают из (C1-С6)-алкандиила, (С2-С6)-алкендиила, и (С1-С6)-алкандиилокси, где атом кислорода (C1-C6)-алкандиилокси-группы связан с группой R2; R1 выбирают из водорода и (C1-C4)-алкила; R2 выбирают из фенилена, который необязательно замещен по одному или двум атомам углерода в кольце одинаковыми или различными заместителями R22; R3 выбирают из (C1-C6)-алкила, необязательно замещенного 1-3 атомами фтора, или R3 является остатком насыщенного или ненасыщенного 5-членного - 10-членного моноциклического или бициклического кольца, которое содержит 0, 1 или 2 гетероатома в кольце, выбранных из N, О и S, и представляет собой циклопентил, инданил, фенил, нафтил, тиазолил, изотиазолил, пиридил, бензотиазолил или хинолин, и где остаток кольца необязательно замещен по одному или двум атомам углерода в кольце одинаковыми или различными заместителями R31; R22 выбирают из (C1-C4)-алкила, необязательно замещенного 1-3 атомами фтора; R31 выбирают из галогена, (С1-С4)-алкила, необязательно замещенного 1-3 атомами фтора, (C1-C4)-алкилокси, необязательно замещенного 1-3 атомами фтора, и (C1-C4)-алкил-S(О)m-, необязательно замещенного 1-3 атомами фтора; m равен 0.

Синергические комбинации каротиноидов и полифенолов // 2563991

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к терапевтической противовоспалительной композиции, которая содержит один или несколько полифенолов и два или более каротиноидов, которые выбирают из группы, состоящей из лютеина, ликопена и β-каротина, где полифенолы выбирают из группы, состоящей из карнозной кислоты, кверцетина, резвератрола и галловой кислоты, в определенном количестве; к способу ингибирования или снижения образования супероксид-ионов, NO, TNF-α и/или PGE2 у субъекта-млекопитающего, которому вводят указанную выше композицию; к способу лечения патологических состояний, в которых супероксид-ионы, NO, TNF-α и/или PGE2 выполняют функцию модулятора или медиатора указанного состояния у субъекта-млекопитающего, которому вводят указанную выше композицию; к применению комбинации одного или нескольких полифенолов и двух или более каротиноидов, которые выбирают из группы, состоящей из лютеина, ликопена и β-каротина, где полифенолы выбирают из группы, состоящей из карнозной кислоты, кверцетина, резвератрола и галловой кислоты, в определенном количестве.

Фармацевтические композиции и терапевтические способы, в которых применяется комбинация комплексного соединения марганца и соединения в форме, не являющейся марганцевым комплексом // 2563825

Изобретение относится к медицине и описывает способ лечения патологического состояния, вызванного присутствием свободных кислородных радикалов у пациента, включающий введение указанному пациенту первого компонента, где первым компонентом является марганцевый комплекс Формулы I, в количестве, эффективном для лечения патологического состояния, и в качестве второго компонента - не являющийся марганцевым комплекс соединения Формулы I в количестве, эффективном для снижения поглощения марганца мозгом пациента по сравнению с введением первого компонента в отсутствие второго компонента, где второй компонент вводят в количестве от примерно 1 до 20 мкмоль/кг, где первый компонент и второй компонент включены в соотношении первый компонент:второй компонент в диапазоне от примерно 1:1 до 1:10 веса тела и где введение первого компонента и/или введение второго компонента необязательно вместе с одним или несколькими физиологически приемлемыми носителями и/или вспомогательными веществами.

Новые кристаллы сольватов // 2563631

Изобретение относится к кристаллам сольвата тритил олмесартана медоксомила с ацетоном, которые включают 1 моль ацетона на 1 моль тритил олмесартана медоксомила, вариантам способов их получения, а также к способу получения олмесартана медоксомила с использованием кристаллов сольвата тритил олмесартана медоксомила с ацетоном.

Средство, обладающее эндотелийпротекторной активностью // 2563622

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению n-тирозола в качестве эндотелийпротекторного средства. Изобретение позволяет расширить арсенал средств, обладающих эндотелийпротекторным действием.

Способ профилактики оксидативного стресса на фоне применения гормональной контрацептивной рилизинг-системы // 2563178

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и может быть использовано для профилактики оксидативного стресса на фоне гормональной контрацептивной рилизинг-системы.

Терапевтический агент (y-39983) против корнеальной эндотелиальной дисфункции // 2563141

Группа изобретений относится к медицине. Терапевтический агент против корнеальной эндотелиальной дисфункции, содержащий (R)-(+)-N-(1H-пирроло[2,3-b]пиридин-4-ил)-4-(1-аминоэтил)бензамид <Y-39983> или его фармакологически приемлемую соль (соединение (Ia)) в качестве активного ингредиента, агент для стимулирования адгезии корнеальных эндотелиальных клеток, содержащий соединение (Ia), среду для культивирования корнеальных эндотелиальных клеток, содержащую агент для стимулирования адгезии, имплант для корнеальной эндотелиальной кератопластики, содержащий корнеальные эндотелиальные клетки, каркас и соединение (Ia), и способ получения корнеального эндотелиального препарата, включающий стадию культивирования корнеальных эндотелиальных клеток с использованием среды для культивирования.

Способ снижения гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro // 2563119

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к аспектам, связанным с клеточным иммунитетом, и описывает способ снижения гормонально обусловленного иммуносупрессивного эффекта клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro.

Способ изготовления биологического стимулятора // 2561863

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ приготовления биологического стимулятора, включающего 50% биологически активной массы из личинок трутней, 49,7% раствора хлорида натрия и 0,3% консерванта, заключающийся в том, что для приготовления препарата соты с живым здоровым трутневым расплодом возрастом 3-5 дней выдерживают в холодильнике при температуре 3-4°C в течение 5-6 дней, затем соты с расплодом вскрывают и отбирают личинок трутней одинакового размера, светло-серого цвета, после чего личинок трутней измельчают в стерильной лабораторной мельнице, разводят стерильным раствором хлорида натрия с концентрацией 0,9% в пропорции 1:1 и автоклавируют при температуре внутри котла 120°C и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 1 часа, затем массу отфильтровывают через 2 слоя марли в стерильную мерную посуду, доводят стерильным раствором хлорида натрия с концентрацией 0,9% до первоначального объема, добавляют консервант фенол, разливают при соблюдении правил асептики и антисептики в подготовленные стерильные флаконы и герметично закупоривают их, автоклавируют при 120°C и давлении пара в рубашке 1,5 атмосферы в течение 20 минут.

Способ лечения бруцеллеза крупного рогатого скота // 2540428

(57) Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения бруцеллеза. Способ включает введение смеси медицинского раствора формальдегида и изотонического раствора натрия хлорида при соотношении весовых частей (2-6):(994-998).