Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц


G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2685413:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (RU)

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии. В качестве ПАВ используется 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятый в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%. Сенсебилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%. Изобретение обеспечивает получение эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц с повышенной чувствительностью. 3 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к способам получения диагностических препаратов, используемых для массовой прижизненной диагностики пуллороза тифа птиц.

Известен способ получения эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella pullorum-gillinarum, выделение из нее антигенной фракции, формалинизацию эритроцитов баранов и сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов полученным антигеном, отличающийся тем, что выделяют O-антигенную фракцию гидролизом бактериальной массы в 0,1%-ном растворе КОН при температуре 92-94°C в течение 110 120 мин, а сенсибилизацию проводят при температуре 45 50°C в течение 4 ч при концентрации O-антигенной фракции 1 1,2 мг на 1,0 см3 19 20%-ной взвеси эритроцитов в фосфатно-буферном растворе (Патент РФ №2070055, МПК A61K 39/112, G01N 33/555, опубликовано 10.12.1996).

Однако известный процесс изготовления пуллорного эритроцитарного антигена является недостаточно эффективным из-за низкого выхода целевого продукта.

Известен также способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93 96°C с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии (Патент РФ №2085949, МПК G01N 33/555, A61K 39/112, G01N 33/539, A61K 39/02, опубликовано 27.07.1997).

Задачей предполагаемого изобретения является повышение чувствительности целевого продукта.

Это достигается в способе изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93 96°C с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии тем, что в качестве поверхностно-активного вещества для выделения антигенной фракции используют 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%, а сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%.

Известно моюще-дезинфицирующие средства, представляющие собой смеси синтетических детергентов, главным образом анионоактивных и бактерицидных хлорсодержащих веществ. К числу таких средств относится дезмол (авт. свид. №223979, кл. C11D 3/065, 1966 г.). Дезмол содержит поверхностно-активное - вещество триполифосфат натрия, метасиликат натрия, хлорамин, кальцинированную соду, сульфат натрия и воду.

Известен способ получения натриевой соли сукцината хитозана (Патент RU 2144040, МПК С08В 37/08, A61K 31/722, Опубликовано 10.01.2000), который может быть использован в ветеринарии, медицине и косметике в качестве пленкообразователя, гидранта или эмульгатора.

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения, содержащие режимы способа изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц аналогичное заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию «новизны».

Все режимы способа осуществимы в промышленных условиях, направлены на решение реальной технической задачи, т.е. предложение «промышленно применимо».

Изобретение иллюстрируется на следующих примерах:

Пример 1.

А. Получение O-антигенной фракции.

Собранную биомассу после глубинного культивирования в биореакторах штамма S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя пуллороза-тифа ресуспендируют с помощью поверхностно-активного вещества и щелочи (0,8%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1% и 1%-ный водный раствор двууглекислого натрия, взятый в конечной весовой концентрации 0,1% или 0,2%-ный раствор NaOH, взятый в конечной весовой концентрации 0,01%) до концентрации 25 млрд. микробных клеток в 1 мл и экстрагируют в течение 60 мин при t 93-96°C. Экстракт освобождают от клеточного дейтрита центрифугированием на центрифуге OTP-101 К (20000 об/мин) и прогревают при t 93°C в течение 50 мин. Полученный экстракт фильтруют и используют для сенсибилизации эритроцитов барана.

Б. Сенсибилизация эритроцитов барана.

Сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят экстрактом антигенного комплекса в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5%. На 1 л 20% взвеси формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе pH 7,2 добавляют 300 мл экстракта антигена. Тщательно перемешивают и подогревают в водяной бане при t 56°C 30 мин. Затем взвесь эритроцитов выдерживают при t 40°C 2 ч или при комнатной температуре 12 ч. Бутыли оставляют для осаждения методом отстоя. По мере оседания эритроцитов сенсибилизирующий раствор сливают, а к осадку доливают равный объем буфера с 0,15% формальдегида. Операцию повторяют 3-4 раза до полного осветления надосадочной жидкости.

Отмытые сенсибилизированные эритроциты фильтруют через бязево-марлевую салфетку, ресуспендируют в стерильном фосфатно-буферном растворе, содержащем 0,15% формальдегида, до 10% концентрации и выдерживают при t 37°C 24 ч. Далее производится расфасовка в 20 мл флаконы, получая состав 1 эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц.

Пример 2.

А. Получение О-антигенной фракции.

Собранную биомассу после глубинного культивирования в биореакторах штамма S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя пуллороза-тифа ресуспендируют с помощью поверхностно-активного вещества и щелочи (1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,5% и 2%-ный водный раствор двууглекислого натрия, взятый в конечной весовой концентрации 0,2% или 0,3%-ный раствор NaOH, взятый в конечной весовой концентрации 0,015%) до концентрации 25 млрд. микробных клеток в 1 мл и экстрагируют в течение 80 мин при t 96°C. Экстракт освобождают от клеточного дейтрита центрифугированием на центрифуге OTP-101 К (16000 об/мин) и прогревают при t 96°C в течение 60 мин. Полученный экстракт фильтруют и используют для сенсибилизации эритроцитов барана.

Б. Сенсибилизация эритроцитов барана.

Сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят экстрактом антигенного комплекса в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 1,5%. На 1 л 20% взвеси формалинизированных эритроцитов на фосфатно-буферном растворе pH 7,2 добавляют 300 мл экстракта антигена. Тщательно перемешивают и подогревают в водяной бане при t 56°C 30 мин. Затем взвесь эритроцитов выдерживают при t 40°C 2 ч или при комнатной температуре 12 ч. Бутыли оставляют для осаждения методом отстоя. По мере оседания эритроцитов сенсибилизирующий раствор сливают, а к осадку доливают равный объем буфера с 0,15% формальдегида. Операцию повторяют 3-4 раза до полного осветления надосадочной жидкости.

Отмытые сенсибилизированные эритроциты фильтруют через бязево-марлевую салфетку, ресуспендируют в стерильном фосфатно-буферном растворе, содержащем 0,2% формальдегида, до 10% концентрации и выдерживают при t 37°C 24 ч. Далее производится расфасовка в 20 мл флаконы, получая состав 2 эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц.

Пример 3. Эффективность эритроцитарного диагностикума (полученного согласно примерам 1-2 и прототипа) для диагностики пуллороза-тифа птиц определяют на курах. 60 цыплят в возрасте от 50 дней заражают возбудителем пуллороза-тифа в дозе 0,03 мл штаммом S. gallinarum pullorum 24КСТ, ЛБ, 10-Б в "S''-форме возбудителя и делят на три группы по 20 цыплят в каждой группы. Через 10 дней диагностику пуллороза-тифа определяют в кровекапельной реакции непрямой гемаплютинации (ККРНГА) на предметном стекле путем выявления антигена пуллороза-тифа. Кровь для ККРНГА берут у птиц из гребня или подкрыльцовой вены. Каплю крови наносят на сухое, обезжиренное предметное стекло и добавляют к ней каплю эритроцитарного диагностикума (полученного согласно примерам 1-2 и прототипа). Соотношение состава 1 или 2 или прототипа и крови должно быть 1:1. Кровь цыплят каждой группы смешивают с составом 1, 2 и прототипа (кровь группы 1 смешивают с составом 1, кровь группы 2 смешивают с составом 2, кровь группы 3 смешивают с составом, полученным согласно способу-прототипу). Предметное стекло покачивают на грелке-качалке при температуре от 37° до 40°C. Температура в помещении, где ставят реакцию, должна быть не ниже 18°C. На одном предметном стекле ставят одновременно не более трех реакций. Учет результатов реакции проводят визуально. Реакцию на эритроцитарный антиген считают положительной, если в течение 2 минут в смеси крови с антигеном выпали хорошо заметные хлопья коричневого цвета с просветлением жидкости Реакцию считают сомнительной, если в течение 2 минут в смеси крови с антигеном появились слабовыраженные мелкозернистые хлопья коричневого цвета; Отрицательная реакция характеризуется образованием в капле крови с антигеном равномерной стабильной гомогенной взвеси эритроцитов барана.

В группах 1 и 2 цыплят у всех цыплят реакция на эритроцитарный антиген была положительной. В группе 3 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была положительной у 12 цыплят, у 5 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была сомнительной, а у 3 цыплят реакция на эритроцитарный антиген была отрицательной.

Таким образом, чувствительность целевого продукта повысилась на 40%.

Кроме того, пуллорный эритроцитарный диагностикум, приготовленный предлагаемым способом, сохраняет свою активность и специфичность в течение 3-х лет при 4-8°C. При таком способе получают из бактериальной массы S.gallinarum-pullorum O-антиген, обладающий максимально возможной сенсибилизирующей, антителосвязывающей, агглютинирующей активностью, комплементарностью и способностью вступать в прочную химическую связь с рецепторами эритроцитов, который по своей диагностической ценности в кровекапельной реакции непрямой гемагглютинации превосходит известный пуллорный эритроцитарный диагностикум.

Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц, включающий получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции обработкой бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°С с последующей сенсибилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии, отличающийся тем, что в качестве поверхностно-активного вещества для выделения антигенной фракции используют 0,8-1,2%-ный водный раствор Дезмола, взятого в конечной весовой концентрации 0,1-0,5%, а сенсибилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5%.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к способу дифференциальной диагностики грибовидного микоза. Для этого проводят анализ взятого у пациента биологического материала из очага поражения и проведение иммуногистохимического исследования биоптатов.

Изобретение относится к области ветеринарной и медицинской гельминтологии. Способ получения чистой жизнеспособной культуры протосколексов Echinococcus multilocularis предусматривает получение чистой жизнеспособной культуры протосколексов Е.
Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для получения антигена для дифференциальной диагностики вакцинированных и больных бруцеллезом животных.

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает серологическое исследование крови серонегативных животных на лейкоз с применение РИД в течение 5 дней после учета и оценки реакции на ППД-туберкулин для млекопитающих.
Изобретение относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использовано при получении эритроцитарного антигена для диагностики некробактериоза животных.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и санитарной эпидемиологии. Предложен способ получения имитаторов патогенных биологических агентов путем обработки суспензии клеток возбудителя опасного инфекционного заболевания СВЧ-облучением с частотой 2450 МГц, мощностью 6 Вт/см3 двукратно по 5 минут.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения диагностикума для определения концентрации лечебного рекомбинантного α-интерферона в сыворотке крови больных вирусными инфекциями.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и может быть использовано в технологии изготовления референс-панели сывороток, содержащих антигены и антитела к тестируемому вирусу, для контроля чувствительности, специфичности тест-систем иммуноферментных, иммунохемилюминесцентных и иммуноблотов.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для получения эритроцитарного сибиреязвенного антигена для набора определения антител в сыворотке крови животных, вакцинированных против сибирской язвы.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к получению диагностических препаратов. При осуществлении предлагаемого способа получения сыворотки для диагностики алеутской болезни норок (АБН) получают высокоочищенный вирусный антиген путем гомогенизации органов инфицированных АБН норок с последующим трехкратным замораживанием/размораживанием гомогената, дезинтеграции клеточного гомогената трехкратной ультразвуковой обработкой, осаждением неразрушенных клеток двукратным низкоскоростным центрифугированием, последующим осаждением иммунных комплексов, уплотнением осадка низкоскоростным центрифугированием, экстрагированием иммунных комплексов (ИК) минимальными количествами ТНЭ буфера путем трехкратной экстракции на холоду в течение 1-2 часов с последующим низкоскоростным центрифугированием, осаждением ИК высокоскоростным центрифугированием из объединенных экстрактов при 30000 об/мин в течение 2,5 часов, извлечением ИК из осадка минимальными количествами ТНЭ буфера путем трехкратного экстрагирования на холоду в течение 1-2 часов с последующим низкоскоростным центрифугированием, диссоциацией иммунных комплексов в кислой среде в течение 1 часа на холоду, отделением вируса АБН-Ф от антител высокоскоростным ультрацентрифугированием, растворением осадка в минимальном количестве карбонатного буфера, отделением ферритина от вирусных частиц на колонке с сефарозой 6B в системе карбонатного буфера.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии и профилактической медицине и раскрывает cпособ определения предрасположенности к развитию осложнений заболеваний сердечно-сосудистой системы при экстремальных изменениях климатических условий.

Изобретение относится к медицине и касается способа хроматографической очистки тканевого активатора плазминогена, где проводят цинк-хелатную хроматографию на металлхелатном сорбенте с метакрилатной матрицей, затем аффинную хроматографию на пептидном аффинном сорбенте Capture Select tPA и затем переводят тканевой активатор плазминогена в финальный буферный раствор путем хроматографии на сильном катионообменном сорбенте, с повышением содержания хлорида натрия и аргинина в промывочных буферных растворах.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для диагностики и лечения синдрома раздраженного кишечника (СРК). Описаны способы, анализы и системы для диагностики, выбора терапии и лечения СРК на основании уровня антител к винкулину и к CdtB у субъекта.

Группа изобретений относится к области создания магазинов аналитических средств. Магазин аналитических средств содержит множество аналитических вспомогательных средств, по меньшей мере два отсека, в которые помещены аналитические вспомогательные средства, при этом каждое из аналитических вспомогательных средств содержит по меньшей мере один тестирующий элемент с по меньшей мере одним химическим реактивом для распознавания по меньшей мере одного аналита в пробе жидкости.

Изобретение относится к области ветеринарии, микробиологии и биотехнологии. Предложен способ выявления и количественной оценки содержания ДНК U.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, и предназначено для прогнозирования преждевременных родов. Используя показатели концентрации общего количества внеклеточной ДНК (овДНК) и концентрации IL-8 в плазме периферической крови у беременных женщин на 22-36 неделях гестации, определяют переменную Р.
Изобретение относится к медицине, гинекологии и может быть использовано в лечении пациенток с пролапсом гениталий при недифференцированной дисплазии соединительной ткани.

Изобретение относится к способу определения свинца(II) в водных объектах окружающей среды и биологических образцах. Способ включает приготовление полимерной сенсорной пленки, которую помещают в испытуемый образец и по изменению цвета полимерной сенсорной пленки определяют наличие в нем свинца(II), количество которого определяют по калиброванной цветовой шкале, предварительно полученной из не менее 5-ти испытуемых образцов с известными концентрациями свинца.

Изобретение относится к измерительной технике и может быть использовано для тестирования жидкой пробы. Заявлен блок носителя реагентов, представляющий собой картридж сосудов или микропланшет, имеющий множество реакционных сосудов, содержащий соединительную часть для обеспечения разъемного соединения с соединительной частью (18) пипетирующей руки средств пипетирования лабораторного робота (1) для разъемного соединения пипетирующего наконечника.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и представляет собой способ оценки эффективности нейроретинопротективного лечения первичной открытоугольной глаукомы с применением препарата Ретиналамина, включающий определение содержания нейронспецифической энолазы (neuron specific enolase или NSE) в слезной жидкости, согласно изобретению ее определяют до и после лечения и при снижении содержания NSE не менее чем на 20% от исходного показателя результат нейроретинопротекции оценивают как эффективный.

Изобретение относится к области биотехнологии, биохимии, молекулярной биологии, микробиологии и медицине. Предложен ДНК-чип и набор для идентификации генетических детерминант резистентности микроорганизмов - возбудителей инфекций, приводящих к нарушению репродуктивных функций человека: Treponema pallidum, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealiticum, Atopobium vaginae, Enterococcus faecalis, Trichomonas vaginalis, Escherichia coli, Mobiluncus mulieris, Streptococcus anginosus, Fusobacterium nucleatum, Staphylococcus epidermidis, Bacteroides fragilis, к антимикробным препаратам, включающим антибиотики пенициллинового ряда, цефалоспорины, тетрациклины, фторхинолоны, макролиды, нитроимидазолы, спектиномицин.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10-ной суспензии. В качестве ПАВ используется 0,8-1,2-ный водный раствор Дезмола, взятый в конечной весовой концентрации 0,1-0,5. Сенсебилизацию формалинизированных эритроцитов проводят в присутствии натриевой соли сукцината хитозана, взятой в конечной весовой концентрации 0,5-1,5. Изобретение обеспечивает получение эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц с повышенной чувствительностью. 3 пр.

Наверх