Комбинация омега-3 жирной кислоты и sglt-2 ингибитора для лечения болезней печени

Группа изобретений относится к лечению NAFLD или NASH. Раскрыты применения комбинации, содержащей эффективную дозу композиции омега-3 жирных кислот в виде Epanova® и эффективную дозу ингибитора SGLT-2 - дапаглифлозина, для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, для снижения содержания жира в печени у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени, для снижения содержания жира в печени и снижения воспаления в печени у субъекта, для остановки прогрессирования фиброза печени у субъекта, для остановки прогрессирования NAFLD и/или NASH. Группа изобретений обеспечивает улучшение показателя по шкале активности NAFLD у субъекта. 8 н. и 11 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 табл., 4 пр.

 

Настоящее изобретение относится к способам лечения неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD или НАЖБП) и/или неалкогольного стеатогепатита (NASH или НАСГ) комбинацией ингибитора натрий-глюкозного котранспортера 2-го типа (SGLT2) и композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде свободных кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей). Настоящее изобретение также относится к способам лечения NAFLD и/или NASH, где ингибитор SGLT2 представляет собой дапаглифлозин и/или композиция омега-3 жирных кислот предоставлена в виде Epanova® (USAN = омега-3 карбоновые кислоты). Настоящее изобретение далее относится к комбинациям Epanova® и ингибиторов SGLT-2. Настоящее изобретение далее относится к комбинациям дапаглифлозина и композиций омега-3 жирных кислот. Настоящее изобретение также относится к определенной комбинации дапаглифлозина и Epanova®.

NAFLD поражает приблизительно 15-40% от общей численности населения (источник: Alimentary Pharmacol Ther, 2014, 39, 254-269), до 85% людей, страдающих ожирением, и 75% пациентов с диабетом 2-го типа и охватывает целый спектр заболеваний от неосложненного стеатоза (неалкогольного стеатоза печени - NAFL) до NASH. Лишь в немногих исследованиях рассматривалась распространенность NASH, и хотя в большинстве из них указана распространенность на уровне 3-7%, однако, недавнее исследование методом биопсии печени показало, что эта цифра может быть выше, чем предполагали ранее - 10,9% у населения, не страдающего диабетом, и 22,2% в когорте диабетиков (Williams, Gastroenterology 2011; 140: 124-131). NASH может развиться в фиброз и цирроз печени, и, следовательно, стать опасным для жизни заболеванием. Кроме того, риск развития сердечно-сосудистых патологий или гепатоцеллюлярного рака выше у пациентов с NASH. Весь спектр NAFLD связывают с метаболическим синдромом. Появляется все больше доказательств того, что среди больных, страдающих NASH, к развитию фиброза наиболее предрасположены пациенты с плохим контролем уровней глюкозы и более тяжелой резистентностью к инсулину (Moore JB. Non-alcoholic fatty liver disease: the hepatic consequence of obesity and the metabolic syndrome. Proc Nutr Soc 2010; 69: 211-20). В определение NAFLD входит: >5,56%, или чаще >5,5%, содержания жира в печени, установленного с помощью магнитно-резонансной спектроскопии (МРС) или магнитно-резонансной томографии (МРТ).

Диагноз NASH устанавливается на основании клинической картины и результатов гистопатологического исследования. Для установления диагноза NASH требуется, например, чтобы потребление алкоголя субъектом было незначительным. Гистопатологический диагноз делается квалифицированным патологоанатомом и, как правило, производится по наличию четырех признаков, по которым также измеряют уровень активности и стадию заболевания печени, и которые вместе взятые повышают вероятность того, что пациент страдает NASH. Этими четырьмя признаками являются степень стеатоза, степень лобулярного воспаления, степень баллонирования (активности) и степень фиброза (стадия). Дифференциация диагноза NASH от NAFL может также включать другие гистопатологические признаки в определенной комбинации со стеатозом, лобулярным воспалением и баллонированием.

Стеатоз, лобулярное воспаление и баллонирование, как упоминается выше, оценивают по комбинированной NAS (шкала активности NAFLD), см. Kleiner et al, Hepatology, 2006, 41(6), 1313-1321:

* Процентное содержание гепатоцитов, содержащих капельки жира

По мере роста NAS, повышается вероятность NASH, причем в общем случае при показателе NAS, равном 5, вероятность наличия NASH составляет 70%, при показателе NAS, равном 6 и более, вероятность наличия NASH составляет почти 100%. У пациентов, показатель NAS которых равен, например, 3, NASH может быть, но с малой вероятностью.

Степень фиброза оценивают отдельно (по биопсии печени) для выявления стадии заболевания, но это не требуется для подтверждения диагноза NASH:

В данной области известны различные биомаркеры нарушения функции печени или повреждения печени. В их число входят трансаминазы (АЛТ и ACT), алкалинфосфатаза (АЛФ) (повышенный уровень которой может свидетельствовать о заболевании желчных протоков), гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ) и цитокератин (СК)18. Изменения в одном, двух, трех или всех этих маркерах можно использовать в качестве биомаркера изменений в стадии болезни печени, потенциально снижая или исключая необходимость биопсии печени с целью выяснения стадии заболевания.

В некоторых исследованиях была изучена эффективность лечения пациентов, страдающих NAFLD и/или NASH, производными омега-3 жирных кислот (действие на степень стеатоза рассмотрена в публикации Parker et al, J Hepatology, 2012, 56, 944-951), однако необходимы дополнительные клинические испытания для определения оптимальной дозы, соответствующих популяций больных и количественного определения благоприятного эффекта от этого терапевтического лечения.

SGLT2 входит в семейство белков, которые, пользуясь электрохимическим натриевым градиентом, переносят глюкозу в противоположном направлении градиенту концентрации натрия внутри клеток. В разных тканях находятся разные транспортеры Na+/глюкозы: SGLT1 в основном находится в слизистой оболочке кишок в тонком кишечнике и в S3 сегменте проксимальных канальцев нефрона в почке; a SGLT2 в основном находится в S1 сегменте проксимальных канальцев нефрона в почке.

Сахарный диабет возникает в результате несоответствия в потребности и доставке инсулина, приводящего к повышенным уровням глюкозы. При лечении сахарного диабета с использованием ингибиторов SGLT2 снижаются уровни глюкозы в плазме путем подавления повторной абсорбции глюкозы в почках, и вследствие этого происходит повышенное выделение глюкозы с мочой. Долговременный и, особенно, плохо контролируемый диабет приводит к ряду осложнений, например, со стороны сердечно-сосудистой системы, некоторые из которых могут стать опасными для жизни. Одним из возможных осложнений является повышение уровня триглицеридов, поэтому уровни триглицеридов в крови у многих пациентов-диабетиков выше рекомендованных.

Пациенты с NAFLD характеризуются гиперинсулинемией и селективной резистентностью к инсулину - сниженной активностью инсулина в отношении выработки глюкозы печенью, но повышенной активностью инсулина на жирообразование "de novo" вследствие гиперинсулинемии.

В публикации Tormeno et al (Expert Opinion Emerging Drugs, 2013, 18(3), 279-290) рассматриваются новые лекарства для лечения NASH.

Было исследовано действие ингибитора SGLT-2 ипраглифлозина при лечении анормального отложения печеночных липидов, см. Katsuno et al, US 2008/0045466, раскрытие которого включено в данный документ ссылкой.

Было исследовано действие ипраглифлозина на различные показатели, в том числе, стеатоз печени у мышей (Eur J Pharmacology, 715 (2013), 246-255).

В международной патентной заявке за номером WO 2014/142364 (Mochida Pharmaceuticals) раскрыто применение ЕРА или ее производных (таких, как Epadel™) для лечения жировой болезни печени или расстройства, там же приведен протокол Фазы 2 клинических испытаний. Результаты Фазы 2 клинических испытаний Epadel™ в лечении NASH обнародованы в публикации Sanyal et al (Gastroenterology, 2014, 147; 377-384); Epadel™ не продемонстрировал сколько-нибудь значительного действия на стеатоз печени или на какие-либо гистологические признаки NASH в этом испытании.

В патентной заявке США US 2014/0187633 описаны способы лечения или профилактики неалкогольного стеатогепатита и/или первичного билиарного цирроза, используя омега-3 жирные кислоты, в частности, очищенный этилэйкозапентаеноат.

В некоторых исследованиях было показано, что дапаглифлозин имеет тенденцию к снижению содержания жира в печени диабетиков (Bolinder, J Clin Endocrinol Metab, 2012 Mar; 97(3): 1020-31), однако, механизм этого действия не совсем понятен.

Предполагается, что дапаглифлозин может снижать содержание жира в печени двумя механизмами - отрицательным энергетическим балансом, а также повышенным соотношением глюкагон/инсулин, в то время как Epanova® может снижать содержание жира в печени путем снижения жирообразования "de novo" и улучшения функции жировой ткани, уменьшая высвобождение жирных кислот, что впоследствии также делает вклад в снижение массы жира в организме и, вследствие этого уменьшает поток жирных кислот в печень. Поэтому предполагается, что комбинация дапаглифлозина и Epanova® может привести к дополнительному снижению жира в печени, по сравнению с их индивидуальным действием, благодаря действию на различные механизмы, участвующие в регуляции жира в печени. Согласно данному изобретению снижение жира в печени под действием этой комбинации включает в себя лечение неалкогольной жировой болезни печени (NAFLD) и/или неалкогольного стеатогепатита (NASH).

Неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD или НАЖБП) широко распространена среди пациентов с сахарным диабетом, и растет свидетельство тому, что у пациентов с диабетом 2-го типа существует особенно высокий риск развития прогрессирующих форм NAFLD, неалкогольного стеатогепатита (NASH или НАСГ) и связанного с ними запущенного фиброза печени. Внешнесекреторная недостаточность поджелудочной железы (Pancreatic Exocrine Insufficiency - PEI) с нарушением выработки и секреции желудочных ферментов, таких как амилазы и липазы, также чаще встречается у пациентов с сахарным диабетом. Синдром приводит к нарушенному гидролизу жирных кислот в природном триглицериде или этерифицированной форме. Лечение пациентов, страдающих PEI (а также NAFLD и/или NASH), комбинацией по данному изобретению, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя омега-3 жирные кислоты в форме свободной кислоты, может быть более эффективным в отношении снижения содержания жира в печени, чем лечение комбинацией по данному изобретению, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя омега-3 жирные кислоты в форме эфира или триглицерида (для абсорбции которых необходим гидролиз липазой до формы свободной жирной кислоты).

Нами исследовано действие Epanova (Эпанова), дапаглифлозина и комбинации этих двух компонентов в двух доклинических исследованиях и клинических испытаниях на людях, описанных в Примерах в данном документе.

Несмотря на то, что в двух доклинических исследованиях был показан некоторый благоприятный эффект при лечении NASH с использованием Эпанова, в двух мышиных моделях NASH использование дапаглифлозина не продемонстрировало какого-либо эффекта, и любой положительный эффект от комбинации был приписан наличию компонента Эпанова. Неожиданно, было предположено, что результаты при исследовании II действия на людях (Effect II human clinical trial, протокол описан в Примерах далее) продемонстрируют благоприятный эффект от комбинации.

В предшествующих исследованиях на людях - пациентах-диабетиках, было показано, что ингибиторы SGLT2 снижают вес тела и повышают чувствительность к инсулину, а также демонстрируют тенденцию к снижению содержания жира в печени. В исследованиях NASH на мышиной модели, включенных в настоящую заявку, не наблюдали изменений в весе тела, уровнях глюкозы или инсулина или в содержании жира в печени, однако, мышиные модели NASH были не диабетической моделью, а моделью ожирения и устойчивости к инсулину. Поэтому вероятно, что мышиные модели, используемые в Примерах в данном документе, адекватно не отражают действие от введения ингибиторов SGLT-2 пациентам-диабетикам в отношении снижения содержания жира в печени или других элементов шкалы активности NAFLD.

Краткое описание изобретения

В одном аспекте настоящего изобретения предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH.

В одном аспекте композиция омега-3 предложена в виде Epanova® или биоэквивалентного ему варианта.

В другом аспекте ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин.

В одном аспекте лечение включает в себя: выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В другом аспекте лечение включает в себя: выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В одном аспекте субъекту установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ). В одном варианте осуществления лекарственный препарат также приводит к снижению уровня содержания триглицеридов у субъекта. В другом варианте осуществления лекарственный препарат также приводит к повышению уровней ЕРА и/или DHA у субъекта. В дополнительном варианте осуществления лекарственный препарат также приводит к снижению гибели клеток и/или баллонирования в печени у субъекта. В дополнительном варианте осуществления у субъекта избыточный вес (ИМТ>25).

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для снижения содержания жира в печени и снижения воспаления в печени у субъекта, нуждающегося в этом.

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для остановки прогрессирования фиброза печени у субъекта, нуждающегося в этом.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина, в случае субъекта с установленным диагнозом NAFLD или NASH, для применения, останавливающего прогрессирования NAFLD и/или NASH, включающего в себя введение комбинации и вызывающего тем самым остановку прогрессирования фиброза печени у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в лечении NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, включающего в себя введение комбинации и вызывающего тем самым снижение веса субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в лечении NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, включающего в себя введение комбинации и вызывающего тем самым повышение чувствительности субъекта к инсулину.

В дополнительном аспекте предложена комбинация Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и дапаглифлозина.

В одном варианте осуществления применяется 1 г, 2 г или 4 г препарата

Эпанова в день.

В другом варианте осуществления применяется 5 или 10 мг дапаглифлозина.

В одном аспекте в настоящем раскрытии предложены способы лечения NAFLD и/или NASH, включающие в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении. В одном варианте осуществления этого аспекта способ предназначен для лечения NASH.

В определенном аспекте лечение композицией омега-3 жирных кислот и ингибитором SGLT-2 особенно эффективно для улучшения показателя стеатоза субъекта, и тем самым особенно эффективно для снижения содержания жира в печени.

В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается беспрепятственное или нормальное выделение желчи, отсутствуют повреждения печени, нарушения функции печени не наблюдаются, наблюдается нормальное содержание прямого билирубина и отсутствует заболевание желчных путей или заболевание желчных путей у субъекта находится в начальной стадии.

В некоторых вариантах осуществления у субъекта нет состояния, выбранного из группы, состоящей из алкогольного повреждения печени, медикаментозного повреждения печени, хронического активного гепатита, цирроза и рака печени.

В некоторых аспектах у субъекта в семейном анамнезе нет жировой болезни печени.

В других аспектах субъект имеет один или несколько генетических полиморфизмов, связанных с повышенным риском жировой болезни печени.

В других аспектах у субъекта в семейном анамнезе есть жировая болезнь печени.

В одном аспекте у людей, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями композиций омега-3 жирных кислот и ингибиторов SGLT-2, выявлен диагноз диабета II типа (дополнительно к NAFLD и/или NASH). В другом аспекте у людей, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями, отсутствует диагноз диабета II типа. В дополнительном аспекте у людей, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями, отсутствуют симптомы диабета и их уровень глюкозы в крови ниже 11,1 ммоль/л, их уровень глюкозы в плазме натощак ниже 7 ммоль/л; или их уровень глюкозы в плазме через 2 часа ниже 11,1 ммоль/л в ходе пероральной пробы на толерантность к глюкозе.

В одном аспекте люди, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями композиций омега-3 жирных кислот и ингибиторов SGLT-2, страдают внешнесекреторной недостаточностью поджелудочной железы (дополнительно к NAFLD и/или NASH). В дополнительном аспекте люди, которые будут получать лечение, страдают внешнесекреторной недостаточностью поджелудочной железы и диабетом II типа (дополнительно к NAFLD и/или NASH). В некоторых аспектах пациенты, которые будут получать лечение, имеют избыточный вес и их индекс массы тела (ИМТ)>25.

В дополнительном аспекте в настоящем раскрытии предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей).

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей), и где композиция омега-3 жирных кислот содержит DHA.

В одном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот в виде свободной кислоты.

В одном аспекте комбинация ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот снижает содержание жира в печени больше, чем каждый из компонентов, взятый по отдельности.

В другом аспекте комбинация ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот может снижать содержание жира в печени на уровне, примерно равном суммарному эффекту от индивидуальных компонентов (т.е. имеет аддитивное воздействие).

В другом аспекте комбинация ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот может снижать содержание жира в печени больше, чем суммарный эффект от индивидуальных компонентов взятых по отдельности (т.е. имеет воздействие больше аддитивного).

Конкретные предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения будут понятны из последующего более детального описания определенных предпочтительных вариантов осуществления и формулы изобретения.

В одном варианте осуществления настоящее изобретения предлагает способы, где теплокровное животное представляет собой человека.

В одном варианте осуществления композиция омега-3 жирных кислот имеет вид капсулированного масла.

"Внешнесекреторная недостаточность поджелудочной железы"

Проверка достоверности и более широкое использование тестов концентрации фекальной эластазы-1 (FE-1) (FEC), измеряемой с помощью панкреатической эластазы-1, позволили провести недавние исследования на более крупных популяциях для определения распространенности внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы (PEI). Фекальная эластаза-1 представляет собой очень стабильный белок, выделяемый экзокринной поджелудочной железой и присутствующий в неизмененном виде в фекалиях. Тест FE-1 имеет высокую прогностическую ценность и высокую чувствительность в отношении PEL Хорошая корреляция наблюдается между массой FEC и липазой (r=0,84; р<0,001), амилазой, трипсином двенадцатиперстной кишки, объемом и выходом по бикарбонату. Предполагается, что значение FEC <100 μг/г или <200 μг/г является признаком PEI. См. Stevens et al, DigDisSci 2004; 49:1 405-11. Другие способы диагностики PEI известны в данной области и также могут быть применимы для диагностики пациентов, страдающих PEI, а также NAFLD и/или NASH, к которым может быть применимо лечение согласно настоящему раскрытию.

Омега-3 жирные кислоты

Фармацевтические композиции, обогащенные омега-3 полиненасыщенными жирными кислотами (ПНЖК), были разработаны для лечения по различным клиническим показаниям, включая различные расстройства липидов крови, включая гипертриглицеридемию и смешанную дислипидемию.

Омега-3 (ОМ3) жирные кислоты, как правило, представляют собой натуральным образом полученные смеси из таких источников, как рыба, которые затем могут быть подвергнуты дальнейшей обработке, и часто находятся в сочетании с другими жирными кислотами, такими как омега-6 жирными кислотами. Точный состав смеси жирных кислот может зависеть от источника кислот и степени и характера дальнейшей обработки. Обычно такие смеси обогащены эйкозапентаеновой кислотой (С20:5 n-3) ("ЕРА", также известной как тимнодоновая кислота). Докозагексаеновая кислота (С22:6 n-3) ("DHA", также известная как цервоновая кислота) и/или докозапентаеновая кислота (С22:5 n-3) ("DPA", также известная как клупанодоновая кислота) также обычно может присутствуовать в некотором соотношении.

Были одобрены несколько продаваемых по рецепту омега-3 продуктов для применения человеком, например, одобренные Управлением по контролю качества пищевых продуктов и медикаментов (FDA) лекарства на основе омега-3 этилового эфира. FDA в США в 2004 г. первой была одобрена смесь этиловых эфиров омега-3 жирных кислот (Lovaza®, этиловые эфиры омега-3-кислот, GlaxoSmithKline, Research Triangle Park, NC) в качестве диетической добавки для снижения уровней TG (триглицеридов) у взрослых с очень высокими (≥500 мг/дл) уровнями TG. Активный ингредиент в Lovaza® включает этиловые эфиры (ЕЕ) жирных кислот, в основном ЕРА-EE (примерно 465 мг/1 г капсулы) и DHA-EE (примерно 375 мг/1 г капсулы). Рекомендуемая доза Lovaza® - 4 г/день.

Недавно в разных странах получил разрешения на продажу воспроизведенный аналог Lovaza® производства компании Teva Pharmaceuticals (Petah Tikva, Central District), а также лекарства со сходной смесью ЕЕ, такие как Omtryg® (этиловые эфиры омега-3-кислоты A, Trygg Pharmaceuticals, Oslo, Norway). Другие товарные знаки могут также быть использованы для некоторых из этих продуктов в различных странах.

В данном документе ссылка на "биоэквивалентный вариант" композиции, предназначена для обозначения варианта композиции, который получил или может получить разрешение на продажу регулирующим органом на основании его биоэквивалентности данной композиции. Фармацевтические продукты являются биоэквивалентными, если они фармацевтически эквивалентны (одна и та же лекарственная форма и путь введения, например) и их биодоступность (скорость и степень доступности) после введения в одинаковой молярной дозе сходна до такой степени, что можно ожидать, что их действие с учетом эффективности и безопасности будет в основном одинаковым.

Для удобства в данном документе композиции омега-3 жирных кислот, включающие в себя смесь омега-3 жирных кислот в основном в виде этиловых эфиров, будут обозначаться как композиции ОМ3-ЕЕ (что может быть сокращено до ОМ3-ЕЕ).

В определенных вариантах осуществления композиция омега-3 жирных кислот включает в себя ЕРА, в основном в виде эфира, и DHA, в основном в виде эфира. Фармацевтическая композиция омега-3 может включать в себя ЕРА, в основном в виде этилового эфира, в массовой доле, составляющей примерно 35-60%, и DHA, в основном в виде этилового эфира, в массовой доле, составляющей примерно 25-50%.

Vascepa® (INN этил икозапент, Amarin Pharma Inc., Bedminster, NJ), содержит очищенный ЕРА-EE, и его рекомендуемая доза составляет 4 г/день. Epadel® представляет собой рецептуру ЕРА-EE, которая одобрена в Японии и поставляется на рынок компанией Mochida Pharmaceuticals.

Однако для ЕРА-EE и DHA-EE перед всасыванием из кишечника требуется гидролиз панкреатической липазой, поэтому для оптимального усвоения их следует принимать с едой. Высвобождение панкреатических липаз стимулируется жирами, принимаемыми с пищей, а поскольку некоторым пациентам с тяжелой формой гипертриглицеридемии в качестве части их лечения рекомендовано придерживаться диеты с низким содержанием жиров, существует большая заинтересованность в лекарственной ОМ3 жирной кислоте с повышенной биодоступностью, которая не подпадает под действие этих диетических ограничений.

Epanova® (USAN омега-3 карбоновые кислоты) был одобрен FDA в мае 2014 г. в дозах по 2 г или 4 г в качестве диетической добавки для снижения уровней триглицеридов (TG) у взрослых пациентов с тяжелой формой (>500 мг/дл) гипертриглицеридемии и содержит смесь свободных жирных кислот (FFA) с ЕРА-FFA и DHA-FFA в качестве наиболее распространенных омега-3 представителей; активный ингредиент инкапсулирован в мягкую желатиновую капсулу, покрытую полиакрилатным материалом. Производство этого продукта на основе жирных кислот требует дополнительной стадии по сравнению с производством уже доступных ОМ3-ЕЕ лекарств. Она состоит из гидролиза и перегонки ЕЕ для получения свободных омега-3 жирных кислот.

Композиция, используемая в Epanova®, включает в себя ЕРА и DHA, концентрация которых в массовых долях составляет примерно 50-60% жирных кислот и 15-25% жирных кислот, соответственно. Epanova® содержит (в массовых долях) примерно 75% ЕРА + DHA в 1 грамме капсулы и представляет собой сложную смесь, включающую несколько представителей омега-3 ЖК и несколько представителей омега-6 ЖК, каждая находится в, по существу, свободной форме. Одним из этих других представителей омега-3 ЖК является DP А, которая присутствует примерно в 1-8% (масс.) жирных кислот. Примеры композиций жирных кислот, используемых в Epanova®, описаны в WO 2013/103902, например, в Примере 7, и, например, в Таблице 10, которая воспроизведена для удобства в Таблице 1 ниже.

В конкретных вариантах осуществления композиция омега-3 жирных кислот включает в себя ЕРА, в основном в виде свободной кислоты, DHA, в основном в виде свободной кислоты, и докозапентаеновую кислоту (DPA), в основном в виде свободной кислоты. В композиции омега-3 жирных кислот массовая доля ЕРА может составлять не менее 50% жирных кислот, DHA - не менее 15% жирных кислот, и DPA - не менее 1% жирных кислот, где каждая из ЕРА, DHA и DPA присутствует, по существу, в виде свободной кислоты. В композиции омега-3 жирных кислот массовая доля ЕРА может составлять от примерно 50% до примерно 60% жирных кислот, DHA - от примерно 17% до примерно 23% жирных кислот, и DPA - от примерно 1% до примерно 8% жирных кислот, где каждая из ЕРА, DHA и DPA присутствует, по существу, в виде свободной кислоты. В конкретных вариантах осуществления DPA присутствует в массовой доле не менее примерно 1,5% жирных кислот, например, не менее примерно 2% жирных кислот, например, не менее примерно 2,5% жирных кислот, например, не менее примерно 3% жирных кислот, например, не менее примерно 3,5% жирных кислот, например, не менее примерно 4% жирных кислот, например, не менее примерно 4,5% жирных кислот.

В одном аспекте омега-3 жирные кислоты в композиции омега-3 жирных кислот для применения в настоящем изобретении находятся в виде свободных жирных кислот. Пригодные смеси омега-3 свободных жирных кислот для применения в настоящем изобретении раскрыты в публикации WO 2013/103902, содержание которой включено в данный документ ссылкой. В одном варианте осуществления данного аспекта - композиция свободных жирных кислот предложена в виде Epanova® или биоэквивалентного ему варианта. В другом варианте осуществления данного аспекта - композиция свободных жирных кислот предложена в виде Epanova®.

Следует пояснить, что ссылка в данном документе на Epanova® может быть заменена на его US AN наименование - омега-3 карбоновые кислоты. В других вариантах осуществления ссылка на Epanova® может быть заменена на следующее описание:

стандартная лекарственная форма, содержащая композицию полиненасыщенных жирных кислот, содержащая:

ЕРА в массовой доле от 50% до 60%;

DHA в массовой доле от 17% до 23%;

DPA в массовой доле от 1% до 8%; где по меньшей мере 90% от массы полиненасыщенной жирной кислоты в композиции находится в виде свободной кислоты.

Для удобства композиции омега-3 жирных кислот, содержащие смесь омега-3 жирных кислот в основном в виде свободной жирной кислоты (в виде карбоновой кислоты), как, например, в Epanova®, будут обозначаться в данном документе как композиции ОМ3-СА (что может быть сокращено до ОМ3-СА).

Следует пояснить, что термин "композиции" в данном контексте предназначен обозначать масла (смесь масел), которые представляют собой активный фармацевтический ингредиент. Таким образом, ссылка на композицию ОМ3-СА предназначена обозначать смесь масел, содержащую омега-3 жирные кислоты в виде свободных жирных кислот. Такие композиции можно предоставить в окончательной фармацевтической лекарственной форме, такой как одобренный фармацевтический продукт, например, Epanova®. Далее, следует пояснить, что ссылка на "продукт" предназначена обозначать окончательную фармацевтическую лекарственную форму, содержащую активный ингредиент. Таким образом, ссылка на ОМ3-СА продукт, такой как Epanova®, относится к инкапсулированной композиции масел. Аналогичная фразеология используется и для масляных композиций, содержащих этиловые сложные эфиры и соответствующих им одобренных продуктов.

В одном аспекте композиция омега-3 жирных кислот для применения в настоящем изобретении представляет собой композицию ОМ3-ЕЕ. В одном варианте осуществления данного аспекта композиция ОМ3-ЕЕ предложена в виде Lovaza®. В дополнительном варианте осуществления композиция ОМ3-ЕЕ предложена в виде Omtryg®. В дополнительных вариантах осуществления композиция ОМ3-ЕЕ предложена в любом продукте, для которого получено разрешение на продажу от регулирующего органа на основании его биоэквивалентности любому из ОМ3-ЕЕ лекарств, описанных ранее в данном документе.

В другом варианте осуществления композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта. В другом варианте осуществления композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде Vascepa®.

В одном аспекте композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и предложена, например, в виде Lovaza® или Epanova®, или биоэквивалентных им вариантов.

В другом аспекте омега-3 жирные кислоты в композиции омега-3 жирных кислот в основном находятся в виде триглицеридов.

В другом аспекте омега-3 жирные кислоты в композиции омега-3 жирных кислот в основном находятся в виде фосфолипидов.

В другом аспекте омега-3 жирные кислоты в композиции омега-3 жирных кислот в основном находятся в виде солей.

В вышеприведенных аспектах омега-3 жирные кислоты описаны как находящиеся в основном в определенном виде, следует пояснить, что это означает, что по меньшей мере 70%, например, по меньшей мере 80%, например, по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95%, например, по меньшей мере 98% омега-3 жирных кислот находится в указанном виде.

Композиция омега-3 жирных кислот может включать в себя один или несколько наполнителей или разбавителей. Например, в нее может быть включен альфа-токоферол.

В другом аспекте композиция омега-3 жирных кислот для удобства использования упакована в стандартные лекарственные формы для перорального введения.

В конкретных вариантах осуществления лекарственная форма, содержащая композицию омега-3 жирных кислот представляет собой капсулу. В определенных вариантах осуществления лекарственная форма представляет собой твердую желатиновую капсулу. В других вариантах осуществления лекарственная форма представляет собой мягкую желатиновую капсулу.

В различных вариантах осуществления капсула содержит желатин типа А. В определенных вариантах осуществления капсула содержит желатин типа В. В некоторых вариантах осуществления капсула содержит желатин как типа А, так и типа В. Источники коллагена для получения любого из типов желатина А или В включают, но не ограничиваются ими, коров, свиней и рыбу.

В различных вариантах осуществления капсула представляет собой мягкую желатиновую капсулу, в которой не менее 1% (вес/вес) является желатином типа А. В определенных вариантах осуществления по меньшей мере примерно 2% (вес/вес), 3% (вес/вес), 4% (вес/вес), 5% (вес/вес), 6% (вес/вес), 7% (вес/вес), 8% (вес/вес), 9% (вес/вес) или по меньшей мере примерно 10% (вес/вес) желатина является желатином типа А. В отобранных вариантах осуществления по меньшей мере примерно 15% (вес/вес), 20% (вес/вес), 25% (вес/вес), 30% (вес/вес), 35% (вес/вес), 40% (вес/вес), 45% (вес/вес), даже по меньшей мере примерно 50% (вес/вес), 55% (вес/вес), 60% (вес/вес), 65% (вес/вес), 70% (вес/вес), 75% (вес/вес), 80% (вес/вес), 85% (вес/вес), 90% (вес/вес), 95% или больше желатина является желатином типа А.

В конкретных вариантах осуществления желатин в капсуле состоит по существу из желатина типа А.

В определенных вариантах осуществления желатин типа А представляет собой свиной желатин типа А.

В некоторых вариантах осуществления капсула представляет собой уменьшенную сшитую желатиновую капсулу, такую, как описана в патенте США №7485323, включенном в данный документ ссылкой в полном своем объеме. В нескольких вариантах осуществления капсулы выполнены из веществ, которые не являются материалами животного происхождения, таких как альгинат, агар-агар, каррагинан, пектин, конжак, гуаровая камедь, пищевой крахмал, модифицированный кукурузный крахмал, картофельный крахмал и тапиока. Источники материалов неживотного происхождения, которые можно использовать для изготовления капсул, описаны в публикации патента США №2011/0117180, включенной в данный документ ссылкой. В некоторых вариантах осуществления используются капсулы Vegicaps® Capsules (Catalent). В некоторых вариантах осуществления капсула может представлять собой комбинацию продукта неживотного происхождения, такого как альгинат, и желатина типа А или В.

В определенных вариантах осуществления капсула содержит химически модифицированный желатин. В различных вариантах осуществления химически модифицированный желатин представляет собой сукцинилированный желатин.

В определенных вариантах осуществления капсулированной пероральной стандартной лекарственной формы капсула не имеет покрытия. В нескольких вариантах осуществления капсула имеет покрытие.

В определенных вариантах осуществления капсулы с покрытием, на капсулу наносят покрытие с внешней стороны капсулы, что приводит к высвобождению заключенной в ней композиции омега-3 жирных кислот зависимым от времени образом. В различных вариантах осуществления высвобождение композиции омега-3 жирных кислот отложено по меньшей мере на 15 минут с момента приема. В конкретных вариантах осуществления высвобождение композиции омега-3 жирных кислот отложено по меньшей мере на 30 минут с момента приема. В других вариантах осуществления высвобождение композиции жирных кислот отложено от примерно 30 минут до примерно 60 минут с момента приема. В различных вариантах осуществления покрытия его выбирают из ацетат-тримеллитата целлюлозы, ацетат-фталата целлюлозы и поли(этилакрилат-метилакрилата). В некоторых вариантах осуществления, например, относящихся к Epanova®, покрытие представляет собой нейтральный полиакрилат, такой как поли(этилакрилатметилметакрилат), такой как Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG), средний молекулярный вес которого составляет примерно 800000). В других вариантах осуществления покрытие представляет собой другое покрытие типа Eudragit (Evonik Industries AG), такое как покрытия с замедленным высвобождением, такие как Eudragit RL 100, RL РО, RL 30 D, RL 12-5, RS100, RS РО, RS 30D, RS 12-5, NE 40 D или NM 30 D.

В определенных вариантах осуществления на капсулы нанесено покрытие, как описано в патентах США №№5792795 и 5948818, раскрытия которых включены в настоящее описание с помощью ссылки. В определенных вариантах осуществления, например, относящихся к Epanova®, лекарственная форма представляет собой мягкую желатиновую капсулу с покрытием, содержащую свиной желатин типа А, как описано в патенте США №7960370, включеном в настоящее описание с помощью ссылки.

В различных вариантах осуществления пероральная стандартная лекарственная форма содержит от примерно 100 мг до примерно 2000 мг композиции омега-3 жирных кислот, описанной здесь. В некоторых вариантах осуществления пероральная лекарственная форма содержит примерно 250 мг композиции омега-3 жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления пероральная лекарственная форма содержит примерно 500 мг композиции омега-3 жирных кислот. В определенных вариантах осуществления пероральная лекарственная форма содержит примерно 750 мг композиции омега-3 жирных кислот. В некоторых вариантах осуществления пероральная лекарственная форма содержит примерно 1000 мг композиции омега-3 жирных кислот. В других вариантах осуществления пероральная лекарственная форма содержит примерно 1500 мг композиции омега-3 жирных кислот. В определенных вариантах осуществления стандартная лекарственная форма содержит нецелые весовые количества омега-3 жирной кислоты, обычно от 100 мг до 2000 мг.

В некоторых вариантах осуществления лекарственная форма инкапсулирует PUFA в количестве от примерно 50 мг до примерно 2000 мг, или от примерно 100 мг до примерно 1000 мг, например, примерно 75 мг, примерно 100 мг, примерно 125 мг, примерно 150 мг, примерно 175 мг, примерно 200 мг, примерно 225 мг, примерно 250 мг, примерно 275 мг, примерно 300 мг, примерно 325 мг, примерно 350 мг, примерно 375 мг, примерно 400 мг, примерно 425 мг, примерно 450 мг, примерно 475 мг, примерно 500 мг, примерно 525 мг, примерно 550 мг, примерно 575 мг, примерно 600 мг, примерно 625 мг, примерно 650 мг, примерно 675 мг, примерно 700 мг, примерно 725 мг, примерно 750 мг, примерно 775 мг, примерно 800 мг, примерно 825 мг, примерно 850 мг, примерно 875 мг, примерно 900 мг, примерно 925 мг, примерно 950 мг, примерно 975 мг, примерно 1000 мг, примерно 1025 мг, примерно 1050 мг, примерно 1075 мг, примерно 1100 мг, примерно 1025 мг, примерно 1050 мг, примерно 1075 мг, примерно 1200 мг, примерно 1225 мг, примерно 1250 мг, примерно 1275 мг, примерно 1300 мг, примерно 1325 мг, примерно 1350 мг, примерно 1375 мг, примерно 1400 мг, примерно 1425 мг, примерно 1450 мг, примерно 1475 мг, примерно 1500 мг, примерно 1525 мг, примерно 1550 мг, примерно 1575 мг, примерно 1600 мг, примерно 1625 мг, примерно 1650 мг, примерно 1675 мг, примерно 1700 мг, примерно 1725 мг, примерно 1750 мг, примерно 1775 мг, примерно 1800 мг, примерно 1825 мг, примерно 1850 мг, примерно 1875 мг, примерно 1900 мг, примерно 1925 мг, примерно 1950 мг, примерно 1975 мг, примерно 2000 мг.

В дополнительных вариантах осуществления композиция омега-3 жирных кислот предложена в нескольких маленьких милликапсулах, причем каждая из них содержит небольшое количество композиции омега-3 жирных кислот (например, 5, 10,15, 20, 25, 30, 40, 50, 75 или 100 мг ± примерно 5 или 10%, в частности, примерно 25 мг ± примерно 5 или 10%), упакованых (например, в пакетики) так, чтобы суммарная доза, например, один грамм или два грамма композиции омега-3 жирных кислот была предоставлена в виде стандартной лекарственной формы. Для удобства такие милликапсулы являются примерно бесшовными милликапсулами, содержащими желатины и, необязательно, покрытия, как описано выше для случая более крупных капсул. Следует пояснить, что термин "милликапсула" означает капсулу с габаритными размерами обычно меньше чем 10 мм. Например, в некоторых вариантах осуществления милликапсулы могут быть сферическими или почти сферическими по форме и иметь диаметр от примерно 10 до примерно 0,1 мм, например, от примерно 8 до примерно 0,5 мм, например, от примерно 7 до примерно 1 мм, например, от примерно 6 до примерно 2 мм, например, от примерно 5 до примерно 3 мм, например, примерно 4 мм ± примерно 0,1, 0,2, 0,3 или 0,5 мм. В других вариантах осуществления милликапсулы являются эллипсоидными или почти эллипсоидными по форме и имеют главные полуоси (т.е., большую полуось и и малую полуось соответствующих эллипсов) в миллиметровом размере. Например, милликапсулы могут быть эллипсоидными по форме, а размеры их главных полуосей независимо выбраны от примерно 10 до примерно 0,1 мм, например, от примерно 8 до примерно 0,5 мм, например, от примерно 7 до примерно 1 мм, например, от примерно 6 до примерно 2 мм, например, от примерно 5 до примерно 3 мм, например, примерно 4 мм ± примерно 0,1, 0,2, 0,3 или 0,5 мм. В некоторых вариантах осуществления размеры главных полуосей милликапсул независимо выбирают из примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 мм ± примерно 0,1, 0,2, 0,3 или 0,5 мм. В определенных вариантах осуществления, где милликапсулы являются эллипсоидными по форме, поперечное сечение милликапсул является круглым или почти круглым (например, имеет две по существу равные главные полуоси). В таких вариантах осуществления выбранный диаметр круглого поперечного сечения может составлять от примерно 10 до примерно 0,1 мм, например, от примерно 8 до примерно 0,5 мм, например, от примерно 7 до примерно 1 мм, например, от примерно 6 до примерно 2 мм, например, от примерно 5 до примерно 3 мм, например, примерно 4 мм ± примерно 0,1, 0,2, 0,3 или 0,5 мм. В некоторых вариантах осуществления диаметр круглого поперечного сечения составляет примерно 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 мм ± примерно 0,1, 0,2, 0,3 или 0,5 мм.

В различных вариантах осуществления фармацевтическая композиция, представленная в стандартной лекарственной форме, стабильна при комнатной температуре (от примерно 23°С до 27°С, или примерно 25°С) и при примерно 60% относительной влажности в течение периода не менее шести месяцев, не менее одного года или не менее двух лет.

Ингибиторы SGLT2

Ингибиторы SGLT2, используемые в данном изобретении, особенно предпочтительно избирательны в отношении SGLT2 по сравнению с SGLT1. Высокая избирательность действия в отношении SGLT2, как в случае дапаглифлозина, несет в себе преимущества для применения данного изобретения, поскольку позволяет избегать непредсказуемых эффектов ингибирования кишечного SGLT1.

Избирательность действия в отношении SGLT2 выбранного ингибитора можно определять, сравнивая значения ЕС50, измеренные в анализе SGLT1 и SGLT2. Вкратце, последовательности кДНК полной длины человеческого SGLT1 (hSGLT1) и человеческого SGLT2 (hSGLT2) клонируют с помощью ПЦР, используя MARATHON READY™ кДНК почки человека (Clontech, Mountain View, СА), с использованием праймеров, сконструированных на основе опубликованных последовательностей (инвентарные номера в Genbank - NM_003041 и NM_000343). Последовательности hSGLT1 и hSGLT2 клонируют в вектор pIRESneo (Clontech, Mountain View, СА) для экспрессии в клетках млекопитающих и стабильно трансфицируют в клетки яичников китайского хомячка (СНО). Экспрессирующие SGLT клоны отбирают на основании устойчивости к антибиотику G418 (GENETICIN^®, Invitrogen, Carlsbad, СА) и активности в анализе поглощения ¹⁴С-α-метил-D-глюкопиранозида (¹⁴С-AMG).

Клетки, экспрессирующие hSGLT1 или hSGLT2 поддерживаются с использованием стандартных методов культивирования клеток. Анализы натрий-зависимого транспорта глюкозы в 96-луночных планшетах начинают добавлением 100 ил/лунку безбелкового буфера для анализа, содержащего натрий (Hepes/Tris рН 7,4, 137 мМ NaCl, 5,4 мМ KCl, 2,8 мМ CaCl₂, 1,2 мМ MgSO₄), 10 μМ ¹⁴C-AMG и ингибитора или диметилсульфоксида (DMSO) в качестве носителя, и планшеты инкубируют 2 ч при 37°С. Натрий-зависимое поглощение ¹⁴C-AMG рассчитывают, вычитая число отсчетов в минуту (СРМ), наблюдаемое в условиях поглощения без натрия, из отсчетов, наблюдаемых в условиях присутствия натрия. Ингибиторы оценивают при различных концентрациях в трех повторностях в присутствии натрия, а ингибирование в процентах рассчитывают, сравнивая СРМ в содержащих ингибитор лунках с СРМ в лунках, содержащих только носитель DMSO. Флоризин - хорошо известный неселективный ингибитор SGLT, оценивают в параллельных опытах в каждом анализе. Кривую зависимости доза-реакция строят на основе эмпирической модели четырех параметров с помощью XL Fit (IDBS, Guilford, UK) для определения концентрации ингибитора в половине максимального ответа (ЕС₅₀). Избирательность действия к SGLT2 представлена в виде отношения ЕС₅₀, благоприятствующего SGLT2. Ингибитор SGLT2 со значением отношения селективности действия ЕС₅₀, равным не менее 10, и более предпочтительно - не менее 100, в пользу SGLT2 пригоден для применения в данном изобретении.

Ингибиторы SGLT2, пригодные для применения в соответствии с данным изобретением включают С-арилглюкозиды или О-арилглюкозиды. С-арилглюкозиды и О-арилглюкозиды эффективны для лечения диабета. См. патент США №6774112, который включен в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте.

Примеры С-арилглюкозидных (также называемых С-глюкозидами) ингибиторов SGLT2, которые можно применять в способах данного изобретения, включают, но не ограничиваются этим, следующее:

1) С-арилглюкозиды, как раскрыты в патентах США №№6515117 и 6414126, раскрытие которых включено в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте для любых целей;

2) С-арилглюкозиды, как описаны в патентной заявке США №11/233617 (Публикация патентной заявки США №2006/0063722 А1), раскрытие которой включено в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте;

3) С-арилглюкозиды, описанные в патенте США №6774112, раскрытие которого включено в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте;

4) Производные замещенного глюкопиранозилом бензола, описанные в публикации патентной заявки США №2005/0209166, раскрытие которой включено в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте; и

5) Соединения замещенного D-пиранозилом фенила, описанные в публикации патентной заявки США №S 2006/0074031, раскрытие которой включено в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте.

Примеры О-глюкозидных ингибиторов SGLT2, которые можно применять в способах данного изобретения, включают, но не ограничиваются этим, описанные в следующих источниках:

1) 5-Тио-β-D-глюкопиранозид, раскрытый в публикации патентной заявки США №2006/0194809, раскрытие которой включено с помощью ссылки во всей своей полноте для любых целей;

2) Производные глюкопиранилоксибензола, раскрытые в WO 03/01180, раскрытие которого включено с помощью ссылки во всей своей полноте для любых целей;

3) Производные пиразола, описанные в патенте США №6908905, раскрытие которого включено в данный документ с помощью ссылки для любых целей; и

4) Соединения пиразола, описанные в патенте США №6815428, раскрытие которого включено в данный документ с помощью ссылки для любых целей.

Другие раскрытия и публикации, раскрывающие ингибиторы SGLT2, которые могут быть использованы в способах по настоящему изобретению, являются следующими: К. Tsujihara et al., Chem. Pharm. Bull, 44:1174-1180 (1996); M. Hongu et al., Chem. Pharm. Bull, 46:22-33 (1998); M. Hongu et al., Chem. Pharm. Bull, 46:1545-1555 (1998); и A. Oku et al., Diabetes, 48:1794-1800 (1999) и JP 10245391 (Dainippon).

В предпочтительном аспекте изобретением предложены ингибиторы SGLT2 для применения в способах изобретения, раскрытые в патентах США №№6414126 и 6515117, более предпочтительно ингибитор SGLT2 представляет собой соединение I или дапаглифлозин

или его фармацевтически приемлемую соль, все его стереизомеры или его сложноэфирное пролекарство.

В другом предпочтительном аспекте изобретением предложены кристаллические формы соединения I, в их числе кристаллические формы, раскрытые в публикации патентной заявки США №2008/0004336, раскрытие которой включено в данный документ с помощью ссылки во всей своей полноте для любых целей. Наиболее предпочтительными кристаллическими формами для применения в способах настоящего изобретения являются дапаглифлозин (S) пропиленгликоль гидрат и дапаглифлозин (R) пропиленгликоль гидрат.

Дополнительные ингибиторы SGLT2, которые можно применять в настоящем изобретении, включают канаглифлозин (Johnson & Johnson/Mitsubishi Tanabe Pharma); ремоглифлозина этабонат (Islet Sciences, Kissei Pharmaceuticals Co.); ипраглифлозин (Astellas/Kotobuki); эмпаглифлозин (Boehringer Ingelheim); BI-44847 (Boehringer Ingelheim); TS-071 (Taisho Pharmaceutical); тофоглифлозин (Roche/Chugai Pharmaceutical); LX-4211 (Lexicon Pharmaceuticals); DSP-3235 (GlaxoSmithKline/Dainippon Sumitomo); ISIS-SGLT2Rx (Isis Pharmaceuticals); и YM543 (Astellas Pharma Inc). Еще одним ингибитором SGLT-2 является эртуглифлозин (Pfizer и Merck).

Различные формы пролекарств известны из уровня техники. Примеры производных таких пролекарств см. в:

a) Design of Prodrugs, под редакцией Н. Bundgaard, (Elsevier, 1985) и Methods in Enzymology, Vol. 42, p. 309-396, под редакцией К. Widder, et al. (Academic Press, 1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, под редакцией Krogsgaard-Larsen и H. Bundgaard, Chapter 5 "Design and Application of Pro-drugs", H. Bundgaard p. 113-191 (1991);

c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);

d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988) и

e) N. Kakeya, et al, Chem Pharm Bull, 32, 692 (1984).

Примеры таких пролекарств включают расщепляемые in vivo сложные эфиры соединения данного изобретения. In vivo расщепляемый сложный эфир соединения данного изобретения, содержащий карбоксигруппу, представляет собой, например, фармацевтически приемлемый сложный эфир, который расщепляется в организме человека или животного с получением исходной кислоты. Пригодные фармацевтически приемлемые сложные эфиры с карбоксигруппой включают (1-6С)алкиловые эфиры, например, метиловые или этиловые; (1-6С)алкоксиметиловые эфиры, например, метоксиметил; (1-6С)алканоилоксиметиловые эфиры, например, пивалоилоксиметил; фталидиловые эфиры; (3-8С)циклоалкоксикарбонилокси(1-6С)алкильные эфиры, например, 1-циклогексилкарбонилоксиэтил; 1,3-диоксолан-2-илметиловые эфиры, например, 5-метил-1,3-диоксолан-2-илметил; (1-6С)алкоксикарбонилоксиэтиловые эфиры, например, 1-метоксикарбонилоксиэтил; аминокарбонилметиловые эфиры и их моно- или ди-N-((1-6С)алкил)-варианты, например, N,N-диметиламинокарбонилметиловые эфиры и N-этиламинокарбонилметиловые эфиры; и могут быть образованы по любой карбоксигруппе в соединениях данного изобретения. In vivo расщепляемый сложный эфир соединения данного изобретения, содержащий гидроксигруппу, представляет собой, например, фармацевтически приемлемый сложный эфир, который расщепляется в организме человека или животного с получением исходной гидроксигруппы. Пригодные фармацевтически приемлемые сложные эфиры с гидроксигруппой включают (1-6С)алканоиловые эфиры, например, ацетиловые эфиры; и бензоиловые эфиры, где фенильная группа может быть замещена аминометилом или N-замещенным моно- или ди-(1-6С)алкиламинометилом, например, 4-аминометилбензоиловые эфиры и 4-N,N-диметиламинометилбензоиловые эфиры.

Ингибиторы SGLT2, применяемые в соответствии с данным изобретением, можно вводить различным млекопитающим, таким как собаки, кошки, крупный рогатый скот, люди и т.п., нуждающимся в этом лечении. Эти агенты можно вводить системно, как, например, перорально или парантерально.

Ингибиторы SGLT2, используемые в данном изобретении, обычно вводят в виде фармацевтических композиций, которые содержат соединения в одной рецептуре с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Фармацевтические композиции могут быть специально составлены для перорального введения в твердой или жидкой форме, для парентеральной инъекции или для ректального введения. Термин "парентерально" в данном контексте относится к путям введения, которые включают внутривенную, внутримышечную, внутрибрюшинную, внутрисуставную, подкожную и внутригрудинную инъекцию и вливание.

Ингибиторы SGLT2 для удобства включают в обычную системную лекарственную форму, такую как таблетка, капсула, эликсир или составы для инъекций. Вышеперечисленные лекарственные формы также включают необходимые физиологически приемлемые материал носителя, разбавитель, смазывающий агент, буфер, антибактериальное средство, наполнитель (такой как маннит), антиоксиданты (аскорбиновая кислота или бисульфит натрия) и т.п. Предпочтительны пероральные формы, хотя парентеральные формы тоже вполне удовлетворительны.

Фармацевтические композиции для парентеральной инъекции включают в себя фармацевтически приемлемые стерильные водные или неводные растворы, дисперсии, суспензии или эмульсии, а также стерильные порошки для получения восстановленных стерильных инъекционных растворов или дисперсий непосредственно перед использованием. Примеры подходящих водных и неводных носителей, разбавителей, растворителей или носителей включают воду, этанол, многоатомные спирты (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.), растительные масла (такие как оливковое масло), инъекционные органические сложные эфиры (такие как этиловый олеат) и их подходящие смеси. Надлежащую текучесть можно придавать, например, путем применения покрывающих материалов, таких как лецитин, путем придания необходимого размера частицам, как в случае дисперсий, и путем применения поверхностно-активных веществ.

Эти композиции также могут содержать вспомогательные средства, такие как консервант, смачивающие средства, эмульгирующие средства и диспергирующие средства. Предотвращение действия микроорганизмов можно обеспечивать путем включения различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабена, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты и т.п. Также может быть желательно включать в состав средства, регулирующие изотоничность, такие как сахара, хлорид натрия и т.п. Продленное всасывание инъекционных фармацевтических форм можно достичь за счет включения средств, замедляющих всасывание, таких как моностеарат алюминия и желатин.

В некоторых случаях для продления действия препарата желательно замедлить всасывание препарата из подкожной или внутримышечной инъекции. Этого можно достичь за счет использования жидкой суспензии кристаллического или аморфного материала с плохой растворимостью в воде. Скорость всасывания лекарственного средства тогда будет зависеть от скорости его растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера кристаллов и кристаллической формы. В качестве альтернативы, замедленное всасывание парентерально вводимой формы лекарственного средства достигается путем растворения или суспендирования лекарственного средства в масляном носителе.

Инъекционные формы длительного действия получают путем формирования микроинкапсулированных матриц лекарственного средства в биологически разлагаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения лекарственного средства к полимеру и природы конкретного используемого полимера, скорость высвобождения лекарственного средства можно контролировать. Примеры других биоразлагаемых полимеров включают сложные поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Инъекционные составы длительного действия также получают путем включения лекарственного средства в липосомы или микроэмульсии, совместимые с тканями организма.

Инъекционные составы можно стерилизовать, например, путем фильтрации через антибактериальный фильтр или путем включения стерилизующих агентов в виде стерильных твердых композиций, которые можно растворять или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной среде для инъекций непосредственно перед использованием.

Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение смешивают с по меньшей мере одним инертным фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, таким как цитрат натрия или дикальций фосфат и/или а) наполнителями или сухими разбавителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; b) связующими веществами, такими как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и гуммиарабик; с) увлажнителями, такими как глицерин; d) дезинтегрирующими агентами, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный крахмал или крахмал тапиоки, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия; е) замедляющими растворение агентами, такими как парафин; f) ускорителями всасывания, такими как четвертичные аммониевые соединения; g) смачивающими агентами, такими как цетиловый спирт и моностеарат глицерина; h) абсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина, и i) смазками, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смесями. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма может также содержать буферные агенты. Твердые композиции подобного типа также можно использовать в качестве наполнителей в мягких и твердых заполненных желатиновых капсулах, используя такие наполнители, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и т.п.

Твердые лекарственные формы таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получать с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области фармацевтических препаратов. Они могут необязательно содержать контрастные агенты, а также могут иметь такой состав, чтобы высвобождать активный(е) ингредиент(ы) только, или предпочтительно, в определенной части кишечного тракта, необязательно, замедленным образом. Примеры композиций для заливки, которые могут быть использованы, включают полимерные вещества и воски.

Ингибиторы SGLT2 также могут быть в форме микрокапсул, если это необходимо, с одним или несколькими из указанных выше наполнителей.

Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активным соединениям жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, зародышевое, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры сорбита и жирных кислот и их смеси.

Кроме инертных разбавителей пероральная композиция может также включать адъюванты, такие как смачивающие агенты, эмульгаторы и суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые добавки и отдушки.

Суспензии, помимо активных соединений, могут содержать суспендирующие агенты, как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар, трагакант и их смеси.

Вводимая доза корректируется в зависимости от возраста, веса и состояния пациента, а также от способа введения, лекарственной формы и схемы лечения, а также желаемого результата. В общем случае, лекарственные формы, описанные выше, можно вводить при содержании ингибитора SGLT2 от примерно 1 до примерно 1000 мг в день, предпочтительно от примерно 2 до примерно 400 мг в день, более предпочтительно от 2,5 до примерно 75 мг/день, и даже более предпочтительно от 2,5 до примерно 50 мг/день. В одном аспекте используется 5 или 10 мг/день.

Лекарственные формы можно вводить в виде однократной дозы или в виде разделенных доз от одного до четырех раз в день.

Если не указано иное, дозировки и составы для ингибиторов SGLT2, используемые в способах, изложенных в данном документе, раскрыты в различных патентах и заявках, рассмотренных по всей данной заявке, которые включены в данное описание во всей их полноте.

Специалисту в данной области техники следует принимать во внимание, что количество лекарственного средства, необходимое для достижения терапевтического эффекта при введении, будет, конечно же, изменяться в зависимости от выбранного агента, природы и тяжести состояния и млекопитающего, получающего лечение, и в конечном счете выбирается лечащим врачом по своему усмотрению. Кроме того, оптимальное количество и интервалы между отдельными дозами лекарственного средства будут определяться характером и степенью желаемого терапевтического эффекта, формой, путем и местом введения, конкретным пациентом, получающим лечение, и такие оптимальные параметры можно определять обычными методами. Следует также иметь в виду, что оптимальный курс лечения, например, количество вводимых доз, могут устанавливать специалисты в этой области техники, используя обычные исследования для определения хода лечения.

Активность подавления SGLT2 соединениями, полезными для настоящего изобретения, можно определять, используя систему анализов, как описано ниже.

АНАЛИЗ АКТИВНОСТИ SGLT2

Последовательность мРНК для SGLT2 человека клонируют с помощью обратной транскрипции и амплификации мРНК из почки человека, с использованием стандартных способов молекулярной биологии. Последовательность кДНК стабильно трансфицируют в СНО клетки и клоны анализируют на SGLT2 активность, по существу, как описано в публикации Ryan et al., 1994, "НК-2: an immortalized proximal tubule epithelial cell line from normal adult human kidney," Kidney International 45:48-57. Оценку ингибирования SGLT2 активности в клонированной отобранной клеточной линии осуществляют, по существу, как описано в публикации Ryan et al., со следующими изменениями. Клетки выращивают в 96-луночном планшете 2-4 дня до 75000 или 30000 клеток в лунке в F-12 питательной смеси Хэма (Ham's F-12; GIBCO, Long Island, NY), 10% эмбриональной телячьей сыворотке, 300 цг/мл генетицина и пенициллин-стрептомицина. На стадии слияния клетки дважды промывают 10 мМ Hepes/Tris, рН 7,4, 137 мМ N-метил-D-глюкамина, 5,4 мМ KCl, 2,8 мМ CaCl₂, 1,2 мМ MgSO₄. Клетки затем инкубируют с 10 μМ [¹⁴C]AMG, и 10 μМ ингибитора (конечная DMSO = 0,5%) в 10 мМ Hepes/Tris, рН 7,4, 137 мМ NaCl, 5,4 мМ KCl, 2,8 мМ CaCl₂, 1,2 мМ MgSO₄ при 37°С в течение 1,5 ч. Анализ поглощения прекращают, разбавляя ледяным 1X PBS, содержащим 0,5 мМ флоризина, и затем клетки лизируют, используя 0,1% NaOH. После добавления сцинтилляционной жидкости MicroScint клетки встряхивают 1 ч, а затем количественно определяют [¹⁴C]AMG с помощью сцинтилляционного счетчика TopCount. Контрольные опыты проводят с NaCl и без него. Для определения значений ЕС₅₀ используют 10 концентраций ингибитора через 2 log интервала в соответствующем интервале ответа, и значения для трех планшетов усредняют.Ryan et al., Id.

Комбинация омега-3 жирных кислот и ингибиторов SGLT-2

В одном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 и композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей). В одном варианте осуществления ингибитор SLGT-2 выбирают из группы, состоящей из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, BI-44847, TS-071, тофоглифлозина, LX-4211, DSP-3235, ISIS-SGLT2Rx и YM543. В другом варианте осуществления ингибитор SGLT-2 выбирают из группы, состоящей из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина, эмпаглифлозина, BI-44847, TS-071, тофоглифлозина, LX-4211, DSP-3235, ISIS-SGLT2Rx, YM543 и эртуглифлозина. В другом варианте осуществления ингибитор SGLT-2 выбирают из группы, состоящей из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В другом варианте осуществления ингибитор SGLT-2 выбирают из группы, состоящей из дапаглифлозина, канаглифлозина и ипраглифлозина. В другом варианте осуществления ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, фосфолипидов или солей. В другом варианте осуществления композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот или эфиров. В другом варианте осуществления композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 карбоновых кислот, в одном варианте осуществления композиция омега-3 карбоновых кислот предложена в виде Epanova®. В другом аспекте композиция омега-3 жирных кислот включает в себя смесь эфиров омега-3 жирных кислот, таких как этиловые эфиры. В другом аспекте композиция омега-3 жирных кислот включает в себя ЕРА-EE высокой чистоты (такой, как >90% (весовая доля) ЕРА-ЕЕ, такой, как >95% ЕРА-ЕЕ, такой, как не менее 98% ЕРА-ЕЕ). В одном аспекте композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде Lovaza®, Vascepa® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них. В одном аспекте композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде Lovaza® или биоэквивалентного ему варианта. В одном аспекте композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта.

Следует пояснить, что приведенные здесь ссылки на ремоглифлозина этабонат применимы к любым другим пролекарствам, или к самому ремоглифлозину, если контекст не требует иного.

Следует пояснить, что при описании в данном документе композиции омега-3 жирных кислот как имеющей вид свободных карбоновых кислот или этиловых эфиров, подразумевается, что это - преобладающая форма в композиции, и это не мешает тому, чтобы меньшая часть композиции была другого вида, например, карбоновая кислота присутствует в композиции, где преобладает этиловый эфир, или триглицериды присутствуют в композициях либо карбоновых кислот, либо этиловых эфиров.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova®.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova®.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova®.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® и Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa®.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® и Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa®.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® и Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa®.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и предложена, например, в виде Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентных вариантов любого из них.

Два компонента комбинации данного изобретения можно вводить последовательно или в разное время дня, в соответствии со стандартным режимом дозирования каждого компонента. В одном аспекте их вводят вместе, например, утром.

Каждый компонент комбинации для удобства вводят в виде пероральной лекарственной формы. Например, для удобства дапаглифлозин подходящим образом вводят в виде таблетки в дозе 2,5 мг, 5 мг или 10 мг дапаглифлозина, а композицию ОМ3-СА подходящим образом вводят в виде капсулы, предпочтительно капсулы с покрытием, как описано ранее в данном документе. В определенных вариантах осуществления, ежедневно вводят не менее примерно 2 г композиции ОМ3-СА. В некоторых вариантах осуществления, ежедневно вводят не менее примерно 3 г композиции ОМ3-СА. В определенных вариантах осуществления, ежедневно вводят не менее примерно 4 г композиции ОМ3-СА. В определенных вариантах осуществления, ежедневно вводят не менее примерно 1 г композиции ОМ3-СА. Обычно ОМ3-СА вводят в виде нескольких стандартных лекарственных форм, таких, как описаны выше. Так, в определенных вариантах осуществления, ежедневно вводят не менее 2-х стандартных лекарственных форм, причем каждая содержит 1 г композиции ОМ3-СА. В различных вариантах осуществления, ежедневно вводят не менее 3-х стандартных лекарственных форм, причем каждая содержит 1 г ОМ3-СА. В конкретных вариантах осуществления, ежедневно вводят не менее 4-х стандартных лекарственных форм, причем каждая содержит 1 г ОМ3-СА. В одном аспекте в приведенных выше вариантах осуществления композиция ОМ3-СА предоставлена в виде Epanova®.

В одном аспекте предложена комбинация 2,5 мг, 5 мг или 10 мг дапаглифлозина и 1 г, 2 г или 4 г ОМ3-СА.

В одном аспекте предложена комбинация 2,5 мг, 5 мг или 10 мг дапаглифлозина и 1 г, 2 г или 4 г Epanova® или биоэквивалентного ему варианта.

В одном аспекте предложена комбинация 2,5 мг, 5 мг или 10 мг дапаглифлозина и 1 г, 2 г или 4 г Epanova®.

В другом аспекте предложена комбинация 5 мг или 10 мг дапаглифлозина и 2 г или 4 г Epanova®.

В другом аспекте предложена комбинация 10 мг дапаглифлозина и 4 г Epanova®. Соответственно, 10 мг дапаглифлозина вводят в виде одной таблетки, а 4 г Epanova® вводят в виде четырех капсул по 1 г. Для удобства общее количество пяти лекарственных форм можно вводить вместе (хотя проглатывать их следует по отдельности), например, утром.

Пригодные дозировки, содержащие композицию омега-3 этиловых эфиров, изложены во вкладках в коммерческой упаковке, инструкции по применению препарата и/или этикетках для Lovaza®, Vascepa® и Omtryg® или их воспроизведенного варианта, находящегося в продаже.

Например, каждый из Lovaza®, Vascepa® и Omtryg® можно применять в виде дозы по 4 г ежедневно.

В одном аспекте предложена комбинация 2,5 мг, 5 мг или 10 мг дапаглифлозина и вплоть до 4 г Lovaza® или биоэквивалентного ему варианта. В другом аспекте предложена комбинация 4 г Lovaza® или биоэквивалентного ему варианта и 10 мг дапаглифлозина.

В другом аспекте несколько стандартных лекарственных форм, как описано выше, могут быть для удобства упакованы вместе в дозировочном комплекте для упрощения использования и соблюдения предписаний пациентом.

В определенных вариантах осуществления дозировочный комплект представляет собой бутылку. В других вариантах осуществления несколько стандартных лекарственных форм расфасованы в блистерные упаковки, несколько из которых могут быть необязательно упакованы вместе в коробку или другой контейнер. Как правило, будь то в бутылке или в одной или нескольких блистерных упаковках, нескольких стандартных лекарственных форм достаточно для дозирования в течение 30 дней, 60 дней или 90 дней. Так, в выбранных вариантах осуществления, где стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, в которой заключен примерно один грамм фармацевтической композиции, как описано выше, дозировочный комплект включает в себя 30, 60, 90,120, 150, 180, 240, 270, 300, 330 или 360 таких капсул. Дозировочный комплект также включает в себя 30, 60 или 90 таблеток дапаглифлозина.

В различных вариантах осуществления несколько стандартных лекарственных форм расфасованы в инертной атмосфере, такой как азот или инертный газ, или упакованы в условиях вакуума.

В другом аспекте комбинация настоящего изобретения может находиться в виде комбинации с фиксированной дозой, т.е. в монолитной лекарственной форме.

В другом аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 и ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация дапаглифлозина и ОМ3-СА продукта для применения в качестве лекарственного препарата.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация ингибитора SGLT-2 и композиции ОМ3-СА продукта для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 и ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и предложена, например, в виде Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентных вариантов любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина; например, дапаглифлозин.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и предложена, например, в виде Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентных вариантов любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина; например, дапаглифлозин.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация дапаглифлозина и композиции ОМ3-СА для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложена комбинация дапаглифлозина и Epanova® для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 и композиции ОМ3-СА для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 и ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и представляет собой, например, Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентные варианты любого из них, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина; например, дапаглифлозин.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте данного изобретения предложена комбинация дапаглифлозина и композиции ОМ3-СА для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте данного изобретения предложена комбинация дапаглифлозина и Epanova® для применения в качестве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где субъект является или не является диабетиком.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании его показателей степени стеатоза, степени лобулярного воспаления и степени баллонирования, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или пролекарства в виде сложного эфира для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где у субъекта не нарушена или практически не нарушена нормальная функция желчных путей. В одном аспекте отсутствие нарушения или практическое отсутствие нарушения нормальной функции желчных путей устанавливают на основании анализа уровней алкалинфосфатазы (АЛФ) и билирубина у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5; введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5; введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение улучшение показателя состояния стеатоза у субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложена комбинация композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

определение уровней АЛФ и билирубина в сыворотке у субъекта;

введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В некоторых аспектах выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NAFLD и/или NASH включает выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; или с показателем степени стеатоза равным или больше 1; или с показателем степени лобулярного воспаления равным или больше 1; или с показателем степени баллонирования равным или больше 1; или с показателем стадии фиброза равным или больше 1.

В определенном аспекте лечение композицией омега-3 жирных кислот и ингибитором SGLT-2 особенно эффективно для улучшения показателя стеатоза субъекта, и тем самым особенно эффективно для снижения содержания жира в печени.

Таким образом, в одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства для применения в качестве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени у субъекта, где применение включает в себя выявление субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), введение комбинации; и тем самым снижение содержания жира в печени по меньшей мере на 15%, например, по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 25% (согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени у субъекта, где применение включает в себя выявление субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), введение комбинации; и тем самым снижение содержания жира в печени по меньшей мере на 15%, например, по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 25% (согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени и для снижения уровня содержания триглицеридов в плазме у субъекта с установленным диагнозом сахарный диабет II типа и установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени и для повышения уровней содержания ЕРА и/или DHA в плазме у субъекта с установленным диагнозом сахарный диабет II типа и установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в качестве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени и для снижения гибели клеток и/или баллонирования у субъекта с установленным диагнозом сахарный диабет II типа и установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для снижения содержания жира в печени и снижения воспаления в печени у субъекта, нуждающегося в этом.

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для снижения содержания жира в печени у субъекта с избыточным весом (ИМТ>25), установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, с установленным диагнозом сахарный диабет II типа.

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для снижения содержания жира в печени и снижения уровня содержания триглицеридов в плазме у субъекта с избыточным весом (ИМТ>25), установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, с установленным диагнозом сахарный диабет II типа.

В одном аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для снижения содержания жира в печени и для повышения уровней содержания ЕРА и/или DHA в плазме у субъекта с избыточным весом (ИМТ>25), установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, с установленным диагнозом сахарный диабет II типа.

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для снижения содержания жира в печени и снижения гибели клеток печени и/или баллонирования у субъекта с избыточным весом (ИМТ>25), установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, с установленным диагнозом сахарный диабет II типа.

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для остановки прогрессирования фиброза печени у субъекта, нуждающегося в этом.

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина, у субъекта с установленным диагнозом NAFLD или NASH, для применения, останавливающего прогрессирование NAFLD и/или NASH, включающего в себя введение комбинации и вызывающего тем самым остановку прогрессирования фиброза печени субъекта.

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в лечении NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, включающего в себя введение комбинации и вызывающего тем самым снижение веса субъекта.

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина для применения в лечении NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, включающего в себя введение комбинации и вызывающего тем самым повышение чувствительности субъекта к инсулину.

В другом аспекте предложена комбинация эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в применении для поворота вспять развития NASH или вылечивания NASH у субъекта, страдающего NASH, где стадию NASH у субъекта диагностируют с помощью гистопатологического исследования.

В одном аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где омега-3 жирные кислоты могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции ОМ3-СА теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 и эффективной дозы ОМ3-ЕЕ продукта, такого как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и представляет собой, например, Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентные варианты любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина; например, дапаглифлозин.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 и эффективной дозы продукта этил икозапента, такого как Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, и эффективной дозы ОМ3-ЕЕ продукта, такого как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, и эффективной дозы продукта этил икозапента, такого как Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы ОМ3-ЕЕ продукта, такого как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы продукта этил икозапента, такого как Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В одном аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы композиции ОМ3-СА теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В одном аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы Epanova® теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В одном аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где омега-3 жирные кислоты могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции ОМ3-СА теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2 и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2 и эффективной дозы ОМ3-EE продукта, такого как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и представляет собой, например, Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентные варианты любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина; например, дапаглифлозин.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2 и эффективной дозы продукта этил икозапента, такого как Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, и эффективной дозы ОМ3-ЕЕ продукта, такого как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, и эффективной дозы продукта этил икозапента, такого как Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы ОМ3-ЕЕ продукта, такого как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В другом аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы продукта этил икозапента, такого как Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В одном аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы ОМ3-СА продукта теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В одном аспекте предложен способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя снижение накопления жира в печени теплокровного животного путем введения эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы Epanova® теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где субъект является или не является диабетиком, и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей).

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании клинической и гистопатологической диагностики, и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей).

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза, и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей).

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза, и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции ОМ3-СА.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза, и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателей по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза, и введение дапаглифлозина и Epanova® или биоэквивалентного ему варианта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании его показателей степени стеатоза, степени лобулярного воспаления и степени баллонирования, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза субъекта, и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей).

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где у субъекта не нарушена или практически не нарушена нормальная функция желчных путей, и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей). В одном аспекте отсутствие нарушения или практическое отсутствие нарушения нормальной функции желчных путей устанавливают на основании анализа уровней алкалинфосфатазы (АЛФ) и билирубина у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы ОМ3-СА; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции ОМ3-СА; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5;

введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта;

и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции ОМ3-СА; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5;

введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта;

и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции ОМ3-СА; и тем самым улучшения показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5;

введение эффективной дозы дапаглифлозина и эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта;

и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; определение уровней АЛФ и билирубина в сыворотке у субъекта; и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение состояния стеатоза у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В некоторых аспектах выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NAFLD и/или NASH включает выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; или с показателем степени стеатоза равным или больше 1; или с показателем степени лобулярного воспаления равным или больше 1; или с показателем степени баллонирования равным или больше 1; или с показателем стадии фиброза равным или больше 1.

В определенном аспекте лечение композицией омега-3 жирных кислот и ингибитором SGLT-2 особенно эффективно для улучшения показателя стеатоза субъекта, и тем самым особенно эффективно для снижения содержания жира в печени.

Следовательно, в одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ); введение комбинации эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства; и тем самым снижение содержания жира в печени по меньшей мере на 15%, например, по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 25% (согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени субъекта, включающий в себя выявление субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ); введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина; и тем самым снижение содержания жира в печени по меньшей мере на 15%, например, по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 25% (согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени субъекта с установленным диагнозом сахарный диабет II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени и снижения уровня содержания триглицеридов в плазме у субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени и повышения уровней содержания ЕРА и/или DHA в плазме у субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В другом аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени и снижения гибели клеток и/или баллонирования у субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В другом аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени и уменьшения воспаления печени у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени субъекта с установленным диагнозом сахарный диабет II типа, имеющего избыточный вес (ИМТ >25), и у которого установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени и снижения уровня содержания триглицеридов в плазме у субъекта с избыточным весом (ИМТ >25), у которого установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ) и у которого, необязательно, установлен диагноз сахарный диабет II типа, причем способ включает введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В одном аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени и повышения уровней содержания ЕРА и/или DHA в плазме у субъекта с избыточным весом (ИМТ >25), установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ) и с, необязательно, установленным диагнозом сахарный диабет II типа, причем способ включает введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В другом аспекте предложен способ снижения содержания жира в печени и снижения гибели клеток печени и/или баллонирования у субъекта с избыточным весом (ИМТ >25), установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ) и с, необязательно, установленным диагнозом сахарный диабет II типа, причем способ включает введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В другом аспекте предложен способ остановки прогрессирования фиброза печени у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В другом аспекте предложен способ остановки прогрессирования NAFLD и/или NASH у субъекта с установленным диагнозом NAFLD или NASH, включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина, и вызывающий тем самым остановку прогрессирования фиброза печени субъекта.

В другом аспекте предложен способ лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина и вызывающий тем самым снижение веса тела субъекта.

В другом аспекте предложен способ лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина и вызывающий тем самым повышение чувствительности субъекта к инсулину.

В дополнительном аспекте предложен способ лечения NASH у нуждающегося в этом субъекта, включающий в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; определение уровней АЛФ и билирубина в сыворотке у субъекта; и введение эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и тем самым улучшение состояния стеатоза и лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В некоторых аспектах выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NAFLD и/или NASH включает выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; или с показателем степени стеатоза равным или больше 1; или с показателем степени лобулярного воспаления равным или больше 1; или с показателем степени баллонирования равным или больше 1; или с показателем стадии фиброза равным или больше 1.

В другом аспекте предложен способ для поворота вспять развития NASH или вылечивания NASH у субъекта, страдающего NASH, где стадию NASH у субъекта диагностируют с помощью гистопатологического исследования, включающий в себя введение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей), в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 и ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или его сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и предложена, например, в виде Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентных вариантов любого из них, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина; например, дапаглифлозин.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 и композиции ОМ3-СА в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 и Epanova® в производстве лекарственного препарата для лечения NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей), в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 и ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина с ОМ3-СА продуктом, таким как Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В другом аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства и композиции омега-3 жирных кислот, где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя DHA (в виде свободной кислоты, эфира, триглицерида или фосфолипида) и предложена, например, в виде Lovaza® или Epanova® или биоэквивалентных вариантов любого из них, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина; например, дапаглифлозин.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации ингибитора SGLT-2 и композиции ОМ3-СА в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина и композиции ОМ3-СА в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации дапаглифлозина и Epanova® в производстве лекарственного препарата для снижения накопления жира в печени у человека при лечении NAFLD и/или NASH.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства производстве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где субъект является или не является диабетиком.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании его показателей степени стеатоза, степени лобулярного воспаления и степени баллонирования, необязательно, в сочетании с показателем стадии фиброза субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где у субъекта не нарушена или практически не нарушена нормальная функция желчных путей. В одном аспекте отсутствие нарушения или практическое отсутствие нарушения нормальной функции желчных путей устанавливают на основании анализа уровней алкалинфосфатазы (АЛФ) и билирубина у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH; введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза, баллонирования и/или лобулярного воспаления у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании их показателя по шкале активности NAFLD;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя: выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 2 пункта, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение показателя состояния стеатоза у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта, и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение улучшение показателя состояния стеатоза у субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта. Соответственно, в этом аспекте ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина. В одном варианте осуществления этого аспекта ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин. В одном варианте осуществления этого аспекта у субъекта, нуждающегося в лечении, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с установленным ранее диагнозом сахарного диабета II типа, у которого показатель по шкале активности NAFLD больше или равен 5;

введение комбинации; и тем самым улучшение улучшение показателя состояния стеатоза у субъекта по меньшей мере на 1 пункт, без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В дополнительном аспекте предложено применение комбинации композиции омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей) и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для лечения NASH, где лечение включает в себя:

выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5;

определение уровней АЛФ и билирубина в сыворотке у субъекта;

введение комбинации; и тем самым улучшение состояния стеатоза у указанного субъекта без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

В некоторых аспектах выявление субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NAFLD и/или NASH включает выявление субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; или с показателем степени стеатоза равным или больше 1; или с показателем степени лобулярного воспаления равным или больше 1; или с показателем степени баллонирования равным или больше 1; или с показателем стадии фиброза равным или больше 1.

В определенном аспекте лечение композицией омега-3 жирных кислот и ингибитором SGLT-2 особенно эффективно для улучшения показателя стеатоза субъекта, и тем самым особенно эффективно для снижения содержания жира в печени.

Таким образом, в одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы композиции ОМ3-СА и эффективной дозы ингибитора SGLT-2 или его фармацевтически приемлемой соли, стереоизомера или сложноэфирного пролекарства в производстве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени у субъекта, включающее в себя выявление субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), введение комбинации; и тем самым снижение содержания жира в печени по меньшей мере на 15%, например, по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 25% (согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени у субъекта, включающее в себя выявление субъекта с установленным диагнозом сахарного диабета II типа и с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), введение комбинации; и тем самым снижение содержания жира в печени по меньшей мере на 15%, например, по меньшей мере на 20%, например, по меньшей мере на 25% (согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени и снижения уровня содержания триглицеридов в плазме у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени и для повышения уровней содержания ЕРА и/или DHA в плазме у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для снижения содержания жира в печени и снижения гибели клеток и/или баллонирования у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ).

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения для снижения содержания жира в печени и снижения воспаления в печени у субъекта, нуждающегося в этом.

В одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения для снижения содержания жира в печени у субъекта с избыточным весом (ИМТ >25), установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, с установленным диагнозом сахарный диабет II типа.

В одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения для снижения содержания жира в печени и снижения уровня содержания триглицеридов в плазме у субъекта с избыточным весом (ИМТ >25), у которого установлено повышенное содержание жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, установлен диагноз сахарный диабет II типа.

В одном аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения для снижения содержания жира в печени и повышения уровней содержания ЕРА и/или DHA в плазме у субъекта с избыточным весом (ИМТ >25), с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, с установленным диагнозом сахарный диабет II типа.

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения для снижения содержания жира в печени и снижения гибели печени клеток печени и/или баллонирования у субъекта с избыточным весом (ИМТ >25), с установленным повышенным содержанием жира в печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРС или МРТ), а также, необязательно, с установленным диагнозом сахарный диабет II типа.

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения, останавливающего прогрессирование фиброза печени у субъекта, нуждающегося в этом.

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в случае субъекта с установленным диагнозом NAFLD или NASH, в производстве лекарственного препарата для применения, останавливающего прогрессирование NAFLD и/или NASH, причем указанное лечение включает введение комбинации и вызывает тем самым остановку прогрессирования фиброза печени субъекта.

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения в лечении NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, причем указанное лечение включает введение комбинации и вызывает тем самым снижение веса субъекта.

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения в лечении NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, причем указанное лечение включает введение комбинации и вызывает тем самым повышение чувствительности субъекта к инсулину.

В некоторых вариантах осуществления у субъекта наблюдается беспрепятственное или нормальное выделение желчи, отсутствует повреждение печени, нарушения функции печени не наблюдаются, наблюдаются нормальные уровни содержания прямого билирубина, отсутствует заболевание желчных путей или заболевание желчных путей у субъекта находится на начальной стадии.

В некоторых вариантах осуществления у субъекта нет состояния, выбранного из группы, состоящей из алкогольного повреждения печени, медикаментозного повреждения печени, хронического активного гепатита, цирроза и рака печени.

В некоторых аспектах у субъекта в семейном анамнезе нет жировой болезни печени.

В других аспектах субъект имеет один или несколько генетических полиморфизмов, связанных с повышенным риском стеатоза печени.

В других аспектах у субъекта в семейном анамнезе есть жировая болезнь печени.

В некоторых аспектах у пациента установлен диагноз NASH на основании окончательного гистопатологического диагноза NASH.

В другом аспекте предложено применение комбинации эффективной дозы Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективной дозы дапаглифлозина в производстве лекарственного препарата для применения, поворачивающего вспять развитие NASH или вылечивающего NASH у субъекта, страдающего NASH, где стадию NASH у субъекта диагностируют с помощью гистопатологического исследования.

В одном аспекте у людей, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями композиций омега-3 жирных кислот и ингибиторов SGLT-2, выявлен диагноз диабета II типа (дополнительно к NAFLD и/или NASH). В другом аспекте у людей, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями, отсутствует диагноз диабета II типа. В дополнительном аспекте у людей, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями, отсутствуют симптомы диабета и их уровни глюкозы в плазме ниже 11,1 ммоль/л, их уровень глюкозы в плазме натощак ниже 7 ммоль/л; или их уровень глюкозы в плазме через 2 часа ниже 11,1 ммоль/л в ходе пероральной пробы на толерантность к глюкозе.

В одном аспекте люди, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями композицию омега-3 жирных кислот и ингибиторов SGLT-2, страдают внешнесекреторной недостаточностью поджелудочной железы (дополнительно к NAFLD и/или NASH). В дополнительном аспекте люди, которые будут получать лечение, страдают внешнесекреторной недостаточностью поджелудочной железы и диабетом II типа (дополнительно к NAFLD и/или NASH). В конкретном варианте осуществления данных аспектов композиция омега-3 жирных кислот для применения представляет собой композицию ОМ3-СА, такую как Epanova® или биоэквивалентные ему варианты.

В одном аспекте у людей, которые будут получать лечение вышеуказанными комбинациями композиций омега-3 жирных кислот и ингибиторов SGLT-2, установлен диагноз внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы (дополнительно к NASH) с помощью, например, теста FEC. В дополнительном аспекте люди, которые будут получать лечение, страдают внешнесекреторной недостаточностью поджелудочной железы, как установлено с помощью, например, теста FEC, а также страдают диабетом II типа (дополнительно к NASH). В конкретном варианте осуществления данных аспектов композиция омега-3 жирных кислот для применения представляет собой композицию ОМ3-СА, такую как Epanova® или биоэквивалентные ему варианты.

В приведенных выше аспектах (комбинации, применения и способы) и ингибитор SGLT-2, и композиция омега-3 жирных кислот для удобства представляют собой стандартные лекарственные формы. Для удобства ингибитор SGLT-2 присутствует в виде таблетки в дозировке, которая в области техники известна как приемлемая доза (например, доза, одобренная регулирующим органом для лечения диабета). Для удобства композиция омега-3 жирных кислот присутствует в форме масла и составлена в одной или нескольких капсулах, таких как твердые или мягкие желатиновые капсулы, как описано выше, в дозировке, которая известна в области техники, например, примерно от 1 до 4 г, в частности, от 2 до 4 г композиции омега-3 жирных кислот. Для удобства композиция омега-3 жирных кислот составлена в капсулах, каждая из которых содержит примерно один грамм активного ингредиента, таким образом, вводят несколько капсул для достижения требуемой дозы.

Следует пояснить, что в приведенных выше комбинациях, комбинациях для применения, применениях и способах эффективная доза дапаглифлозина означает любую дозу, одобренную для продажи регулирующим органом (таким как FDA в США), такую как 5 мг или 10 мг.

Следует пояснить, что в приведенных выше комбинациях, комбинациях для применения, применениях и способах эффективная доза Epanova® означает 1 г, 2 г или 4 г, особенно дозы, равные 2 г и 4 г, одобренные FDA в США, и более конкретно -4 г.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую ингибитор SGLT-2 или его фармацевтически приемлемую соль, стереоизомер или сложноэфирное про лекарство;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую композицию омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей); и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую ингибитор SGLT-2;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую ОМ3-СА, такую как Epanova® или биоэквивалентный ему вариант; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую ингибитор SGLT-2, выбранный из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую ОМ3-СА, такую как Epanova® или биоэквивалентный ему вариант; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую дапаглифлозин;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую ОМ3-СА, такую как Epanova® или биоэквивалентный ему вариант; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую ингибитор SGLT-2;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую ОМ3-ЕЕ, такую как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентный вариант любого из них; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую ингибитор SGLT-2, выбранный из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую ОМ3-ЕЕ, такую как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентный вариант любого из них; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую дапаглифлозин;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую ОМ3-ЕЕ, такую как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентный вариант любого из них; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую ингибитор SGLT-2;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую этил икозапент, такой как Vascepa® или биоэквивалентный ему вариант; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую ингибитор SGLT-2, выбранный из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую этил икозапент, такой как Vascepa® или биоэквивалентный ему вариант; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В последующем аспекте предложен комплект, включающий:

a) стандартную лекарственную форму, содержащую дапаглифлозин;

b) стандартную лекарственную форму, содержащую этил икозапент, такой как Vascepa® или биоэквивалентный ему вариант; и, необязательно,

c) рекомендации по использованию в лечении NAFLD и/или NASH.

В еще одном аспекте результаты анализа вторичных переменных в исследовании Effect II, описанном в Примерах 1, 1А и 1В, указывают, что комбинация Epanova® и дапаглифлозина эффективна в лечении NASH.

Комбинирование с дополнительными средствами

Пациентам с сердечно-сосудистыми заболеваниями, такими как NAFLD и/или NASH, может потребоваться медикаментозное лечение в дополнение к комбинации данного изобретения. Например, могут потребоваться одно или несколько дополнительных средств для улучшения контроля гликемии (т.е. противодиабетическое средство). В другом примере может потребоваться дополнительное средство для контролирования уровней липидов, такое как статин или другое средство для снижения липидов.

Поэтому в дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, фосфолипидов или солей) и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с ОМ3-СА и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-СА и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с Epanova® или биоэквивалентным ему вариантом и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2 с этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация ингибитора SGLT-2, выбранного из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина, с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с ОМ3-ЕЕ продуктом, таким как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентным вариантом любого из них, и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

В дополнительном аспекте предложена комбинация дапаглифлозина с продуктом этил икозапентом, таким как Vascepa® или биоэквивалентным ему вариантом, и дополнительным противодиабетическим средством и/или дополнительным средством для контролирования уровней липидов.

Такие дополнительные комбинации можно подходящим образом использовать в способах лечения и применениях, описанных выше.

Примеры пригодных дополнительных противодиабетических средств для применения при совместном введении по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются ими, бигуаниды (например, метформин или фенформин), ингибиторы глюкозидаз (например, акарбозу или миглитол), инсулины (включая стимуляторы секреции инсулина или усилители чувствительности рецепторов к инсулину), меглитиниды (например, репаглинид), сульфонилмочевины (например, глимепирид, глибурид, гликлазид, хлорпропамид и глипизид), комбинации бигуанид/глибурид (например, глюкованс - Glucovance®), тиазолидиндионы (например, троглитазон, розиглитазон и пиоглитазон), агонисты PPAR-альфа, агонисты PPAR-гамма, двойные агонисты PPAR альфа/гамма, ингибиторы гликогенфосфорилаз, ингибиторы связывающего жирные кислоты белка (аР2), глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1) и другие агонисты рецептора GLP-1.

Другие пригодные тиазолидиндионы включают, но не ограничиваются ими, МСС-555 (раскрыты в патенте США №5594016, Mitsubishi), фараглитазар (GI-262570, Glaxo-Wellcome), энглитазон (СР-68722, Pfizer), дарглитазон (СР-86325, Pfizer); изаглитазон (MIT/Johnson& Johnson), реглитазар (JTT-501, (JPNT/Pharmacia & Upjohn), ривоглитазон (R-119702, Sankyo/WL), лираглутид (NN-2344, Dr. Reddy/NN) и (2)-1,4-бис-4-[(3,5-диоксо-1,2,4-оксадиазолидин-2-ил-метил)]феноксибут-2-ен (YM-440, Yamanouchi).

Примеры PPAR-альфа агонистов, PPAR-гамма агонистов и PPAR альфа/гамма двойных агонистов включают, но не ограничиваются ими, мураглитазар, пелиглитазар, тезаглитазар AR-H039242 (AstraZeneca), GW-501516 (Glaxo-Wellcome), KRP297 (Kyorin Merck), а также раскрытые в публикации Murakami et al, "A Novel Insulin Sensitizer Acts As a Coligand for Peroxisome Proliferation - Activated Receptor Alpha (PPAR alpha) and PPAR gamma. Effect on PPAR alpha Activation on Abnormal Lipid Metabolism in Liver of Zucker Fatty Rats", Diabetes 47,1841-1847 (1998); WO 01/21602 и в патенте США №6414002 и в патенте США №6653314, раскрытия которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, с использованием доз, приведенных в данных документах. В одном варианте осуществления соединения, обозначенные как предпочтительные в указанных ссылках, являются предпочтительными для использования в настоящем изобретении.

Пригодные ингибиторы аР2 включают, но не ограничиваются ими, те, которые раскрыты в патентной заявке США за номером 09/391053, поданной 7 сентября 1999 г., и патенте США №6548529, раскрытия которых включены в данный документ во всей своей полноте путем ссылки, с использованием доз, приведенных в данных документах.

Другие пригодные меглитиниды включают натеглинид (Novartis) или KAD1229 (PF/Kissei).

В другом варианте осуществления настоящее изобретение дополнительно предусматривает совместное введение одного или нескольких дополнительных противодиабетических средств, где дополнительное противодиабетическое средство представляет собой метформин.

В дополнительном аспекте настоящего изобретения предложена комбинация композиции омега-3 жирных кислот (особенно предоставленная в виде Epanova®), дапаглифлозина и саксаглиптина, пригодная для лечения NASH.

Пригодные средства, понижающие уровень липидов, включают ингибиторы редуктазы HMG-CoA, также известные как статины. Примеры пригодных статинов включают розувастатин, симвастатин, флувастатин, правастатин, аторвастатин и питавастатин.

Другие пригодные средства, понижающие уровень липидов, включают PPAR α-агонисты (фибраты, например, гемфиброзил); секвестранты желчных кислот (холестирамин); ингибиторы всасывания холестерина (растительные станолы, синтетические ингибиторы); ингибиторы всасывания желчных кислот (IBATi) и никотиновой кислоты и аналоги (ниацин и составы замедленного высвобождения).

Пример 1: Действие Epanova® и дапаглифлозина отдельно и в комбинации на содержание жира в печени у пациентов с диабетом 2 типа; Двойное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое, 12-недельное исследование в параллельных группах; EFFECT II

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРМИНОВ

В этом описании используются следующие сокращения и специальные термины.

ИССЛЕДУЕМОЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЙ ПРЕПАРАТ (Epanova®) - Готовят мягкие капсулы из свиного желатина типа А, причем каждая содержит один грамм (1 г) композиции PUFA, содержащей омега-3 PUFA в виде свободной кислоты. На капсулы наносят покрытие из Eudragit NE 30-D (Evonik Industries AG).

Исследование представляет собой двойное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое, 12-недельное исследование в параллельных группах для оценки действия Эпанова (Epanova) и дапаглифлозина на содержание жира в печени у больных диабетом 2 типа со стеатозом печени (>5,5% согласно оценке с помощью МРТ).

Субъекты будут рандомизированы в соотношении 1:1:1:1 в группы плацебо, 4 г Эпанова, 10 мг дапаглифлозина или комбинации 4 г Эпанова и 10 мг дапаглифлозина. Пациенты будут получать лечение в течение 12 недель. Посещение запланировано на 7 неделе с целью предоставления исследуемого лекарственного препарата и контроля безопасности. Полная продолжительность исследования будет составлять максимум 15 недель и последующее посещение для контроля безопасности будет проведено в течение недели после окончания исследования.

Целью исследования является изучение того, может ли комбинация Эпанова и дапаглифлозина заметно снизить содержание жира в печени, а также изучение наличия взаимодействия между Эпанова и дапаглифлозином в отношении контроля глюкозы. Кроме того, целью исследования является изучение действия Эпанова и дапаглифлозина на другие параметры, относящиеся к воспалению печени и повреждению клеток печени.

• Главной целью данного исследования является изучение воздействия Эпанова и дапаглифлозина и комбинации Эпанова и дапаглифлозина на содержание жира в печени по сравнению с плацебо, используя МРТ.

• Второй целью является изучение воздействия на параметры, связанные со статусом NAFLD, такими как уровни трансаминаз, фрагментов цитокина-18, глюкозы, инсулина (HOMA-IR), HbA1c, адипонектина, биомаркеров окислительного стресса (например, 13-HODE), а также параметров воспаления, таких как hsCRP и остеопонтин, в плазме.

• Третьей целью является изучение воздействия на содержание жира в печени относительно изменения массы телесного жира и внутреннего жира, включая жир поджелудочной железы, липопротеины, особенно триглицериды плазмы, а также уровни DHA и ЕРА в плазме.

• Цель поискового исследования заключается в изучении воздействия на контролирование глюкозы (уровни глюкозы и инсулина натощак, пероральной пробы на толерантность к глюкозе и HbA1c) только лишь дапаглифлозина по сравнению с его комбинацией с Эпанова.

• Вторая поисковая цель заключается в изучении параметров, которые при одномоментной выборке в отношении содержания жира в печени на исходном уровне, могут дать алгоритм, предсказывающий развитие стеатоза печени (исследование обследования NAFLD). Будут разработаны две разные шкалы: 1) шкала стеатоза печени для выявления стеатоза печени на основании клинически измеряемых переменных параметров. "Шкала участкового врача". 2) шкала стеатоза печени для выявления стеатоза печени на основании расширенного числа переменных параметров, включая генетику, метаболомику и протеомику. "Научная шкала".

Для данного исследования каждый субъект должен отвечать всем критериям включения и ни одному из критериев исключения.

Чтобы быть включенными в исследование субъекты должны соответствовать следующим критериям:

1. Предоставление информированного согласия до проведения каких-либо конкретных процедур исследования.

2. Мужчины или женщины ≥40 лет и ≤75 лет, имеющие вены, пригодные для канюлирования или многократной венепункции.

3. Имеют содержание жира в печени согласно оценке с помощью МРТ ≥5,5%.

4. Диабет типа 2 при отсутствии терапии, понижающей уровень глюкозы, или получающие постоянное лечение метформином и/или сульфонилмочевиной.

5. Имеют индекс массы тела (ИМТ) ≥25 и ≤40 кг/м.

6. Готовность поддерживать текущий образ жизни, включая уровень активности.

Субъекты не должны участвовать в исследовании, если выполняется любой из следующих критериев исключения:

1. Участие в планировании и/или проведении исследования (относится как к работникам AstraZeneca, так и к работникам в местоположении проведения исследования).

2. Предыдущее участие в настоящем исследовании.

3. Участие в другом клиническом исследовании с использованием исследуемого лекарственного препарата в течение предыдущих 28 дней.

4. Любое состояние, при котором не показано использование МРТ, такое как, но ограничиваясь этим, наличие ритмоводителя или клаустрофобии.

5. История наличия (как обнаружено при посещении 1) любого клинически значимого заболевания или расстройства, которое по мнению исследователя может либо представлять собой потенциальную опасность для субъекта вследствие участия в исследовании, либо повлиять на результаты или способность субъекта участвовать в исследовании.

6. Любое клинически значимое заболевание, медицинская или хирургическая процедура или травма в течение 4 недель от первого приема исследуемого препарата.

7. Непереносимость омега-3 жирных кислот, этиловых эфиров или рыбы.

8. Непереносимость или аллергия на дапаглифозин или любой другой ингибитор SGLT2 или любое другое вещество в таблетках.

9. Использование дапаглифозина или любого другого ингибитора SGLT2 в течение 4 недель от посещения 1.

10. eGFR <60 мл/мин/1,73 м² при обследовании. (Modification of Diet in Renal Disease equation (Levey, et al. 1999).

11. Использование инсулина или GLP-1 терапии или других пероральных противодиабетических лекарств, отличных от метформина или сульфонилмочевины.

12. Диабет 2 типа с HbA1c >9% (=86 ммоль/моль) или <6,5% (=48 ммоль/моль).

13. Использование рыбьего жира, других пищевых добавок, содержащих ЕРА или DHA, или пищевых продуктов с повышенным содержанием ЕРА и/или DHA в течение 6 недель от посещения 1 или в ходе исследования.

14. Продолжающаяся диета для похудения (гипокалорийная диета) или использование средств для похудения, за исключением случаев, когда диета или лечение были прекращены по меньшей мере за 3 месяца до обследования и вес тела субъекта застабилизировался (+/- 3 кг) в продолжение 3 предыдущих месяцев перед обследованием.

15. Использование масел льняного семени, семян периллы, конопли, спирулины или черной смородины в течение 1 месяца с начала исследования и во время исследования до окончания исследования.

16. Любые, по мнению исследователя, клинически значимые отклонения в клинической химии, гематологии или результатах анализа мочи.

17. Повышенный NAFLD показатель стадии фиброза (≥-1,455) на основании оценки, полученной при обследовании.*)

18. Недавние случаи (за последние 12 месяцев) злоупотребления наркотиками или злоупотребления алкоголем. Злоупотребление алкоголем определяется как принятие >14 напитков в неделю (1 напиток = 35 сл пива, 14 сл вина или 4 сл крепкого спиртного напитка) или на основании оценки, сделанной исследователем.

19. Беременные, кормящие женщины или планирующие забеременеть в продолжение исследования женщины, или женщины детородного возраста, которые не используют приемлемые методы контрацепции. Женщина считается женщиной детородного возраста, если она не прошла хирургическую стерилизацию или прошло меньше 1 года с момента ее последней менструации.

20. Любое другое состояние, которое, по мнению исследователя, может повлиять на способность субъекта предоставить информированное согласие, выполнять инструкции исследования, или которое может повлиять на интерпретацию результатов исследования или подвергнуть субъекта неоправданному риску.

21. Донорская сдача плазмы в течение одного месяца от момента обследования или любая донорская сдача/потеря крови > 500 мл в течение 3 месяцев перед посещением 1 или в ходе исследования.

*) Калькулятор показателя в режиме on-line: http://nafldscore.com/

<-1,455: прогнозирующий показатель отсутствия значительного фиброза (фиброз F0-F2)

от ≤-1,455 до ≤0,675: промежуточный показатель

>0,675: прогнозирующий показатель наличия значительного фиброза (фиброз F3-F4)

Посещение для обследования (посещение 1) будет проводиться вплоть до 14 дней до рандомизации (посещение 2). Во время обследования оценивается, удовлетворяют ли давшие согласие субъекты критериям отбора на начальном этапе. Субъекты, не удовлетворяющие этим критериям, не должны вноситься в список участников исследования.

Объем оценочного обследования, выполняемого во время этого посещения, обширен и включает процедуры получения согласия, истории болезни, включая демографические данные, клиническую оценку, МРТ, пероральный тест на толерантность к глюкозе (ПТТГ) и взятие проб, как предписано в Плане исследования. Предположительно посещение 1 должно занимать два дня, чтобы позволить выполнить МРТ, опрос, инструктаж, получение информированного согласия и получить пробы плазмы натощак, включая ПТТГ.

В ходе посещения 2 оцениваются результаты обследования, чтобы убедиться, что пациент соответствует критериям отбора. Если критерии выполняются, пациента рандомизируют и осуществляют прием исследуемого лекарственного средства. В ходе этого посещения берут пробы, как предписано в Плане исследования. Затем пациенты будут получать лечение в течение 12 недель.

Пациент снова посетит клинику через 6 недель от начала лечения (посещение 3), чтобы получить исследуемое лекарственное средство. В ходе этого посещения проводят контроль безопасности (включая фиксирование АЕ и взятие проб).

Еще через 6 недель лечение закончится и пациент снова посетит клинику (посещение 4). В ходе этого посещения проводят контроль безопасности (включая фиксирование АЕ и взятие проб, как предписано в Плане исследования). Кроме того, посещение включает в себя клиническую оценку, МРТ, пероральный тест на толерантность к глюкозе (ПТТГ) и взятие проб для оценки эффективности.

В течение 1 недели после посещения 4 проводят последующий контроль безопасности в ходе телефонного разговора (посещение 5).

При этом фиксируют возможные АЕ. Если обнаружены какие-либо лабораторные сигналы в отношении безопасности, которые не были устранены во время исследования, посещение необходимо проводить в клинике, где будут взяты дополнительные пробы по безопасности для последующего наблюдения за этими сигналами. Может быть выбран дополнительный более поздний момент времени.

Пациент пройдет МРТ сканирование в ходе посещения 1 (обследование) и посещения 4 (прекращение лечения).

Основной целью является изучение содержания жира в печени с использованием магнитно-резонансной томографии (МРТ). Используется МРТ с использованием методик Dixon, поскольку она имеет более высокую точность, чем магнитно-резонансная спектроскопия (МРС) при оценке содержания жира в печени. Первичной переменной является содержание жира в печени (%), рассчитанная как: содержание жира в печени * 100 / (содержание жира в печени + содержание воды в печени). Также измеряют объем печени для изучения общего содержания жира в печени: общее содержание жира в печени (1) = содержание жира в печени (%) * объем печени.

При лечении каждый из омега-3 ЖК (Kabir et al, Am J Clinical Nutrition, 2007, 86, 1670-1679) и дапаглифлозина (Bolinder et al, Journal of clinical Endocrinology and Metabolism, 2012, 97, 1020-1031; Bolinder et al, Diabetes, Obesity and Metabolism, 2014, 16, 159-169) показали снижение содержания жира в организме. Поэтому, необходимо выполнить МРТ всего организма для оценки общей массы жира и мышечной ткани. Также измеряют содержание липидов поджелудочной железы (%) и ее размер. Также оценивают массу внутреннего жира и объем подкожного жира, используя МРТ на основе методик Dixon. Томография будет выполняться брюшной области с использованием границы L4/L5 в качестве анатомической ссылки. Объемы внутреннего и подкожного жира дают в литрах.

Все исследования выполняют на клиническом сканирующем МРТ при силе поля 1,5 Т, пациенты в положении лежа на спине.

Пробы для оценки показателей липидов и глюкозы берут в ходе посещения 1 (обследование), посещения 2 (рандомизация) и посещения 4 (прекращение лечения), соответственно. Уровни инсулина, глюкозы и NEFA в плазме также анализируют в связи с пероральным тестом толерантности к глюкозе (ПТТГ).

Пробы для оценки липидов, всасывания липидов и окислительного стресса берут в ходе посещения 1 (обследование) и посещения 4 (прекращение лечения).

Пробы для оценки воспаления, окислительного стресса, холинового обмена и гибели клеток берут в ходе посещения 1 (обследование) и посещения 4 (прекращение лечения).

Пробы для оценки метаболомики и протеомики берут только в ходе посещения 1 (обследование).

Пробы для оценки показателей железа и витамина D берут только в ходе посещения 1 (обследование).

Пероральный тест толерантности к глюкозе (ПТТГ) выполняют в ходе посещений 1 и 4. Все пробы плазмы берут из катетера, введенного в подкожную латеральную вену.

При проведении медицинского осмотра производят оценку следующего: общее состояние, состояние дыхательной, сердечно-сосудистой систем и органов живота.

Используют однократные дозы по 4 г Эпанова и 10 мг дапаглифлозина.

Рандомизацию производят по принципу 1:1:1:1 и тем самым:

- 1/4 популяции получает Эпанова по 4 г раз в день

- 1/4 популяции получает дапаглифлозин по 10 мг раз в день

- 1/4 популяции получает как Эпанова по 4 г раз в день, так и и дапаглифлозин по 10 мг раз в день

- 1/4 популяции получает плацебо в капсулах и таблетках.

Все лекарственные средства принимают раз в день утром.

Первичная переменная результата содержания жира в печени будет анализироваться по логарифмической шкале с использованием модели линейных смешанных эффектов с лечением и временем в качестве фиксированных эффектов, и пациентом в качестве случайного эффекта. Получающиеся различия в log (содержание жира в печени) будут обратно преобразованы в среднее геометрическое отношение и представлены как разница в среднем процентном изменении от базового уровня вместе с 95% доверительным интервалом (CI) и соответствующим значением р. Чтобы выполнить основную задачу оценки воздействия комбинации Эпанова и дапаглифлозина по сравнению с обоими ее компонентами, будет использоваться статистическая стратегия тестирования Даннетта для контроля ошибки 1 рода с поправкой на эффект множественных сравнений, равной 5%. Поправка на множественность производиться не будет для вторичных, третичных и поисковых конечных точек.

Для вторичных и третичных конечных точек будет выполняться сходный статистический анализ. Для переменных с примерно нормальным распределением, данные будут анализироваться по исходной шкале, и результаты будут представлены как абсолютное отличие среднего изменения от базовой линии. Распределение различных переменных будет определять, будет или нет преобразование данных выполняться до анализа.

Анализы чувствительности первичной конечной точки будут выполнены для оценки влияния любых недостающих данных.

Пример 1b

В варианте вышеуказанного протокола EFFECT II можно проводить, как описано в Примере 1 выше, но со следующими изменениями (при этом остальные детали остаются такими, как описаны выше).

Основная задача

Главной целью данного исследования является оценка эффективности комбинации Epanova® и дапаглифлозина по сравнению с плацебо на снижение содержания жира в печени (%) в конце 12 недель двойного слепого лечения диабета 2 типа, при этом повышенное содержание жира в печени определяется как >5,5% (оценка с помощью МРТ).

Второстепенная задача

Второй целью данного исследования является оценка относительной эффективности комбинации Epanova® и дапаглифлозина, одного Epanova®, одного дапаглифлозина и плацебо на снижение содержания жира в печени в конце 12 недель двойного слепого лечения диабета 2 типа, при этом повышенное содержание жира в печени определяется как >5,5% (оценка с помощью МРТ).

Задачи поискового исследования

Цель поискового исследования - оценить воздействие комбинации Epanova® и дапаглифлозина, одного Epanova® и одного дапаглифлозина по сравнению с плацебо на параметры, связанные с печенью, указывающие на окислительный стресс и воспаление и/или гибель клеток.

Цель поискового исследования - оценить воздействие комбинации Эпанова и дапаглифлозина, одного Эпанова и одного дапаглифлозина по сравнению с плацебо на отложения жира в организме (например, содержание внутреннего и подкожного жира и жира в поджелудочной железе (%)), диффузию жидкости в печени, уровни липидов, липопротеинов и общих DHA и ЕРА в плазме.

Цель поискового исследования заключается в изучении воздействия на контролирование глюкозы (например, глюкозы натощак и HbA1c) с помощью Epanova® в комбинации с дапаглифлозином, одного Epanova® и одного дапаглифлозина по сравнению с плацебо.

Поисковая цель заключается в изучении изменений состава жирных кислот в плазме и повышений уровней DHA и ЕРА вследствие воздействия лечения на содержание жира в печени и уровни триглицеридов в плазме.

Поисковая цель заключается в анализе генетических полиморфизмов в связи с накоплением жира в печени.

Другой поисковой целью является построение алгоритма, с помощью которого можно предсказать развитие стеатоза печени на основании одномоментной выборки данных ("исследование обследования NAFLD").

Критерии включения

Чтобы быть включенными в исследование пациенты должны соответствовать следующим критериям:

1. Предоставление информированного согласия до проведения каких-либо конкретных процедур исследования.

2. Мужчины или женщины ≥40 лет и ≤75 лет, имеющие вены, пригодные для канюлирования или многократной венепункции.

3. Имеют содержание жира в печени согласно оценке с помощью МРТ >5,5%.

4. Диабет 2 типа выявлен не менее чем за 6 месяцев в соответствии с критериями ВОЗ. Диагноз диабета 2 типа может основываться на следующем:

- Диабет 2 типа ранее зафиксирован в истории болезни И/ИЛИ

- Лечение антигипергликемическими препаратами и/или диетой И/ИЛИ

- Содержание глюкозы в плазме без подготовки ≥11,1 ммоль/л или натощак ≥7,0 ммоль/л или HbA1c≥48 ммоль/моль (6,5%).

5. Антидиабетическая лекарственная терапия: постоянно (т.е. > 1 месяца) метформин и/или сульфонилмочевина или нефармакологическое лечение.

6. Для пациентов без сопутствующей сульфонилмочевины: HbA1c≥48 и ≥80 ммоль/моль (≥6,5% и ≤9,5%) при посещении 1. Для пациентов с сопутствующей сульфонилмочевиной: HbA1c ≥53 и ≤80 ммоль/моль (≥7,0% и ≤9,5%) при посещении 1.

7. Имеют индекс массы тела (ИМТ) ≥25 и ≤40 кг/м².

Критерии исключения

Пациенты не должны участвовать в исследовании, если выполняется любой из следующих критериев исключения:

8. Участие в планировании и/или проведении исследования (относится как к работникам AstraZeneca, так и к работникам в местоположении проведения исследования).

9. Предшествующая рандомизация в настоящем исследовании

10. Участие в другом клиническом исследовании с использованием исследуемого лекарственного препарата в течение предыдущих 28 дней.

11. Любое состояние, при котором не показано использование МРТ, такое как, но ограничиваясь этим, наличие ритмоводителя или клаустрофобии.

12. История наличия (как обнаружено при посещении 1) любого клинически значимого заболевания или расстройства, которое по мнению исследователя может либо представлять собой потенциальную опасность для пациента вследствие участия в исследовании, либо повлиять на результаты или способность пациента участвовать в исследовании.

13. Выявление признаков диабета 1 типа (свидетельство наличия антител к островковым клеткам).

14. Клиренс креатинина <60 мл/мин на момент обследования (формула Кокрофта-Голта).

15. Тяжелая травма печени и/или значительно нарушенная функция печени, определяемая как содержание аспартатаминотрансферазы (ACT) >3х верхний предел нормы (ULN) и/или аланинаминотрансферазы (АЛТ) >3х ULN.

16. Общий билирубин >2,0 мг/дл (34,2 μмоль/л)

17. Непереносимость омега-3 жирных кислот, этиловых эфиров или рыбы.

18. Непереносимость или аллергия на дапаглифозин или любой другой ингибитор SGLT2 или любое другое вещество в таблетках.

19. Использование дапаглифозина или любого другого ингибитора SGLT2 в течение последних 4 недель перед посещением 1.

20. Использование инсулина или терапии GLP-1 или других пероральных антидиабетических средств (OAD), отличных от метформина или сульфонилмочевины в течение последних 4 недель перед посещением 1.

21. Использование рыбьего жира, других пищевых добавок, содержащих ЕРА или DHA, или пищевых продуктов с повышенным содержанием ЕРА и/или DHA в течение 4 недель от посещения 1 или в ходе исследования.

22. Продолжающаяся диета для похудения (гипокалорийная диета) или использование средств для похудения, за исключением случаев, когда диета или лечение были прекращены по меньшей мере за 3 месяца до обследования и вес тела пациента стабилизировался (+/- 3 кг) в продолжение 3 предыдущих месяцев перед обследованием.

23. Использование масел льняного семени, семян периллы, конопли, спирулины или черной смородины в течение 1 месяца от начала исследования и во время исследования до окончания исследования.

24. Любые клинически значимые отклонения в результатах клинической химии, гематологии или анализа мочи по мнению исследователя. Сюда включены признаки заболевания печени, отличные от NAFLD, которые служат причиной дальнейшего исследования или лечения на основании клинической оценки.

25. Недавние случаи (за последние 12 месяцев) злоупотребления наркотиками или злоупотребления алкоголем. Злоупотребление алкоголем определяется как принятие >14 напитков в неделю (1 напиток = 35 сл пива, 14 сл вина или 4 сл крепкого спиртного напитка) или на основании оценки, сделанной исследователем.

26. Беременные, кормящие женщины или планирующие забеременеть в продолжение исследования женщины, или женщины детородного возраста, которые не используют приемлемые методы контрацепции. Женщина считается женщиной детородного возраста, если она не прошла хирургическую стерилизацию или прошло меньше 1 года с момента ее последней менструации. Приемлемыми методами контрацепции являются: комбинированная гормональная контрацепция (содержащая эстроген и прогестерон), связанная с ингибированием овуляции (пероральная, интравагинальная, трансдермальная), гормональная контрацепция только прогестероном, связанная с ингибированием овуляции (пероральная, инъекционная, имплантируемая), внутриматочное средство, внутриматочная система с высвобождением гормона, двусторонняя окклюзия труб и вазектомизированный партнер.

27. Любое другое состояние, которое, по мнению исследователя, может повлиять на способность пациента предоставить информированное согласие, выполнять инструкции исследования, или которое может повлиять на интерпретацию результатов исследования или подвергнуть пациента неоправданному риску.

28. Донорская сдача плазмы в течение одного месяца от момента обследования или любая донорская сдача/потеря крови > 500 мл в течение 3 месяцев перед посещением 1 или в ходе исследования.

ПТТГ будет выполняться в ходе посещения 2, а не в посещение 1.

Контакт путем телефонного разговора (посещение 3) будет осуществлен после принятия пациентом исследуемого лекарственного средства в течение 14 дней для наблюдения за их общим состоянием, включая диабетические показатели для проверки признаков гипо- или гипергликемии. Нумерация последующих посещений таким образом увеличивается на 1 по сравнению с протоколом, подробности которого даны выше.

Основные гипотезы представляют собой три попарных сравнения с плацебо в отношении снижения содержания жира в печени (%). В частности, следующие гипотезы будут изучаться одновременно:

Н_0СР: μ_C - μ_P,

Н_0ЕР: μ_E - μ_P,

H_0DP: μ_D - μ_P.

(С = Эпанова + дапаглифлозин; D - дапаглифлозин; Р = плацебо; Е = Эпанова)

Анализ первичной переменной результата будет выполнен с использованием FAS (Полный набор анализов). Основные гипотезы, основанные на изменении от исходного уровня содержания жира в печени (%) будут анализироваться по натуральной логарифмической шкале с использованием модели линейных смешанных эффектов с лечением и фактором стратификации (исходное содержание жира в печени ≤/>8%) в качестве фиксированных эффектов, и пациентом в качестве случайного эффекта.

Получающиеся различия в log (содержание жира в печени) будут обратно преобразованы в среднее геометрическое отношение и представлены как разница в среднем изменении от базового уровня вместе с 95% доверительным интервалом (CI) и соответствующим значением р.

Для достижения основной цели - оценки эффекта комбинации Эпанова и дапаглифлозина по сравнению с плацебо - будет использоваться 5% двусторонний тест значимости с альфа-коррекцией Даннетта для 3 множественных сравнений.

Вторичные гипотезы представляют собой все попарные сравнения между С, Е, D и Р по отношению к снижению уровня содержания жира в печени (%):

Н_0СЕ: μ_C - μ_E,

H_0DE: μ_D - μ_E,

H_0CD: μ_C - μ_D.

Используя FAS, вторичные гипотезы, основанные на изменении исходного уровня содержания жира в печени (%), будут анализироваться с использованием того же метода и процедуры, что и при анализе первичной переменной. С целью соответствия вторичным задачам мы выполняем следующее:

Если хотя бы одна из трех основных гипотез отвергается, все попарные сравнения между С, Е и D будут выполняться с помощью метода Тьюки, скорректированного для 3 множественных сравнении с поправкой на эффект множественных сравнений (FWER), принимаемой равной 5%

а Посещение для обследования (посещение 1) может занять 2 дня, особенно учитывая проведение МРТ в отдельный день. Если содержание печеночных липидов >5,5% и если критерии включения и исключения выполняются, то пациент будет рандомизирован.

b Переговоры по телефону с целью последующего наблюдения за безопасностью. Может быть выполнено медсестрой, участвующей в исследовании. Посещение 6 предпочтительно происходит через 1 неделю после посещения 5.

с Вес, рост (рост только при начальном обследовании), окружность талии и бедер. Общая масса жира по биоимпедансу.

d SMBG - Самоконтроль уровня глюкозы в крови. Также включает анализ U-кетонов. Посещение будет выполнено медсестрой в форме телефонного звонка.

е Обследование МРТ - см. раздел 5.1.1. МРТ во время посещения 5 должно быть проведено до окончания лечения, т.е. по меньшей мере за день до посещения 5.

Допустимый временной промежуток для этого МРТ - вплоть до 6 дней до посещения 5.

f Образцы плазмы из введенного в подкожную латеральную вену катетера должны отбираться на -15, 0, 30, 60 и 120 минуте после 75 г пероральной нагрузки глюкозой.

g Посещение в конце лечения (посещение 5) может занять 2 дня, особенно учитывая проведение МРТ за день до отбора проб натощак. Последняя доза IP должна производиться за день до отбора проб натощак, включая ПТТГ.

h Дополнительные пробы в отношении безопасности будут взяты после окончания исследования, если наблюдались лабораторные сигналы безопасности, но не были устранены во время исследования, также может быть выбран дополнительный более поздний момент времени. Время для последующего отбора проб крови после исследования будет определено лечащим врачом, участвующим в исследовании. Можно провести дополнительные обследования, отличающиеся от взятия лабораторных проб, если это необходимо по соображениям безопасности (по усмотрению исследователя).

i Только Р-глюкоза, S-инсулин, S-C-пептид, В-НЬА1с

j Будут получены образцы крови и мочи. См. таблицу 3 ниже

k SAE будут регистрироваться с момента получения информированного согласия.

АЕ будут регистрироваться, начиная с посещения 2 (рандомизация).

Пример 1b

Приняты следующие дополнительные поправки к протоколу исследования:

Первичные и вторичные переменные непрерывного результата - % жира в печени, для популяции полного анализа, будут анализироваться по натуральной логарифмической шкале с использованием модели линейных смешанных эффектов. Модель будет адаптирована к изменению от исходного уровня содержания жира в печени в % на 12 неделе в натуральном логарифмическом масштабе с лечением, исходным уровнем содержания жира в печени в % (≤/>8%) и статусом включения (поправка номер 2 до или после протокола) в качестве фиксированных эффектов, и центрами/местоположениями в качестве случайного эффекта.

Основная гипотеза будет проверяться с использованием метода множественных проверок Даннетта с поправкой на эффект множественных сравнений, принимаемой равной 5%, скорректированного для 3 множественных сравнений. При условии отказа по меньшей мере от одной из трех гипотез для первичного анализа, вторичные гипотезы будут проверяться с использованием метода множественных проверок Тьюки с поправкой на эффект множественных сравнений, принимаемой равной 5%, скорректированного для трех сравнений.

Объем выборки для каждой группы снижены до n=20.

Следующая гипотеза будет протестирована в качестве основной гипотезы:

Н_0СР: μ_C - μ_P = 0

Н_0ЕР: μ_E - μ_P = 0

H_0DP: μ_D - μ_P = 0

Следующая гипотеза будет протестирована в качестве второй гипотезы:

H_0CE: μ_C - μ_E = 0

H_0DE: μ_D - μ_E = 0

H_0CD: μ_C - μ_D = 0

Пример 2: Доклиническое исследование

Задача исследования:

Исследовать воздействие пяти различных ингибиторов SGLT2 в комбинации с омега-3 жирной кислотой Эпанова в мышах VCU с неалкогольным стеатогепатитом на отмену NASH.

Основная задача:

Определить эффективность Эпанова в комбинации с четырьмя различными ингибиторами SGLT2 на снижение показателя по шкале активности NAFLD (NAS) в мышиной модели NASH.

Модель: Модель NASH на мышах VCU.

Диета: Рацион с высоким содержанием жира и холестерина в сочетании с фруктозой и глюкозой

Обработка:

Лекарственные средства вводили ежедневно через желудочный зонд.

Вводимый через зонд объем не превышает 3 мл/кг (60-70 μл/мышь с примерным весом тела 20-25 г).

Схема:

Образцы крови из хвостовой вены или сафена будут в каждом случае максимально составлять 100 μл на мышь.

Считываемые параметры:

1) Вес тела на 0, 8, 12 и 16 неделю

2) Прием пищи на 0, 8, 12 и 16 неделю (на клетку; n=3 в группе)

3) Общий холестерин и триглицериды в плазме на 0,12 и 16 неделю

4) Профиль липопротеинов на 0 и 16 неделю (холестерин, триглицериды и фосфолипиды, если возможно)

5) Свободный холестерин/этерифицированный холестерин в плазме как непрямое измерение активности LCAT на 0 и 16 неделю

6) Уровни АЛТ и ACT на 0 и 8, 12, 16 неделю

7) ФК в плазме: уровни DHA и ЕРА на 1 день и 16 неделю

8) СК18 в плазме на 4, 8, 12 и 16 неделю

9) Биопсия печени и гистология на 16 неделю

10) Показатели плазмы: HbA1c, фруктозамин, Р-глюкоза, АЛТ, ACT

11) Вес печени и содержание липидов (FC, СЕ и TG, фосфолипиды и профиль FFA для ЕРА и DHA) при умерщвлении

12) Отбор фекалий на 3 неделю (2*48 ч, в каждой клетке, n=6 в группе) для проведения калориметрического анализа в бомбе при AZ.

Доклиническое исследование в том виде, как оно описано, не проводилось. Вместо него проводили доклинические исследования в том виде, как они описаны в Примерах 3 и 4.

Пример 3 - Доклиническое исследование 2

Влияние ингибиторов SGLT-2 и Эпанова по отдельности или в комбинации на метаболические параметры и показатель печеночной патологии в мышиной модели DIO-NASH

Основные задачи:

Определение эффекта от 6 недель обработки ингибиторами SGLT2 - дапаглифлозином, ипраглифлозином и канаглифлозином и соединением омега-3 - Эпанова по отдельности или в комбинации на показатель активности NAFLD (NAS), включая стадию фиброза (сравнение после обработки и перед обработкой) в мышиной модели индуцированного диетой ожирения для жировой болезни печени и NASH (DIO-NASH).

Вторичные задачи:

a. Определение эффекта от 6 недель обработки ингибиторами SGLT2 - дапаглифлозином, ипраглифлозином и канаглифлозином и соединением омега-3 - Эпанова по отдельности или в комбинации на последнюю стадию стеатоза печени, воспаления и фиброза, оцениваемого с помощью (гисто)химического анализа.

b. Определение эффекта от 6 недель обработки ингибиторами SGLT2 - дапаглифлозином, ипраглифлозином и канаглифлозином и соединением омега-3 - Эпанова по отдельности или в комбинации на последнюю стадию печеночного содержания триглицеридов и холестерина, оцениваемого с помощью биохимического анализа.

c. Определение эффекта от 6 недель обработки ингибиторами SGLT2 - дапаглифлозином, ипраглифлозином и канаглифлозином и соединением омега-3 - Эпанова по отдельности или в комбинации на количество принимаемой пищи и воды, вес тела (BW) и состава тела.

d. Определение эффекта от 6 недель обработки ингибиторами SGLT2 - дапаглифлозином, ипраглифлозином и канаглифлозином и соединением омега-3 - Эпанова по отдельности или в комбинации на гомеостаз глюкозы (уровень глюкозы в крови натощак (BG)).

e. Определение эффекта от 6 недель обработки ингибиторами SGLT2 - дапаглифлозином, ипраглифлозином и канаглифлозином и соединением омега-3 - Эпанова по отдельности или в комбинации на уровни инсулина в плазме.

f. Определение эффекта от 6 недель обработки ингибиторами SGLT2 - дапаглифлозином, ипраглифлозином и канаглифлозином и соединением омега-3 - Эпанова по отдельности или в комбинации на уровни аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT), общего холестерина (ТС) и триглицеридов (TG) в плазме.

g. Сбор конечной плазмы для анализа ФК.

h. Сбор конечной плазмы для анализа биомаркеров.

i. Сбор конечной печени для измерения общего веса и подготовки для гистологии, (био)химического анализа и анализа экспрессии генов (необязательно), и измерения класса липидов.

j. Сбор жировых отложений в тканях (эпидидимальных и висцеральных/брыжеечных) для определения веса и, необязательно, анализа экспрессии генов.

План исследования

Материалы и методы

Животные

Самцов мышей C57B1/6J в возрасте 5 недель приобретают у компании JanVier, Франция. В ходе акклиматизации и индуцированной диеты, мышей содержат вместе, по пять в клетке, с циклом свет-темнота 12:12 (световой день 0400-1600 ч) в контролируемых температурных условиях (22±1°С; относительная влажность 50±10%). В ходе всего периода исследования мышам обеспечивают свободный доступ к рациону диеты NASH (DIO-NASH) (D09100301, исследовательская диета) (40% жиры (18% транс-жиры)), 40% углеводы (20% фруктоза) и 2% холестерин). Мышей выдерживают на этом рационе 28 недель перед проведением экспериментов. В дополнение к этому, меньшей группе животных дают рацион с нормальной диетой (Altromin 1324, Brogaarden) для включения в качестве худой контрольной группы (LEAN-CHOW). Во время послеоперационного периода восстановления и исследования животные будут содержаться по одному в клетке. BW регистрируется один раз в день в ходе периода исследования. 24-Часовое потребление пищи и воды регистрируется один раз в неделю в ходе периода исследования.

Наблюдение за индуцированием DIO-NASH. стратификацией, рандомизацией и исходным уровнем

В ходе периода индуцирования диетой DIO-NASH, раз в месяц проводят измерение BW. После 25 недель индуцирования диетой получают биопсию печени для определения прогрессии печеночного фиброза и стеатоза, оцениваемых по гистохимическому анализу, а затем определяют показатель активности NAFLD, включая стадию фиброза и, необязательно, анализ экспрессии генов (см. ниже). В день -6, животных стратифицируют по группам обработки согласно уровням фиброза (% коллагена), а затем рандомизируют на основании 1) фиброза печени и 2) BW. Кроме того, анализируют ожирение печени (% липидов). В день -5 животным проводят эхо-планарную томографию (EchoMRI) для анализа композиционного состава тела.

Группы для исследования

Животных рандомизируют в 8+1 группы для исследования (n=10):

Группа 1 DIO-NASH - Носитель (QD, РО)

Группа 2 DIO-NASH - Дапаглифлозин, 1 мг/кг (QD, РО)

Группа 3 DIO-NASH - Эпанова, 600 мг/кг (QD, РО)

Группа 4 DIO-NASH - Дапаглифлозин (1 мг/кг) + Эпанова (600 мг/кг) (QD, РО)

Группа 5 DIO-NASH - Ипраглифлозин, 3 мг/кг (QD, РО)

Группа 6 DIO-NASH - Ипраглифлозин (3 мг/кг) + Эпанова (600 мг/кг) (QD, РО)

Группа 7 DIO-NASH - Канаглифлозин, 30 мг/кг (QD, РО)

Группа 8 DIO-NASH - Канаглифлозин (30 мг/кг) + Эпанова (600 мг/кг) (QD, РО)

Группа 9 LEAN-CHOW - Контрольная

Дозируемые объемы составляют 5-20 мл/кг (TBD). Путь введения представляет собой пероральное (РО) дозирование через желудочный зонд. Частота дозирования составляет один раз в день (QD). День 0 является днем первого дозирования. Животным дозируют соединение(я) и носитель между 2 и 4 часами дня. Животные получают дозирование в течение 42 дней. Последнюю дозу вводят за день до окончания (день 41 исследования).

Вес тела, прием пищи и воды

Вес тела регистрируют один раз в день в ходе периода исследования при осуществлении дозирования. Прием пищи и воды измеряют раз в неделю (24-часовой прием) в ходе периода исследования.

Приготовление соединения

Ингибиторы SGLT2 - дапаглифлозин, ипраглифлозин и канаглифлозин - растворяют в PBS, получая конечную концентрацию 0,2 мг/мл, 0,6 мг/мл и 6 мг/мл, соответственно, для дозируемого объема в 5 мл/кг (в альтернативном случае -10 или 20 мл/кг (TBD)). Соединение омега-3 Эпанова будет предоставляться в капсулах (1 г; примерно 800 мг омега-3). Носитель - оливковое масло и PBS. Соединение Эпанова готовят путем аспирации содержимого 2 капсул (примерно 1600 мг омега-3) для растворения в 13 мл оливкового масла с получением конечной концентрации примерно 120 мг/мл для дозируемого объема, равного 5 мл/кг (в альтернативном случае - 10 или 20 мл/кг (TBD)).

Предварительное печеночное обследование для оценки уровней стеатоза и фиброза

Приготовление биопсии для предварительного печеночного обследования: После выдерживания в течение ночи в 4% PFA (параформальдегиде), печеночные биопсии инфильтрируют в парафин в течение ночи в автоматизированном процессоре тканей Miles Scientific Tissue-TEK VIP Tissue Processor, а затем заливают в парафиновые блоки. С них затем обрезают излишки и получают срезы по 5 им на биопсию (для окрашивания Сириус красным) на Microm НМ340Е Microtome (Thermo Scientific). Кроме того, для каждой биопсии получают дополнительные срезы, чтобы в конце исследования сравнить предварительную биопсию с целой печенью в связи с гистологической оценкой (показатель активности NAFLD, включая стадию фиброза) (см. ниже). 5 срезов (на каждую биопсию) заливают в один блок и два блока помещают на одно стекло, получая суммарно 10 срезов биопсий на каждом стекле. Срезы оставляют сушиться в течение ночи. Для оценки стеатоза печени и фиброза срезы окрашивают Сириус красным и анализируют с помощью программного обеспечения Visiomorph (Visiopharm, Copenhagen, Denmark). Оценка стеатоза печени и фиброза по предварительной биопсии будет описана как % от общей площади.

Отбор конечных проб глюкозы в крови и плазмы.

Пробы крови для измерения 4 ч BG натощак отбирают на день 38 исследования. Кроме того, плазма будет получена на 38 день исследования для определения 4 ч инсулина в плазме натощак, ТС и TG. Животных подвергают голоданию с 6 до 10 часов утра и затем отбирают образцы крови из хвостовой вены (через разрез) для определения уровней глюкозы в крови и инсулина в плазме и из подчелюстной (щечной) вены для анализа ТС и TG в плазме.

Состав тела

Композиционный состав тела анализируют до начала исследования на день -5 и на день 36 с помощью неинвазивного метода EchoMRI-900 (EchoMRI, США). Томограф измеряет массу жировой и мышечной ткани. Во время процедуры сканирования мышь помещают в фиксатор для иммобилизации на 90-120 секунд.

Окончание

Животных умерщвляют на 42 день исследования в накормленном состоянии.

Анализ класса липидов в образцах печени

Ткани печени (примерно 50 мг) иссекают при вскрытии и быстро взвешивают и немедленно переносят в 2-мл пробирку для гомогенизации и мгновенно замораживают в жидком азоте.

Обработка ткани печени

Предварительная биопсия: Примерно за три недели до начала исследования кусок ткани печени (~100 мг) иссекают из дистальной части левой боковой доли, делят на две части и немедленно помещают либо в 4% параформальдегид (2/3) либо в RNAlater (1/3).

Конечная ткань печени: Через 6 недель обработки собирают целую печень, взвешивают и из левой боковой доли иссекают биопсии печени и немедленно помещают в 4% параформальдегид (~100 мг), RNAlater (~50 мг) и кусок (~100 мг), ототбранный в пробирку FastPrep и мгновенно замораженный в жидком азоте. Фиксация, заливка и срезы: Вслед за фиксацией в течение ночи в 4% забуференном фосфатом формальдегиде (10% формалина), печеночные биопсии инфильтрируют в парафин в течение ночи в автоматизированном процессоре тканей Miles Scientific Tissue-TEK VIP Tissue Processor, а затем заливают в парафиновые блоки. В один блок заливают пять биопсий. С блоков обрезают излишки и получают четыре 5 μм среза с каждого блока на Microm НМ340Е Microtome (Thermo Scientific). Один срез из двух разных блоков помещают на одно предметное стекло, в сумме получая по 10 срезов биопсий на одном стекле.

Гомогенизация тканей: 1 мл раствора 5%NH-40/ddH₂O (ab142227, Abeam) вносят в пробирку FastPrep. Пробирки помещают в гомогенизатор FastPrep и встряхивают в течение 2×60 секунд. После гомогенизации образцы медленно нагревают до 80-100°С в блоке нагревания в течение 3 минут. После охлаждения до комнатной температуры стадию нагревания повторяют. Образцы центрифугируют 2 минуты на максимальной скорости, используя микроцентрифугу, для удаления любого нерастворимого материала. Надосадочную жидкость хранят при -80°С до использования.

Показатель активности NAFLD (NAS) и стадия фиброза

Предварительную печеночную биопсию и конечную ткань печени из левой боковой доли собирают для получения NAS и оценки стадии фиброза, используя клинические критерии, изложенные Kleiner с коллегами (Design and validation of a histological scoring system for nonalcoholic fatty liver disease, Kleiner et al, Hepatology 41; 2005). NAS представляет собой сумму показателей стеатоза, лобулярного воспаления и гепатоцеллюлярного баллонирования:

Гистология: Стеатоз, баллонирующая дегенерация, воспаление и фиброз

Приготовление биопсии для гиспопатологического печеночного обследования: Для оценки стеатоза печени, баллонирующей дегенерации, фиброза и воспаления срезы окрашивают, используя гематоксилин и эозин (Н&Е), Сириус Красный, СК18 (баллонирование) и галектин-3 (макрофаги), соответственно), с последующим анализом с использованием программного обеспечения Visiomorph (Visiopharm, Copenhagen, Denmark). Оценка стеатоза печени, фиброза или воспаления по биопсии будет описана как процентная доля от общей площади с использованием протокола, разработанного для определенной цели.

Окрашивание Н&Е: Вкратце, срезы, залитые в парафин, депарафинизируют в ксилоле и повторно гидратируют последовательно в сортовом этаноле. Срезы затем инкубируют в течение 5 минут в гематоксилине Майера (Кат. № MHS80 2,5 л, Sigma Aldrich), промывают 5 минут в струе воды из-под крана и затем окрашивают 5 минут в растворе Eosin Y (Кат. № НТ110280 2,5 л, Sigma-Aldrich). Стекла гидрируют, закрепляют с помощью Pertex и дают возможность высохнуть перед сканированием. Сириус красный: Вкратце, срезы, залитые в парафин, депарафинизируют в ксилоле и повторно гидратируют последовательно в сортовом этаноле. Стекла окрашивают пикро-сириусом красным в течение часа и промывают два раза в подкисленной воде. Оставшуюся воду удаляют, интенсивно стряхивая стекла. Вслед за этим стекла гидратируют, три раза меняя 100% этанол, проясняют в ксилоле и закрепляют с помощью Pertex, затем им дают просохнуть перед сканированием. СК18 и галектин-3 иммуногистохимия: Коммерческие антитела СК18 и галектин-3 применяют, используя стандартные процедуры. Вкратце, залитые в парафин срезы депарафинизируют в ксилоле и повторно гидратируют последовательно в сортовом этаноле перед восстановлением антигена в кипящем трис-EGTA буфере (рН 9) или путем обработки протеиназой К. Между всеми стадиями срезы промывают в промывочном буфере (TBS+Tween 20, TBS-T). Эндогенную пероксидазную активность гасят 1% Н202 с последующей блокировкой сывороткой в растворе, содержащем 5% нормальной свиной сыворотки, 1% альбумина бычьей сыворотки и 0,2% Tween 20. Затем срезы инкубируют в течение 1 часа с первичным антителом, разведенным в растворе блокировочной сыворотки, и затем инкубируют со вторичным антителом. Сигнал от антитела усиливают, используя полимерную систему Envision+ HRP-coupled polymer system (Dako), и визуализируют в растворе DAB, получая характерное коричневое окрашивание макрофагов.

Все слайды, наконец, оцифровывают под объективом 20Х в сканирующем устройстве для слайдов Aperio Scanscope AT для анализа изображений.

Химия: Содержание печеночного гидроксипролина

50 мг зафиксированной формалином ткани печени гомогенизируют в 500 μл воды. Добавляют 500 μл концентрированной соляной кислоты и образцы гидролизуют при 120С в течение 3 часов. Надосадочную жидкость переносят в 96-луночный планшет и содержимое лунок выпаривают за ночь досуха. Общее содержание коллагена в печени измеряют по колориметрическому определению остатков гидроксипролина кислотным гидролизом коллагена (Кат. № МАК008, Sigma Aldrich).

Биохимия: Содержание печеночных триглицеридов и холестерина Содержание триглицеридов и холестерина в печеночных гомогенатах измеряют однократными определениями, используя автоматический анализатор Cobas С-111 с коммерческим комплектом (Roche Diagnostics, Germany) согласно инструкции произовдителя.

Данные, отчетность и статистическая оценка

Результаты представлены в виде среднего ± SEM (стандартная ошибка среднего), если не указано иное. Статистическая оценка данных проводится с использованием непарного t-критерия Стьюдента или двухфакторного дисперсионного анализа (ANOVA) для сравнения контрольной LEAN-CHOW и DIO-NASH с носителем. Для сравнения групп DIO-NASH, где применимо, используют однофакторный и двухфакторный дисперсионный анализ (ANOVA). В статистически значимых случаях применяют апостериорный анализ (Даннетт/Бонферрони) (р<0,05 считаются значимыми).

Результаты

Результаты исследования показаны на Фигурах 1 и 2:

На Фигуре 1 показаны эффекты от только одних дапаглифлозина (В), Эпанова (С), ипраглифлозина (Е), канаглифлозина (G) и комбинаций Эпанова с дапаглифлозином (D), ипраглифлозином (F) и канаглифлозином (Н) по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель (А), на показатель активности NAFLD. Статистический анализ проводили непараметрическим дисперсионным анализом (ANOVA) по Краскелу-Уоллису, после чего проводился апостериорный анализ, сравнивая контрольную группу с другими группами. р-Значение < 0,05 принималось значимым. р-Значение согласно анализу по Краскелу-Уоллису составляло < 0,01, в то время как апостериорный анализ не был значимым.

На Фигуре 2 показаны эффекты от только одних Дапаглифлозина (В), Эпанова (С), Ипраглифлозина (Е), Канаглифлозина (G) и комбинаций Эпанова с Дапаглифлозином (D), Ипраглифлозином (F) и Канаглифлозином (Н) по сравнению с контрольной группой, получавшей носитель (А), на стадию фиброза. Статистический анализ проводили непараметрическим дисперсионным анализом (ANOVA) по Краскелу-Уоллису, после чего проводился апостериорный анализ, сравнивая контрольную группу с другими группами. р-Значение < 0,05 принималось значимым. р-Значение в анализе по Краскелу-Уоллису не было значимым (р=0,4).

Краткое изложение результатов:

• Отсутствие эффекта на переменные первичного воздействия; показатели активности NAFLD или стадию фиброза как от Эпанова, дапаглифлозина, так и от комбинации в конце исследования

• Сравнивая биопсии исходного уровня и конца исследования, Эпанова и комбинация снижали показатель активности NAFLD

• Сравнивая биопсии исходного уровня и конца исследования, дапаглифлозин снижал фиброз

Пример 4 - Доклиническое исследование 3

Дополнительно было проведено доклиническое исследование на мышах в соответствии с экспериментальным планом, описанным ниже.

Экспериментальный план

Модель: Мышыная модель VCU (Virginia Commenwealth University) NASH; инбредным мышам C57bI6J/ х 129SI/SvlmJ скармливали рацион с высоким содержанием жиров, холестерина, фруктозы и глюкозы в течение 16 недель до начала фармакологической обработки.

Обработка: лекарственные средства вводят ежедневно через желудочный зонд. Вводимый через зонд объем не превышает 3 мл/кг. Носитель - оливковое масло и вода. Эпанова и дапаглифлозин вводят ежедневно через желудочный зонд в одном шприце.

Схема:

Подготовка: 16 недель диеты с высоким содержанием жиров, холестерина, фруктозы и глюкозы, одна неделя носителя через желудочный зонд.

Т=0 недель: мышей подбирают по соответствию веса тела. Мышей делят на 4 группы по 12 животных. Проводят введение носителя через желудочный зонд перед наступлением активной обработки в течение 4 недель.

Группы

Контрольная:	оливковое масло и вода	n=12
Эпанова:	600 мг/кг/д и вода	n=12
Дапаглифлозин:	1 мг/кг/д и оливковое масло	n=12
Эпанова + дала:	600 мг/кг/д и 1 мг/кг/д	n=12

Анализы плазмы:

a) Печеночная панель (АЛТ и ACT, АЛФ)

b) Липидная панель (общий холестерин и триглицериды)

c) ФК в плазме: уровни общей композиции жирных кислот и дапаглифлозина в плазме

d) глюкоза и инсулин

e) параметры воспаления и биомаркеры окислительного стресса Результаты

Результаты исследования показаны на Фигурах 3 и 4.

Фигура 3: Эффекты от Эпанова (Ера), Дапаглифлозина (Dapa) и комбинации Эпанова и Дапаглифлозина (Epa+Dapa) на гистологическую оценку стеатоза (А), воспаления (В), баллонирования (С) и сумма этих оценок, приведенная как показатель активности NAFLD (D). р-Значение < 0,05 принималось значимым. * р<0,05 по сравнению с контрольным

Фигура 4: Эффекты от Эпанова (Ера), Дапаглифлозина (Dapa) и комбинации Эпанова и Дапаглифлозина (Epa+Dapa) на гистологическую оценку стадии фиброза. р-Значение<0,05 принималось значимым. * р<0,05 по сравнению с контрольным

Краткое изложение результатов:

• Эпанова снизил показатель активности NAFLD со значимым эффектом на стеатоз с тенденцией к влиянию на баллонирование

• Эпанова снизил стадию фиброза

• Один Дапаглифлозин эффекта не дал

• Дапаглифлозин не продемонстрировал эффект сверх эффекта только от Эпанова

Некоторые аспекты раскрытия включают:

1. Комбинацию ингибитора SGLT-2 с композицией омега-3 жирных кислот (где композиция омега-3 жирных кислот включает в себя одну или несколько омега-3 жирных кислот, которые могут быть в виде кислот, эфиров, триглицеридов, фосфолипидов или солей).

2. Комбинацию, как описана в аспекте 1, где композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде ОМ3-СА продукта, такого как Epanova® или биоэквивалентного ему варианта.

3. Комбинацию, как описана в аспекте 2, где ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина.

4. Комбинацию, как описана в аспекте 3, где ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин.

5. Комбинацию, как описана в аспекте 1, где композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде ОМ3-ЕЕ продукта, такого как Lovaza® или Omtryg® или биоэквивалентного варианта любого из них.

6. Комбинацию, как описана в аспекте 1, где композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде продукта этил икозапента, такого как Vascepa® или биоэквивалентного ему варианта.

7. Комбинацию, как описана в аспекте 6, где ингибитор SGLT-2 выбирают из дапаглифлозина, канаглифлозина, ремоглифлозина этабоната, ипраглифлозина и эмпаглифлозина.

8. Комбинацию, как описана в аспекте 7, где ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин.

9. Способ лечения NAFLD и/или NASH, включающий в себя введение эффективной дозы комбинации, как та, что описана в любом одном из аспектов 1 -8, теплокровному животному, нуждающемуся в таком лечении.

10. Комбинацию, как описана в любом одном из аспектов 1-8, для применения в качестве лекарственного препарата.

11. Комбинацию, как описана в любом одном из аспектов 1 -8, для применения в качестве лекарственного препарата в лечении NAFLD и/или NASH.

12. Комбинацию, как описана в аспекте 11 для лечения NAFLD и/или NASH у человека с выявленным диагнозом диабета II типа.

13. Комбинацию, как описана в аспекте 11 или 12 для лечения NAFLD и/или NASH у человека с выявленным диагнозом внешнесекреторной недостаточности поджелудочной железы.

1. Применение комбинации, содержащей эффективную дозу композиции омега-3 жирных кислот и эффективную дозу ингибитора SGLT-2, для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где композиция омега-3 жирных кислот предложена в виде Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и где ингибитор SGLT-2 представляет собой дапаглифлозин.

2. Применение по п. 1, где выявляют субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH на основании показателя по шкале активности NAFLD этого субъекта; и

где вводят эффективную дозу указанного ингибитора SGLT-2 и эффективную дозу указанной композиции омега-3 жирных кислот и тем самым улучшают показатель по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

3. Применение по любому из пп. 1 или 2, где выявляют субъекта с показателем по шкале активности NAFLD больше или равным 5; и

где вводят комбинацию и тем самым улучшают показатель по шкале активности NAFLD у указанного субъекта по меньшей мере на 1 пункт без ухудшения показателя стадии фиброза у субъекта.

4. Применение по любому из пп. 1-3, где у субъекта установлен диагноз сахарный диабет II типа.

5. Применение комбинации, содержащей эффективную дозу Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективную дозу дапаглифлозина, для снижения содержания жира в печени у субъекта, у которого установлен диагноз сахарный диабет II типа и установлено повышенное содержание жира в печени, составляющее более 5,5% согласно оценке с помощью МРТ или МРС.

6. Применение по п. 5, где лекарственный препарат также приводит к снижению уровня содержания триглицеридов в плазме у субъекта.

7. Применение по п. 5 или 6, где лекарственный препарат также приводит к повышению уровней EPA и/или DHA в плазме у субъекта.

8. Применение по любому из пп. 5-7, где лекарственный препарат также приводит к снижению гибели клеток и/или баллонирования у субъекта.

9. Применение по любому из пп. 5-8, где у субъекта также имеется избыточный вес с ИМТ более 25.

10. Применение комбинации, содержащей эффективную дозу Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективную дозу дапаглифлозина для снижения содержания жира в печени и снижения воспаления в печени у субъекта, нуждающегося в этом.

11. Применение комбинации, содержащей эффективную дозу Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективную дозу дапаглифлозина, для остановки прогрессирования фиброза печени у субъекта, нуждающегося в этом.

12. Применение комбинации, содержащей эффективную дозу Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективную дозу дапаглифлозина, у субъекта с установленным диагнозом NAFLD или NASH, для остановки прогрессирования NAFLD и/или NASH, где вводят комбинацию и тем самым вызывают остановку прогрессирования фиброза печени у субъекта.

13. Применение комбинации, содержащей эффективную дозу Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективную дозу дапаглифлозина, для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где вводят комбинацию и тем самым вызывают снижение веса тела субъекта.

14. Применение комбинации, содержащей эффективную дозу Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и эффективную дозу дапаглифлозина, для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH, где вводят комбинацию и тем самым вызывают повышение чувствительности субъекта к инсулину.

15. Комбинация Epanova® или биоэквивалентного ему варианта и дапаглифлозина для лечения NASH у субъекта с установленным или подозреваемым диагнозом NASH.

16. Комбинация по п. 15, где применяется 1 г, 2 г или 4 г Epanova® в день.

17. Комбинация по п. 15, где применяется 5 или 10 мг дапаглифлозина.

18. Применение по любому из пп. 1-14, где применяется 1 г, 2 г или 4 г Epanova® в день.

19. Применение по любому из пп. 1-14, где применяется 5 или 10 мг дапаглифлозина.