Способ оценки степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов

Авторы патента:

G01N33/80 - с использованием групп или типов крови

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2701520:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к способу оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов и может быть использовано в медицине, в лабораторных методах исследования. Предложен способ оценки степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки степени присутствия фосфатидилсерина эритроциты фиксируют глутаровым альдегидом в течение 30 минут, отмывают забуференным физиологическим раствором, помещают в кювету агрегометра, добавляют хлористый лантан в финальных концентрациях 15-25 мкМ, включают перемешивающее устройство, перемешивают в кювете агрегометра в течение 30 с, останавливают перемешивание, процесс оседания агрегатов эритроцитов регистрируют в виде агрегатограммы, о степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов судят по максимальной амплитуде агрегатограммы. Предложен новый эффективный способ оценки степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов. 3 ил., 3 пр.

Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования и может использоваться для оценки степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Известно, что в эритроцитах фосфолипиды расположены асимметрично. Фосфатидилхолин и сфингомиелин локализованы на внешней половине липидного бислоя, фосфатидилэтаноламин на внешней и внутренней половине мембраны. Отрицательно заряженный фосфолипид фосфатидилсерин локализован исключительно на внутренней стороне липидного бислоя (Zwaal R.F.A., Schroit A.J. Blood. 1997. Vol. 89. P. 1121-1132). Выход фосфатидилсерина на поверхность мембран клеток крови при многих патологических состояниях ускоряет свертывание крови, приводит к тромботическим состояниям (Zwaal R.F.A, Comfurius P., Bevers E.V. Cell. Mol. Life Sci. 2005. Vol. 62. P. 971-988).

Известен способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, который включает добавление к эритроцитам флюоресцентного белка аннексина V и последующее измерение флюоресценции с помощью проточного цитофлюориметра (Kuypers F.A., Lewis R.A., HuaM. etal. Blood. 1996. Vol. 87. P. 1179-1183).

Однако для этого требуется дорогостоящее оборудование (проточный цитофлюориметр) и дорогие реактивы.

В качестве прототипа выбран способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов (Шереметьев Ю.А., Поповичева А.Н., Успенский А.Н., Александров А.А., Успенская О.А. Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов. Патент RU 2665171.2018), который включает фиксацию эритроцитов с помощью раствора глутарового альдегида в течение 30 минут, их отмывание забуференным физиологическим раствором. После этого к клеткам добавляют хлористый лантан в финальной концентрации 20 мкМ и наблюдают за появлением агрегатов с помощью светового микроскопа. По появлению агрегатов эритроцитов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Однако этот способ позволяет определить только наличие на поверхности мембран эритроцитов фосфатидилсерина. В то же время важной задачей является определение степени присутствия фосфатидилсерина эритроцитов на поверхности мембран эритроцитов.

Задача предполагаемого изобретения - совершенствование способа.

Технический результат - возможность определить степень присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем фиксацию эритроцитов с помощью раствора глутарового альдегида в течение 30 минут, их отмывание забуференным физиологическим раствором, помещение в кювету агрегометра, добавление к клеткам хлористого лантана в финальных концентрациях 15-25 мкМ, включение перемешивающего устройства, перемешивание в кювете агрегометра в течение 30 с, остановка перемешивания, процесс оседания агрегатов эритроцитов регистрируют в виде агрегатограммы, о степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов судят по максимальной амплитуде агрегатограммы. При концентрациях хлористого лантана меньше 15 мкМ агрегация эритроцитов отсутствует. При концентрации хлористого лантана больше 25 мкМ происходит агрегация и донорских (нормальных) эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты фиксируют в 0.25% растворе глутарового альдегида, приготовленного на фосфатном буфере, в течение 30 минут при комнатной температуре. После фиксации эритроциты один раз отмывают забуференным физиологическим раствором (10 мМ трис-HCI, 150 мМ NaCI, рН 7.4) с помощью центрифугирования при 3000 об/мин в течение 5 минут. 0.9 мл 0.5% суспензии фиксированных эритроцитов в забуференном физиологическом растворе помещают в кювету агрегометра, добавляют 0.1 мл хлористого лантана в финальных концентрациях 15-25 мкМ, включают перемешивающее устройство, перемешивают в кювете агрегометра в течение 30 с, останавливают перемешивание, процесс оседания агрегатов регистрируют в виде агрегатограммы, по максимальной амплитуде агрегатограммы судят о степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Известно, что инкубация отмытых эритроцитов при 37°С в течение 24 ч приводит к развитию эриптоза, на поверхности мембран появляется фосфатидилсерин (Klarl В.А. et al. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2006. Vol. 290. C. 244-253). Инкубация эритроцитов в присутствии ионов кальция приводит к увеличению степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Пример 1. Эритроциты донора фиксировали глутаровым альдегидом. К 0.9 мл 0.5% суспензии нормальных фиксированных эритроцитов, помещенных в кювету агрегометра, добавляли 0.1 мл хлористого лантана в финальной концентрации 20 мкМ, включали перемешивающее устройство, проводили перемешивание в кювете агрегометра в течение 30 с, после этого перемешивание останавливали. Процесс оседания агрегатов эритроцитов регистрировали на лазерном агрегометре. Агрегация эритроцитов отсутствует (рис. 1). На поверхности мембран эритроцитов фосфатидилсерин отсутствует.

Пример 2. Суспензию эритроцитов инкубировали при 37°С в течение 24 ч. После этого эритроциты фиксировали глутаровым альдегидом и помещали в кювету агрегометра. К 0.9 мл 0.5% суспензии фиксированных эритроцитов добавляли 0.1 мл хлористого лантана в финальной концентрации 20 мкМ, включали перемешивающее устройство, проводили перемешивание в кювете агрегометра в течение 30 с, после этого перемешивание останавливали. Процесс оседания агрегатов эритроцитов регистрировали на лазерном агрегометре. Максимальная амплитуда агрегатограммы составила 15% (рис. 2). Степень присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов составила 15%.

Пример 3. Суспензию эритроцитов инкубировали в присутствии 1 мМ кальция при 37°С в течение 24 ч. После этого эритроциты фиксировали глутаровым альдегидом. К 0.9 мл 0.5% суспензии фиксированных эритроцитов добавляли 0.1 мл хлористого лантана в финальной концентрации 20 мкМ, включали перемешивающее устройство, проводили перемешивание в кювете агрегометра в течение 30 с, после этого перемешивание останавливали. Процесс оседания агрегатов эритроцитов регистрировали на лазерном агрегометре. Максимальная амплитуда агрегатограммы составила 30% (рис. 3). Степень присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов составила 30%, что в 2 раза больше, чем у эритроцитов, инкубированных без кальция.

Регистрацию процесса оседания агрегатов эритроцитов осуществляли фотометрическим методом на лазерном агрегометре ЛА 230-2 НПФ «Биола».

Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить степень присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов человека и может найти применение для изучения эритроцитов при различных патологических состояниях и в опытах in vitro по изучению механизмов эриптоза.

Способ оценки степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки степени присутствия фосфатидилсерина эритроциты фиксируют глутаровым альдегидом в течение 30 минут, отмывают забуференным физиологическим раствором, помещают в кювету агрегометра, добавляют хлористый лантан в финальных концентрациях 15-25 мкМ, включают перемешивающее устройство, перемешивают в кювете агрегометра в течение 30 с, останавливают перемешивание, процесс оседания агрегатов эритроцитов регистрируют в виде агрегатограммы, о степени присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов судят по максимальной амплитуде агрегатограммы.

Группа изобретений относится к устройству для диагностики in vitro и применению этого устройства для идентификации и определения групп крови. Раскрыто устройство (10) для диагностики in vitro для детекции по меньшей мере одной реакции между антигеном эритроцитарного фенотипа и антителом, содержащее подложку (12) и гидрофобную пористую мембрану (14) толщиной от 0,05 до 1,5 мм с диаметром пор от 2 до 30 мкм, причем указанная мембрана содержит по меньшей мере одну гидрофильную область реакции (16), предназначенную для получения указанного образца, и поверхность гидрофильной области реакции (16) меньше поверхности гидрофобной пористой мембраны (14).

Способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов // 2665171

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Изобретение представляет собой способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки присутствия фосфатидилсерина эритроциты фиксируют глутаровым альдегидом в течение 30 минут, затем один раз отмывают забуференным физиологическим раствором с pH 7.4, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут, добавляют хлористый лантан до финальной концентрации 20 мкМ, перемешивают и по появлению агрегатов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Портативное устройство для экспресс-диагностики крови // 2655809

Изобретение относится к анализу биологических материалов и измерению характеристик крови в живом организме, в частности к определению группы крови и резус-фактора.

Способ прогноза родоразрешения беременных с рубцом на матке // 2624372

Изобретение относится к медицине и, в частности, к акушерству и позволяет определить прогноз родоразрешения беременных с рубцом на матке. Осуществляют прогноз родоразрешения беременных с рубцом на матке по формуле p=1/(1+2,718-582,96+1,216×1000×ИР-44,07×TCMP), где р - искомая величина; ИР - индекс резистентности; ТСМР - толщина стенки матки в области рубца.

Карты иммунодиагностического тестирования с указательными индикаторами // 2613195

Изобретение относится к области иммунодиагностики и может быть использовано для иммунодиагностического тестирования биологического образца. Карта иммунодиагностического тестирования включает плоскую подложку и множество содержащихся на ней прозрачных колонок с инертным тестовым материалом, выполненным с возможностью формирования реакции агглютинации при добавлении биологического образца и реагента.

Агглютинация частиц в наконечнике // 2498310

Группа изобретений относится к лабораторной диагностике и может быть использована для проведения анализов, основанных на реакции агглютинации частиц. Аналитический наконечник (100), предназначенный для выполнения визуально детектируемой реакции агглютинации после всасывания в него реактивов и образца, включает: первое отверстие (110) для приложения отрицательного или положительного давления к внутреннему объему аналитического наконечника; камеру для образца (120); по меньшей мере, одну боковую камеру (130), которая расположена по периметру камеры для образца; камеру детектирования (150), находящуюся в жидкостной связи с камерой для образца; переходную зону (140) между камерой детектирования и камерой для образца для вращательного перемешивания образца; второе отверстие (160) для всасывания реактивов и образца во внутренний объем аналитического наконечника или для удаления их оттуда.

Способ и устройство для определения минорных клеточных популяций в гетерогенных клеточных популяциях // 2456619

Изобретение относится к области медицины. .

Способ прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину клещевого энцефалита // 2295135

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использован для прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину клещевого энцефалита. .

Использование лигандов рецептора ер4 для лечения опосредованных il-6 заболеваний // 2285527

Способ получения антиидиотипической сыворотки для диагностики злокачественных опухолей // 2205410

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики злокачественных опухолевых заболеваний. .

Способ оценки эффективности лечения сахарного диабета 2 типа // 2701174

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и эндокринологии, и может быть применено в лечении пациентов с сахарным диабетом 2 типа. Способ оценки эффективности лечения сахарного диабета 2 типа, заключающийся в анализе выраженности блеббингообразования лимфоцитов периферической крови, отличается тем, что дополнительно исследуют блеббинг нейтрофилов, подсчет блеббинга лимфоцитов и нейтрофилов проводят в 5 полях зрения, определяют изменения уровня качества жизни по шкале общей оценки нейропатии (TSS) в виде суммы баллов, данные исследования проводят первый раз на 1-4 сутки и второй раз на 16-18 сутки лечения и при достижении при повторном исследовании 43-45% нейтрофилов и 50,5-63,3% лимфоцитов в состоянии блеббинга и снижении суммы баллов TSS до 9,6 и менее баллов судят об эффективности проводимого лечения.

Способ диагностики профпригодности лиц к работе на производстве фталатов // 2701163

Изобретение относится к медицине, в частности к гигиене труда, профпатологии, и раскрывает способ диагностики профпригодности работающих на производстве фталатов.

Способ определения коэффициента вязкости вещества малого объема и устройство для его осуществления // 2700714

Группа изобретений относится к определению коэффициента вязкости жидкости малого объема с помощью электрофореза. Способ включает подготовку исследуемой и эталонной жидкостей, погружение лакмусовой бумаги в вещество, размещение электродов.

Способ раздельного определения органических и неорганических гидропероксидов при помощи хемилюминесценции с использованием каталазы // 2700708

Изобретение относится к клиническим и лабораторным методам исследования и может быть использовано для количественного определения органических и неорганических гидропероксидов в модельных системах и биологических жидкостях.

Способ определения аспиринорезистентности // 2700000

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для экспресс-оценки аспиринорезистентности. Для этого на пробу цельной крови в объеме 25 мкл, помещенную в измерительную камеру до приема аспирина и через 4 часа после его приема, воздействуют ультразвуковыми колебаниями с частотой 150-160 кГц.

Способ прогнозирования выживаемости больных светлоклеточным почечно-клеточным раком // 2699792

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и позволяет прогнозировать выживаемость больных светлоклеточным почечно-клеточным раком (скПКР).

Способ определения мальпозиции транспедикулярных стержней у пациентов с остеопорозом позвонков // 2699662

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике. Способ определения мальпозиции транспедикулярных стержней у пациентов с остеопорозом позвонков путем исследования спинномозговой жидкости лабораторным методом заключается в том, что в спинномозговой жидкости определяют концентрацию церулоплазмина, причем исследование проводят на любом этапе послеоперационного наблюдения после наложения устройства внешней фиксации и при уровне концентрации церулоплазмина в ликворе менее 0,2 г/л делают заключение о наличии мальпозиции, а при концентрации церулоплазмина 0,2 г/л и выше - о ее отсутствии.

Способ определения мальпозиции транспедикулярных стержней в интраоперационном периоде // 2699660

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике. Способ определения мальпозиции транспедикулярных стержней в интраоперационном периоде путем исследования спинномозговой жидкости лабораторным методом заключается в том, что после проведения стержней в тело позвонка в спинномозговой жидкости определяют концентрацию гаптоглобина и при уровне концентрации гаптоглобина в ликворе 0,1 г/л и выше делают заключение, о наличии мальпозиции транспедикулярных стержней, а при концентрации менее 0,1 г/л - об отсутствии мальпозиции.

Способ прогнозирования развития ранней анемии недоношенных // 2699657

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, педиатрии и гематологии, и представляет собой способ прогнозирования развития ранней анемии недоношенных в первый месяц жизни у глубоконедоношенных детей, родившихся с массой тела менее 1500 г.

Способ количественного определения n-[3-(4-нитрофениламино)-индол-2-илметилен]аминогуанидина метансульфоната в плазме крови // 2699550

Изобретение относится к медицине, а именно фармакологии и токсикологии, и может быть использовано для определения N-[3-(4-нитрофениламино)-индол-2-илметилен]аминогуанидина метансульфоната в плазме крови.

Образец для оценки прочности клеевых соединений при сдвиге // 2701201

Изобретение относится к испытательной технике, а именно к образцам для контроля и исследования прочности клеевых соединений при сдвиге конструкционных материалов склеенных внахлест, в том числе в условиях высоких температур.