Способ лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения онкологических заболеваний. Для этого вводят водосодержащую суспензию липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом. Перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят три суспензии липосом различного диаметра с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством. Первую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм. Вторую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм. Третью суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм. После введения каждой суспензии липосом методом компьютерной томографии определяют степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом. Затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани. Лекарственный препарат вводят внутривенно инкапсулированным в липосомы с тем же диаметром, который обеспечивает их наибольшую степень накопления в опухоли. Изобретение повышает эффективность лечения онкологического заболевания. 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, и может быть использовано при лечении онкологических заболеваний у человека и животных с помощью инъекций противоопухолевого лекарственного препарата, предварительно инкапсулированного в липосомы.

Известен способ лечения онкологических заболеваний с помощью внутривенных инъекций раствора лекарственного противоопухолевого препарата - Доксорубицина пациенту с онкологическим заболеванием [Doxorubicin hydrochloride // European Pharmacopoeia. Sixth Edition: монография. 2005. С. 1389-1390.].

Данный способ содержит признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого технического решения, такие, как использование внутривенных инъекций раствора лекарственного препарата для лечения онкологических заболеваний.

Известен способ лечения онкологических заболеваний людей с помощью внутривенных инъекций суспензии липосом с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом (Цисплатином) [Boulikas Т., Clinical overview on Lipoplatin™: a successful liposomal formulation of cisplatin // Expert Opinion on Investigational Drugs. 2009. V. 18(8). P. 1197-1218. doi: l0.1517/13543780903114168].

Данный способ содержит признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого технического решения, такие, как лечение онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата путем внутривенного введения суспензии липосом с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом.

Наиболее близким к заявляемому является известный способ лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата путем введения водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом [Mikhaylov G., Mikac U., Magaeva A.A., Itin V.I., Naiden E.P., Psakhye I., Babes L., Reinheckel Т., Peters C, Zeiser R., Bogyo M, Turk V., Psakhye S.G., Turk В., Vasiljeva O.. Ferri-liposomes as an MRI-visible drug delivery system for targeting tumours and their microenviroment // Nat. Nanotechnol. 2011. V. 6(9). P. 594-602. см. стр. 600, Фиг. 4 (С)] - прототип.

В данном способе осуществляют лечение онкологического заболевания рака молочной железы in vivo на ортотопически трансплантированной мышиной модели вышеуказанной опухоли (опухолевые клетки линии MMTV-PyMT, полученные из трансгенных мышей) с помощью инъекций противоопухолевого лекарственного препарата JPM 565, являющегося ингибитором цистеиновой протеазы катепсина и замедляющего скорость роста опухоли, предварительно инкапсулированного в липосомы со средним диаметром 92,3 нанометров (нм), имеющие липидный состав, при котором содержание яичного фосфатидилхолина составляет 95% и содержание 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] равно 5%. В данном способе лечение проводят в течение 20 дней путем внутрибрюшинного введения лекарственного препарата в количестве 100 мг/кг тела животного каждые два дня при содержании препарата JPM 565 в водосодержащей суспензии липосом 12,5 мг/мл. При этом используют липосомы, которые кроме лекарственного препарата дополнительно содержат магнитные наночастицы магнетита, имеющие средний диаметр 5-7 нм, используемые для визуализации опухоли и фокусировки (концентрирования) препарата в опухоли с помощью наложения (воздействия) внешнего постоянного магнитного поля. В данном способе об эффективности лечения судят по замедлению скорости роста опухоли. Так, для опухоли, имеющей объем 125 мм3 на момент начала лечения, спустя 18 дней после начала лечения объем опухоли составил 400 мм3, в то время, как без использования противоопухолевого препарата (контрольная группа мышей) объем опухоли возрастал до 950 мм3. Таким образом, известный способ лечения за 18 дней замедлял скорость роста опухоли в 2,4 раза.

Недостатком известного способа является то, что он не позволяет обеспечить достаточно высокую эффективность лечения онкологического заболевания. Кроме того, данный способ неизбежно приводит к появлению побочного эффекта, обусловленного комбинацией относительной длительности противоопухолевого лечения и присутствием во всех липосомах кроме лекарственного препарата также наночастиц магнетита, медленно выводящихся из организма, накапливающихся в печени и требующих для их выведения из организма использования дополнительных препаратов.

Техническая проблема изобретения заключается в разработке способа лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, лишенного вышеуказанного недостатка.

Технический результат изобретения состоит в повышении эффективности лечения онкологических заболеваний.

Предварительно были проведены эксперименты с различными способами лечения онкологических заболеваний, которые показали, что указанный технический результат достигается в том случае, когда в способе лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, включающем введение водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом, перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят три суспензии липосом различного диаметра, с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством, первую

суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм, вторую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм, третью суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм, введение каждой последующей суспензии липосом с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством осуществляют через 1-4 ч после введения предыдущей суспензии липосом, после введения каждой суспензии липосом методом компьютерной томографии (КТ) определяют степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом, затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани, и лекарственный препарат вводят внутривенно, инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.

Предлагаемый способ является новым и не описан в патентной и научно-технической литературе.

Предлагаемый способ может быть использован для лечения различных онкологических заболеваний поверхностной или глубокой локализации, например, таких, как рак молочной железы, глиома, рак простаты и т.д. При этом при лечении могут быть использованы различные лекарственные препараты, например, такие как JPM 565, Цисплатин, Иринотекан и т.д. Следует отметить, что в предлагаемом способе используемые лекарственные препараты обязательно должны селективно (избирательно) действовать на подлежащий лечению тип опухоли и быть предварительно инкапсулированы в липосомы, причем для лечения онкологических заболеваний пациенту или больному животному внутривенно необходимо вводить водосодержащую суспензию таких липосом, поскольку механизм всасывания липосом из желудочно-кишечного тракта при пероральном их введении до конца не ясен. При этом липосмы могут быстро деградировать под действием желудочного сока, либо ферментов желчи, в результате чего лекарственный препарат, не обладающий селективностью (избирательностью) по отношению к клеткам опухоли, но обладающий высокой токсичностью (например, Доксорубицин), неизбежно будет воздействовать как на опухолевые клетки, так и на здоровые клетки организма. Внутримышечное введение используемых липосом также может быть нецелесообразным ввиду того, что при этом создается депо липосом в месте введения, а скорость элиминации из депо зависит от размера липосом и составляет от нескольких часов (при диаметре липосом менее 50 нм) до нескольких дней (при диаметре липосом более 50 нм), что замедляет процесс лечения, а в некоторых случаях даже при минимальном диаметре липосом 30-50 нм такие липосомы ввиду малого диаметра капилляров организма могут вообще не дойти из мышцы до пораженного опухолью органа.

В предлагаемом техническом решении, так же, как и в прототипе, используют водосодержащую суспензию липосом, которая в качестве дисперсионной среды может содержать воду или водные растворы различных добавок, например, таких как компоненты буфера, соли, например, NaCl, сахара и т.д. При этом концентрация липосом с инкапсулированным в них лекарственным препаратом в каждом курсе лечения может быть различна.

Следует отметить, что получение липосом с инкапсулированным в них лекарственным препаратом описано в литературе [см. прототип]. Кроме того, коммерчески доступен ряд противоопухолевых препаратов, которые уже инкапсулированны в липосомы [Upendra Bulbake, Sindhu Doppalapudi, Nagavendra Kommineni and Wahid Khan. Liposomal Formulations in Clinical Use: An Updated Review // Pharmaceutics. 2017. V. 9. Р. 1-33].

Липидный состав используемых липосом может быть различен и определяется качественным и количественным соотношением смеси липидов, используемых в процессе получения липосом, однако в пределах одного курса лечения липидный состав всегда должен быть одинаков, поскольку степень и скорость накопления липосом зависят от их липидного состава. В предлагаемом способе перед курсом лечения больного человека или животного им предварительно необходимо внутривенно ввести три суспензии липосом различного диаметра, которые могут быть получены путем пропускания суспенизии липосом через экструдер, снабженный мембраной с круглыми порами, диаметр которых выбран из группы, включающей 200, 100 и 50 нм. Экспериментально было показано, что полученные липосомы имеют сферическую форму и достаточно узкое распределение по размеру, причем их средний диаметр близок к диаметру пор в использованной мембране. Вводимые липосомы не должны содержать лекарственного препарата, но должны содержать внутри одинаковую мольную концентрацию рентгеноконтрастного средства.

При реализации способа исходная суспензия липосом может быть получена методом обращения фаз с последующей гомогенизацией суспензии методом экструзии. В качестве ЙРС можно использовать различные коммерчески доступные водорастворимые средства, содержащие неионогенный йод, например, такие препараты, как Йогексол, Йопромид, Йопамидол и т.д. При этом концентрация ЙРС внутри липосом может быть различной, однако перед началом конкретного курса лечения концентрация ЙРС в липосомах всегда должна быть одинакова. Используемый ЙРС малотоксичны и выводятся из организма в неизменном виде.

Загрузку ЙРС в липосомы проводят на стадии получения липосом. В круглодонной колбе диспергируют необходимую смесь липидов в смеси, содержащей 75 об. % хлороформа и 25 об. % метанола, затем к этому раствору добавляют предварительно сконцентрированный водный раствор йодсодержащего препарата. Смесь обрабатывают ультразвуком на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем колбу присоединяют к роторному испарителю для отгонки органических растворителей. К образовавшемуся гелю добавляют аликвоту водосодержащего натрий-фосфатного буфера и встряхивают до получения суспензии. Для получения гомогенизированных по размеру липосом полученную суспензию последовательно пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200, 100 и 50 нм. Способ получения липосом с различным диаметром и достаточно узким распределением по размеру известен [Ong S., Chitneni М., Lee K., Ming L., Yuen K. Evaluation of Extrusion Technique for Nanosizing Liposomes // Pharmaceutics. 2016. V. 8(4), P. 1-12. doi:10.3390/pharmaceutics8040036]. Мембраны с диаметром пор 50, 100 и 200 нм коммерчески доступны [https://avantilipids.com/divisions/equipment-products].

В предлагаемом способе перед началом лечения используют три типа липосом с различным диаметром, не содержащих инкапсулированного противоопухолевого препарата, но содержащих внутри одинаковую мольную концентрацию одного из ЙРС.

В предложенном способе после каждой инъекции суспензии липосом с ЙРС методом КТ с помощью специальной программы определяют наибольшую степень накопления липосом в зависимости от диаметра используемых липосом. Определять степень накопления липосом в опухолевой ткани можно начинать непосредственно после инъекции суспензии липосом, содержащей ЙРС. Осуществлять последующие инъекции суспензии липосом с другим диаметром можно через 1-4 ч после введения предыдущей суспензии. Указанный оптимальный интервал времени между инъекциями липосом был определен экспериментально.

Накопление липосом в опухолевой ткани обусловлено известным эффектом повышенной проницаемости кровеносных сосудов опухоли и удерживания наночастиц (EPR-эффектом) [Nichols J.W.; Bae Y.Н. EPR: Evidence and fallacy // Journal of Controlled Release. 2014. V. 190. P. 451-464]. После этого выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани и лекарственный препарат вводят инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.

Из научно-технической литературы известно, что накопление липосом зависит как от размеров самих липосом, так и от размера пор сосудов в опухолевой ткани и стадии онкологического заболевания. Поскольку накопление липосом варьируется от пациента к пациенту, заранее нельзя достоверно предсказать оптимальную методику лечения [Гуревич Д.Г., Меерович И.Г., Меерович Г.А., Воробьев С.И., Певгов В.Г., Смирнова З.С, Оборотова Н.А., Лукьянец Е.А., Барышников А.Ю. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли // Российский биотерапевтический журнал. 2007. Т. 2. С. 45-49]. При использовании описанного в прототипе способа в клинической практике могут наблюдаться случаи нерационального введения лекарственного препарата, инкапсулированного в липосомы, одновременно содержащие магнитные наночастицы. Учитывая относительную длительность курса лечения вышеописанными противоопухолевыми препаратами это неизбежно может приводить к накоплению в организме критических концентраций железа и лекарственного препарата, требующих дополнительных манипуляций по их выведению из организма, что осложняет известный способ лечения. В предложенном способе липосомы не содержат наночастиц железа и, следовательно, не требуют дополнительного введения препаратов для выведения железа из организма.

При реализации предлагаемого способа диаметр и степень полидисперсности используемых липосом контролируют методом динамического светорассеяния. Концентрация неиногенного йода в липосомах при необходимости может быть определена рентгенофлуоресцентным методом. Степень накопления липосом в опухоли определяют методом КТ по отношению модуля разности усредненного сигнала для ткани до и после введения суспензии липосом с ИРС к стандартному отклонению шума фона изображения.

Об эффективности лечения судят либо по уменьшению скорости роста опухоли в процессе лечения, либо по уменьшению объема опухоли в процессе лечения. При этом объем опухоли рассчитывают по формуле V=(a×b2)/2, где а и b - это самый большой и самый маленький диаметры опухоли. Начинать лечение целесообразно после выхода липосом с ЙРС из организма.

Преимущества предлагаемого способа иллюстрируют следующие примеры.

Пример 1.

В опыте используют подопытных животных - иммунокомпетентных FVB/N мышей с привитой опухолью молочной железы мыши (опухолевые клетки линии MMTV-PyMT, полученные из трансгенной мыши). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (мыши, которых не лечат) и опытную (мыши, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли.

В качестве ЙРС в примере используют препарат Йогексол. Липосомы с тем же липидным составом, что и в прототипе, получают методом обращения фаз путем диспергирования в круглодонной колбе 95 мг фосфатидилхолина и 5 мг 1,2-дистеароил-зп-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 7,5 мл хлороформа и 2,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 2 мл предварительно сконцентрированного водного раствора Йогексола, содержащего 500 мг йода/мл раствора. Полученную смесь в течение 5 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 15 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют использованные органические растворители. К полученному гелю добавляют 3 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4) и перемешивают до получения суспензии. Для получения трех суспензий липосом с различным диаметром весь объем исходной суспензии липосом, предварительно загруженных ЙРС, вначале пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Треть прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшиеся две трети прошедшей через мембрану суспензии повторно пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Половину прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшуюся половину суспензии снова пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 50 нм. Прошедшую через мембрану суспензию также используют для проведения эксперимента. Неинкапсулированный ЙРС отделяют от суспензии липосом путем диализа в течение 10 ч в диализном мешке с размером пор 100 килодальтон (кДа) против 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4). Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 210, 105 и 55 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1.

На 5-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 150 мкл суспензии липосом со средним диаметром 210 нм, содержащей ЙРС, после чего методом КТ определяют степень накопления липосом в опухоли. При этом максимальную степень накопления, равную 9%, наблюдают через 50 мин после введения суспензии липосом. Через 1 ч после введения вышеуказанной суспензии липосом внутривенно вводят другую суспензию липосом со средним диаметром 105 нм, содержащую Йогексол. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 13%, наблюдают через 30 мин после инъекции. Через 1 ч после введения второй суспензии липосом внутривенно вводят третью суспензию липосом со средним диаметром 55 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 25%, наблюдают через 30 мин после инъекции.

Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, имеющие средний диаметр 55 нм.

После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 50 нм, не содержащие ЙРС, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - ингибитор цистеиновой протеазы катепсина JPM-565. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора липидов в смеси хлороформ-метанол в соотношении 3:1 по объему до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют в водном растворе противоопухолевого препарата, содержащего 12,5 мг JPM-565 в 1 мл раствора, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 50 нм. Для очистки от незагрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns) с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).

Лечение подопытных животных так же, как и в прототипе, проводят после того, как объем опухоли достигнет 125 мм3 и начинают через 3 ч после последней инъекции суспензии липосом с ЙРС. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 100 мг/кг тела мыши (по количеству JPM-565). Контрольной группе мышей вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор 10 мМ натрий-фосфатного буфера. Внутривенные инъекции проводят каждые два дня, при этом общее количество инъекций в каждой группе мышей было равно 10. Объем опухоли у мышей измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.

Опыт показал, что в экспериментальной группе мышей объем опухоли на 18-й день лечения составлял 310 мм3, что в 4 раза меньше, чем у контрольной группы мышей, не получающих лекарство. При этом достигнутый в прототипе эффект замедления скорости роста опухоли в 2,4 раза в нашем случае наблюдают уже на 12-й день лечения.

Пример 2.

В опыте используют подопытных животных - мышей с привитой опухолью предстательной железы человека (клеточная линия 22Rv1). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (мыши, которых не лечат) и опытную (мыши, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли. В качестве ЙРС используют препарат Йопромид.

Липосомы получают методом обращения фаз путем диспергирования в круглодонной колбе 80 мг лецитина, 15 мг холестерина и 5 мг 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 7,5 мл хлороформа и 2,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 2 мл предварительно сконцентрированного водного раствора Йопромида, содержащие 450 мг йода/мл раствора. Полученную смесь в течение 5 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 20 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют использованные органические растворители. К полученному гелю добавляют 3 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4), перемешивают до получения суспензии. Для получения трех суспензий липосом с различным диаметром весь объем исходной суспензии липосом, предварительно загруженных ЙРС, вначале пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Треть прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшиеся две трети прошедшей через мембрану суспензии повторно пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Половину прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшуюся половину суспензии снова пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 50 нм. Прошедшую через мембрану суспензию также используют для проведения эксперимента. Неинкапсулированное ЙРС отделяют от суспензии липосом путем диализа в течение 10 ч в диализном мешке с размером пор 100 кДа против 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4). Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 198, 113 и 49 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1.

На 7-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 150 мкл суспензии липосом со средним диаметром 198 нм, после чего методом КТ определяют степень накопления липосом в опухоли. При этом максимальную степень накопления, равную 7%, наблюдают через 1 ч после введения (инъекции) суспензии липосом с ЙРС. Через 1,5 ч после введения вышеуказанной суспензии липосом внутривенно вводят другую суспензию липосом со средним диаметром 113 нм, содержащую ЙРС. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 17%, наблюдают через 1 ч после внутривенной инъекции суспензии. Через 1,5 ч после введения второй суспензии липосом внутривенно вводят третью суспензию липосом со средним диаметром 49 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 9%, наблюдают через 30 мин после инъекции суспензии.

Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, имеющие средний диаметр 113 нм.

После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 100 нм, не содержащие ЙРС, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - доксорубицин. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора липидов в смеси хлороформ-метанол, взятых в соотношении 3:1 по объему, до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют 120 мМ водным раствором (NH4)2SO4, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм. Далее полученную суспензию очищают от сульфата аммония во внешнем буфере с помощью обессоливающей колонки марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns), затем к ней добавляют водный раствор Доксорубицина с концентрацией 12 мг/мл и инкубируют в течение 2 ч. Для очистки от незагрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns) с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).

Лечения подопытных животных начинают через 4 ч после последней инъекции суспензии липосом с ЙРС. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 9 мг/кг тела животного (по концентрации Доксорубицина). Суспензию липосом внутривенно вводят на 7, 12 и 17 дни после имплантации опухоли. Контрольной группе мышей вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор натрий-фосфатного буфера. Объем опухоли у мышей измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.

Опыт показал, что в экспериментальной группе мышей объем опухоли на 17-й день лечения оказался в 4 раза меньше, чем у контрольной группы мышей. При этом в среднем опухоль у мышей, получающих противоопухолевый препарат, с момента лечения уменьшилась на 80%.

Пример 3.

В опыте используют подопытных животных - крыс с привитой опухолью глиомы головного мозга (клеточная линия С6). Подопытных животных с привитой опухолью делят на две группы по 6 особей в каждой - контрольную (крысы, которых не лечат) и опытную (крысы, которых лечат). Об эффективности лечения заболевания следят по замедлению скорости роста опухоли. В качестве ЙРС используют Йопамидол.

Липосомы получают методом обращения фаз путем диспергирования в кругло донной колбе 250 мг фосфатидилхолина, 125 мг дипальмитоилфосфатидилхолина и 25 мг 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси-(полиэтиленгликоля)-2000] в смеси, содержащей 37,5 мл хлороформа и 12,5 мл метанола, после чего в полученный раствор добавляют 10 мл предварительно сконцентрированного водного раствора препарата Йопамидол, содержащие 520 мг йода/мл раствора. Полученную смесь в течение 10 мин обрабатывают ультразвуком с частотой 14 кГц на ультразвуковой бане до образования устойчивого коллоидного раствора, затем на роторном испарителе отгоняют использованные органические растворители. К полученному гелю добавляют 15 мл водосодержащего 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4) и перемешивают до получения суспензии. Для получения трех суспензий липосом с различным диаметром весь объем исходной суспензии липосом, предварительно загруженных ЙРС, вначале пропускают через экструдер с мембраной с диаметром пор 200 нм. Треть прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшиеся две трети прошедшей через мембрану суспензии повторно пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 100 нм. Половину прошедшей через мембрану суспензии оставляют для проведения эксперимента, а оставшуюся половину суспензии снова пропускают через экструдер с мембраной с другим диаметром пор 50 нм. Прошедшую через мембрану суспензию также используют для проведения эксперимента. Неинкапсулированный ЙРС отделяют от суспензии липосом путем диализа в течение 10 ч в диализном мешке с размером пор 100 кДа против 10 мМ натрий-фосфатного буфера (рН=7,4). Методом динамического светорассеяния было показано, что в опыте были получены три различные дисперсии липосом, имеющие средние диаметры 187, 94 и 50 нм, с индексом полидисперсности, равном или меньшем 0,1.

На 7-й день после привития опухоли животным из опытной группы внутривенно вводят 1 мл суспензии липосом со средним диаметром 187 нм, содержащей ЙРС, после чего методом КТ определяют степень накопления липосом в опухоли. При этом максимальную степень накопления, равную 5%, наблюдают через 70 мин после введения суспензии липосом. Через 4 ч после введения вышеуказанной суспензии липосом внутривенно вводят другую суспензию липосом со средним диаметром 94 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 20%, наблюдают через 1 ч после инъекции суспензии. Через 4 ч после введения второй суспензии липосом внутривенно вводят третью суспензию липосом со средним диаметром 50 нм. Максимальное значение степени накопления суспензии липосом в опухоли, равное 21%, наблюдают через 50 мин после инъекции.

Сравнение полученных результатов показало, что наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани обладают липосомы, имеющие средний диаметр 50 нм.

После этого получают липосомы с вышеописанным липидным составом и оптимальным средним диаметром, близким к 50 нм, не содержащие ЙРС, но содержащие внутри противоопухолевый препарат - Йринотекан. Получение данных липосом осуществляют путем упаривания на роторном испарителе раствора вышеуказанных липидов с общей массой липидов 4,0 г в смеси хлороформ - метанол, взятых в соотношении 3:1 по объему, до образования на стенках колбы равномерной пленки. Полученную пленку суспендируют в водном раствором противоопухолевого препарата, содержащего 750 мг Йринотекана в 50 мл водного 5% раствора декстрозы с рН=6,2. При этом проводят три цикла, каждый из которых включает заморозку и разморозку смеси, до образования суспензии липосом, которую после этого пропускают через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм. Для очистки от незагрузившегося в липосомы противоопухолевого препарата полученную суспензию пропускают через обессоливающую колонку марки NAP-25 (GE Healthcare illustra™ NAP™ Columns) с подвижной фазой, представляющей собой 10 мМ натрий-фосфатный буфер (рН=7,4).

Лечения подопытных животных начинают через 4 ч после последней инъекции суспензии липосом с ЙРС. Лечение проводят путем внутривенного введения водосодержащей суспензии липосом, содержащих противоопухолевый препарат в дозе 50 мг/кг тела (по концентрации Йринотекана). Суспензию липосом вводят по схеме 2 раза в неделю в течение 4-х недель. Контрольной группе крыс вместо суспензии липосом с лекарственным препаратом внутривенно вводят вышеописанный раствор натрий-фосфатного буфера. Объем опухоли у крыс измеряют каждый день и об эффективности лечения судят по изменению скорости роста опухоли.

Объем опухоли у леченых крыс на 28-й день лечения оказался в 4 раза меньше, чем у контрольных нелеченных крыс.

Таким образом, из приведенных примеров видно, что предложенный способ по сравнению с прототипом на 18-й день лечения замедляет рост опухоли с 400 мм3 (в прототипе) до 310 мм3, действительно повышая тем самым эффективность лечения онкологического заболевания в 1,5 раза. При этом в предложенном способе стадия подготовки к лечению занимает несколько часов.

Способ лечения онкологических заболеваний с помощью инъекций лекарственного препарата, включающий введение водосодержащей суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом, отличающийся тем, что перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят три суспензии липосом различного диаметра с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством, первую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм, вторую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм, третью суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм, введение каждой последующей суспензии липосом с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством осуществляют через 1-4 ч после введения предыдущей суспензии липосом, после введения каждой суспензии липосом методом компьютерной томографии определяют степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом, затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани, и лекарственный препарат вводят внутривенно инкапсулированным в липосомы с тем же липидным составом и диаметром, обеспечивающим их наибольшую степень накопления в опухолевой ткани.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области лечения рака желудка. Способ лечения операбельной аденокарциномы желудка включает неоадъювантную химиотерапию с использованием абраксана, 5-фторурацила и оксалиплатина.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и предназначено для лечения неоперабельной аденокарциномы головки поджелудочной железы (АПЖ). Осуществляют внутриартериальное инфузионное введение 50 мг/м2 оксалиплатина в течение 20 минут через катетер, установленный в гастродуоденальную артерию.
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения операбельной аденокарциномы поджелудочной железы (АПЖ). Способ заключается во внутриартериальном инфузионном введении 50 мг/м2 оксалиплатина через катетер в гастродуоденальную артерию в течение 20 минут, затем болюсно суспензии 50 мг/м2 абраксана не более чем в 5 мл липиодола, после чего катетер переустанавливают в чревный ствол и внутриартериально инфузионно вводят 1000 мг/м2 гемцитабина в течение одного часа, затем выполняют хирургическое удаление опухоли, после которого не ранее чем через 2 недели в чревный ствол вводят инфузионно гемцитабин в количестве 1000 мг/м2 с последующей системной химиотерапией посредством перорального введения капецитабина ежедневно по 2500 мг/м2 в сутки в 2 приема утром и вечером не более 14 дней, не чаще 1 раза в месяц до появления нежелательных явлений II-III степени или прогрессирования опухолевого процесса по критериям RECIST.
Изобретение относится к соединению Формулы I или к его фармацевтически приемлемой соли. В формуле I W выбран из водорода и , где кольцо A выбрано из фенила или 6-членного моноциклического гетероарила с одним кольцевым гетероатомом, выбранным из N; каждый X и Y независимо выбран из CR1 и N; Z выбран из фенила, 5- или 6-членного моноциклического гетероарила с 1-2 кольцевыми гетероатомами, независимо выбранными из N, O и S, 6-членного моноциклического частично ненасыщенного гетероциклила с одним кольцевым гетероатомом, выбранным из N; где каждый из фенила, моноциклического гетероарила и моноциклического гетероциклила независимо замещен 0-2 группами RC; L выбран из связи, -(C(R2)(R2))m-, -(C2-C6 алкинилен)-, -O-, -S- и -S(O)2-; каждый RA и RB независимо выбран из галогена, C1-C6 алкила и C1-C6 гидроксиалкила; каждый RC независимо выбран из C1-C6 алкила, C1-C6 алкокси, галогена, C1-C6 гидроксиалкила, С3-С7 циклоалкила, 4-членного гетероциклила с одним кольцевым гетероатомом, выбранным из О, (6-членного гетероциклила с 2 кольцевыми гетероатомами, выбранными из N, O)-C1-C6 алкила, циано, -C(O)OR2 и -C(O)-N(R2)(R2); каждый RD и RF независимо выбран из водорода и -N(R2)(R2); каждый R1 представляет собой водород; каждый R2 независимо выбран из водорода, гидроксила, -NR”R”, C1-C6 алкила, C1-C6 алкокси, C1-C6 галогеналкила, C1-C6 гидроксиалкила, С3-С7 циклоалкила, или 2 R2 вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют 4-членное гетероциклильное кольцо с 1 кольцевым атомом, выбранным из О; каждый R” представляет собой водород или C1-C6 алкил; и m, p и q - каждый независимо представляет собой 0, 1, 2, 3 или 4.
Изобретение относится к области иммунологии. Предложены варианты применения выделенного антитела или его антигенсвязывающего участка, специфичного к B7-H1, в лечении рака.
Изобретение относится к соединению формулы (I), его фармацевтически приемлемым солям или таутомерам, которые могут найти применение при лечении заболевания, связанного со стрессом, вызванным мисфолдингом белков, и в частности с накоплением неправильно свернутых белков.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и касается лечения рака. Для этого вводят эффективное количество антагониста белка запрограммированной смерти 1 (PD-1), представляющего собой моноклональное антитело, тяжелая и легкая цепи которого включают SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22 соответственно, и ингибитора циклинзависимых киназ (CDK) – динациклиба.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан полипептид для нацеливания на выделяющийся фосфатидилсерин (PtdS) клеточной мембраны, который включает: (а) домен гамма-карбоксиглутаминовой кислоты белка S, представленный в SEQ ID NO: 1, или последовательности, по меньшей мере на 95% гомологичной ей, который не содержит домен протеазы или гормон-связывающий домен; и (б) белок S EGF домена.

Изобретение относится к органической химии и фармацевтике, а именно к моногидрату метил[1-({6-[(2S)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, моногидрату метил[1-({6-[(2R)-бутан-2-иламино]-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил}карбонил)пиперидин-4-ил]карбаматтозилата, моногидрату метил(1-{[6-{[(1S)-1-циклопропилэтил]амино}-2-(пиразоло[5,1-b][1,3]тиазол-7-ил)пиримидин-4-ил]карбонил}пиперидин-4-ил)карбаматтозилата и их кристаллам.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающему(й) свойствами ингибитора и обладающему(й) цитостатическим эффектом.
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, молекулярной биологии и медицины. Описан фермент нуклеаза PaCas9 и применение данного фермента нуклеазы.

Изобретение относится к технологии доставки лекарственного средства. Описан кавитационный зародыш, чтобы вызвать кавитацию для создания полости около эпидермиса живого организма, содержащий: оболочку, которая образует его наружную поверхность для поддержания его внешней формы в жидкости; и ядро, которое находится внутри оболочки и которое определяет плавучесть кавитационного зародыша в жидкости, причем кавитационный зародыш вызывает кавитацию под воздействием ультразвуковых волн, излучаемых в жидкость, причем ядро содержит газ на основе перфторуглерода, причем жидкость представляет собой водный раствор, содержащий лекарственное вещество, а оболочка образована объединением (i) по меньшей мере одного нейтрального фосфолипида, выбранного из первой группы, включающей DLPC (1,2-дилауроил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DMPC (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DPPC (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DSPC (1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DOPC (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DMPE (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), DPPE (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), DOPE (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), и (ii) по меньшей мере одного отрицательного полярного фосфолипида, выбранного из второй группы, включающей DMPA-Na (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфат), DPPA-Na (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфат), DOPA-Na (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфат), DMPG-Na (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DPPG-Na (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DOPG-Na (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DMPS-Na (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфосерин), DPPS-Na (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфосерин), DOPS-Na (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфосерин), DOPE-глутарил-(Na)2 (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), тетрамиристоилкардиолипин-(Na)2, DSPE-mPEG-2000-Na (1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), DSPE-mPEG-5000-Na, DSPE-малеинимид PEG-2000-Na и DOTAP-Cl (1,2-диолеоил-3-триметиламмония пропан).

Изобретение относится к области биохимии, в частности к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (dsRNA) для ингибирования экспрессии TMPRSS6, а также к композиции ее содержащей.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения магнитных липосом. Способ получения магнитных липосом включает получение суспензии, включающей фосфатидилхолин и магнитные наночастицы, ее обработку ультразвуком и последующую повторяющуюся процедуру ее замораживания-оттаивания, в качестве магнитных наночастиц используют наночастицы магнетита в форме водного золя, где повторяющаяся процедура замораживания-оттаивания включает замораживание указанной суспензии при температуре жидкого азота, последующее ее плавное оттаивание при комнатной температуре и дополнительно включает ее последующую обработку ультразвуком мощностью 70 Вт и частотой 40 кГц при температуре 20-30°С в течение 5-15 мин, при этом указанную процедуру повторяют не менее трех раз.

Изобретение относится к процессам ранозаживления и регенерации тканей, а именно к ранозаживляющему гелю. Ранозаживляющий гель с липосомами включает метронидазол (метрогил), лидокаин, желатин, гиалуроновую кислоту, карбомер 940 и липосомы.
Изобретение относится к медицине, а именно к ее разделу эндокринология, и к фармации, а именно к созданию субстанций для лекарственных препаратов содержащих тиреоидные гормоны.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ получения микровезикул, содержащих трансгенный продукт и/или лентивирусную РНК, содержащую трансген.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к получению липосомальной формы соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с никотиновой кислотой. Для этого растворяют смесь лецитина и холестерина в соотношении 9:1 в хлороформе с последующим упариванием полученного раствора при температуре 37-40°С и получают фосфолипидную пленку, которую в дальнейшем гидратируют при температуре 37-40°С в фосфатном буфере, содержащем никотинат 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина.

Изобретение относится к области химии, биотехнологии, медицины и химико-фармацевтической промышленности, а именно к полиэтиленгликоль-содержащему липиду, имеющему строение формулы 1, где если m=1, то n=18 или n=32-52, а если m=2, то n=20-46.

Изобретение относится к медицине, в частности к рН-чувствительному носителю для доставки лекарственного средства, способу получения рН-чувствительного носителя, рН-чувствительному лекарственному средству и композиции, и способу обработки клеток заявленным лекарственным средством и/или композицией.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу лечения осаднений, кожных и кожно-мышечных ран у лошадей, крупного и мелкого рогатого скота, включающему обработку раны композиционным составом, содержащим мас.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения онкологических заболеваний. Для этого вводят водосодержащую суспензию липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом. Перед введением суспензии липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом вводят три суспензии липосом различного диаметра с йодсодержащим рентгеноконтрастным средством. Первую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 200 нм. Вторую суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 100 нм. Третью суспензию получают путем пропускания через экструдер, снабженный мембраной с диаметром пор 50 нм. После введения каждой суспензии липосом методом компьютерной томографии определяют степень накопления липосом в опухолевой ткани в зависимости от диаметра липосом. Затем выбирают диаметр липосом с наибольшей степенью накопления в опухолевой ткани. Лекарственный препарат вводят внутривенно инкапсулированным в липосомы с тем же диаметром, который обеспечивает их наибольшую степень накопления в опухоли. Изобретение повышает эффективность лечения онкологического заболевания. 3 пр.

Наверх