Производные тиено[2,3-c]пиранов в качестве cftr модуляторов

Изобретение относится к соединениям, выбранным из: N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамида и 2-(2-гидроксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, предназначенных для лечения кистозного фиброза или хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ). 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 21 табл.

 

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По данной заявке испрашивается приоритет на основании заявки на европейский патент № EP13179671.6, поданной 8 августа 2013; и на основании заявки на патент Великобритании № GB1317935.3, поданной 10 октября 2013. Содержание каждой из этих заявок включено в настоящее описание в качестве ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Данное изобретение относится к соединениям, которые являются модуляторами муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости (МТРП), и их применению для лечения кистозного фиброза. В данном изобретении также представлены способы получения соединения в соответствии с данным изобретением, фармацевтической композиции, содержащей соединение в соответствии с данным изобретением, и способы лечения кистозного фиброза введением соединения в соответствии с данным изобретением.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Переносчики ABC представляют собой семейство гомологичных мембранных белков-переносчиков, регулирующих транспортировку множества фармакологических агентов (например, лекарственных средств, ксенобиотиков, анионов и т.д.), которые связываются и используют клеточный аденозинтрифосфат (АТФ) для их конкретного действия. Было обнаружено, что некоторые из этих переносчиков защищают злокачественные раковые клетки от химиотерапевтических агентов, действуя как белки множественной лекарственной резистентности (такие как MDR1-P гликопротеин или белок множественной лекарственной резистентности, БМЛР 1). На данный момент идентифицировано 48 переносчиков ABC, сгруппированных в 7 семейств на основе их идентичности последовательности и функции.

Переносчики ABC обеспечивают защиту против вредных соединений окружающей среды через регулирование множества важных физиологических ролей в теле, и поэтому представляют собой важные потенциальные цели для лекарственных средств для лечения заболеваний, связанных с дефектами переносчика, транспортировки лекарственных средств во внешние клетки и другими заболеваниями, в которых модулирование активности переносчика ABC может быть благоприятным.

цАМФ/АТФ-медиированный анионный канал, МТРП, является одним из членов семейства переносчиков ABC, обычно связанных с заболеваниями, который экспрессируется во множестве типов клеток, включая абсорбирующие и секреторные клетки эпителия, где они регулируют анионный поток через мембрану, а также активность других ионных каналов и белков. Активность МТРП в эпителиальных клетках является существенной для поддержания переноса электролита через тело, включая ткани дыхательной и пищеварительной систем. (Quinton, 1990).

Ген, кодирующий МТРП, был идентифицирован и секвенирован (Kerem et al., 1989). МТРП содержит около 1480 аминокислот, которые кодируют белок, состоящий из тандемного повтора трансмембранных доменов, каждый из которых содержит шесть трансмембранных спиралей и домен, связывающий нуклеотид. Пара трансмембранных доменов связана большим, полярным, регулирующим (R)-доменом с множеством сайтов фосфорилирования, которые регулируют активность канала и направленную миграцию клеток.

Кистозный фиброз вызывается дефектом в этом гене, который вызывает мутации в МТРП. Кистозный фиброз является самым распространенным летальным генетическим заболеванием у человека и поражает ~0,04% людей со светлым цветом кожи (Bobadilla et al., 2002), например, в Соединенных Штатах Америки, поражен один из каждых 2500 детей, и вплоть до 10 миллионов людей имеют единственную копию дефективного гена без очевидных болезненных эффектов; более того пациенты, имеющие единственную копию гена, обладают повышенной резистентностью к холере и к обезвоживанию вследствие диареи. Этот эффект может объяснить относительно высокую частоту КФ гена среди населения.

Наоборот, люди с двумя копиями КФ-ассоциированного гена страдают от ослабляющего и летального действия КФ, включая хронические легочные инфекции.

У пациентов с кистозным фиброзом мутации в эндогенном дыхательном эпителиальном МТРП не могут сделать клетки эпителия в легких и других тканях проницаемыми для хлорида и бикарбоната, что приводит к пониженной секреции апикального аниона и прерыванию переноса иона и жидкости. Такое снижение переноса аниона вызывает повышенную аккумуляцию слизи и патогенного агента в легких, что вызывает микробные инфекции, которые в конечном итоге вызывают смерть пациентов с КФ.

Кроме заболеваний дыхательных путей, пациенты с КФ также страдают проблемами желудочно-кишечного тракта и недостаточностью поджелудочной железы, которые приводят к смерти, если их не лечить. Кроме того, женщины с кистозным фиброзом страдают пониженной фертильностью, а мужчины являются бесплодными.

Множество заболеваний, вызывающих мутации, было идентифицировано при анализе последовательности МТРП гена хромосом КФ (Kerem et al., 1989). ΔF508-МТРП, наиболее частая мутация КФ (присутствующая в, по крайней мере, 1 аллели у ~90% пациентов с КФ) и существующая в приблизительно 70% случаев кистозного фиброза, содержит одну делецию аминокислоты фенилаланина 508. Эта делеция не дает образующемуся белку правильно свертываться, при этом белок, в свою очередь, не может выйти из эндоплазматического ретикулюма (ЭР) и перенестись в клеточную мембрану и, следовательно, быстро разлагается. В результате, количество каналов, присутствующих в мембране, намного меньше, чем в клетках, экпрессирующих дикий МТРП. Кроме ухудшенной направленной миграции, мутация вызывает дефективное открытие каналов. Более того, даже если ΔF508-МТРП достигает клеточной мембраны с помощью низкотемпературном (27°C) сохранении, при котором он может действовать как цАМФ-активированный хлоридный канал, его активность значительно снижается по сравнению с диким МТРП (Pasyk and Foskett, 1995).

Также были идентифицированы другие мутации, встречающиеся реже, которые изменяют регулирование канала или проводимость канала. При мутации регулирования канала, мутированный белок должным образом переносится и локализуется в клеточной мембране, но либо не может быть активирован, либо не может функционировать как хлоридный канал (например, миссенс-мутации, расположенные в нуклеотидных связывающих доменах), примеры таких мутация включают G551D, G178R, G1349D. Мутации, влияющие на проводимость хлорида, содержат белок МТРП, который правильно переносится в клеточную мембрану, но который создает пониженный хлоридный поток (например, миссенс-мутации, расположенные в трансмембранном домене), примеры таких мутация включают R117H, R334W.

Кроме кистозного фиброза, модулирование активности МТРП может быть благоприятным для других заболеваний, не вызываемых непосредственно мутациями в МТРП, таких как, например, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), сухость глаз и синдром Съоргена.

ХОЗЛ характеризуется прогрессирующим и необратимым ограничением потока воздуха из-за гиперсекреции слизи, бронхиолита и эмфиземы. Потенциальное лечение гиперсекреции слизи и ухудшенного мукоцилиарного клиренса, который являются обычными при ХОЗЛ, может включать применение активаторов мутированного или дикого МТРП. В частности, повышение секреции аниона через МТРП может способствовать переносу жидкости на поверхность дыхательных путей для увлажнения слизистой и оптимизации вязкости околоресничной жидкости. Полученный улучшенный мукоцилиарный клиренс помогает снизить симптомы, связанные с ХОЗЛ.

Сухость глаз характеризуется снижением слезообразования и аномальными профилями жира в слезной пленке, белка и муцина. Многие факторы могут вызывать сухость глаз, некоторые из них включают возраст, артрит, хирургию глаза по методу Lasik, химические/тепловые ожоги, лекарственные средства, аллергии и заболевания, такие как кистозный фиброз и синдром Съоргена. Повышенная секреция аниона через МТРП может улучшить перенос жидкости из клеток эндотелия роговицы и секреторных желез, окружающих глаз, и, в конечном счете, улучшить увлажнение роговицы, тем самым помогая облегчить симптомы, связанные с сухостью глаз. Синдром Съоргена представляет собой аутоиммунное заболевание, при котором иммунная система повреждает вырабатывающие влагу железы в теле, включая глаза, рот, кожу, легочную ткань, печень, влагалище и кишечник. Полученные в результате симптомы включают сухость глаз, рта и влагалища, а также заболевание легких. Синдром Съоргена также связан с ревматоидным артритом, системной красной волчанкой, системным склерозом и полимиозитом/дерматомиозитом. Полагают, что причина заболевания лежит в нарушении переноса белка, для которого лечебные опции ограничены. Следовательно, модулирование активности МТРП может способствовать увлажнению различных органов и помочь усилить связанные с ними симптомы.

Кроме КФ, нарушенный перенос белка, вызванный ΔF508-МТРП, лежит в основе широкого спектра других заболеваний, в частности, заболеваний, в которых нарушенное функционирование эндоплазматического ретикулюма (ЭР) может не давать МТРП белку покинуть клетку и/или приводит к разложению неправильно свернутого белка (Morello et al., 2000; Shastyr, 2003; Zhamg et al., 2012).

Множество генетических заболеваний связано с работой дефектного ЭР, эквивалентной дефекту, наблюдаемому для МТРП в КФ, таких как гликаноз CDG 1 типа, наследственная эмфизема (α-l-антитрипсин (вариант PiZ)), врожденный гипертиреоз, несовершенный остеогенез (проколлаген I, II или IV типа), наследственная гипофибриногенемия (фибриноген), дефицит ACT (α-l-антихимотрипсина), несахарный диабет (НСД), нейрофизический НСД (N2-receptor рецептор гормона вазопрессина), непрогенный НСД (аквапорин II), синдром Шарко-Мари-Тута (периферийный миелиновый белок 22), болезнь Перлизауса-Мерцбахера, нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера (APP и пресенилины), болезнь Паркинсона, амиотрофический боковой склероз, прогрессирующий надъядерный паралич, болезнь Пика, некоторые полиглутаминовые неврологические расстройства, такие как болезнь Хантингтона, спинально-церебеллярная атаксия I типа, спинальная и бульбарная мышечная атрофия, дентато-рубро-паллидо-льюисова атрофия и тиотоническая дистрофия, а также губковидные энцефалопатии, такие как наследственная болезнь Крейцфельдта-Якоба (дефект обработки белка приона), болезни Фабри (лизосомальная α-галактозидаза A), синдром Штреусслера-Шейнкера, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), сухой глаз и синдром Съоргена.

В дополнение к активации активности МТРП, снижение секреции аниона модуляторами МТРП может быть благоприятным для лечения секреторных диарей, при которых эпителиальный перенос воды значительно увеличивается в результате активированного секретагогом переноса хлорида. Механизм включает повышение уАМФ и стимулирование МТРП.

Независимо от причины, избыточный перенос хлорида наблюдается во всех случаях диареи, что приводит к обезвоживанию, ацидозу, ухудшенному росту и смерти. Острые и хронические диареи остаются основной медицинской проблемой по всему миру, и являются значительным фактором в нарушениях питания, приводящих к смерти у детей младше пяти лет (5000000 смертей/год). Более того, у пациентов с хроническим воспалительным заболеванием кишечника (ВЗК) и/или синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД) диарея является опасным состоянием.

Следовательно, существует необходимость в новых соединениях, способных модулировать МТРП. В частности, в данном изобретении описаны соединения, которые могут действовать как модуляторы МТРП для лечения кистозного фиброза. В данном изобретении также представлены способы получения этих соединений, фармацевтические композиции, содержащие эти соединения и способы лечения кистозного фиброза введением соединений в соответствии с данным изобретением.

Краткое описание фигур

На фигуре 1 показано повышение тока, измеренное в анализе TECC для сравнительного соединения и соединения в соответствии с данным изобретением в различных концентрациях тестируемого соединения (50, 100 и 200 нМ).

Сущность изобретения

Данное изобретение основано на предоставлении новых соединений, обладающих способностью действовать в качестве модуляторов МТРП, и на том, что они могут применяться для лечения кистозного фиброза. В данном изобретении также представлены способы получения этих соединений и способы лечения кистозного фиброза введением соединений в соответствии с данным изобретением.

Следовательно, в первом аспекте данного изобретения, представлены соединения в соответствии с данным изобретением, имеющие формулу (I):

где

R¹ является

C_3-7 моно или спироциклическим циклоалкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

4-7-членным моно или спироциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами,

5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S и необязательно замещенных одной или более независимо выбранными R³ группами, или

C_1-6 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами,

каждый R² выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-OC(=O)C_1-4 алкила,

-C(=O)-C_1-4 алкокси,

оксо,

C_1-4 алкила, (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a), и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a),

каждый R³ выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_2-4 алкенила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_3-7 моноциклического циклоалкила,

4-7-членного моноциклического гетероциклоалкила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S,

4-7-членного моноциклического гетероциклоалкенила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S,

5-10-членного моноциклического или конденсированного бициклического гетероарила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, и

-NHSO₂-C_1-4 алкила;

каждый R⁴ выбирают из

гало,

-OH,

C_3-7 моноциклического циклоалкила,

-CN, и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5c),

каждый R^5a, R^5b и R^5c независимо выбирают из

гало,

-OH,

-OP(=O)₂OH,

-CN,

-NR^6aR^6b, и

C_1-4 алкокси; и

каждый R^6a или R^6b независимо выбирают из H и C_1-4 алкила.

В другом аспекте данного изобретения, представлены соединения в соответствии с данным изобретением, имеющие формулу (I):

где

R¹ является

C_3-7 циклоалкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

C_6-10 моно или бициклическим арилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами,

5-10-членным моно или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S и необязательно замещенных одной или более независимо выбранными R³ группами, или

C_1-6 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами,

каждый R² выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-OC(=O)C_1-4 алкила,

-C(=O)-C_1-4 алкокси,

оксо,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a), и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a),

каждый R³ выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_3-7 циклоалкила,

5-10-членного моно или конденсированного бициклического гетероарила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, и

-NHSO₂-C_1-4 алкила;

каждый R⁴ выбирают из

гало,

-OH,

-CN, и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5c),

каждый R^5a, R^5b и R^5c независимо выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-NR^6aR^6b, и

C_1-4 алкокси; и

каждый R^6a или R^6b независимо выбирают из H и C_1-4 алкила.

В конкретном аспекте, представлены соединения в соответствии с данным изобретением для применения для лечения кистозного фиброза. В конкретном аспекте, представлены соединения в соответствии с данным изобретением для применения для лечения кистозного фиброза, вызванного мутациями I, II, III, IV и/или VI классов.

В альтернативном варианте, соединения в соответствии с данным изобретением обладают потенцирующим действием.

В другом конкретном аспекте, соединения в соответствии с данным изобретением обладают низким действием на CYP ферменты, что может дать низкий потенциал взаимодействия лекарственного средства с лекарственным средством и, следовательно, быть благоприятным для пациентов, проходящих множественные терапии.

В еще одном аспекте, в данном изобретении представлены фармацевтические композиции, содержащие соединение в соответствии с данным изобретением и фармацевтический носитель, наполнитель или разбавитель. В конкретном аспекте, фармацевтическая композиция может дополнительно содержать другие терапевтически активные ингредиенты, подходящие для применения в сочетании с соединениями в соответствии с данным изобретением. В более конкретном аспекте, другим терапевтически активным ингредиентом является агент для лечения кистозного фиброза.

Более того, соединения в соответствии с данным изобретением, применяемые в фармацевтических композициях и способах лечения, описанных здесь, являются фармацевтически приемлемыми в том виде, в котором они приготовлены и применяются.

В другом аспекте изобретения, в данном изобретении представлен способ лечения млекопитающего, в частности, человека, имеющего состояние, выбранное из перечисленных здесь состояний, и в частности, кистозного фиброза, где способ включает введение эффективного количества фармацевтической композиции или соединений в соответствии с данным изобретением, описанных здесь.

В данном изобретении также представлены фармацевтические композиции, содержащие соединение в соответствии с данным изобретением и подходящий фармацевтический носитель, наполнитель или разбавитель, для применения в медицине. В конкретном аспекте, фармацевтическая композиция предназначена для применения в лечении кистозного фиброза.

В дополнительных аспектах, в данном изобретении представлены способы синтеза соединений в соответствии с данным изобретением, с типовыми протоколами и путями синтеза, описанными ниже.

Другие объекты и преимущества станут очевидными специалисту в данной области техники из рассмотрения последующего подробного описания.

Должно быть понятно, что соединения в соответствии с данным изобретением могут быть метаболизированы с получением биологически активных метаболитов.

Подробное описание изобретения

Определения

Следующие термины имеют значения, представленные ниже, и применяются для понимания описания и предлагаемой формулы изобретения.

При описании изобретения, которое может включать соединения, фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, и способы применения таких соединений и композиций, следующие термины, если присутствуют, имеют следующие значения, если не указано иначе. Должно быть понятно, что описанные здесь любые группы, определенные ниже, могут быть замещены множеством заместителей, и что соответствующие определения включают такие замещенные группы, как описано ниже. Если не указано иначе, термин “замещенный” определен ниже. Также должно быть понятно, что термины “группа” и “радикалы” могут считаться взаимозаменяемыми в данном описании.

Единственное число может применяться здесь для описания одного или более одного (т.е., по крайней мере, одного) грамматического объекта в статье. Например “аналог” означает один аналог и более одного аналога.

‘Алкил’ означает прямой или разветвленный алифатический углеводород с указанным количеством атомов углерода. Конкретные алкильные группы имеют от 1 до 8 атомов углерода. Более конкретно, относится к низшему алкилу, имеющему от 1 до 6 атомов углерода. Другая конкретная группа имеет от 1 до 4 атомов углерода. Типовые прямые группы включают метил, этил н-пропил и н-бутил. Разветвление означает, что одна или более низших алкильных групп, таких как метил, этил, пропил или бутил, присоединены в линейной алкильной цепи, типовые разветвленные группы включают изопропил, изо-бутил, трет-бутил и изоамил.

‘Алкокси’ относится к группе -OR²⁶, где R²⁶ является алкилом с указанным числом атомов углерода. Конкретные алкокси группы включают метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, трет-бутокси, втор-бутокси, н-пентокси, н-гексокси и 1,2-диметилбутокси. Конкретные алкоксигруппы включают низший алкокси, т.е. имеющий от 1 до 6 атомов углерода. Другие конкретные алкоксигруппы имеют от 1 до 4 атомов углерода.

‘Алкилен’ относится к двухвалентной алкеновой радикальной группе, имеющей указанное количество атомов углерода, в частности, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, и более конкретно, от 1 до 4 атомов углерода, которая может быть прямой или разветвленной. Этот термин представлен такими группами, как метилен (-CH₂-), этилен (-CH₂-CH₂-) или -CH(CH₃)- и подобными.

‘Алкенил’ относится к одновалентной олефиново (ненасыщенной) углеводородной группе с указанным количеством атомов углерода. Конкретный алкенил имеет от 2 до 8 атомов углерода, и более конкретно, от 2 до 6 атомов углерода, может быть прямым или разветвленным и имеет, по крайней мере, 1 и, в частности, от 1 до 2 мест олефиновой ненасыщенности. Конкретные алкенильные группы включают этенил (-CH=CH₂), н-пропенил (-CH₂CH=CH₂), изопропенил (-C(CH₃)=CH₂) и подобные.

‘Amino’ относится к радикалу -NH₂.

‘Арил’ относится к одновалентной ароматической углеводородной группе, полученной удалением одного атома водорода с одного атома углерода исходной ароматической системы колец. В частности, арил относится к ароматической системе колец, моноциклической или полициклической, с указанным количеством атомов в кольце. Более конкретно, термин включает группы, которые содержат от 6 до 10 членов в кольце. Если арильная группа является моноциклической системой колец, она, предпочтительно, содержит 6 атомов углерода. В частности, арильные группы включают фенил, нафтил, инденил и тетрагидронафтил.

‘Циклоалкил’ относится к не ароматической гидрокарбильной системе колец, моноциклической или полициклической, с указанным количеством атомов в кольце. Циклоалкил может иметь от 3 до 10 атомов углерода и, в частности, от 3 до 7 атомов углерода. Такие циклоалкильные группы включают, например, одинарные кольцевые структуры, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

‘Циано’ относится к радикалу -CN.

‘Гало’ или ‘галоген’ относится к фтору (F), хлору (Cl), брому (Br) и йоду (I). Конкретные гало группы включают фтор или хлор.

‘Гетеро’, при применении для описания соединения или группы, присутствующей в соединении, означает, что один или более атомов углерода в соединении или группе замещены гетероатомом азота, кислорода или серы. Гетеро может применяться к любой гидрокарбильной группе, описанной выше, такой как алкил, например, гетероалкил, циклоалкил, например, гетероциклоалкил, арил, например, гетероарил и подобные, имеющей от 1 до 4, и в частности, от 1 до 3 гетероатомов, более конкретно, 1 или 2 гетероатома, например, один гетероатом.

‘Гетероарил’ означает ароматическую кольцевую структуру, моноциклическую или полициклическую, которая включает один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, и указанное количество атомов в кольце. В частности, ароматическая кольцевая структура может иметь от 5 до 10 членов в кольце. Гетероарильная группа может быть, например, пятичленное или шестичленное моноциклическое кольцо или бициклическая структура, образованная из конденсированных пяти- и шестичленных колец или двух конденсированных шестичленных колец, или, например, двух конденсированных пятичленных колец. Каждое кольцо может содержать вплоть до четырех гетероатомов, обычно выбранных из азота, серы и кислорода. Обычно гетероарильное кольцо содержит вплоть до 4 гетероатомов, более конкретно, вплоть до 3 гетероатомов, более часто, вплоть до 2, например, один гетероатом. В одном варианте, гетероарильное кольцо содержит, по крайней мере, один атом азота в кольце. Атомы азота в гетероарильных кольцах могут быть основными, как в случае имидазола или пиридина, или практически не основными, как в случае атома азота индола или пиррола. В общем, количество основных атомов азота, присутствующих в гетероарильной группе, включая любые заместители аминогрупп в кольце, составляет менее пяти. Примеры пятичленных моноциклических гетероарильных групп включают, но не ограничены ими, пиррольную, фурановую, тиофеновую, имидазольную, фуразановую, оксазольную, оксадиазольную, оксатриазольную, изоксазольную, тиазольную, изотиазольную, пиразольную, триазольную и тетразольную группы. Примеры шестичленных моноциклических гетероарильных групп включают, но не ограничены ими, пиридин, пиразин, пиридазин, пиримидин и триазин. Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих пятичленные кольца, конденсированные с другими пятичленными кольцами, включают, но не ограничены ими, имидазотиазол и имидазоимидазол. Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих шестичленное кольцо, конденсированное с пятичленным кольцом, включают, но не ограничены ими, бензфурановую, бензтиофеновую, бензимидазольную, бензоксазольную, изобензоксазольную, бензизоксазольную, бензтиазольную, бензизотиазольную, изобензофурановую, индольную, изоиндольную, изоиндолоновую, индолизиновую, индолиновую, изоиндолиновую, пуриновую (например, адениновую, гуаниновую), индазольную, пиразолопиримидиновую, триазолопиримидиновую, бензодиоксольную и пиразолопиридиновую группы. Конкретные примеры бициклических гетероарильных групп, содержащих два конденсированных шестичленных кольца, включают, но не ограничены ими, хинолиновую, изохинолиновую, хромановую, тиохромановую, хроменовую, изохроменовую, хромановую, изохромановую, бензодиоксановую, хинолизиновую, бензоксазиновую, бензодиазиновую, пиридопиридиновую, хиноксалиновую, хиназолиновую, циннолиновую, фталазиновую, нафтиридиновую и птеридиновую группы. Конкретными гетероарильными группами являются те, которые получены из тиофена, пиррола, бензотиофена, бензофурана, индола, пиридина, хинолина, имидазола, оксазола и пиразина.

Примеры типовых гетероарилов включают следующие:

где каждый Y выбирают из >C(=O), NH, O и S.

В данном описании, термин ‘гетероциклоалкил’ означает стабильную не ароматическую кольцевую структуру, моноциклическую или полициклическую, которая включает один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, и указанное количество атомов в кольце. Не ароматическая кольцевая структура может иметь от 4 до 10 членов в кольце, и в частности, от 4 до 7 членов в кольце. Конденсированная гетероциклическая система колец сожжет включать карбоциклические кольца и должна включать только одно гетероциклическое кольцо. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничены ими, морфолин, пиперидин (например, 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил и 4-пиперидинил), пирролидин (например, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил и 3-пирролидинил), пирролидон, пиран, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, диоксан, тетрагидропиран (например, 4-тетрагидропиранил), имидазолин, имидазолидинон, оксазолин, тиазолин, 2-пиразолин, пиразолидин, пиперазин и н-алкилпиперазины, такие как н-метилпиперазин. Другие примеры включают тиоморфолин и его S-оксид и S,S-диоксид (в частности, тиоморфолин). Другие примеры включают азетидин, пиперидон, пиперазон и н-алкилпиперидины, такие как н-метилпиперидин. Конкретные примеры гетероциклоалкильных групп показаны в следующих иллюстративных примерах:

где каждый W выбирают из CH₂, NH, O и S; и каждый Y выбирают из NH, O, C(=O), SO₂ и S.

В данном описании, термин ‘гетероциклоалкенил’ означает ‘гетероциклоалкил’, где одна связь в кольце восстановлена, таким образом кольцо содержит двойную связь. Конкретные примеры гетероциклоалкенильных групп показаны в следующих иллюстративных примерах:

где каждый W выбирают из CH₂, NH, O и S; и каждый Y выбирают из NH, O, C(=O), SO₂ и S.

‘Гидроксил’ относится к радикалу -OH.

‘Оксо’ относится к радикалу =O.

‘Замещенная’ означает группу, в которой один или более атомов водорода каждый независимо замещены одинаковыми или разными заместителями.

‘Сульфо’ или ‘сульфоновая кислота’ относится к радикалу, такому как -SO₃H.

‘Тиол’ относится к группе -SH.

В данном описании, термин ‘замещен одним или более’ означает от одного до четырех заместителей. В одном варианте, он означает от одного до тех заместителей. В других вариантах, он означает от одного до двух заместителей. В других вариантах, он означает один заместитель.

‘Тиоалкокси’ относится к группе -SR²⁶, где R²⁶ имеет указанное количество атомов углерода и, в частности, является C₁-C₈ алкилом. Конкретные тиоалкоксигруппы включают тиометокси, тиоэтокси, н-тиопропокси, изотиопропокси, н-тиобутокси, трет-тиобутокси, втор-тиобутокси, н-тиопентокси, н-тиогексокси и 1,2-диметилтиобутокси. Конкретные тиоалкоксигруппы включают низшие тиоалкокси, т.е. содержащие от 1 до 6 атомов углерода. Другие конкретные алкоксигруппы имеют от 1 до 4 атомов углерода.

Специалист в области органического синтеза поймет, что максимальное количество гетероатомов в стабильном, химически возможном гетероциклическом кольце, является ли оно ароматическим или не ароматическим, определяется размером кольца, степенью ненасыщенности и валентностью гетероатомов. В общем, гетероциклическое кольцо может иметь от одного до четырех гетероатомов, пока гетероароматическое кольцо является химически возможным и стабильным.

‘Фармацевтически приемлемый’ означает одобренный или одобряемый регулирующим органом федерального или местного правительства или соответствующего агентства в странах, отличных от США, или которые перечислены в фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для применения на животных и, более конкретно, у человека.

‘Фармацевтически приемлемая соль’ относится к соли соединения в соответствии с данным изобретением, которая является фармацевтически приемлемой и которая обладает желаемым фармакологическим действием исходного соединения. В частности, такие соли являются не токсичными, могут неорганическими или органическими кислотно-аддитивными солями и основно-аддитивными солями. Конкретно, такие соли включают: (1) кислотно-аддитивные соли, полученные с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и подобные; или полученные с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, капроновая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этандисульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4-хлорбензолсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, 4-метилбицикло[2.2.2]-окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюкогептоновая кислота, 3-фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, трет-бутилуксусная кислота, лаурилсерная кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, муконовая кислота и подобные; или (2) соли, полученные, когда кислотный протон, присутствующий в исходном соединении, замещается ионом металла, например, ионом щелочного металла, ионом щелочноземельного металла или ионом алюминия; или координирующие с органическим основанием, таким как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, н-метилглюкамин и подобные. Соли также включают, только в качестве примера, натрий, калий, кальций, магний, аммоний, тетраалкиламмоний и подобные; и когда соединение содержит щелочную функциональную группу, соли не токсичных органических или неорганических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, тартрат, мезилат, ацетат, малеат, оксала и подобные. Термин ‘фармацевтически приемлемый катион’ относится к приемлемому катионному противоиону кислотной функциональной группы. Такие катионы представлены катионами натрия, калия, кальция, магния, аммония, тетраалкиламмония и подобными.

‘Фармацевтически приемлемый носитель’ относится к разбавителю, адъюванту, наполнителю или носителю, с которыми соединение в соответствии с данным изобретением вводят.

‘Пролекарства’ относятся к соединениям, включая производные соединений в соответствии с данным изобретением, которые имеют отщепляемые группы и становятся, в результате сольволиза или в физиологических условиях, соединениями в соответствии с данным изобретением, которые фармацевтически активны in vivo. Такие примеры включают, но не ограничены ими, производные сложного эфира холина и подобные, сложные эфиры н-алкилморфолина и подобные.

‘Сольват’ означает формы соединения, которые связаны с растворителем, обычно в результате реакции сольволиза. Такая физическая связь включает водородное связывание. Обычные растворители включают воду, этанол, уксусную кислоту и подобные. Соединения в соответствии с данным изобретением могут быть получены, например, в кристаллической форме и могут быть сольватированы или гидрированы. Подходящие сольваты включают фармацевтически приемлемые сольваты, такие как гидраты, а также включают стехиометрические сольваты и не стехиометрические сольваты. В определенных случаях сольват способен к выделению, например, если одна или более молекул растворителя введены в кристаллическую решетку кристаллического твердого вещества. ‘Сольват’ охватывает и фазу раствора, и выделяемые сольваты. Типовые сольваты включают гидраты, этаноляты и метаноляты.

‘Пациент’ включает человека. Термины ‘человек’, ‘пациент’ и ‘субъект’ применяют здесь взаимозаменяемо.

‘Эффективное количество’ означает количество соединения в соответствии с данным изобретением, которое, при введении пациенту для лечения заболевания, является достаточным для проведения такого лечения заболевания. “Эффективное количество” может меняться в зависимости от соединения, заболевания и его тяжести, возраста, массы тела и т.д. лечимого пациента.

‘Лечить’ или ‘лечение’ любого заболевания или расстройства относится, в одном варианте, к облегчению заболевания или расстройства (т.е. остановке заболевания или снижения проявлений, степени или тяжести, по крайней мере, одного из его клиническим симптомов). В другом варианте, ‘лечить’ или ‘лечение’ относится к облегчению, по крайней мере, одного физического параметра, который может не быть заметен пациенту. В еще одном варианте, ‘лечить’ или ‘лечение’ относится к модулированию заболевания или расстройства, физически (например, стабилизация видимого симптома), физиологически (например, стабилизация физического параметра) или обоими способами. В другом варианте, ‘лечить’ или ‘лечение’ относится к замедлению развития заболевания.

‘Соединение(я) в соответствии с данным изобретением’ и эквивалентные выражения охватывают соединения формулы, описанных здесь, где выражение включает фармацевтически приемлемые соли и сольваты, например, гидраты, и сольваты фармацевтически приемлемых солей, где это возможно по контексту. Также ссылка на промежуточные соединения, независимо от того, заявлены они сами или нет, охватывает их соли и сольваты, где это возможно по контексту.

В данном описании, “мутация(и) I класса” относится к мутациям, которые вмешиваются в синтез белка. Они вызывают введение преждевременного сигнала об окончании трансляции (стоп-кодон) в мРНК. Процессированные МТРП белки являются нестабильными и быстро разлагаются, следовательно, чистым результатом является то, что белки в апикальной мембране отсутствуют. В частности, мутации I класса относятся к p.Gly542X (G542X), W1282X, c.489+1G>T (621+1G>T) или c.579+1G>T (711+1G>T) мутации. Более конкретно, мутации I класса относятся к G542X; или W1282X мутациям.

В данном описании, “мутация(и) II класса” относятся к мутациям, которые поражают белковые мутации. Это приводит к образованию МТРП белка, который не может быть правильно свернут и/или перенесен в место его функционирования в апикальной мембране. В частности, мутации II класса относятся к p.Phe508del (F508del), p.Ile507del или p.Asn1303Lys (N1303K) мутациям. Более конкретно, мутации II класса относятся к F508del или N1303K мутациям.

В данном описании, “мутация(и) III класса” относятся к мутациям, которые изменяют регулирование МТРП канала. Мутированный МТРП белок правильно переносится и локализуется в клеточной мембране, но не может быть активирован, или он не может функционировать в качестве хлоридного канала. В частности, мутации III класса относятся к p.Gly551Asp (G551D), G551S, R553G; G1349D; S1251N, G178R, S549N мутациям. Более конкретно, мутации III класса относятся к G551D, R553G, G1349D, S1251N, G178R или S549N мутациям.

В данном описании, “мутация(и) IV класса” относятся к мутациям, которые поражают проводимость хлоридов. МТРП белок правильно переносится в клеточную мембрану, но создает пониженный поток Cl- или “дефект открытия мембранного канала” (большинство являются миссенс-мутациями, расположенными в трансмембранном домене). В частности, мутации IV класса относятся к p.Arg117His (R117H), R347P или p.Arg334Trp (R334W) мутациям.

В данном описании, “мутация(и) V класса” относятся к мутациям, которые снижают уровень нормально функционирующего МТРП на апикальной мембране, или вызывают “дефект проводимости” (например, частично нарушенные мутации сплайсинга или миссенс-мутации недостаточного переноса). В частности, мутации V класса относятся к c.1210-12T[5] (5T аллель), c.3140-26A>G (3272-26A>G), c.3850-2477C>T (3849+10kbC>T) мутациям.

В данном описании, “мутация(и) VI класса” относятся к мутациям, которые снижают стабильность МТРП, который присутствует, или которые поражают регулирование других каналов, что вызывает внутреннюю нестабильность МТРП белка. При этом, хотя он остается функциональным, МТРП белок является нестабильным на поверхности клетки, и он быстро удаляется и разлагается клеточными механизмами. В частности, мутации VI класса относятся к Rescued F508del, 120del23, N287Y, 4326dellTC или 4279insA мутациям. Более конкретно, мутации VI класса относятся к Rescued F508del мутациям.

Если здесь представлены интервалы, например, но без ограничений, C₁-₈ алкил, цитирование интервала должно рассматриваться как включающее каждое число из указанного интервала.

Другие производные соединений в соответствии с данным изобретением обладают активностью в форме кислоты и производного кислоты, но в чувствительной к кислоте форме часто дает преимущества растворимости, совместимости с тканями или замедленного выделения в организм млекопитающего (Bundgaard, 1985). Пролекарства включают производные кислоты, хорошо известные практикующим специалистам в данной области техники, такие как, например, сложные эфиры, полученные реакцией исходной кислоты и подходящим спиртом или амидами, полученные реакцией соединения исходной кислоты с замещенным или незамещенным амином и ангидридами кислоты или смешанными ангидридами. Простые алифатические или ароматические сложные эфиры, амиды и ангидриды, полученные из кислотных групп, присоединенных к соединениям в соответствии с данным изобретением, являются особенно полезными пролекарствами. В некоторых случаях желательно получать пролекарства типа двойного сложного эфира, такие как сложные эфиры (ацилокси)алкила или сложные эфиры ((алкоксикарбонил)окси)алкила. Конкретные такие пролекарства включают сложные эфиры C_1-8 алкила, C_2-8 алкенила, C_6-10 необязательно замещенного арила и (C₆-₁₀ арил)-(C_1-4 алкила) соединений в соответствии с данным изобретением.

В данном описании, термин ‘изотопный вариант’ относится к соединению, которое содержит не природные доли изотопов на одном или более атомах, которые составляют это соединение. Например, ‘изотопный вариант’ соединения может содержать один или более не радиоактивных изотопов, таких как, например, дейтерий (²H или D), углерод-13 (¹³C), азот-15 (¹⁵N) или подобные. Должно быть понятно, что в соединении, в котором сделано такое изотопное соединение, следующие атомы, если присутствуют, могут меняться так, что, например, любой водород может быть ²H/D, любой углерод может быть ¹³C или любой азот может быть ¹⁵N, и что присутствие и размещение таких атомов может быть определено специалистом в данной области техники. Также данное изобретение может включать получение радиоизотопных вариантов с радиоизотопами, в тех случаях, когда полученные соединения могут применяться для исследования распределения лекарственных средств и/или субстрата в ткани. Радиоактивные изотопы тритий, т.е. ³H, и углерод-14, т.е. ¹⁴C, особенно полезны для этой цели благодаря простоте их введения и легкости определения. Далее, могут быть получены соединения, которые замещены позитронно-активными изотопами, такими как ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O и ¹³N, и они будут полезны в исследованиях позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) для исследования степени занятости рецептора субстратом.

Все изотопные варианты представленных здесь соединений, радиоактивные или нет, включены в объем данного изобретения.

Также должно быть понятно, что соединения, которые имеют одинаковую молекулярную формулу, но отличаются по природе или последовательности связывания их атомов или расположения их атомов в пространстве, называются ‘изомерами’. Изомеры, которые отличаются расположением их атомов в пространстве, называются ‘стереоизомерами’.

Стереоизомеры, которые не являются зеркальными изображениями друг друга, называются ‘диастереомерами’, и такие, которые являются неналагающимися зеркальными изображениями друг друга называются ‘энантиомерами’. Если соединение имеет асимметрический центр, например оно связано с четырьмя различными группами, возможна пара энантиомеров. Энантиомер может быть охарактеризован абсолютной конфигурацией его асимметрического центра и описывается R- и S-секвенирующими правилами Кана и Прелога, или методом, в котором молекула вращается в плоскости поляризованного света и обозначается как правовращающий и левовращающий (т.е. как (+) или (-)-изомеры, соответственно). Хиральное соединение может существовать либо как отдельный энантиомер, либо как их смесь. Смесь, содержащая равные доли энантиомеров, называется ‘рацемическая смесь’.

Все таутомерные формы представленных здесь соединений включены в объем данного изобретения. ‘Таутомеры’ относятся к соединениям, которые являются взаимозаменяемыми формами конкретной структуры соединения, и которые варьируются в замещении атомов водорода и электронов. Таким образом, две структуры могут быть в равновесии через движение π электронов и атома (обычно H). Например, енолы и кетоны являются таутомерами, так как они быстро взаимопревращаются обработкой либо кислотой, либо основанием. Другим примером таутомеризма является аци- и нитро- формы фенилнитрометана, которые также образуются при обработке кислотой или основанием. Другой пример таутомеризма иллюстрирован ниже:

Таутомерные формы могут быть релевантными к приобретению оптимальной химической реакционной способности и биологической активности целевого соединения.

Соединения в соответствии с данным изобретением могут обладать одним или более асимметрическими центрами; такие соединения поэтому могут быть получены как отдельные (R)- или (S)- стереоизомеры или их смеси.

Если не указано иначе, описание или наименование конкретного соединения в описании и формуле изобретения включает их отдельные энантиомеры и смеси, рацемические или другие. Способы определения стереохимии и разделения стереоизомеров хорошо известны в данной области техники.

Должно быть понятно, что соединения в соответствии с данным изобретением могут быть метаболизированы с получением биологически активных метаболитов.

Изобретение

Данное изобретение основано на идентификации новых соединений, которые могут быть полезны для лечения кистозного фиброза.

В данном изобретении также представлены способы получения этих соединений, фармацевтических композиций, содержащих эти соединения, и способы лечения кистозного фиброза введением соединений в соответствии с данным изобретением.

Следовательно, в одном аспекте данного изобретения, представлены соединения в соответствии с данным изобретением, имеющие формулу (I):

где

R¹ является

C_3-7 моно или спироциклическим циклоалкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

4-7-членным моно или спироциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

C_6-10 моноциклическим или конденсированным бициклическим арилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами,

5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S и необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, или

C_1-6 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами,

каждый R² выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-OC(=O)C_1-4 алкила,

-C(=O)-C_1-4 алкокси,

оксо,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a), и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранных R^5a),

каждый R³ выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_2-4 алкенила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_3-7 моноциклического циклоалкила,

4-7-членного моноциклического гетероциклоалкила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S,

4-7-членного моноциклического гетероциклоалкенила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S,

5-10-членного моноциклического или конденсированного бициклического гетероарила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, и

-NHSO₂-C_1-4 алкила;

каждый R⁴ выбирают из

гало,

-OH,

C_3-7 моноциклического циклоалкила,

-CN, и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5c),

каждый R^5a, R^5b и R^5c независимо выбирают из

гало,

-OH,

-OP(=O)₂OH,

-CN,

-NR^6aR^6b, и

C_1-4 алкокси; и

каждый R^6a или R^6b независимо выбирают из H и C_1-4 алкила.

В другом аспекте данного изобретения, представлены соединения, имеющие формулу (I):

где

R¹ является

C_3-7 циклоалкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

C_6-10 моно или бициклическим арилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами,

5-10-членным моно или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S и необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, или

C_1-6 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами;

каждый R² выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-OC(=O)C_1-4 алкила,

-C(=O)-C_1-4 алкокси,

оксо,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a), и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a),

каждый R³ выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_3-7 циклоалкила,

5-10-членного моно или конденсированного бициклического гетероарила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S, и

-NHSO₂-C_1-4 алкила;

каждый R⁴ выбирают из

гало,

-OH,

-CN, и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5c),

каждый R^5a, R^5b и R^5c независимо выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-NR^6aR^6b, и

C_1-4 алкокси; и

каждый R^6a или R^6b независимо выбирают из H и C_1-4 алкила.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_3-7 моно или спироциклическим циклоалкилом. В конкретном варианте, R¹ является спиро[3.3]гептаном, циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом. В более конкретном варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_3-7 циклоалкилом. В конкретном варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_3-7 моно- или спироциклическим циклоалкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В другом варианте, R¹ является спиро[3.3]гептаном, циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R¹ является C_3-7 моно- или спироциклическим циклоалкилом, замещенным одной или двумя независимо выбранными R² группами. В другом конкретном варианте, R¹ является спиро[3.3]гептаном, циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной или двумя независимо выбранными R² группами. В более конкретном варианте, R¹ является C_3-7 моно- или спироциклическим циклоалкилом, замещенным одной R² группой. В другом конкретном варианте, R¹ является спиро[3.3]гептаном, циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной R² группой.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_3-7 циклоалкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В другом варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R¹ является C_3-7 циклоалкилом, замещенным одной или двумя независимо выбранными R² группами. В другом конкретном варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной или двумя независимо выбранными R² группами. В более конкретном варианте, R¹ является C_3-7 циклоалкилом, замещенным одной R² группой. В другом конкретном варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной R² группой.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_3-7 циклоалкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R² выбирают из гало, CN, оксо и OH. В более конкретном варианте, R² выбирают из F, Cl, CN, оксо и OH.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_3-7 циклоалкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R² является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃. В другом более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a. В еще одном более конкретном варианте, R² является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, -CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В другом более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, -CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_3-7 циклоалкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В другом варианте, R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R² является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a такой, как определен выше. В конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂. В конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a. В другом конкретном варианте, R² является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, -CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В более конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, -CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂-CH₃, O-CF₃, -OCH₂-CHF₂, -OCH₂CH₂OCH₃ или -OCH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 4-7-членным моно- или спироциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В другом варианте, R¹ является окса-спиро[3.3]гептаном, аза-спиро[3.3]гептаном, окса-6-аза-спиро[3.3]гептаном, диаза-спиро[3.3]гептаном, пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R¹ является 4-7-членным моно- или спироциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или двумя независимо выбранными R² группами. В другом конкретном варианте, R¹ является окса-спиро[3.3]гептаном, аза-спиро[3.3]гептаном, окса-6-аза-спиро[3.3]гептаном, диаза-спиро[3.3]гептаном, пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или двумя независимо выбранными R² группами. В более конкретном варианте, R¹ является 4-7-членным моно- или спироциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной R² группой. В другом конкретном варианте, R¹ является окса-спиро[3.3]гептаном, аза-спиро[3.3]гептаном, окса-6-аза-спиро[3.3]гептаном, диаза-спиро[3.3]гептаном, пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной R² группой.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В другом варианте, R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R¹ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или двумя независимо выбранными R² группами. В другом конкретном варианте, R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или двумя независимо выбранными R² группами. В более конкретном варианте, R¹ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной R² группой. В другом конкретном варианте, R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной R² группой.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R² выбирают из гало, CN, оксо и OH. В более конкретном варианте, R² выбирают из F, Cl, CN, оксо и OH.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R² выбирают из -OC(=O)CH₃, -OC(=O)CH₂CH₃ и -OC(=O)CH(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃. В другом более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранных R^5a. В еще одном более конкретном варианте, R² является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В другом более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, и R² такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R² группами. В конкретном варианте, R² является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a. В другом более конкретном варианте, R² является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом. В конкретном варианте, R¹ является фенилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В другом варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или двумя независимо выбранными R³ группами. В другом конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или двумя независимо выбранными R³ группами. В более конкретном варианте, R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной R³ группой. В другом конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной R³ группой.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ выбирают из гало, CN и OH. В более конкретном варианте, R³ выбирают из F, Cl, CN и OH.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃. В еще более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃. В наиболее конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃. -CH₂-OH, -CH₂-OP(=O)₂OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранных R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранных R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃. -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃). В другом наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH-CH₂-OCH₃, -CH=CH-CH₂-OCH₂CH₃, -CCH₃=CH-CH₂-OCH₃ или -CH=CCH₃-CH₂-OCH₂CH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_3-7 циклоалкилом. В более конкретном варианте, R³ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом. В наиболее конкретном варианте, R³ является циклопропилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. В более конкретном варианте, R³ является тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкенилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. В более конкретном варианте, R³ является дигидропиранилом или тетрагидропиридинилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. В более конкретном варианте, R³ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_6-10 моно- или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фенилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является -NHSO₂-CH₃ или -NHSO₂-CH₂CH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилм или пиразинилом. В более конкретном варианте, R¹ является пиразолилом, тиазолилом или тиофенилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В другом варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или двумя независимо выбранными R³ группами. В другом конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или двумя независимо выбранными R³ группами. В более конкретном варианте, R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной R³ группой. В другом конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной R³ группой.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 55-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ выбирают из гало, CN и OH. В более конкретном варианте, R³ выбирают из F, Cl, CN и OH.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃ или -CH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5a является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5a является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃. В наиболее конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃. -CH₂-OH, -CH₂-OP(=O)₂OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ и -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃ или -CH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃). В другом наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH-CH₂-OCH₃, -CH=CH-CH₂-OCH₂CH₃, -CCH₃=CH-CH₂-OCH₃ или -CH=CCH₃-CH₂-O CH₂CH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является C_3-7 циклоалкилом. В более конкретном варианте, R³ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом. В наиболее конкретном варианте, R³ является циклопропилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. В более конкретном варианте, R³ является тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинил.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкенилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. В более конкретном варианте, R³ является дигидропиранилом или тетрагидропиридинилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S. В более конкретном варианте, R³ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретение имеет любую формулу I, где R¹ является 5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, и R³ такой, как описано выше. В конкретном варианте, R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R³ группами. В конкретном варианте, R³ является -NHSO₂-CH₃ или -NHSO₂-CH₂CH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является 5-6-членным моноциклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, где две соседних R³ группы вместе с атомом углерода, с которым они связаны, образуют 8-10-членный конденсированный бицикл. В конкретном варианте, R¹ является

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_1-6 алкилом. В конкретном варианте, R¹ является -CH₃, -CH₂-CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₃)₂-CH₃ или -C(CH₃)H-C(CH₃)₂H. В более конкретном варианте, R¹ является -C(CH₃)₃ или -CH₂CH(CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R¹ является -C(CH₃)₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами. В конкретном варианте, R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной, двумя или тремя независимо выбранными R⁴ группами. В более конкретном варианте, R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной R⁴ группой.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами. В конкретном варианте, R¹ является -CH₃, -CH₂-CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₃)₂-CH₃ или -CH(CH₃) -CH(CH₃)₂, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R⁴ группами. В другом конкретном варианте, R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами, выбранными из F, Cl, OH и CN. В конкретном варианте, R¹ является -CH₃, -CH₂-CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₃)₂-CH₃ или -CH(CH₃)-CH(CH₃)₂, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R⁴ группами, выбранными из F, Cl, OH и CN. В наиболее конкретном варианте, R¹ является -CF₃, -CH₂CF₃, -CH(OH)CF₃, -CH₂-OH, -CH₂-CH₂-OH, -C(CH₃)₂-CH₂-OH, -CH₂-CN или -CH₂-CH₂-CN.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами. В конкретном варианте, R¹ является -CH₃, -CH₂-CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₃)₂-CH₃ или -CH(CH₃)-CH(CH₃)₂, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R⁴ группами, и R⁴ является C_3-7 циклоалкилом. В другом конкретном варианте, R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами, выбранными из циклопропила, циклобутила, циклопентила и циклогексила. В конкретном варианте, R¹ является -CH₃, -CH₂-CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₃)₂-CH₃ или -CH(CH₃)-CH(CH₃)₂, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R⁴ группами, выбранными из циклопропила, циклобутила, циклопентила и циклогексила. В наиболее конкретном варианте, R¹ является -CH₂-циклопропилом или -CH(CH₃)-циклопропилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами, где R⁴ является C_1-4 алкокси необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5c. В конкретном варианте, R¹ является -CH₃, -CH₂-CH₃,-CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₃)₂-CH₃ или -CH(CH₃)-CH(CH₃)₂, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R⁴ группами, где R⁴ является C_1-4 алкокси необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5c. В более конкретном варианте, R⁴ -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5c. В другом более конкретном варианте, R⁴ является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5c, где R^5c выбирают из F, Cl, OH, -CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃,-NH(CH₃) или -N(CH₃)₂. В другом более конкретном варианте, R⁴ является -OCH₃, -OCH₂-CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых замещен одной или более независимо выбранными R^5c, и каждый R^5c является F, Cl, OH, -CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃,-NH(CH₃) или -N(CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R⁴ является -OCH₃, -OCH₂-CH₃, O-CF₃, -OCH₂-CHF₂, -OCH₂CH₂OCH₃ или -OCH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является

где R^4a является C_1-5 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранных гало, CN, C_1-4 алкокси или C_3-7 моноциклическим циклоалкилом. В конкретном варианте, R^4a является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂CH(CH₃)₂ или -CH₂C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранных гало, CN, C_1-4 алкокси или C_3-7 моноциклическим циклоалкилом. В конкретном варианте, R^4a является C_1-5 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранных F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, циклопропила, циклобутила или циклопентила. В другом конкретном варианте, R^4a является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂CH(CH₃)₂ или -CH₂C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранных F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, циклопропила, циклобутила или циклопентила. В наиболее конкретном варианте, R^4a является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂CH(CH₃)₂ или -CH₂C(CH₃)₃. В другом наиболее конкретном варианте, R^4a является -CF₃, -CH₂CF₃ или -CH₂CN.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу I, где R¹ является

где R^4b является C_3-7 моноциклическим циклоалкилом. В конкретном варианте, R^4b является циклопропилом, циклобутилом или циклопентилом. В более конкретном варианте, R^4b является циклопропилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa

где R³ такой, как описано выше и индекс n равен 0, 1 или 2.

В другом варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb

где R³ такой, как описано выше и индекс n равен 0, 1 или 2.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 0.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 0.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из гало, CN и OH. В более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из F, Cl, CN и OH.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из гало, CN и OH. В более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из F, Cl, CN и OH.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -CH₂-OP(=O)₂OH,-C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ и -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -CH₂-OP(=O)₂OH,-C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ и -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ независимо выбирают из-CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ и -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ и -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ и -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкокси, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -OCH₃, -OCH₂CH₃ и -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкокси, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -OCH₃, -OCH₂CH₃ и -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкокси, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -OCH₃, -OCH₂CH₃ и -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из C_1-4 алкокси, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из -OCH₃, -OCH₂CH₃ и -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_2-4 алкенила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃). В другом наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH-CH₂-OCH₃, -CH=CH-CH₂-OCH₂CH₃, -CCH₃=CH-CH₂-OCH₃ или -CH=CCH₃-CH₂-OCH₂CH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_2-4 алкенила, необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b. В другом более конкретном варианте, R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В еще одном более конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃). В другом наиболее конкретном варианте, R³ является -CH=CH-CH₂-OCH₃, -CH=CH-CH₂-OCH₂CH₃, -CCH₃=CH-CH₂-OCH₃ или -CH=CCH₃-CH₂-OCH₂CH₃.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_3-7 циклоалкила. В более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из циклопропила, циклобутила, циклопентила и циклогексила. В наиболее конкретном варианте, R³ является циклопропилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из C_3-7 циклоалкила. В более конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из циклопропила, циклобутила, циклопентила и циклогексила. В наиболее конкретном варианте, R³ является циклопропилом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из 4-7-членного моноциклического гетероциклоалкила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S. В конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из тетрагидропиранила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила и тиоморфолинила.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из 4-7-членного моноциклического гетероциклоалкила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S. В конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из тетрагидропиранила, пиперидинила, пиперазинила, морфолинила и тиоморфолинила.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIa, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из 4-7-членного моноциклического гетероциклоалкенила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S. В конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из дигидропиранила и тетрагидропиридинила.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIb, где индекс n равен 1 или 2, где каждый R³ независимо выбирают из 4-7-членного моноциклического гетероциклоалкенила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S. В конкретном варианте, каждый R³ независимо выбирают из дигидропиранила и тетрагидропиридинила.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIIa или IIIb:

где R² такой, как описано выше.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIIa или IIIb, где R² выбирают из гало, CN, оксо и OH. В более конкретном варианте, R² выбирают из F, Cl, CN, оксо и OH.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIIa или IIIb, где R² является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a такой, как определен выше. В более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃. В другом более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a. В еще одном более конкретном варианте, R² является C_1-4 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В другом более конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, CH(CH₃)₂ или -C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением имеет формулу IIIa или IIIb, где R² является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a такой, как определен выше. В конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂. В конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a. В другом конкретном варианте, R² является C_1-4 алкокси, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В более конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a, где R^5a является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂. В наиболее конкретном варианте, R² является -OCH₃, -OCH₂-CH₃, O-CF₃, -OCH₂-CHF₂, -OCH₂CH₂OCH₃ или -OCH₂CH₂N(CH₃)₂.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением выбирают из:

2-(2-фторбензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамида,

2-(2-гидроксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(1-гидроксициклопропанкарбоксамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-(2-(трифторметил)бензамидо)-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(2-гидрокси-2-метилпропанамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(4-фтор-2-(трифторметил)бензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(2,4-дифторбензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(1-(гидроксиметил)циклопропанкарбоксамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(3-гидрокси-2,2-диметилпропанамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-метил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

метил 1-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-илкарбамоил)циклопропанкарбоксилата,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-циклопропил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-изопропил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-(трифторметил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

5-трет-бутил-N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-этил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-1,2,4-триазол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-3-этил-4-метил-1H-пиразол-5-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-фторникотинамида,

2-(4-фтор-2-гидроксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(2-гидроксипропанамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-6-фторпиколинамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-хлор-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-(2-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)бензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(2-(1H-имидазол-2-ил)бензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-(2-(метилсульфонамидо)бензамидо)-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-оксопирролидин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-оксопирролидин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-метил-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пиразоло[4,3-c]пиридин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1,4,6,7-тетрагидропиранo[4,3-c]пиразол-3-карбоксамида,

4-бром-N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-хлор-5-метил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-метил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-хлор-5-этил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4,6-дигидро-1H-фуро[3,4-c]пиразол-3-карбоксамида,

2-(2-гидрокси-3,3-диметилбутанамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(2-гидрокси-3-метилбутанамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(1-(гидроксиметил)циклобутанкарбоксамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

4-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-илкарбамоил)тетрагидро-2H-пиран-4-илацетата, и

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-(метоксиметил)-1H-пиразол-3-карбоксамида.

В другом варианте, соединение в соответствии с данным изобретением выбирают из:

Цис-2-[[2-фторциклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, Энантиомер 1,

Цис-2-[[2-фторциклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, Энантиомер 2,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(3,6-дигидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-[(2-гидрокси-4-метилпентаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(3,3-дифторциклобутанкарбонил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(2,2-дифторциклопропанкарбонил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-хлор-5-(метоксиметил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-[[2-гидрокси-3-метилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, Энантиомер 1,

2-[[2-гидрокси-3-метилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, Энантиомер 2,

2-(2-гидроксибутаноиламино)-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

(3-Карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)амида 5-этокси-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты,

(3-Карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-амида 5-(2-метоксиэтокси)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты,

2-[(3-гидрокси-3-метилбутаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-[[3,3,3-трифтор-2-(гидроксиметил)пропаноил]амино]-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-(3-гидроксибутаноиламино)-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[1-(1-гидроксиэтил)циклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(2-циклопропил-2-гидроксиацетил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

(3-Карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-амида 5-(1-гидроксиэтил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты,

Этилового эфира 2-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-2-илкарбамоил)циклопропанкарбоновой кислоты,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-[(E)-3-метоксипроп-1-енил]-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-(1-гидрокси-1-метилэтил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(3-метоксипропил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-[(2-гидроксиацетил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(3-гидрокси-4-метилпентаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(3-циклопропил-3-гидроксипропаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-[(4,4,4-трифтор-3-гидроксибутаноил)амино]-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(3-гидрокси-2-метилпропаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-пропил-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(2-этоксиэтил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-циано-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-[[2-(гидроксиметил)-3-метилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(1,2-дигидроксиэтил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-[[(2S)-2-гидрокси-3,3-диметилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[(2R)-2-гидрокси-3,3-диметилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[1-[1-гидроксиэтил]циклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[1-[1-гидроксиэтил]циклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-(гидроксиметил)-1-метилпиразол-3-карбоксамида,

2-[(2-гидрокси-2,3,3-триметилбутаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[2-(гидроксиметил)циклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[(1S,2S)-2-(гидроксиметил)циклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[2-(циклопропилметил)-3-гидроксипропаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[2-(гидроксиметил)-3,3-диметилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[2-(гидроксиметил)бутаноиламино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[(1R,3R)-3-(гидроксиметил)-2,2-диметилциклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(гидроксиметил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-[[2-(гидроксиметил)-3,3-диметилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[2-(гидроксиметил)-3,3-диметилбутаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[1-(гидроксиметил)-2,2-диметил-циклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

Дигидрофосфата [5-[(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)карбамоил]пиразол-1-ил]метила,

Дигидрофосфата [3-[(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)карбамоил]пиразол-1-ил]метила,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(2,3-дигидро-1,4-диоксин-5-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида, и

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(1,4-диоксан-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида.

В еще одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением выбирают из:

2-[[2-(циклопропилметил)-3-гидроксипропаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, энантиомер 1,

2-[[2-(циклопропилметил)-3-гидроксипропаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, энантиомер 2,

2-[[(2S)-3-циклопропил-2-гидроксипропаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[(1R)-1-(гидроксиметил)-2,2-диметилциклопропанкарбонил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(2-метоксиэтокси)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(2-изопропоксиэтокси)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

Дигидрофосфата [3-[(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)карбамоил]-4-метилпиразол-1-ил]метила,

Дигидрофосфата [5-[(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)карбамоил]-4-метилпиразол-1-ил]метила,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-оксо-1,3-дигидроимидазол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(метоксиметил)-1H-пиразол-3-карбоксамида,

2-[(2-гидрокси-4,4-диметилпентаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-оксопирролидин-2-карбоксамида,

(2R)-N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-оксопирролидин-2-карбоксамида,

2-[[2-гидрокси-4,4-диметилпентаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, энантиомер 1,

2-[[2-гидрокси-4,4-диметилпентаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, энантиомер 2,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-[1,4-диоксан-2-ил]-1H-пиразол-3-карбоксамида, энантиомер 1,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-[1,4-диоксан-2-ил]-1H-пиразол-3-карбоксамида, энантиомер 2,

2-[[2-(дифторметокси)бензоил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1-(дифторметил)пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-(дифторметил)пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-хлор-1-(дифторметил)пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-3-(дифторметил)-1-метилпиразол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-(дифторметил)-1-метилпиразол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1-метилпиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-метилпиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1-(2,2,2-трифторэтил)пиразол-3-карбоксамида,

2-[[3-(дифторметил)бензоил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[2-(дифторметил)бензоил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(3,3-дифтор-1-метилциклобутанкарбонил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-метилоксазол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1-(2,2-дифторэтил)пиразол-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-(трифторметил)тиазол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)тиазол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)оксазол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-(трифторметил)-1H-имидазол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-метилтиазол-2-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2,4-диметилоксазол-5-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)изоксазол-5-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)тиазол-5-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-метилоксазол-5-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)оксазол-5-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1-метил-5-(трифторметил)пиразол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)пиразин-2-карбоксамида,

6-бутил-N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-оксо-1H-пиридин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-3,5-диметилизоксазол-4-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-метилпиразин-2-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиррол-2-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-6-метилпиридин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-8-метил-4-оксопиридо[1,2-a]пиримидин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2,3-дигидро-[1,4]диоксино[2,3-b]пиридин-7-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-метилизоксазол-4-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-[(3-метилоксетан-3-карбонил)амино]-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-метил-4-оксо-3H-хиназолин-5-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4,7-диметилпиразоло[5,1-c][1,2,4]триазин-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-метил-4-оксо-3H-хиназолин-7-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-2-(2,2,2-трифторэтил)пиразол-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-[[(2S)-3,3,3-трифтор-2-гидрокси-2-метилпропаноил]амино]-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[(2S)-2-гидроксипропаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(4-гидрокситетрагидропиран-4-карбонил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(2-гидрокси-3-метокси-2-метилпропаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(2-гидрокси-3-метоксипропаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразоло[3,4-b]пиридин-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-(тетрагидропиран-4-карбониламино)-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(2-этоксиацетил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(2-метоксиацетил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[2-(2-метоксиэтокси)ацетил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-(тетрагидрофуран-2-карбониламино)-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

5,5,7,7-тетраметил-2-(тетрагидрофуран-3-карбониламино)-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[(2-метокси-2-метилпропаноил)амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

2-[[2-гидрокси-3-метокси-2-метилпропаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, энантиомер 1,

2-[[(2S)-2-гидрокси-3-метокси-2-метилпропаноил]амино]-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида, энантиомер 2,

5,5,7,7-тетраметил-2-[(3,3,3-трифтор-2-гидроксипропаноил)амино]-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида,

(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)амида 6-оксо-1,6-дигидропиридазин-3-карбоновой кислоты, и

N-(3-карбамоил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-3-карбоксамида.

В одном варианте, соединением в соответствии с данным изобретением является N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамидом.

В другом варианте, соединение в соответствии с данным изобретением не является N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамидом.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением не является изотопным вариантом.

В одном аспекте соединение по любому из представленных здесь вариантов присутствует в виде свободного основания.

В одном аспекте соединение по любому из представленных здесь вариантов является фармацевтически приемлемой солью.

В одном аспекте соединение по любому из представленных здесь вариантов является сольватом соединения.

В одном аспекте соединение по любому из представленных здесь вариантов является сольватом фармацевтически приемлемой соли соединения.

Хотя конкретные группы для каждого варианта в общем были по-отдельности перечислены выше, соединение в соответствии с данным изобретением включает такое, в котором несколько или каждый вариант в указанной выше формуле, а также в других представленных здесь формулах, выбирают из одного или более из конкретных членов или групп, обозначенных, соответственно, для каждой переменной. Поэтому данное изобретение включает все сочетания таких вариантов в свой объем.

Хотя конкретные группы для каждого варианта в общем были по-отдельности перечислены выше, соединение в соответствии с данным изобретением включает такое, для которого одна или более переменных (например, R группы) выбирают из одного или более вариантов согласно любой из формул, перечисленных выше. Поэтому данное изобретение включает все сочетания переменных из любого из описанных вариантов в свой объем.

Альтернативно, исключение одной или более указанных переменных из группы или варианта или их сочетаний также рассматривается в данном изобретении.

В определенных аспектах в данном изобретении представлены пролекарства и производные соединений указанных выше формул. Пролекарства представляют собой производные соединений в соответствии с данным изобретением, которые имеют метаболически отщепляемые группы и в результате сольволиза или в физиологических условиях становятся соединениями в соответствии с данным изобретением, которые фармацевтически активны in vivo. Такие примеры включают, но не ограничены ими, производные холинового эфира и подобные, сложные эфиры N-алкилморфолина и подобные.

Другие производные соединений в соответствии с данным изобретением обладают активностью в форме кислоты и производного кислоты, но чувствительные к кислоте формы часто обладают преимуществами растворимости, совместимости с тканями или замедленного выделения в организме млекопитающего (Bundgaard, 1985). Пролекарства включают производные кислоты, хорошо известные в данной области техники, такие как, например, сложные эфиры, полученные взаимодействием исходной кислоты с подходящим спиртом или амидами, полученными реакцией соединения исходной кислоты с замещенным или не замещенным амином и ангидридами кислоты или смешанными ангидридами. Простые алифатические или ароматические сложные эфиры, амиды и ангидриды, полученные из кислотных групп, принадлежащих соединениям в соответствии с данным изобретением, являются предпочтительными пролекарствами. В некоторых случаях желательно получать пролекарства типа двойного сложного эфира, такие как сложные эфиры (ацилокси)алкила или сложные эфиры ((алкоксикарбонил)окси)алкила. Особенно полезными являются сложные эфиры C₁-C₈ алкила, C₂-C₈ алкенила, арила, C₇-C₁₂ замещенного арила и C₇-C₁₂ арилалкила соединений в соответствии с данным изобретением.

Части формулы изобретения

1) Соединение формулы I

где

R¹ является

C_3-7 моно или спироциклическим циклоалкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

4-7-членным моно- или спироциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами,

5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S и необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами, или

C_1-6 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами,

каждый R² выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-OC(=O)C_1-4 алкила,

-C(=O)-C_1-4 алкоксиа,

оксо,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a), и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a),

каждый R³ выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_1-4 алкенила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_3-7 циклоалкила,

4-7-членного моноциклического гетероциклоалкила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S,

4-7-членного моноциклического гетероциклоалкенила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S,

5-10-членного моноциклического или конденсированного бициклического гетероарила, содержащнго один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, и

-NHSO₂-C_1-4 алкила;

каждый R⁴ выбирают из

гало,

-OH,

C_3-7 циклоалкила,

-CN, и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5c),

каждый R^5a, R^5b и R^5c независимо выбирают из

гало,

-OH,

-OP(=O)₂OH,

-CN,

-NR^6aR^6b, и

C_1-4 алкокси; и

каждый R^6a или R^6b независимо выбирают из H и C_1-4 алкила;

или его фармацевтически приемлемая соль или сольват или фармацевтически приемлемая соль его сольвата.

2) Соединение формулы I:

где

R¹ является

C_3-7 циклоалкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R² группами,

4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами, или

C_6-10 моно- или бициклическим арилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами,

5-10-членным моно- или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S и необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами,

C_1-6 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами,

каждый R² выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-OC(=O)C_1-4 алкила,

-C(=O)-C_1-4 алкокси,

оксо,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a), и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5a),

каждый R³ выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

C_1-4 алкила (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5b),

C_3-7 циклоалкила,

5-10-членного моно- или конденсированного бициклического гетероарила, содержащего один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, и

-NHSO₂-C_1-4 алкила;

каждый R⁴ выбирают из

гало,

-OH,

-CN, и

C_1-4 алкокси (необязательно замещенного одной или более независимо выбранными R^5c),

каждый R^5a, R^5b и R^5c независимо выбирают из

гало,

-OH,

-CN,

-NR^6aR^6b, и

C_1-4 алкокси;

каждый R^6a или R^6b независимо выбирают из H и C_1-4 алкила;

или его фармацевтически приемлемая соль или сольват или фармацевтически приемлемая соль его сольвата.

3) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является C_3-7 моно- или спироциклическим циклоалкилом.

4) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является C_3-7 моно- или спироциклическим циклоалкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R² групп.

5) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 3 или 4, где R¹ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом.

6) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 4, где R² выбирают из F, Cl, CN, оксо и OH.

7) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 4, где R² является C_1-4 алкилом или C_1-4 алкокси, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a.

8) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 7, где R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃,-OCH₃ или -OCH₂-CH₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a.

9) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 7 или 8, где R^5a является F, Cl, OH, CN или -OCH₃.

10) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является 4-7-членным моно- или спироциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из O, N и S, замещенным одной или более независимо выбранными R² группами.

11) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 10, где R¹ является пирролидинилом, тетрагидрофуранилом, тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом.

12) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 10, где R² является F, Cl, CN, оксо или OH.

13) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 10, где R² является -OC(=O)CH₃.

14) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 10, где R² является C_1-4 алкилом или C_1-4 алкокси, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a.

15) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 10, где R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -OCH₃ или -OCH₂-CH₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5a.

16) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 14 или 15, где R^5a является F, Cl, OH, CN или -OCH₃.

17) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом.

18) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является C_6-10 моноциклическим или бициклическим арилом, замещенным одной или более независимо выбранными R³ группами.

19) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 17 или 18, где R¹ является фенилом.

20) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 18, где R³ является F, Cl, OH или CN.

21) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 18, где R³ является C_1-4 алкилом или C_1-4 алкокси, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b.

22) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 18, где R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -OCH₃ или -OCH₂-CH₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b.

23) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 21 или 22, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃.

24) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 18, где R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b.

25) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 18, где R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃), -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b.

26) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 21 или 22, где R^5b является F, Cl, OH, CN или -OCH₃.

27) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 18, где R³ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом.

28) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 18, где R³ является 5-6-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S.

29) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 25, где R³ является пирразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиримидилом или пиразинилом.

30) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 25, где R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S.

31) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 25, где R³ является тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом.

32) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 25, где R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкенилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S.

33) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 25, где R³ является дигидропиранилом или тетрагидропиридинилом.

34) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 25, где R³ является -NHSO₂-C_1-4 алкилом.

35) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является 5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S.

36) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является 5-10-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, замещенных одной или более независимо выбранными R³ группами.

37) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 35 или 36, где R¹ является фуранилом, тиофенилом, пиразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиридазинилом, пиримидилом или пиразинилом.

38) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 36, где R³ является F, Cl, OH или CN.

39) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 36, где R³ является C_1-4 алкилом или C_1-4 алкокси, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранных R^5b.

40) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 36, где R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -OCH₃ или -OCH₂-CH₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, и R^5b такая, как описана в пункте 1.

41) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 39 или 40, где R^5b является F, Cl, OH, -OP(=O)₂OH, CN или -OCH₃.

42) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 36, где R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранными R^5b.

43) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 36, где R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b.

44) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 42 или 43, где R^5b является F, Cl, OH, -CN или -OCH₃.

45) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 36, где R³ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом.

46) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 45, где R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O или S.

47) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 46, где R³ является тетрагидропиранилом, пиперидинилом, пиперазинилом, морфолинилом или тиоморфолинилом.

48) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 45, где R³ является 4-7-членным моноциклическим гетероциклоалкенилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S.

49) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 48, где R³ является дигидропиранилом или тетрагидропиридинилом.

50) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 36, где R³ является 5-6-членным моноциклическим или конденсированным бициклическим гетероарилом, содержащим один или более гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S.

51) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 46, где R³ является пирразолилом, имидазолилом, тиазолилом, оксазолилом, пиридинилом, пиримидилом или пиразинилом.

52) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 or 2, где R¹ является C_1-6 алкилом.

53) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является C_1-6 алкилом, замещенным одной или более независимо выбранными R⁴ группами.

54) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пунктам 52 или 53, где R¹ является -CH₃, -CH₂-CH₃,-CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -C(CH₃)₂-CH₃ или -CH(CH₃)-CH(CH₃)₂.

55) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 53, где R⁴ является F, Cl, OH или CN.

56) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 53, где R⁴ является C_3-7 моноциклическим циклоалкилом.

57) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 56, где R⁴ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом.

58) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 53, где R⁴ является C_1-4 алкокси, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5c.

59) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 58, где R⁴ является -OCH₃, -OCH₂-CH₃ или -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5c.

60) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 58 или 59, где R^5c является F, Cl, OH, -CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃,-NH(CH₃) или -N(CH₃)₂.

61) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является

где R^4a является C_1-5 алкилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранных гало, CN, C_1-4 алкокси, или C_3-7 моноциклическим циклоалкилом.

62) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 61, где R^4a является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂CH(CH₃)₂ или -CH₂C(CH₃)₃, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, циклопропилом, циклобутилом или циклопентилом.

63) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где R¹ является

где R^4b является C_3-7 моноциклическим циклоалкилом. В конкретном варианте, R^4b является циклопропилом, циклобутилом или циклопентилом. В более конкретном варианте, R^4b является циклопропилом.

64) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где соединение имеет формулу IIa или IIb:

где R³ такой, как описан в пункте 1, и индекс n равен 0, 1 или 2.

65) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 64, где индекс n равен 0.

66) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 64, где индекс n равен 1 или 2, где R³ выбирают из гало, CN и OH.

67) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 64, где индекс n равен 1 или 2, где R³ является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

68) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 64, где индекс n равен 1 или 2, где R³ является -OCH₃, -OCH₂CH₃, -OCH(CH₃)₂, каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b, где R^5b является F, Cl, OH, CN, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -NHCH₃, -N(CH₃)₂, -NH(CH₂-CH₃), -N(CH₂-CH₃)CH₃ или -N(CH₂-CH₃)₂.

69) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 64, где R³ является C_2-4 алкенилом, необязательно замещенным одной или более независимо выбранных R^5b.

70) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 64, где R³ является -CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH=CH-CH₂CH₃, -CH₂-CH=CH-CH₃, -CH₂-CH₂-CH=CH₂, -C(CH₃)=CH₂, -CH=CH(CH₃) или -C(CH₃)=CH(CH₃), каждый из которых необязательно замещен одной или более независимо выбранными R^5b.

71) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 69 или 70, где R^5b является F, Cl, OH, CN или -OCH₃.

72) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 69, где R³ является -CH=CH-CH₂-OCH₃, -CH=CH-CH₂-OCH₂CH₃, -CCH₃=CH-CH₂-OCH₃ или -CH=CCH₃-CH₂-OCH₂CH₃.

73) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 64, где индекс n равен 1 или 2, где R³ является циклопропилом, циклобутилом, циклопентилом или циклогексилом.

74) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 1 или 2, где соединение имеет формулу IIIa или IIIb:

где R² такой, как описан в пункте 1.

75) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 74, где R² выбирают из F, Cl, CN, оксо и OH.

76) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 74, где R² является -CH₃, -CH₂CH₃, -CH(CH₃)₂, -C(CH₃)₃, -CH₂-OH, -C(OH)(CH₃)₂, -CF₃, -CH₂-CHF₂, -CH₂CH₂OCH₃ или -CH₂CH₂N(CH₃)₂.

77) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по пункту 74, где R² является -OCH₃, -OCH₂-CH₃, O-CF₃, -OCH₂-CHF₂, -OCH₂CH₂OCH₃ или -OCH₂CH₂N(CH₃)₂.

78) Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество соединения по любому из пунктов 1-77.

79) Фармацевтическая композиция по пункту 54, содержащая другой терапевтический агент.

80) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пунктов 1-77 или фармацевтическая композиция по пункту 78 или 79 для применения в медицине.

81) Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пунктов 1-77 или фармацевтическая композиция по пункту 78 или 79 для применения для лечения кистозного фиброза.

82) Способ лечения кистозного фиброза, включающий количество соединения по любому из пунктов 1-77 или фармацевтической композиции по пункту 78 или 79, достаточное для проведения такого лечения.

83) Применение по пункту 81 или способ по пункту 80, где кистозный фиброз вызван мутациями I, II, III, IV и/или VI класса.

84) Применение или способ по пункту 83, где мутацией I класса является G452X; и/или W1282X.

85) Применение или способ по пункту 83, где мутацией II класса является F508del и/или N1303K.

86) Применение или способ по пункту 83, где мутацией III класса является G551D, R553G, G1349D, S1251N, G178R и/или S549N.

87) Применение или способ по пункту 83, где мутацией IV класса является R117H и/или R334W.

88) Применение или способ по пункту 83, где мутацией VI класса является Rescued F508del.

89) Способ по пункту 82, где соединение по по любому из пунктов 1-75 или фармацевтическая композиция по любому из пунктов 78 или 79 вводят в сочетании с другим терапевтическим агентом.

90) Фармацевтическая композиция по пункту 79 или способ по пункту 89, где другим терапевтическим агентом является агент для лечения кистозного фиброза.

Фармацевтические композиции

При применении в качестве лекарственного средства, соединение в соответствии с данным изобретением обычно вводят в форме фармацевтической композиции. Такие композиции могут быть получены методами, хорошо известными в фармацевтике и содержат, по крайней мере, одно активное соединение в соответствии с данным изобретением формулы I. В общем, соединение в соответствии с данным изобретением вводят в фармацевтически эффективном количестве. Количество соединения в соответствии с данным изобретением, вводимое фактически, определяется терапевтом с учетом соответствующих обстоятельств, включая лечимое состояние, выбранный путь введения вводимое соединение в соответствии с данным изобретением, возраст, массу тела и реакцию конкретного пациента, тяжесть симптомов пациента и подобные.

Фармацевтические композиции в соответствии с данным изобретением могут вводиться множеством способов, включая пероральный, ректальный, чрезкожный, подкожный, внутрисуставный, внутривенный, внутримышечный и интраназальный. В зависимости от предполагаемого способа введения, соединение в соответствии с данным изобретением предпочтительно составляют либо в виде композиций для инъекций, либо в виде пероральных композиций, либо в виде мазей, лосьонов или пластырей для чрезкожного введения.

Композиции для перорального введения могут принимать форму жидких растворов или суспензий или порошков. Более часто, однако, композиции присутствуют в стандартных лекарственных формах для обеспечивания точной дозировки. Термин ‘стандартная лекарственная форма’ относится к физически отдельным единицам, подходящим в качестве разовых доз для человека и млекопитающих, где каждая форма содержит предопределенное количество активного вещества, рассчитанное так, чтобы получить желаемый терапевтический эффект, в сочетании с подходящим фармацевтическим наполнителем или носителем. Типовые стандартные лекарственные формы включают предварительно заполненные, предварительно отмеренные ампулы или шприцы с жидкими композициями, или пилюли, таблетки, капсулы или подобные с твердыми композициями. В таких композициях соединение в соответствии с данным изобретением формулы I обычно находится в незначительных количествах (от около 0,1 до около 50% массовых или, предпочтительно, от около 1 до около 40% массовых), где оставшийся объем занимают различные носители или наполнители и технологические добавки, помогающие формировать желаемую лекарственную форму.

Жидкие формы, подходящие для перорального введения, могут включать подходящие водные и не водные носители с буферами, суспендирующие и диспергирующие агенты, красители, вкусовые добавки и подобные. Твердые формы могут включать, например, любые из следующих ингредиентов или соединение из изобретений похожей природы: связующий агент, такой как микрокристаллическая целлюлоза, трагакант или желатин; наполнитель, такой как крахмал или лактоза, разрыхляющие агент, такой как альгиновая кислота, Примогель или кукурузный крахмал; смазывающий агент, такой как стеарат магния; глидант, такой как коллоидная двуокись кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или вкусовая добавка, такая как вкус перечной мяты или апельсина.

Композиции для инъекций обычно основаны на стельном физиологическом растворе или физиологическом растворе с фосфатным буфером для инъекций или других носителей для инъекций, известных в данной области техники. Как и выше, активное соединение в соответствии с данным изобретением формулы I в таких композициях обычно содержится в незначительных количествах, часто от около 0,05 до 10% массовых, и остаток составляют носитель для инъекций и подобные.

Чрезкожные композиции обычно составляют в виде мази или крема для местного применения, содержащих активные ингредиенты, обычно в количестве от около 0,01 до около 20% массовых, предпочтительно, от около 0,1 до около 20% массовых, предпочтительно, от около 0,1 до около 10% массовых, и более предпочтительно, от около 0,5 до около 15% массовых. Если композиция имеет форму мази, активные ингредиенты обычно объединяют либо с парафиновой, либо со смешиваемой с водой основной для мази. Альтернативно, активные ингредиенты согут быть составлены в виде крема с, например основной для крема «масло в воде». Такие чрезкожные композиции хорошо известны в данной области техники и обычно включают дополнительные ингредиенты для улучшения проникновения в кожу, стабильности активных ингредиентов или композиции. Все такие известные чрезкожные композиции и ингредиенты включены в объем данного изобретения.

Соединение в соответствии с данным изобретением также может вводиться с применением чрезкожного устройства. Следовательно, чрезкожное введение может осуществляться с применением пластыря типа резервуара или пористой мембраны, или разновидности твердой матрицы.

Описанные выше компоненты для перорально вводимых, вводимых инъекцией или местно вводимых композиций являются только типовыми. Другие материалы и методы обработки и подобные указаны в Части 8 Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17^th edition, 1985, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, которая включена сюда в качестве ссылки.

Соединение в соответствии с данным изобретением также может вводиться через формы с замедленным выделением или через системы доставки лекарственных средств с замедленным выделением. Описание типовых материалов замедленного выделения можно найти в Remington’s Pharmaceutical Sciences (Remington, 1985).

Следующие примеры композиций иллюстрируют типовые фармацевтические композиции, которые могут быть получены в соответствии с данным изобретением. Данное изобретение, однако, не ограничено следующими фармацевтическими композициями.

Композиция 1 - Таблетки

Соединение в соответствии с данным изобретением формулы I может быть смешано в виде сухого порошка с сухим желатиновым связующим агентом в массовом соотношении приблизительно 1:2. Незначительно количество стеарата магния может быть добавлено в качестве смазывающего агента. Смесь может быть сформована в 240-270 мг таблетки (80-90 мг активного соединения в соответствии с данным изобретением формулы I на таблетку) в таблетировочном прессе.

Композиция 2 - Капсулы

Соединение в соответствии с данным изобретением формулы I может быть смешано в виде сухого порошка с крахмальным разбавителем в массовом соотношении приблизительно 1:1. Смесь может быть наполнена в 250 мг капсулы (125 мг активного соединения в соответствии с данным изобретением формулы I на капсулу).

Композиция 3 - Жидкость

Соединение в соответствии с данным изобретением формулы I (125 мг) может быть смешано с сахарозой (1,75 г) и ксантановой камедью (4 мг), и полученная смесь может быть смешана, пропущена через сито № 10 меш U.S. и затем смешана с предварительно полученным раствором микрокристаллической целлюлозы и карбоксиметилцеллюлозы натрия (11:89, 50 мг) в воде. Бензоат натрия (10 мг), вкусовая добавка и краситель могут быть растворены в воде и добавлены при перемешивании. Достаточное количество воды может быть добавлено при перемешивании. Дополнительное достаточное количество воды может быть затем добавлено для получения общего объема 5 мл.

Композиция 4 - Таблетки

Соединение в соответствии с данным изобретением формулы I может быть смешано в виде сухого порошка с сухим желатиновым связующим агентом в массовом соотношении приблизительно 1:2. Незначительно количество стеарата магния может быть добавлено в качестве смазывающего агента. Смесь может быть сформована в 450-900 мг таблетки (150-300 мг активного соединения в соответствии с данным изобретением формулы I на таблетку) в таблетировочном прессе.

Композиция 5 - Инъекция

Соединение в соответствии с данным изобретением формулы I может быть растворено или суспендировано в водной среде для инъекций на основе буферированного стерильного физиологического раствора до концентрации приблизительно 5 мг/мл.

Композиция 6 - Местная

Стеариловый спирт (250 г) и белый вазелин (250 г) могут быть расплавлены при температуре около 75°С, и затем может быть добавлена смесь A соединения в соответствии с данным изобретением формулы I (50 г) метилpпарабена (0,25 г), пропилпарабена (0,15 г), лаурилсульфата натрия (10 г) и пропиленгликоля (120 г), растворенная в воде (около 370 г), и полученная смесь может перемешиваться до тех пор. пока она не станет твердой.

Способы лечения

В одном варианте, в данном изобретении представлены соединения в соответствии с данным изобретением или фармацевтические композиции, содержащие соединение в соответствии с данным изобретением, для применения в медицине. В конкретном варианте, в данном изобретении представлены соединения в соответствии с данным изобретением или фармацевтические композиции, содержащие соединение в соответствии с данным изобретением для применения в лечении кистозного фиброза. В более конкретном варианте, кистозный фиброз вызывается мутацией I, II, III, IV и/или VI класса.

В другом варианте, в данном изобретении представлены соединения в соответствии с данным изобретением или фармацевтические композиции, содержащие соединением в соответствии с данным изобретением для применения в производстве лекарственного средства для использования в лечении кистозного фиброза. В более конкретном варианте, кистозный фиброз вызывается мутацией I, II, III, IV и/или VI класса.

В одном варианте, в данном изобретении представлены фармацевтические композиции, содержащие соединение в соответствии с данным изобретением и другой терапевтический агент. В конкретном варианте, другим терапевтическим агентом является агент для лечения кистозного фиброза. В более конкретном варианте, кистозный фиброз вызывается мутацией I, II, III, IV и/или VI класса.

В дополнительных аспектах способа лечения в соответствии с данным изобретением, в данном изобретении представлены способы лечения млекопитающего, пораженного кистозным фиброзом, где способы включают введение эффективного количества соединения в соответствии с данным изобретением или одной или более описанных фармацевтических композиций пациенту, нуждающемуся в таковом. В более конкретном варианте, кистозный фиброз вызывается мутацией I, II, III, IV и/или VI класса.

Соединение в соответствии с данным изобретением может вводиться в качестве единственного активного агента, или оно может вводиться в сочетании с другими терапевтическими агентами, включая другие соединения, которые обладают такой же или подобной терапевтической активностью, и которые признаны безопасными и эффективными для такого комбинированного ведения. В конкретном варианте, совместное введение двух (или более) агентов позволяет значительно снизить дозы каждого применяемого агента, тем самым снижая побочные эффекты.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением или фармацевтическую композицию, содержащую соединение в соответствии с данным изобретением, вводят в качестве лекарственного средства. В конкретном варианте, указанная фармацевтическая композиция дополнительно содержит другой активный ингредиент.

В одном варианте, соединение в соответствии с данным изобретением совместно вводят с другим терапевтическим агентом для лечения кистозного фиброза, где конкретные агенты включают, но не ограничены ими, антибиотики (например аминогликозиды, колистин, азтреонам, ципрофлоксацин, азитромицин), отхаркивающие средства (например, гипертонический физиологический раствор, ацетилцистеин, дорназа альфа, денуфозол), МТРП корректоры (например, VX-809, VX-661, VX-983), добавки к панкреатическому ферменту (например, панкреатин, панкрелипаза).

Совместное введение включает любые средства добавки двух или более терапевтических агентов пациенту в качестве части одного и того же режима лечения, что очевидно специалисту в данной области техники. Хотя два или более агентов могут вводиться одновременно, в одной композиции, это не является существенным. Агенты могут вводиться в различных композициях и в разное время.

Методики химического синтеза

Общие положения

Соединения в соответствии с данным изобретением могут быть получены из легкодоступных исходных материалов с применением представленных ниже общих способов и методик. Должно быть понятно, что если даны типовые или предпочтительные условия процесса (т.е. температуры реакции, время, мольные соотношения реагентов, растворители, давление и т.д.), другие условия процесса также могут применяться, если не указано иначе. Оптимальные условия реакции могут варьироваться в зависимости от конкретных применяемых реагентов или растворителей, но такие условия могут быть определены специалистом в данной области техники в процессе обычной оптимизации.

Дополнительно, как очевидно специалисту в данной области техники, обычные защитные группы могут быть необходимы для защиты определенных функциональных групп от нежелательных реакций. Выбор подходящей защитной группы для конкретной функциональной группы, а также подходящих условий для защиты и снятия защиты хорошо известны в данной области техники (Wuts and Green, 2012).

Представленные ниже способы иллюстрируют подробно получение соединения в соответствии с данным изобретением, определенного выше, и сравнительных примеров. Соединение в соответствии с данным изобретением может быть получено из известных или коммерчески доступных исходных материалов и реагентов специалистом в области органического синтеза.

Все реагенты имеют коммерческую степень очистки, и их применяют такими, как они получены без дальнейшей очистки, если не указано иначе. Коммерчески доступные безводные растворители применяют для реакций, проводимых в инертной атмосфере. Химически чистые растворители применяют во всех остальных случаях, если не указано иначе. Хроматографию на колонке проводят на силикагеле 60 (35-70 мкм). Тонкослойную хроматографию проводят с применением предварительно покрытых силикагелем F-254 планшетов (толщина 0,25 мм). ¹H ЯМР спектры записывают на спектрометре Bruker DPX 400 NMR (400 МГц) или на спектрометре Bruker Advance 300 NMR (300 МГц). Химические сдвиги (δ) для 1H ЯМР спектра записывают в частях на миллион (ч./млн.) по отношению к тетраметилсилану (δ 0,00) или подходящему пику остаточного растворителя, т.е. CHCl₃ (δ 7,27), в качестве внутренней ссылки. Множества даны в виде синглета (с), дублета (д), триплета (т), квартета (кв), квинтиплета (квин), мультиплета (м) и широкого (ш). Спектр электрораспыления МС получают на спектрометре Waters platform LC/MS или на Waters Acquity H-Class UPLC, соединенном со спектрометром Waters Mass detector 3100. Применяемые колонки: Waters Acquity UPLC BEH C18 1,7 мкм, 2,1 мм ВД×50 мм Д, Waters Acquity UPLC BEH C18 1,7 мкм, 2,1 мм ВД×30 мм Д или Waters Xterra MS 5мкм C18, 100×4,6 мм. В способах применяют либо MeCN/H₂O градиенты (H₂O содержит либо 0,1% ТФК, либо 0,1% NH₃), либо MeOH/H₂O градиенты (H₂O содержит 0,05% ТФК). Микроволновое нагревание проводят с помощью Biotage Initiator.

Рацемические смеси разделяют на системе Agilent HP1100 с УФ детектором. Применяемая колонка: Chiralpak 1A (10×250 мм, 5 мкм). Применяемые растворители: iPrOH и тБМЭ. Альтернативно, разделение проводят с применением системы SFC2. Применяемая колонка: Lux Cellulose-4. Применяемые растворители: CO₂ и MeOH. Энантиомерную чистоту определяют на системе Agilent HP1100 с УФ детектором. Применяемая колонка: Chiralpak IA (4,6×250 м, 5 мкм). Применяемые растворители: iPrOH и тБМЭ.

Список аббревиатур, применяемых в экспериментальном разделе:

Аббревиатура	Определение
ДХМ	Дихлорметан
ДИЭА	N,N-диизопропилэтиламин
MeCN	Ацетонитрил
ДМФ	N,N-диметилформамид
Кат.	Каталитическое количество
ТФК	Трифторуксусная кислота
ТГФ	Тетрагидрофуран
ЯМР	Ядерный магнитный резонанс
ДМСО	Диметилсульфоксид
ЖХ-МС	Жидкостная хроматография – масс спектрометрия
EtOAc	этилацетат
ХИАД	Химическая ионизация при атмосферном давлении
Ву	Время удержания
с	синглет
шс	широкий синглет
м	мультиплет
мин	минута
мл	миллилитр
мкл	микролитр
г	грамм
мг	миллиграмм
ПП-КДИ	карбодиимид на полимерной подложке
ПП-тризамин	тризамин на полимерной подложке
ТЭА	Триэтиламин
ммоль	миллимоль
ЖХВД	Жидкостная хроматография высокого давления
NMP	N-Метилпирролидон
AcCl	Ацетилхлорид
ч./млн.	частей на миллион
ГОБт	N-гидроксибензо-триазол
ЭДК	1-Этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид
Pd2(dba)3	Трис(дибензилиден-ацетон)дипалладий (0)
XPhos	2-дициклогексил-фосфино-2′,4′,6′-триизопропилбифенил
Соед.	Соединение
Спос.	Способ
Пр.с.	Промежуточное соединение
ММ	Молекулярная масса
ИММ	Измеренная молекулярная масса
НА	Не активный
Pd(dppf) Cl2.ДХМ	1,1'-Бис(дифенилфосфино)ферроцен-палладий(II) дихлорид дихлорметан
мкм	микрометр
тБМЭ	трет-Бутилметиловый эфир
iPrOH	изо-Пропанол
SEM-Cl	2-(Триметилсилил) этоксиметил хлорид
DIBAL-H	Гидрид диизобутилалюминия
ДМА	диметилацетамид
NaOEt	Этоксид натрия
хир. разд.	Хиральное разделение
tBuOLi	трет-бутоксид лития

Синтез соединения в соответствии с данным изобретением

Пример 1. Общие методы синтеза

Соединения в соответствии с данным изобретением и сравнительные примеры могут быть получены по следующим схемам.

Схема 1: Синтез основной молекулы и дальнейшее сочетание с амидом

Схема 2: синтез 4-замещенные производных пиразола

Схема 3: синтез 3-замещенных производных пиразола

Пример 2. Синтез промежуточных соединений

Промежуточное соединение 2: 2,2,6,6-тетраметилтетрагидро-4H-пиран-4-он

Форон или 2,6-диметил-2,5-гептадиен-4-он (1 экв.) смешивают с водным раствором 1 M HCl, и полученную эмульсию перемешивают с 40°C в течение 6 дней. Водную фазу экстрагируют ДХМ, и органическую фазу концентрируют и очищают дистилляцией с получением желаемого продукта.

Альтернативный синтез промежуточного соединения 2

В 20-литровый реактор загружают водный 6M HCl и нагревают до 30°C. Расплавленный Форон добавляют при энергичном перемешивании при 40°C в течение до 3 ч до завершения. Полученный раствор затем охлаждают до 30°C и экстрагируют 4×1 л ДХМ. Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором NaHCO₃ (400 мл) и сушат над Na₂SO₄. Полученную неочищенную смесь затем концентрируют в вакууме и, наконец, очищают дистилляцией.

Промежуточное соединение 3: амид 2-амино-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоновой кислоты

В колбу, содержащую 2,2,6,6-тетраметилтетрагидро-4H-пиран-4-он (Пр.с. 2, 1 экв.) добавляют цианоацетамид (1 экв.), серу (0,9 экв.) и диэтиламин (1,1 экв.). Затем добавляют EtOH, и полученную смесь перемешивают при 40°C в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют водой и частично концентрируют выпариванием, что вызывает выпадение в осадок твердого вещества, которое отделяют фильтрацией. Лепешку затем промывают водой и гексаном с получением желаемого продукта.

Альтернативный синтез 1 промежуточного соединения 3

Начиная с 2,2,6,6-тетраметилтетрагидро-4H-пиран-4-она (Пр.с. 2, 1 экв.), цианоацетамид (1,1 экв.) и морфолин (1,5 экв.) нагревают в EtOH при 80°C в инертной атмосфере. Через 6 ч нагревания смесь охлаждают и добавляют серу (1,1 экв.). Затем смесь нагревают при 80°C в течение ночи, затем концентрируют в вакууме и экстрагируют насыщенным NH₄Cl и NaHCO₃. Органическую фазу затем сушат над MgSO₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток затем очищают хроматографией на колонке.

Альтернативный синтез 2 промежуточного соединения 3

В 20-литровый стеклянный реактор с механической мешалкой (400 об/мин) и дефлегматором загружают 2,2,6,6-тетраметилтетрагидро-4H-пиран-4-он (Пр.с. 2) (1,466 кг, 9,01 моль, 1 экв.) и 2-цианоацетамид (1,363 кг, 1,8 экв.), затем абсолютный EtOH (4,5 L) и морфолин (0,706 кг, 0,9 экв.). Полученную суспензию нагревают в течение 23 ч при 75°C (внутренняя температура). Через 23 ч добавляют серу (0,26 кг, 0,9 экв.) одной порцией при 75°C, и полученную суспензию перемешивают в течение еще 90 мин, после чего полученный раствор охлаждают до 20°C. Затем весь раствор концентрируют в вакууме (50 мбар/45°C) с получением твердого остатка. Воду (13,5 л) добавляют одной порцией при 75°C, и смесь охлаждают до 22°C. Перемешивание (700 об/мин при 22°C) продолжают в течение 2,5 ч. Твердые вещества разделяют фильтрацией, сушат вакуум-отсосом и затем в вакуумной печи при 40°C в течение более 3 дней с получением желаемого продукта.

Промежуточное соединение 7: Этиловый эфир 5-ацетил-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты

Бут-3-ин-2-он (Пр.с. 5, 1 экв.) и этиловый эфир диазоуксусной кислоты (Пр.с. 6, 1,1 экв.) добавляют в раствор InCl₃ (0,2 экв.) в воде и перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре, смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Полученную органическую фазу сушат и выпаривают с получением желаемого продукта.

Промежуточное соединение 9: этиловый эфир 5-гидрокси-2H-пиразол-3-карбоновой кислоты

Этиловый эфир 4,4,4-трихлор-3-оксомасляной кислоты (Пр.с. 8, 1 экв.) и H₂NNH₂.HCl (1,1 экв.) смешивают в EtOH. Полученную смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Смесь затем выпаривают, и полученный неочищенный остаток очищают хроматографией с получением Пр.с. 9 и этилового эфира 5-этокси-2H-пиразол-3-карбоновой кислоты (Пр.с. 10).

Промежуточное соединение 11: дипиразоло[1,5-a;1',5'-d]пиразин-4,9-дион

10 г (89 ммоль) пирразолкарбоновой кислоты суспендируют в толуоле, 100 мл, при комнатной температуре. Затем добавляют 2 эквивалента тионилхлорида, затем каталитическое количество ДМФ (0,5 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч при 75°С. Через 1 ч при 70°С, реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, твердый продукт собирают фильтрацией, промывают толуолом и повторно суспендируют в ДХМ. Добавляют триэтиламин (2 эквивалента), и суспензию перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Продукт собирают фильтрацией, промывают ДХМ и сушат при 40°С в вакууме с получением желаемого продукта.

Таблица 1 Иллюстративные промежуточные соединения к соединениям в соответствии с данным изобретением
Пр.с.	Структура	СС	ММ	ИММ
1		Коммерчески доступно	138	139
2		Коммерчески доступно или Пр.с. 1	156	157
3		Пр.с. 2	254	238
4		Коммерчески доступно	205	205-207
5		Коммерчески доступно	68	НА
6		Коммерчески доступно	114	НА
7		Пр.с. 5, Пр.с. 6	182	183
8		Коммерчески доступно	69	НА
9		Пр.с. 8	156	157
10		Пр.с. 8	184	185
11		Коммерчески доступно	188	_

Пример 3. Общие способы синтеза для получения соединений в соответствии с данным изобретением

Способ A1: Сочетание амида с хлоранигдридами

Аминотиофен (1 экв.) смешивают с ДХМ и пиридином (1,5 экв.). Эту смесь охлаждают на ледяной бане. Хлорангидрид (1,15 экв.), полученный Способом B или из коммерческого источника, растворяют в ДХМ и добавляют к этой смеси. После завершения добавления, ледяную баню удаляют и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 1-2 часа. Затем смесь выпаривают и остаток очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ A2: Сочетание Микаямы

В реакционный сосуд загружают аминотиофен (1 экв.), карбоновую кислоту (2 экв.), ДМАП (0,5 экв.), ТЭА (4 экв.) и йодид 2-хлор-1-метилпиридиния (2 экв.) в ДХМ. После перемешивания смеси при 50°C в течение 2 ч, смесь охлаждают, разбавляют ДХМ и промывают водный NaHCO₃. Органическую фазу сушат над MgSO₄. Выпаривание дает неочищенный остаток, который очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ A3: Образование первичного амида

Кислоту (1 экв.) растворяют в ДМФ и добавляют NH₄Cl (2 экв.), ТЭА (2 экв.), ГОБт (1,5 экв.) и ЭДК (1,5 экв.). Поученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляют EtOAc и промывают насыщенным раствором соли. Органическую фазу выпаривают, и полученный неочищенный остаток очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ A4: Сочетание амида со сложными эфирами

Амин (1 экв.) смешивают со сложным эфиром (10 экв.), и полученную смесь нагревают при высокой температуре (180°C или более) в микроволновой печи. Через 30 мин смесь разбавляют EtOAc и промывают насыщенным раствором соли. Выпаривание органической фазы дает остаток, который применяют на следующей стадии как есть.

Иллюстративный пример: метиловый эфир 2-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-2-илкарбамоил)масляной кислоты

Амин (100 мг, 0,39 ммоль) смешивают с диметиловым эфиром 2-этилмалоновой кислоты (0,6 мл, 3,99 ммоль) и полученную смесь нагревают при 180°C в микроволновой печи. Через 30 ми смесь разбавляют EtOAc и промывают насыщенным раствором соли. Выпаривание органической фазы дает остаток, который применяют, как есть.

Способ A5: Получение амида

Сложный эфир (1 экв.) смешивают с NH₄Cl (шпателем) и раствором NH₄OH. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре до завершения реакции. Смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Органический слой затем сушат и выпаривают. Желаемый продукт получают очисткой хроматографией.

Способ B: Получение хлорангидрида

Кислоту (1 экв.) растворяют в ДХМ, обрабатывают оксалилхлоридом (10 экв.) и несколькими каплями ДМФ. Смесь перемешивают при 45°C в герметично закрытой пробирке в течение 1,5 ч. Смесь затем выпаривают и неочищенный остаток применяют как есть.

Иллюстративный пример: 1-хлоркарбонилциклопропиловый эфир уксусной кислоты

Раствор 1-ацетоксициклопропанкарбоновой кислоты (100 мг, 0,69 ммоль) в ДХМ (1 мл) обрабатывают оксалилхлоридом (0,59 мл, 6,9 ммоль) и одной каплей ДМФ и затем перемешивают при 45°C в герметично закрытой пробирке в течение 1 ч. Растворитель и избыток оксалилхлорида выпаривают (несколько раз при промывании ДХМ) с получением хлорангидрида (72,7 мг), который применяют на следующей стадии как есть.

Способ B2: Получение хлорангидрида

Кислоту (1 экв.) растворяют в ДХМ и обрабатывают оксалилхлоридом (10 экв.) и несколькими каплями ДМФ. Смесь перемешивают при 45°C в герметично закрытой пробирке в течение 1,5 ч. Смесь затем выпаривают и неочищенной применяют как есть.

Способ C1: Защита ацетила гидроксильных кислот

Спирт (1 экв.) смешивают с пиридином (1,2 экв.) и ДХМ и полученный раствор охлаждают при 0°C. После добавления по каплям AcCl (1 экв.) смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, смесь затем промывают водным NH₄Cl, и водную фазу экстрагируют дважды ДХМ. Объединенные органические фазы сушат над MgSO₄, фильтруют и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: 1-ацетоксициклопропанкарбоновая кислота

Раствор 1-гидроксициклопропанкарбоновой кислоты (100 мг, 0,98 ммоль) и пиридина (100 мкл) в 3 мл ДХМ охлаждают до 0°C. Раствор ацетилхлорида (80 мкл, 1,18 ммоль) в 3 мл ДХМ затем по каплям добавляют в ледяную смесь. После добавления полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем смесь промывают насыщенным раствором NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют дважды ДХМ. Объединенные органические фазы объединяют, сушат над MgSO₄, фильтруют, и выпаривают с получением желаемого продукта, который применяют как есть.

Способ C2: TBS защита гидроксильной группы

Спирт (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ при 0°C. После добавления имидазола (1,4 экв.) и TBSCl (1,2 экв.) раствор перемешивают при 0°C в течение 30 мин. Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Выпаривание дает остаток, который растворяют в EtOAc. Эту органическую фазу экстрагируют NH₄Cl. Органическую фазу затем сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: этиловый эфир 1-(трет-Бутил-диметилсиланилоксиметил)циклобутанкарбоновой кислоты

Спирт (400 мг, 2,5 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (4 мл). Раствор охлаждают до 0°C и добавляют имидазол (238 мг, 3,5 ммоль) и TBSCl (457 мг, 3,0 ммоль). Через 30 мин смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь затем концентрируют в вакууме, и остаток повторно растворяют в EtOAc. Эту органическую фазу экстрагируют NH₄Cl. Органическую фазу затем сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: 3-(трет-Бутил-диметилсиланилокси)масляная кислота

3-Гидроксимасляную кислоту (500 мг, 4,8 ммоль) растворяют в смеси TBSCl (1,5 г, 10,1 ммоль) в сухом ДХМ (48 мл). Полученную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Полученную суспензию затем фильтруют, и полученные остатки промывают ДХМ, затем перемешивают в Et₂O и фильтруют. Полученный фильтрат выпаривают с получением желаемого продукта, который применяют как есть.

Способ C3: SEM защита пиразолов

Пиразол (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ при 0°C. После добавления NaH (1,5 экв.) смесь перемешивают при 0°C в атмосфере N₂ в течение 30 мин. Затем медленно добавляют SEM-Cl (1,5 экв.) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь гасят водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выделяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: метиловый эфир 4-бром-1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты

Пиразол (Пр.с. 4, 2 г, 9,76 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (20 мл) при 0°C. После добавления NaH (60% масс., 584 мг, 14,6 ммоль) смесь перемешивают при 0°C в атмосфере N₂ в течение 30 мин. Затем медленно добавляют SEM-Cl (2,58 мл, 14,6 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь гасят водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выделяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Способ C4: SEM защита спиртов

Спирт (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ при 0°C. После добавления NaH (1,3 экв.) смесь перемешивают при 0°C в атмосфере N₂ в течение 30 мин. Затем медленно добавляют SEM-Cl (1,2 экв.) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Если остается исходный материал, добавляют еще NaH и SEM-Cl. Наконец, смесь гасят водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выделяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: метиловый эфир 1-метил-5-(2-триметилсиланилэтоксиметоксиметил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты

Начиная с коммерчески доступного спирта (170 мг, 1 ммоль), получают раствор в сухом ТГФ (2 мл) при 0°C. После добавления NaH (60% массовых, 44 мг, 1,3 ммоль), смесь перемешивают при 0°C в атмосфере N₂ в течение 30 мин. Затем медленно добавляют SEM-Cl (0,212 мл, 1,2 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют дополнительное количество NaH (22 мг, 0,65 ммоль) и SEM-Cl (0,1 мл, 0,6 экв.) и реакционную смесь перемешивают при 80°C в течение 4 ч. Наконец, смесь гасят водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выделяют, сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Способ D1: Снятие защиты с ацетила

Ацетиловый эфир (1 экв.) растворяют в MeOH и обрабатывают K₂CO₃ (2 экв.) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют еще K₂CO₃ (2 экв.) и полученную смесь нагревают при 60°C в течение еще 5 ч. Выпаривание дает остаток, который очищают препаративной хроматографией.

Вместо применения K₂CO₃ в MeOH, альтернативно, может применяться LiOH (3 экв.) в MeOH-воде.

Способ D2: Гидролиз сложного эфира

Сложный эфир (1 экв.) смешивают с LiOH (3 экв.) в смеси диоксан:воды (2:1). Смесь перемешивают при 40°C в течение 3 ч. Выпаривание дает водную фазу, которую подкисляют до pH=1. Полученную суспензию фильтруют с получением желаемого продукта в виде твердого вещества.

Желаемая кислота также может быть выделена экстрагированием с EtOAc или ДХМ. Сушка и выпаривание органического растворителя дает кислоту, которая может применяться как есть. Вместо LiOH также может применяться NaOH. Диоксан может быть замещен другими органическими растворителями, которые смешиваемы с водой, такими как MeOH или EtOH.

Иллюстративный пример: моноэтиловый эфир 2-трет-Бутил-малоновой кислоты

Коммерчески доступный диэтиловый эфир 2-трет-бутил-малоновой кислоты (1 г, 4,6 ммоль) растворяют в EtOH (7 мл). Добавляют 1N раствор NaOH (5,06 мл, 5,06 ммоль) и полученную смесь перемешивают при 40°C в течение ночи. Затем смесь подкисляют до pH=1 добавлением HCl. Экстрагирование EtOAc дает органическую фазу, которую сушат над MgSO₄, фильтруют и выпаривают с получением желаемого продукта.

Способ D3: Гидролиз до пиридона

2-Фторпиридин растворяют в смеси 6 M HCl_водн и диоксана. Смесь нагревают в течение 6 ч при 70°C. Выпаривание дает водную фазу, которую гасят насыщенным раствором K₂CO₃. Полученную суспензию фильтруют с получением твердого вещества, которое промывают водой. Растирание этого твердого вещества с MeOH дает желаемый продукт.

Способ D4: Снятие защиты TBS

Силиловый эфир (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ и этот раствор охлаждают при 0°C. Добавляют TBAF (1,1 экв.) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Раствор разбавляют насыщенным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выпаривают с получением остатка, который очищают препаративной хроматографией.

Иллюстративный пример: 2-(1-(гидроксиметил)циклобутанкарбоксамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамид

Силиловый эфир (474 мг, 0,99 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (1,5 мл) и этот раствор охлаждают при 0°C. Добавляют TBAF (1,09 мл 1 M раствора в ТГФ, 1,08 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Раствор разбавляют насыщенным раствором NH₄Cl и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выпаривают с получением остатка, который очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ D5: Снятие защиты SEM с пиразолов

Защищенный SEM пиразол (1 экв.) растворяют в ТГФ вместе с TBAF (1 M раствор в ТГФ, 3 экв.). Полученный раствор нагревают при 70°C в течение ночи в герметично закрытой СВЧ-пробирке в инертной атмосфере. Затем реакционную смесь выпаривают и полученный неочищенный остаток разбавляют EtOAc. Органическую фазу экстрагируют насыщенным раствором соли и выпаривают с получением остатка, который очищают препаративной хроматографией.

Иллюстративный пример: N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(3-метоксипропил)-1H-пиразол-3-карбоксамид

Защищенный SEM пиразол (25 мг, 0,046 ммоль) растворяют в ТГФ (1 мл) вместе с TBAF (1 M раствор в ТГФ, 136 мкл, 0,438 ммоль). Полученный раствор нагревают при 70°C в течение ночи в герметично закрытой СВЧ-пробирке в инертной атмосфере. Затем реакционную смесь выпаривают, и полученный неочищенный остаток разбавляют EtOAc. Органическую фазу экстрагируют насыщенным раствором соли и выпаривают с получением остатка, который очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ D6: Снятие защиты SEM со спиртов

Защищенный SEM спирт (1 экв.) растворяют в диоксане и к этой смеси добавляют 4M раствор HCl в диоксане (1 экв.). После перемешивания при 50°C в течение 1 ч смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают препаративной хроматографией.

Иллюстративный пример: N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-(гидроксиметил)-1-метилпиразол-3-карбоксамид

Защищенный SEM спирт (523 мг, 1 ммоль) растворяют в диоксане (10 мл) и к этой смеси добавляют 4 M раствор HCl в диоксане (0,25 мл, 1 ммоль). После перемешивания при 50°C в течение 1 ч смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают препаративной хроматографией.

Способ D7: Гидролиз сложного эфира

К раствору сложного эфира (1 экв.) в ТГФ:MeOH:H₂O добавляют LiOH (1 экв.). Полученную смесь перемешивают при 45°C. Затем реакционную смесь разбавляют водой и добавляют LiOH (1M раствор) до pH=10. Водный слой экстрагируют CH₂Cl₂, затем водную фазу подкисляют до pH=3 добавлением 1M раствора HCl. Экстрагированием EtOAc дает органическую фазу, которуют сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который применяют как есть.

Способ D8: гидролиз сложного эфира фосфата

Сложный эфир фосфата (1 экв.) растворяют в смеси ацетона и H₂O (1:1) и перемешивают при 40°C в течение ночи. Затем смесь частично выпаривают, и полученную водную фазу подщелачивают водным раствором NH₄OH. Этот раствор экстрагируют ДХМ. Затем водный раствор подкисляют с применением 12 M HCl в H₂O. Экстрагирование EtOAc дает органическую фазу, которую сушат и выпаривают. Полученный неочищенный продукт очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта. С помощью препаративной хроматографии 2 региоизомера могут быть разделены.

Способ D9: гидролиз сложного эфира

Сложный эфир добавляют к смеси 2 M HCl_водн.:диоксана (1:1). Полученную смесь нагревают при 70°C в течение ночи. Желаемый продукт может быть получен экстрагированием органических растворителей, таких как EtOAc или ДХМ. Альтернативно, желаемый продукт может быть получен выпариванием реакционной смеси и очисткой полученного неочищенного остатка хроматографией.

Способ D10: Снятие защиты SEM пиразолов с применением HCl

Защищенный SEM пиразол (1 экв.) растворяют в ТГФ и к этой смеси добавляют 4M раствор HCl в диоксане (3 экв.). Смесь перемешивают при 50°C. Когда реакция закончится, смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу сушат над Na₂SO₄, фильтруют и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ E₁: Восстановление сложного эфира с LiBH₄

Сложный эфир (1 экв.) взвешивают в колбе с LiBH₄ (3 экв.). Колбу помещают на ледяную баню с последующим добавлением сухого ТГФ. При добавлении растворителя смесь перемешивают при комнатной температуре. Через 4 ч добавляют еще 3 экв. LiBH₄, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакцию гасят 2 M HCl. Органический растворитель выпаривают, и полученную смесь экстрагируют ДХМ. Органическую фазу концентрируют в вакууме и остаток очищают препаративной хроматографией.

Иллюстративный пример: 2-(1-(гидроксиметил)циклопропанкарбоксамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамид

Сложный эфир (900 мг, 2,34 ммоль) взвешивают вместе с LiBH₄ (153 мг, 7,02 ммоль) в колбе. Колбу помещают на ледяную баню и медленно добавляют сухой ТГФ (20 мл). После перемешивания в течение 5 мин ледяную баню удаляют и смесь перемешивают при комнатной температуре. Через 4 ч к смеси добавляют еще порцию LiBH₄ (153 мг, 7,02 ммоль) при комнатной температуре. Затем смесь перемешивают в течение ночи. Реакцию затем гасят 2 M HCl. Выпаривание ТГФ дает водную фазу, которую экстрагируют ДХМ. Органическую фазу концентрируют в вакууме и остаток очищают препаративной хроматографией.

Способ E₂: Восстановление кетона с NaBH₄

Кетон (1 экв.) растворяют в MeOH и полученный раствор охлаждают при 0°C. Добавляют NaBH₄ (2 экв.) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию гасят водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выпаривают, и полученный остаток очищают препаративной хроматографией с получением желаемого соединения.

Тот же способ может применяться для восстановления альдегида.

Иллюстративный пример: 2-(2-гидрокси-3-метилбутанамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамид

Кетон (338 мг, 0,96 ммоль) растворяют в MeOH (3,3 мл) и полученный раствор охлаждают при 0°C. Добавляют NaBH₄ (67 мг, 1,92 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасят водой и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу выпаривают, и полученный остаток очищают препаративной хроматографией с получением желаемого соединения.

Энантиомерно чистые соединения получают очисткой на хиральной колонке.

Способ E₃: Восстановление алкена с H₂ и Pd/C

Алкен (1 экв.) растворяют в MeOH вместе с Pd/C (10% массовых, 0,1 экв.) и применяют баллон H₂. Смесь перемешивают при комнатной температуре до завершения реакции. Затем смесь фильтруют через целит, и полученную жидкость концентрируют с получением остатка, который применяют как есть или очищают препаративной хроматографией.

Способ E₄: восстановление нитрила с DIBAL-H

Нитрил (1 экв.) растворяют в ДХМ и полученный раствор охлаждают при -78°C в атмосфере N₂. К этой смеси добавляют раствор DIBAL-H в гексане (1 M, 4 экв.). Реакционную смесь перемешивают при -78°C в течение 15 мин, после чего ее нагревают до комнатной температуры. После перемешивания в течение ночи добавляют еще DIBAL-H в зависимости от превращения исходного нитрила. Затем смесь гасят водой и солью Рошеля. Экстрагирование ДХМ дает органическую фазу, которую сушат и фильтруют над двуокисью кремния. После выпаривания получают остаток, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: (3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-амид 4-формил-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты

Нитрил (250 мг, 0,67 ммоль) растворяют в ДХМ (4 мл) и полученный раствор охлаждают при -78°C в атмосфере N₂. К этой смеси добавляют раствор DIBAL-H в гексане (1 M, 2,68 мл, 2,68 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при -78°C в течение 15 мин, затем ее нагревают до комнатной температуры. После перемешивания в течение ночи, дополнительный DIBAL-H (2 мл, 2 ммоль) добавляют при -78°C. Раствор нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение еще 1 ч. Затем смесь гасят водой солью Рошеля. Экстрагирование ДХМ дает органическую фазу, которую сушат и фильтруют над двуокисью кремния. После выпаривания получают остаток, который применяют как есть.

Способ E₅: Востановление сложного эфира с DIBAL-H

Сложный эфир (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ при -78°C. Смесь DIBAL-H в гексане (2,2 экв.) добавляют по каплям к смеси в инертной атмосфере. Смесь перемешивают в течение 10 мин при -78°C, затем смесь доводят до комнатной температуры. Если реакция не завершена, добавляют еще экв. DIBAL-H. Затем смесь разбавляют водным HCl (2M) и экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фракции сушат и выпаривают. Полученный неочищенный остаток может применяться как есть или его очищают хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ F₁: Сочетание Сузуки

Бромид гетероарила (1 экв.) смешивают с бороновым эфиром (1,25 экв.), Pd(dppf)Cl₂.ДХМ (0,07 экв.) и ДИЭА (2,5 экв.) в смеси диоксан:воды (2:1). Реакционную смесь нагревают при 110°C до завершения реакции. Разбавление ДХМ дает органическую фазу, которую промывают водой. Затем органическую фазу сушат и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть или очищают препаративной хроматографией.

Иллюстративный пример: метиловый эфир 4-(3,6-дигидро-2H-пиран-4-ил)-1H-пиразол-3-карбоновой кислоты

Пиразол (Пр.с. 4, 200 мг, 0,976 ммоль) смешивают с бороновым эфиром (256 мг, 1,22 ммоль), Pd(dppf)Cl₂.ДХМ (56 мг, 0,068 ммоль) и ДИЭА (425 мкл, 2,43 ммоль) в смеси диоксан:вода (2:1, 3 мл). Реакционную смесь нагревают при 110°C в микроволновой печи в течение 2 ч. Разбавление ДХМ дает органическую фазу, которую промывают водой. Затем органическую фазу сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который применяют как есть или очищают препаративной хроматографией.

Способ F₂: Катализированное Cu сочетание спиртов

Бромид гетероарила (1 экв.) смешивают с CuI (0,05 экв.) и tBuOLi (3,0 экв.). Спирт применяют в качестве растворителя. Реакционную смесь нагревают при 120°C в микроволновой печи до завершения реакции. Смесь разбавляют водой и экстрагируют EtOAc. Органический слой сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который применяют как есть или очищают хроматографией.

Иллюстративный пример: 4-(2-Метоксиэтокси)-1-(2-триметилсиланилэтоксиметил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота

Пиразол (1,10 г, 3,28 ммоль) смешивают с этиленгликолем (6 мл). Добавляют CuI (31 мг, 0,164 ммоль) и tBuOLi (789 мг, 9,85 ммоль). Смесь нагревают в микроволновой печи при 120°C до завершения реакции. Во время реакции сложный эфир гидролизуют. Затем смесь разбавляют насыщенным раствором NaHCO₃ и экстрагируют EtOAc. Водный слой подкисляют до pH=7 и экстрагируют EtOAc. Эту органическую фазу сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который применяют как есть.

Способ F₃: Карбоксилирование

Бромид гетероарила (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ при -78°C. Смесь nBuLi в гексане (1,2 экв.) добавляют по каплям к этой смеси. После перемешивания в течение 10 мин CO₂ газ барботируют через смесь. Смесь доводят до комнатной температуры и гасят водой. Водную смесь доводят до pH~10 и экстрагируют EtOAc. Водный слой затем подкисляют до pH~3 и экстрагируют EtOAc. Полученную органическую фракцию сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: 4-Метоксиметил-1-(2-триметилсиланил-этоксиметил)-1H-пиразол-3-карбоновая кислота

Пиразол (161 мг, 0,5 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (3 мл) при -78°C. Смесь nBuLi в гексане (2,5 M в гексане, 240 мкл, 0,6 ммоль) добавляют по каплям к этой смеси. После перемешивания в течение 10 мин CO₂ газ барботируют через смесь. Смесь доводят до комнатной температуры и гасят водой. Водную смесь доводят до pH~10 и экстрагируют EtOAc. Водный слой затем подкисляют до pH~3 и экстрагируют EtOAc. Полученную органическую фракцию сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который применяют как есть.

Способ G₁: Гриньяр

Карбонил (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ в атмосфере N₂. Этот раствор охлаждают при -78°C, при этом добавляют раствор магнийорганического бромида (4 экв.). После добавления, реакционную смесь доводят до комнатной температуры. Затем смесь гасят водой и разбавляют насыщенным раствором NH₄Cl. Экстрагирование EtOAc дает органическую фазу, которую сушат, фильтруют и выпаривают.

Иллюстративный пример: N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-5-(1-гидрокси-1-метилэтил)-1H-пиразол-3-карбоксамид

Карбонил (98 мг, 0,25 ммоль) растворяют в сухом ТГФ в атмосфере N₂. Этот раствор охлаждают при -78°C, при этом добавляют MeMgBr (3 M в простом эфире, 0,33 мл, 1 ммоль). После добваления реакционную смесь доводят до комнатной температуры. Затем смесь гасят водой и разбавляют насыщенным раствором NH₄Cl. Экстрагирование EtOAc дает органическую фазу, которую сушат, фильтруют и выпаривают. Полученный неочищенный остаток очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ H₁: алкилирование спиртов

Смесь спирта (1 экв.), алкилирующего агента (1 экв.) и основания (1,2 экв.) смешивают в ДМА. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь гасят водой и разбавляют насыщенным раствором соли. Экстрагирование EtOAc дает органическую фазу, которую сушат, фильтруют и выпаривают. Полученный неочищенный остаток применяют как есть.

Иллюстративный пример: этиловый эфир 5-(2-метоксиэтокси)-2H-пиразол-3-карбоновой кислоты

Смесь спирта (79 мг, 0,5 ммоль), 1-бром-2-метоксиэтана (47 мкл, 0,5 ммоль) и K₂CO₃ (83 мг, 0,6 ммоль) смешивают в ДМА (1 мл). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь гасят водой и разбавляют насыщенным раствором соли. Экстрагирование EtOAc дает органическую фазу, которую сушат, фильтруют и выпаривают. Полученный остаток применяют как есть.

Способ H₂: алкилирование малоновых эфиров

Раствор NaOEt (1,1 экв.) в EtOH перемешивают при 0°C. Диэтилмалонат (1 экв.) добавляют к этой смеси вместе с желаемым алкилирующим агентом (1,1 экв.). Ледяную баню плавят, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь гасят водой и экстрагируют простым эфиром. Органическую фазу сушат и выпаривают с получением желаемого продукта, который применяют как есть.

Иллюстративный пример: диэтиловый эфир 2-циклопропилметилмалоновой кислоты

Раствор NaOEt в EtOH (2,7 M, 2,6 мл, 6,9 ммоль) охлаждают при 0°C и добавляют диэтилмалонат (0,95 мл, 6,2 ммоль) с дополнительными 1,5 мл EtOH. Затем добавляют бромметилциклопропан (0,67 мл, 6,9 ммоль). Полученную смесь доводят до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Смесь затем гасят водой и экстрагируют простым эфиром. Органическую фазу сушат и выпаривают с получением желаемого продукта, который применяют как есть.

Способ H₃: Алкилирование пиразольного кольца

Хлорметиловый эфир ди-трет-бутилового эфира фосфорной кислоты (1 экв.) растворяют в ДМА вместе с пиразолом (1 экв.) и Cs₂CO₃ (1,25 экв.). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Разбавление водой дает водную фазу, которую экстрагируют EtOAc. Полученную органическую фазу сушат и выпаривают с получением желаемого продукта, который применяют как есть.

Способ H₄: метилирование спиртов

Смесь спирта (1 экв.) растворяют в сухом ТГФ и охлаждают при 0°C. NaH (1,2 экв.) добавляют порциями. Полученную смесь перемешивают в течение 10 мин при 0°C, после чего добавляют MeI (1,2 экв.). Наконец, ледяную баню удаляют и смесь перемешивают при комнатной температуре. После разбавления водой, смесь экстрагируют EtOAc. Объединенные органические фракции сушат и выпаривают. Полученный неочищенный продукт применяют как есть или очищают хроматографией с получением желаемого продукта.

Способ I₁: Галогенирование с применением NXS

Раствор пиразола (1 экв.) и N-галосукцинимид (NXS) (1,2 экв.) перемешивают при 55°C в течение ночи. В зависимости от превращения, может быть добавлен дополнительный NXS после перемешивания в течение ночи. Смесь обрабатывают разделением между водной фазой и органической фазой. Органическую фазу затем сушат и выпаривают с получением остатка, который либо очищают хроматографией, либо применяют как есть.

Иллюстративный пример: 4-Хлор-5-метоксиметил-1H-пиразол-3-карбоновая кислота

Раствор коммерчески доступного пиразола (156 мг, 1 ммоль) и NCS (160 мг, 1,2 экв.) перемешивают при 55°C в течение ночи. Добавляют дополнительные 31 мг (0,2 ммоль) NCS и смесь хранят при 55°C в течение еще 4 ч. Смесь затем разбавляют 1M раствором LiOH и промывают EtOAc. Затем водную фазу подкисляют 2 M раствором HCl до pH=1. Экстрагирование EtOAc дает органическую фазу, которую сушат и выпаривают с получением остатка, который применяют как есть.

Способ J₁: Окисление алкена до диола

Оксон (2 экв.) и NaHCO₃ (4 экв.) добавляют к раствору алкена (1 экв.) в смеси ацетон:вода (4:1). Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. В зависимости от превращения, дополнительный оксон и NaHCO₃ могут быть добавлены к смеси после перемешивания в течение ночи. Смесь затем концентрируют, разбавляют EtOAc и промывают раствором Na₂SO₃ и водой. Органическую фазу сушат и выпаривают с получением остатка, который либо очищают препаративной хроматографией, либо применяют как есть.

Иллюстративный пример: N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-4-(1,2-дигидроксиэтил)-1H-пиразол-3-карбоксамид

Оксон (395 мг, 0,64 ммоль) и NaHCO₃ (108 мг, 1,28 ммоль) добавляют к раствору алкена (120 мг, 0,32 ммоль) в смеси ацетон:вода (4:1, 3 мл). После перемешивания полученной смеси при комнатной температуре в течение ночи, дополнительный оксон и NaHCO₃ добавляют к смеси. Смесь перемешивают в течение еще 4 ч при комнатной температуре. Смесь затем концентрируют, разбавляют EtOAc и промывают раствором Na₂SO₃ и водой. Органическую фазу сушат и выпаривают с получением остатка, который очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Пример 4. Иллюстративные примеры получения соединений в соответствии с данным изобретением

Соединение 2: N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамид

Промежуточное соединение 3 (15 г, 59 ммоль) и 2H-пиразол-3-карбоновую кислоту (9,9 г, 88 ммоль) суспендируют в ДХМ (250 мл). Добавляют реагент Мукаямы (йодид 2-хлор-1-метилпиридиния) (18,1 г, 71 ммоль), ТЭА (24,7 мл, 177 ммоль) и ДМАП (3,6 г, 29 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 40°C в течение ночи и затем охлаждают. Смесь выпаривают, и полученный неочищенный остаток суспендируют в 1 M растворе HCl. После перемешивания в течение 10 мин суспензию фильтруют и полученный осадок выделяют. Этот осадок повторно суспендируют в 0,1 M растворе лимонной кислоты. Снова, фильтрация дает осадок. Третье растирание проводят с применением простого эфира в качестве растворителя с получением осадка после фильтрации. Наконец, осадок (13,6 г) суспендируют в EtOH (816 мл) и нагревают при кипении с обратным холодильником. К этой суспензии добавляют 65 мл ДМФ с получением прозрачного раствора. Раствор концентрируют до 275 мл и охлаждают при 0°C. Получают суспензию, твердое вещество отделяют фильтрацией и лепешку сушат с получением желаемого продукта.

Альтернативный способ

К перемешиваемому (400 об/мин) раствору 600 г (2,36 моль) Промежуточного соединения 3 в ДМАц (6 л) добавляют при температуре окружающей среды 1,3 эквивалента Промежуточного соединения 11. К полученной суспензии, при комнатной температуре, добавляют ДИПЭА (618 мл, 1,5 экв.) небольшими порциями в течение более 5 мин. Полученную суспензию нагревают до 80°С и перемешивают в течение 18 ч при этой температуре. Полученную смесь охлаждают до 15°С и добавляют водный насыщенный раствор NH₄Cl (7,5 л) добавляют в течение более 30 минут, сохраняя внутреннюю температуру между 15-24°С. Полученный твердый продукт собирают фильтрацией и растирают с водой (7,5 л) при механическом перемешивании (600 об/мин) в течение 30 мин. Полученную суспензию фильтруют, и полученное твердое вещество растирают в МТБЭ (8 л) при механическом перемешивании в течение 45 минут. Полученное твердое вещество отделяют фильтрацией и сушат в вакуумной печи.

Наконец, твердое вещество очищают горячим растиранием в этаноле. Затем неочищенное твердое вещество суспендируют в абсолютном EtOH (16 л) в течение 1,5 ч при 78°С. Суспензию охлаждают до 20°С и затем перемешивают в течение еще часа. Твердый продукт собирают фильтрацией, промывают 500 мл и снова 200 мл абсолютного EtOH, затем сушат с получением желаемого продукта.

Соединение 3: 2-(2-гидроксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамид

Стадия i): синтез 2-(2-ацетоксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида

Раствор Пр.с. 2 (112 мг, 0,44 ммоль) и пиридина (53 мкл, 0,66 ммоль) в 5 мл ДХМ охлаждают до 0°C, обрабатывают по каплям раствором хлорангидрида (114 мг, 0,57 ммоль) в 5 мл ДХМ. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь промывают насыщенным раствором NaHCO₃, и водную фазу дважды экстрагируют ДХМ. Органические фазы объединяют, сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который применяют как есть.

Стадия ii) синтез 2-(2-гидроксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида

К раствору 2-(2-ацетоксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида (200 мг, 0,48 ммоль) в 4 мл MeOH/диоксана=1:1, охлажденному до 0°C, добавляют карбонат калия (66 мг, 0,52 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 90 мин, отфильтровывают и фильтрат затем подкисляют 1M HCl. Образуется осадок, который отделяют фильтрацией с получением желаемого соединения, которое применяют как есть.

Соединение 8: 2-(4-фтор-2-(трифторметил)бензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамид

Промежуточное соединение 2 (69 мг, 0,27 ммоль) и 4-фтор-2-трифторбензойную кислоту (114 мг, 0,55 ммоль) суспендируют в ДХМ (5 мл). Добавляют реагент Мукаямы (йодид 2-хлор-1-метилпиридиния) (140 мг, 0,55 ммоль), ТЭА (0,170 мл, 1,1 ммоль) и ДМАП (17 мг, 0,14 ммоль). Реакционную смесь перемешивают с 50°C в течение 2 часов и затем охлаждают, разбавляют ДХМ и промывают насыщенным раствором NaHCO₃. Органические фазы объединяют, сушат и выпаривают с получением неочищенного продукта, который очищают препаративной хроматографией с получением желаемого продукта.

Пример 5. Иллюстративные примеры получения сравнительных соединений

Соединение D: 2-(2-гидроксибензамидо)-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамид

Синтезируют с применением коммерчески доступного промежуточного соединения 2-амино-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида в способе A1 и D1.

Соединение C: 2-(2-гидроксибензамидо)-4,5,6,7-тетрагидротиено[2,3-c]пиридин-3-карбоксамид

трет-Бутиловый эфир 2-амино-3-карбамоил-4,7-дигидро-5H-тиено[2,3-c]пиридин-6-карбоновой кислоты обрабатывают Способом A1 с получением желаемого соединения.

Стадия ii)

Продукт со стадии i, описанный выше, обрабатывают Способом D1 с получением желаемого соединения.

Стадия iii)

Продукт со стадии ii, описанный выше, (1 экв.) растворяют в смеси ТФК и ДХМ при 0°C. Ледяную баню плавят, и полученную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Смесь затем разбавляют ДХМ и экстрагируют насыщенным раствором NaHCO₃. Растирание с ди-изопропиловым эфиром дает желаемое соединение.

Также, Сравнительное соединение A может быть получено тем же способом, который описан для Сравнительного соединения C, начиная с коммерчески доступного амида 2-амино-6-метил-4,5,6,7-тетрагидро-тиено[2,3-c]пиридин-3-карбоновой кислоты.

Таблица II Список конечных соединений

Таблица III Сравнительные соединения

Таблица IV Данные ЯМР типовых соединений в соответствии с данным изобретением
Соед №	(δ) данные ЯМР
1	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,67 (1Н, д), 8,01 (1Н, т), 7,68 (1Н, м), 7,74 (1Н, м), 7,40 (2Н, м), 7,26 (1Н, с), 2,75 (2Н, с), 1,47 (6Н, с), 1,21 (6Н, с).
2	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 13,55 (1Н, сш), 12,53 (1Н, сш), 7,94 (1Н, сш), 7,54 (1Н, сш), 7,10 (1Н, сш), 6,79 (1Н, с), 2,73 (2Н, с), 1,45 (6Н, с), 1,20 (6Н, с), 1,45 (6Н, с).
3	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,91 (1Н, с), 11,66 (1Н, с), 7,95 (1Н, дд), 7,46 (1Н, сш), 7,39-7,45 (1Н, м), 7,06 (1Н, сш), 6,93-7,02 (2Н, м), 2,72 (2Н, с), 1,46 (6Н, с), 1,20 (6Н, с).
4	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,30 (1Н, с), 7,56 (1H, сш), 6,96 (1Н, сш), 6,83 (1Н, с), 2,72 (2Н, с), 1,42 (6Н, с), 1,19 (6Н, с), 1,15 (2Н, м), 1,03 (2Н, м).
5	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,04 (1Н, с), 7,89 (1Н, д), 7,79 (3H, м), 7,60 (1Н, м), 7,16 (1Н, сш), 2,69 (2Н, с), 1,46 (6Н, с), 1,20 (6Н, с).
6	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,05 (1Н, с), 7,53 (1Н, сш), 6,95 (1Н, сш), 5,97 (1Н, с), 2,70 (2Н, с), 1,42 (6Н, с), 1,33 (6Н, с), 1,19 (6Н, с).
7	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,03 (1Н, с), 7,90 (1Н, дд), 7,84 (1Н, дд), 7,73 (1Н, м), 7,62 (1Н, сш), 7,20 (1Н, сш), 2,70 (2Н, с), 1,46 (6Н, с), 1,21 (6Н, с).
8	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,65 (1Н, д), 8,06 (1Н, м), 7,69 (1Н, сш), 7,52 (1Н, м), 7,32 (1Н, м), 7,07 (1Н, сш), 2,74 (2Н, с), 1,46 (6Н, с), 1,20 (6Н, с).
9	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,06 (1Н, с), 7,12 (2Н, м), 5,30 (1Н, т), 3,58 (2Н, д), 2,67 (2Н, с), 1,40 (6Н, с), 1,17 (6Н, с), 1,05 (2Н, м), 0,82 (2Н, м).
10	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,00 (1Н, с), 7,50 (1Н, сш), 6,94 (1Н, сш), 5,16 (1Н, т), 3,41 (2Н, д), 2,69 (2Н, с), 1,41 (6Н, с), 1,18 (6H, с), 1,13 (6Н, с).
17	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 13,26 (1Н, с), 12,39 (1Н, с), 7,60 (1Н, сш), 7,00 (1Н, сш), 6,56 (1Н, с), 2,73 (2Н, с), 2,66 (2Н, кв), 1,45 (6Н, с), 1,24 (6Н, с), 1,22 (3Н, т).
22	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 11,99 (1Н, с), 7,60 (1Н, сш), 7,00 (1Н, сш), 6,16 (1Н, д), 4,22 (1Н, м), 2,70 (2Н, с), 1,42 (6Н, с), 1,29 (3Н, д), 1,18 (6Н, с).
38	¹H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 11,97 (1Н, с), 7,51 (1Н, сш), 6,94 (1Н, сш), 6,20 (1Н, д), 3,73 (1Н, д), 2,70 (2Н, с), 1,43 (6Н, с), 1,18 (6Н, д), 0,92 (9Н, с).
39	¹H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 11,99 (1Н, с), 7,53 (1Н, сш), 6,96 (1Н, сш), 6,10 (1Н, д), 3,97 (1Н, дд), 2,70 (2Н, с), 2,08 (1Н, м), 1,43 (6Н, с), 1,19 (6Н, д), 0,95 (6Н, д), 0,76 (6H, д).
40	¹H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 11,75 (1Н, с), 7,46 (1Н, сш), 6,98 (1Н, сш), 5,30 (1Н, т), 3,66 (2Н, д), 2,69 (2Н, с), 2,26 (2Н, м), 1,95 (3Н, м), 1,80 (1Н, м), 1,42 (6H, с), 1,19 (6H, с).
41	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 12,31 (1Н, с), 7,37 (2Н, м), 3,77 (2Н, м), 3,60 (2Н, м), 2,70 (2Н, с), 2,16 (3Н, с), 2,04 (2Н, м), 1,98 (2Н, м), 1,42 (6Н, с), 1,18 (6Н, с).
42	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 13,63 (1Н, с), 12,44 (1Н, с), 7,59 (1Н, сш), 7,05 (1Н, сш), 6,73 (1Н, с), 4,47 (2Н, с), 3,28 (3Н, с), 2,73 (2Н, с), 1,45 (6Н, с), 1,20 (6Н, с).
65	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 13,32 (1Н, с), 12,40 (1H, с), 7,76 (1H, с), 7,60 (1Н, ш), 6,95 (1Н, ш), 3,33 (2Н, т), 3,23 (3Н, с), 2,76 (2Н, т), 2,72 (2Н, с), 1,79 (2Н, м), 1,45 (6Н, с), 1,20 (6Н, с).
71	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 13,34 (1Н, с), 12,42 (1H, с), 7,73 (1H, с), 7,55 (1Н, ш), 6,95 (1Н, ш), 2,73 (2Н, с), 2,70 (2Н, т), 1,54 (2Н, квт), 1,45 (6Н, с), 1,20 (6Н, с), 0,90 (3Н, т).
86	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 11,58 (1Н, с), 7,59 (1H, шс), 7,00 (1H, шс), 4,91 (1H, т), 3,53 (2H, т), 2,69 (2H, с), 2,42 (1H, м), 1,50 (2H, м), 1,41 (6H, с), 1,18 (6H, с), 1,02 (1H, д), 0,83 (3H, т).
60	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 11,99 (1Н, с), 7,59 (1H, шс), 6,98 (1H, шс), 6,07 (1H, м), 3,82 (1H, т), 2,72 (2H, с), 1,41 (6H, с), 1,19 (6H, с), 1,06 (1H, м), 0,40 (4H, м).
64	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 13,34 (1Н, с), 12,39 (1Н, с), 7,55 (1Н, сш), 7,00 (1Н, сш), 6,59 (1Н, д), 5,44 (1Н, с), 2,73 (1Н, с), 1,48 (6Н, с), 1,45 (6Н, с), 1,20 (6Н, с).
81	1H ЯМР δ (ч./млн.)(ДМСО-d6): 13,34 (1Н, с), 7,55 (1H, шс), 7,00 (1H, шс), 5,78 (1H, сш), 2,73 (1H, с), 1,45 (6H, с), 1,30 (3H, с), 1,81 (6H, д), 0,93 (9H, с).
91	1H ЯМР δ (ч./млн.) (ДМСО-d6): 13,34 (1Н, с), 7,55 (1H, сш), 7,00 (1H, сш), 5,78 (1H, сш), 3,85 (2H, кв), 3,58 (2H, кв), 2,67 (2H, с), 1,41 (6H, д), 1,23 (3H, с), 1,18 (6H, с), 1,00 (3H, с).

Биологические примеры

Пример 6. In vitro анализы

6.1 Анализ миграции ЖФБ-галогенида для мутации МТРП-ΔF508

В анализе миграции ЖФБ галогенида измеряют функциональность каналов муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости (МТРП) в колонии клеток эпителия бронхов, пораженных кистозным фиброзом КФBE41o-. Анализ используют для оценки возможности соединений повышать вероятность открытия существующих МТРП каналов в мембране. Наблюдения возможны благодаря тому, что флуоресценция желтого флуоресцентного белка (ЖФБ), вариант ЖФБ H148Q, I152L, практически гасится ионами галогенида, такими как Cl^- и I^-. (Galietta et al., 2001; Nagai et al., 2002).

Для этой цели клетки КФBE41o- высевают в 96-луночные планшеты (6000 КФBE клеток/лунку). Через день после высевания клетки КФBE трансфицируют векторами аденовируса, которые направляют экспрессию МТРП ΔF508 мутанта и ЖФБ репортера. Клетки инкубируют при 27°C, 5% CO₂ в течение 24 часов так, чтобы позволить правильное свертывание и миграцию в мембрану МТРП канала, или обрабатывают МТРП модулятором в течение 24 ч при 37°C.

На следующий день МТРП каналы активируют обработкой цАМФ эвокатором форсколином (10,67 мкм) и тестируемым соединением в 1xD-ФРФБ (от Gibco, № по каталогу 14090-041) в течение 10 мин до добавления раствора I^- (137 мМ NaI, 2,7 мМ KI, 1,76 мМ KH₂PO₄, 10,1 мМ Na₂HPO₄, 5 мМ глюкозы). Вызванное I^- гашение флуоресценции записывают сразу же после инъекции I^- в течение 7 секунд. Возможность соединения повышать открытие канала напрямую коррелирует со снижением флуоресценции и выражается как (1-(флуоресценция через 7 секунд (F)/флуоресценция до инъекции (F0))), и EC₅₀ получают из графика (1-F/F0) к концентрации соединения.

Таблица V Иллюстративные EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-ΔF508 соединений в соответствии с данным изобретением
Соед №	EC50 (нМ)
1	12,16
2	10,00
3	4,40
4	32,00
5	63,43
6	75,77
7	60,16
8	22,81
9	28,00
10	121,05
11	27,18
12	951,90
13	17,86
14	32,23
15	7,56
16	25,26
17	15,51
18	829,10
19	41,85
20	305,40
21	6,46
22	219,00
23	102,40
24	313,80
25	4,14
26	1269,00
27	440,00
28	378,40
29	10000,00
30	141,10
31	354,00
32	23,00
33	4,00
34	10,00
35	3,00
36	13,00
37	16,00
38	5,00
39	6,00
40	32,00
41	1739,00
42	12,16

Таблица VI EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-ΔF508 сравнительных соединений
Соед №	EC50 (нМ)
A	>10000
B	<370
C	>10000
D	156,4
E	478,7

6.2 Анализ миграции ЖФБ-галогенида для мутации МТРП-ΔF508

В анализе миграции ЖФБ галогенида измеряют функциональность каналов муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости (МТРП) в колонии клеток эпителия бронхов, пораженных кистозным фиброзом КФBE41o-. Анализ используют для оценки возможности соединений повышать вероятность открытия существующих МТРП каналов в мембране. Наблюдения возможны благодаря тому, что флуоресценция желтого флуоресцентного белка (ЖФБ), вариант ЖФБ H148Q, I152L, практически гасится ионами галогенида, такими как Cl^- и I^-. (Galietta et al., 2001; Nagai et al., 2002).

Для этой цели клетки КФBE41o- высевают в 384-луночные планшеты (3000 КФBE клеток/лунку). Через день после высевания клетки КФBE трансфицируют векторами аденовируса, которые направляют экспрессию МТРП ΔF508 мутанта и ЖФБ репортера. Клетки инкубируют при 27°C, 5% CO₂ в течение 24 часов так, чтобы позволить правильное свертывание и миграцию в мембрану МТРП канала, или обрабатывают МТРП модулятором в течение 24 ч при 37°C.

На следующий день МТРП каналы активируют обработкой цАМФ эвокатором форсколином (10,67 мкм) и тестируемым соединением в 1xD-ФРФБ в общем объеме 30 мкл (от Gibco, № по каталогу 14090-041) в течение 10 мин до добавления раствора 30 мкл следующего раствора I^- (375 мМ NaI, 7,5 мМ KI, 1,76 мМ KH₂PO₄, 10,1 мМ Na₂HPO₄, 13,75 мМ глюкозы). Вызванное I^- гашение флуоресценции записывают сразу же после инъекции I^- в течение 2 мин на FDSS/μCell (Hamamatsu). Возможность соединения повышать открытие канала напрямую коррелирует со снижением флуоресценции и выражается как (1-(флуоресценция через 36 секунд (F)/флуоресценция до инъекции (F0))), и EC₅₀ получают из графика (1-F/F0) к концентрации соединения.

Таблица VII Иллюстративные EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-ΔF508 соединений в соответствии с данным изобретением
Соед. №	EC50 (нМ)
1	65,56
2	3,40
3	6,46
4	22,58
5	47,84
6	16,24
7	70,30
8	27,32
9	15,12
10	74,62
11	12,56
12	196,90
13	6,13
14	9,44
15	2,72
16	90,78
17	10,33
18	467,20
19	7,33
20	422,30
21	0,71
22	83,00
23	190,10
24	234,40
25	2,25
26	667,00
27	189,00
28	146,80
29	10000,00
30	101,24
31	354,10
32	39,60
33	6,93
34	10,08
35	2,44
36	12,40
37	25,42
38	5,99
39	4,51
40	35,58
41	602,10
42	15,34
43	495,50
44	275,80
45	29,59
46	2,84
47	117,60
48	66,64
49	125,30
50	10,61
51	92,55
52	1,97
53	9,91
54	8,51
55	24,52
56	79,29
57	2000,00
58	177,80
59	8,74
60	18,42
61	188,30
62	301,00
63	66,35
64	167,20
65	26,98
66	83,96
67	42,75
68	60,02
69	34,19
70	176,00
71	14,41
72	17,86
73	20,84
74	82,60
75	667,00
76	2,17
77	126,95
78	6,39
79	23,64
80	667,00
81	3,23
82	2000,00
83	643,65
84	25,35
85	93,48
86	160,30
87	667,00
88	144,80
89	312,70
90	120,40
91	64,05
93	478,9
94	30,09
95	24,48
96	97,40
97	113,10
98	2,62
99	28,31
100	189,70
101	26,82
102	667,00
104	2000,00
105	6,67
106	0,54
107	386,90
108	2000,00
109	4,32
110	0,66
111	23,90
112	34,37
113	77,45
114	40,86
115	62,08
116	88,04
117	239,10
118	303,30
119	158,75
120	121,25
121	18,67
122	41,72
123	87,94
124	40,61
125	193,90
126	555,20
127	2000,00
128	34,18
129	77,30
130	2000,00
131	167,90
132	2000,00
133	552,00
134	78,58
135	138,30
136	81,50
137	128,20
138	52,22
139	56,97
140	143,50
141	99,46
143	153,40
144	471,60
145	153,50
146	202,30
147	169,00
148	2000,00
149	345,80
150	667,00
151	20,13
152	12,04
153	33,94
154	62,48
155	71,50
157	33,14
158	300,50
159	667,00
160	640,70
161	667,00
162	602,50
163	636,25
164	646,20
165	145,14
166	116,20
167	7,58
169	667

6.3 Анализ миграции ЖФБ-галогенида для мутации МТРП-G551D

В анализе миграции ЖФБ галогенида измеряют функциональность каналов муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости (МТРП). Анализ используют для оценки возможности соединений повышать открытие каналов существующих мутантных МТРП каналов в мембране. Наблюдения возможны благодаря тому, что флуоресценция желтого флуоресцентного белка (ЖФБ), вариант ЖФБ H148Q, I152L, F47L, практически гасится ионами галогенида, такими как Cl^- и I^-. (Galietta et al., 2001).

Для этой цели клетки HEK293- высевают в 96-луночные планшеты. Во время высевания клетки обратно трансфицируют векторами плазмида, которые направляют экспрессию МТРП G551D мутанта и ЖФБ репортера. Клетки инкубируют при 37°C, 5% CO₂ в течение 24 часов так, чтобы позволить достаточную экспрессию белка МТРП.

На следующий день МТРП каналы активируют обработкой цАМФ эвокатором форсколином (10,67 мкм) и тестируемым соединением в D-ФРФБ (Gibco) в течение 10 мин до добавления раствора I^- (137 мМ NaI, 2,7 мМ KI, 1,76 мМ KH₂PO₄, 10,1 мМ Na₂HPO₄, 5 мМ глюкозы). Вызванное I^- гашение флуоресценции записывают сразу же после инъекции I^- в течение 7 секунд. Возможность соединения повышать открытие канала напрямую коррелирует со снижением флуоресценции и выражается как (1-(флуоресценция через 36 секунд (F)/флуоресценция до инъекции (F0))), и EC₅₀ получают из графика (1-F/F0) к концентрации соединения.

Подобные анализы YHA были разработаны для других мутантов МТРП с дефектами открытия канала или дефектами проводимости канала для определения действия соединения на активность канала. Примеры мутантов включают G178R, G1349D, S549N, R117H, R334W. Этот анализ также применяют для дополнительных МТРП мутантов класса I, включая G542X, W1282X; мутантов II класса, включая N1303K, и для мутантов III класса, включая S1251N; или дикого МТРП.

Таблица VIII Иллюстративные EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-G551D соединений в соответствии с данным изобретением
Соед. №	EC50 (нМ)
1	281,90
2	500,00
3	162,20
4	1340,00
5	764,00
6	10000,00
7	1087,80
8	308,30
9	1000,00
10	2651,50
11	589,83
12	3330,00
13	197,90
14	376,60
15	77,48
16	5252,70
17	192,73
18	3330,00
19	356,60
20	3290,50
21	57,54
22	10000,00
23	1270,50
24	10000,00
25	80,58
26	10000,00
27	1666,00
28	2003,00
29	10000,00
30	6665,00
31	10000,00
32	853,90
33	92,05
34	270,30
35	182,70
36	716,30
37	892,00
41	10000,00
43	10000,00
44	10000,00
45	1136,70
46	1425,50
47	4706,00
48	4565,00
49	5672,00
50	288,34
51	5553,30
53	3330,00
54	10000,00
55	599,83
56	10000,00
57	10000,00
58	10000,00
59	3330,00
60	6665,00
61	4164,00
62	3330,00
63	1186,00
64	2905,00
65	1556,70
66	3330,00
67	3330,00
68	3330,00
69	3330,00
70	3330,00
71	1170,60
72	367,80
73	569,60
74	3330,00
75	10000,00
76	412,00
77	7776,70
78	3354,00
79	3330,00
80	10000,00
81	6665,00
82	10000,00
83	10000,00
84	3330,00
85	3330,00
86	10000,00
88	1175,00
89	10000,00
90	3200,00
93	3330
94	540,95
95	1063
96	3330,00
97	2777,50
98	5107,70
99	1337,20
100	2865,00
101	1364,00
102	10000,00
104	10000,00
105	730,10
106	981,45
107	10000,00
108	10000,00
109	3260,50
110	209,30
111	3100,50
112	1829,50
113	2786,00
114	1706,30
115	586,20
116	1521,00
117	6665,00
118	10000,00
119	2172,50
120	2405,00
121	1004,30
122	2380,00
123	824,90
124	685,20
125	3330,00
126	3330,00
127	10000,00
128	877,70
129	2290,00
130	10000,00
131	10000,00
132	10000,00
133	3330,00
134	2021,00
135	2026,00
136	2532,70
137	2657,00
138	10000,00
139	577,05
140	10000,00
141	1621,00
143	2706,00
144	10000,00
145	10000,00
146	10000,00
147	10000,00
148	10000,00
149	10000,00
150	10000,00
151	970,83
152	2163,00
153	10000,00
154	10000,00
155	10000,00
157	10000,00
158	10000,00
159	10000,00
160	10000,00
161	10000,00
162	10000,00
163	10000,00
164	10000,00
165	10000,00
166	10000,00
167	10000,00
169	10000,00

Таблица IX EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-G551D сравнительных соединений
Соед. №	EC50
A	>10000
D	>10000
E	2895

Таблица X EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-G178R соединений в соответствии с данным изобретением
Соед. №	EC50 (нМ)
2	56,9
9	699
13	98,8
14	169
15	87,5
33	88,6
34	42,2
35	44,1
38	96,8
39	1360
40	>3330
42	156
45	368
46	19
50	47,4
52	39,7
55	58,3
71	89,3
72	31,4
76	14,1
77	2210
92	82,24
94	67,61
98	41,51
101	346,6
105	54,41
106	26
110	22,49
121	465,7
136	785,9
151	221,45
154	3330
92	82,24
94	67,61
98	41,51
101	346,6
105	54,41
106	26
110	22,49
121	465,7
136	785,9
151	221,45
154	3330

Таблица XI Иллюстративные EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-G1349D соединений в соответствии с данным изобретением
Соед. №	EC50 (нМ)
2	63,3
9	578
13	75,3
14	371
15	75,3
33	116
34	47,4
35	118
38	517
39	1340
40	1910
42	678
45	325
46	58,4
50	70,5
52	60,9
55	74
71	97,7
72	64
76	24,4
77	1310
94	672,30
95	81,43
98	54,67
101	888,00
105	120,00
106	199,90
110	141,70
121	536,30
136	1192,00
151	463,70
154	3330,00

Таблица XII Иллюстративные EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-S549N соединений в соответствии с данным изобретением
Соед. №	EC50 (нМ)
2	211
9	902
13	158
14	253
15	208
33	164
34	444
35	120
38	690
39	1100
40	1930
42	508
45	1520
46	140
50	105
52	86,5
55	108
71	196
72	122
76	31,5
77	1450
94	344,50
95	290,80
98	73,02
101	947,00
105	292,70
106	21,80
110	261,40
121	598,90
136	2605,00
151	3330,00
154	2374,00

Таблица XIII Иллюстративные EC50, измеренные в анализе миграции ЖФБ-галогенида для МТРП-R117H соединений в соответствии с данным изобретением
Соед. №	EC50 (нМ)
2	166
9	433
13	177
14	207
15	158
33	165
34	301
35	180
38	64,3
39	145
40	2900
42	193
45	1200
46	24,4
50	76,3
52	11,4
55	38,9
71	116
72	147
76	15,3
77	1010
94	147,50
95	106,10
98	26,69
101	1123,00
105	434,80
106	11,74
110	49,88
121	723,80
136	806,70
151	780,00
154	1577,00
94	147,50
95	106,10
98	26,69
101	1123,00
105	434,80
106	11,74
110	49,88
121	723,80
136	806,70
151	780,00
154	1577,00

6.4 Анализ миграции ЖФБ-галогенида для мутации МТРП-G551D - глюконатного буфера

В анализе миграции ЖФБ галогенида измеряют функциональность каналов муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости (МТРП) в колонии клеток эпителия бронхов, пораженных кистозным фиброзом КФBE41o-. Анализ используют для оценки возможности соединений повышать вероятность открытия существующих МТРП каналов в мембране. Наблюдения возможны благодаря тому, что флуоресценция желтого флуоресцентного белка (ЖФБ), вариант ЖФБ H148Q, I152L, практически гасится ионами галогенида, такими как Cl^- и I^-. (Galietta et al., 2001; Nagai et al., 2002).

Для этой цели клетки КФBE41o- высевают в 96-луночные планшеты (6000 КФBE клеток/лунку). Через день после высевания клетки КФBE трансфицируют векторами аденовируса, которые направляют экспрессию МТРП ΔF508 мутанта и ЖФБ репортера. Клетки инкубируют при 27°C, 5% CO₂ в течение 24 часов так, чтобы позволить правильное свертывание и миграцию в мембрану МТРП канала, или обрабатывают МТРП модулятором в течение 24 ч при 37°C.

На следующий день МТРП каналы активируют обработкой цАМФ эвокатором форсколином (10,67 мкм) и тестируемым соединением в глюконатном буфере (137 мМ динатрийглюконат, 2,7 мМ KCl, 1,76 мМ KH₂PO₄, 10,1 мМ Na₂HPO₄, 5 мМ глюкозы) в течение 10 мин до добавления раствора I^- (137 мМ NaI, 2,7 мМ KI, 1,76 мМ KH₂PO₄, 10,1 мМ Na₂HPO₄, 5 мМ глюкозы). Вызванное I^- гашение флуоресценции записывают сразу же после инъекции I^- в течение 7 секунд. Возможность соединения повышать открытие канала напрямую коррелирует со снижением флуоресценции и выражается как (1-(флуоресценция через 7 секунд (F)/флуоресценция до инъекции (F0))), и EC₅₀ получают из графика (1-F/F0) к концентрации соединения.

Пример 7. Клеточные анализы

Электрофизиологические измерения на первичных культурах клеток эпителия бронхов человека являются полезным предклиническим суррогатом клинической эффективности (Rowe and Verkman, 2013), поэтому соединения оценивают в анализе камеры Уссинга и/или TECC, которые представляют собой анализы с электрофизиологическим измерением.

7.1 Анализ в камере Уссинга

7.1.1 Протокол

В анализе в камере Уссинга измеряют функциональность муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости (МТРП) через измерение тока короткого замыкания (Iкз), создаваемого вокруг базально-латеральной и апикальной мембран клеток эпителия легких.

Для измерения Iкз, эпителий закорачивают введением тока, который корректируется усилителем с обратной связью так, чтобы сохранять трансэпителиальный потенциал (Vт) на уровне 0 мВ. Требуемое количество тока корректируется цепью обратной связи и непрерывно измеряется. Периодически напряжение фиксируют на значениях, отличающихся от 0 мВ, что позволяет оценить трансэпителиальное сопротивление (Rт).

Для этой цели клетки эпителия бронхов, выделенные у пациентов с КФ, гомозиготные для МТРП ΔF508 мутации (hAEC-CF, Epithelix) или гетерозиготные для МТРП G551D и ΔF508 мутаций (University of Chapel Hill, North Carolina), помещают на покрытые коллагеном подложки Snapwell IV типа (Corning-Costar). Эпителий дыхательных путей человека создают обеспечиванием интерфейса воздух-жидкость в течение 21 для образования хорошо дифференцированных поляризованных культур, которые похожи на in vivo псевдо-стратифицированный реснитчатый эпителий (Fulcher et ak., 2005). В случае гомозиготных ΔF508 МТРП образцов, дифференцированные клетки обрабатывают 3 мкМ VX809 (2626 South Loop West, Suite 225, Houston, TX 77054 USA, № по каталогу S1565) для того, что позволить достаточную экспрессию правильно свернутого МТРП белка на мембране (48 часов базально-латеральной обработки и 24 часа апикальной обработки), до электрофизиологических записей. Для гетерозиготных G551D/ΔF508, дифференцированные клетки применяют как есть для записей.

Для электрофизиологической записи эпителий дыхательных путей человека устанавливают на камеры Уссинга для измерения тока короткого замыкания (Iкз). Эпителий промывают в растворе NaCl-Рингера (120 мМ NaCl, 25 мМ NaHCO₃, 1,2 мМ CaCl₂, 1,2 мМ MgCl₂, 0,8 мМ KH₂PO₄, 0,8 мМ K₂HPO₄, pH 7,4, 5 мМ глюкозы) на базально-латеральной стороне, и раствором глутамата-Рингера (120 мМ глутамата натрия, 25 мМ NaHCO₃, 1,2 мМ CaCl₂, 1,2 мМ MgCl₂, 0,8 мМ KH₂PO₄, 0,8 мМ K₂HPO₄, pH 7,4, 5 мМ глюкозы) на апикальной стороне для создания Cl^- градиента. Обе камеры насыщают газом 95% O₂, 5% CO₂ выдерживают при 27°C. Апикальный амилорид используют для ингибирования эндогенных ENaC токов, а форколин применяют на апикальной и базально-латеральной сторонах для стимулирования МТРП. После стимуляции форсколином, соединения добавляют на обе стороны для тестирования их потенциала на повышение открытия МТРП. Повышение Iкз используют как меру повышенной активности МТРП, значения EC₅₀ получают через измерение влияния различных концентраций соединения на ток короткого замыкания на первичных клетках, для этой цели тот же Snapwell применяют для добавления повышенных количеств соединения, и повышение сигнала Iкз на каждой стадии затем превращают в дозозависимую кривую. Inh-172, ингибитор, специфический к МТРП, применяют для тестирования специфичности тестируемых соединений.

7.2 Анализ TECC

7.2.2 Протокол для первичных клеток эпителия бронхов

Анализ TECC (трансэпителиальная фиксированная цепь, EP-design) измеряет функциональность муковисцидозного трансмембранного регулятора проводимости (МТРП) через измерение тока короткого замыкания (Iкз), созданного над базально-латеральной и апикальной мембраной клеток эпителия легких. В TECC трансэпителиальный потенциал PD и транэпителиальное сопротивление (Rт) измеряют в открытой цепи и переводят в Iкз с применением закона Ома. 24 лунки могут быть измерены одновременно, что позволяет получить высокий выход по сравнению с камерами Уссинга.

Для этой цели клетки эпителия бронхов, выделенные у пациентов с КФ, гомозиготные для МТРП ΔF508 мутации (hAEC-CF, Epithelix) помещают на покрытые коллагеном подложки Transwell IV типа (Costar). Эпителий дыхательных путей человека создают обеспечиванием интерфейса воздух-жидкость в течение 21 для образования хорошо дифференцированных поляризованных культур, которые похожи на in vivo псевдо-стратифицированный реснитчатый эпителий (Fulcher et ak., 2005). В случае гомозиготных ΔF508 МТРП образцов, дифференцированные клетки обрабатывают 3 мкМ VX809 (2626 South Loop West, Suite 225, Houston, TX 77054 USA, № по каталогу S1565) для того, что позводить достаточную экспрессию правильно свернутого МТРП белка на мембране (48 часов базально-латеральной обработки и 24 часа апикальной обработки), до электрофизиологических записей. Для гетерозиготных G551D/ΔF508, дифференцированные клетки применяют как есть для записей. Эпителий дыхательных путей человека создают обеспечиванием интерфейса воздух-жидкость в течение 21 для образования хорошо дифференцированных поляризованных культур, которые похожи на in vivo псевдо-стратифицированный реснитчатый эпителий (Fulcher et ak., 2005). В случае гомозиготных ΔF508 МТРП образцов, дифференцированные клетки обрабатывают 3 мкМ VX809 (2626 South Loop West, Suite 225, Houston, TX 77054 USA, № по каталогу S1565) для того, что позволить достаточную экспрессию правильно свернутого МТРП белка на мембране (48 часов базально-латеральной обработки и 24 часа апикальной обработки), до электрофизиологических записей. Для гетерозиготных G551D/ΔF508, дифференцированные клетки применяют как есть для записей.

Информация на соединениях может быть восстановлена на гомозиготных ΔF508 МТРП образцах, изучая повышенную активность МТРП при добавлении соединений экстренным способом или систематическим способом. На G551D/ΔF508 МТРП гетерозиготные образцы соединения добавляют экстренным способом к дифференцированным клеткам.

Для экстренного способа, для электрофизиолоигических записей, эпителий дыхательных путей человека устанавливают на нагревательную пластину TECC для электрофизиологического измерения и выдерживают при 37°C. Эпителий промывают в растворе NaCl-Рингер (120 мМ NaCl, 25 мМ NaHCO₃, 1,2 мМ CaCl₂, 1,2 мМ MgCl₂, 0,8 мМ KH₂PO₄, 0,8 мМ K₂HPO₄, pH 7,4, 5 мМ глюкозы) на базально-латеральной и апикальной сторонах. Апикальный амилорид применяют для ингибирования эндогенных ENaC токов, а форколин наносят на апикальную и базально-латеральную стороны для стимулирования МТРП. После стимуляции форсколином, соединения добавляют на обе стороны для тестирования их потенциала на повышение открытия МТРП. Измерения проводят в течение 20 минут, записывая каждые 2 минуты. Повышение Iкз используют как меру повышенной активности МТРП, значения EC₅₀ получают через измерение влияния различных концентраций соединения на Iкз на первичных клетках, для этой цели каждый трансвел обрабатывают различной концентрацией соединения. Inh-172, ингибитор, специфический к МТРП, применяют для тестирования специфичности тестируемых соединений.

Для систематического способа дифференцированные клетки обрабатывают 3 мкМ VX809 (2626 South Loop West, Suite 225, Houston, TX 77054 USA, № по каталогу S1565) и потенцирующими соединениями в различных концентрациях (48 часов базально-латеральной обработки и 24 часа апикальной обработки), до электрофизиологических записей. Для электрофизиологических записей, эпителий дыхательных путей человека устанавливают на нагревательную пластину TECC для электрофизиологического измерения и выдерживают при 37°C. Эпителий промывают в растворе NaCl-Рингер (120 мМ NaCl, 25 мМ NaHCO₃, 1,2 мМ CaCl₂, 1,2 мМ MgCl₂, 0,8 мМ KH₂PO₄, 0,8 мМ K₂HPO₄, pH 7,4, 5 мМ глюкозы) на базально-латеральной и апикальной сторонах. Апикальный амилорид применяют для ингибирования эндогенных ENaC токов, а форколин наносят на апикальную и базально-латеральную стороны для стимулирования МТРП. После стимуляции форсколином, соединения добавляют на обе стороны для тестирования их потенциала на повышение открытия МТРП. Измерения проводят в течение 20 минут, записывая каждые 2 минуты. Повышение Iкз используют как меру повышенной активности МТРП, значения EC₅₀ получают через измерение влияния различных концентраций соединения на Iкз на первичных клетках, для этой цели каждый трансвел обрабатывают различной концентрацией соединения. Inh-172, ингибитор, специфический к МТРП, применяют для тестирования специфичности тестируемых соединений.

Подобные записи TECC проводят с применением первичных клеток для других МТРП мутантов с дефективным открытием каналов или дефективной проводимости каналов для определения действия соединения на активность канала. Примеры мутантов включают R117H, G178R. Такие же первичные клетки, содержащие МТРП мутанты I класса, включая G542X, W1282X; и дополнительные мутанты II класса, включая N1303K, могут применяться для электрофизиологических записей.

7.2.2 Результаты

При следовании данному протоколу получают следующие значения. Разница между ΔIкз, измеренным как ДМСО (базовая линия) и ΔIкз, измеренным с тестируемым соединением.

7.2.2.1 Измерения тока короткого замыкания (Iкз) measurements

Таблица XIV Результаты анализа TECC для иллюстративных соединений в соответствии с данным изобретением при 3 мкМ
Соед. №	ΔIкз (мкА/см2)	ΔIкз (мкА/см2), ДМСО	Повышение тока (мкА/см2)
2	10,9207	-0,7427	11,6634
4	4,6728	-0,5211	5,1939
10	3,9356	-0,5211	4,4567

Таблица XIV Результаты анализа TECC для иллюстративных соединений в соответствии с данным изобретением при 3 мкМ
Соед. №	ΔIкз (мкА/см2)	ΔIкз (мкА/см2), ДМСО	Повышение тока (мкА/см2)
2	4,5996	-0,3248	4,9244
A	-0,3807		-0,0559
B	0,1807		0,5055
E	0,1663	0,4911

Таблица XV Результаты анализа TECC для иллюстративных соединений в соответствии с данным изобретением и сравнительных соединений при 3 нМ
Концент-рация	ДМСО	Соед. A ΔIкз (мкА/см2)	Соед. B ΔIкз (мкА/см2)	Соед. E ΔIкз (мкА/см2)	Соед. 2 ΔIкз (мкА/см2)
50 нМ		-0,3807	0,1807	0,1663	4,5996
100 нМ	-0,3734	-0,5401	0,4762	-0,0318	4,9327
200 нМ		-0,6598	0,8022	0,5241	5,0457

Как показано в таблице XIV, таблице XV и таблице XVI выше и на фиг. 1, соединения в соответствии с данным изобретением демонстрируют действие на белок МТРП в дозе 3 мкМ или 50 нМ или 50/100/200 нМ, в то время как такая активность для структурных аналогов не измерена (сравнительные соединения A, B и E), которая остается на базовом уровне.

7.2.2.2 Измерение EC₅₀ для анализа TECC МТРП ΔF508

Таблица XVII Анализ TECC в МТРП ΔF508 EC50 для иллюстративных соединений в соответствии с данным изобретением и сравнительных соединений
Соед. №	EC50
2	36,96
6	165,4, 60,93
9	237,1, 65,02
21	16,27
105	54,43
154	502,1

7.2.3 Протокол ЩРК - МТРП G551D

Для записей G551D, клетки щитовидной железы рыбы-крысы (ЩРК), стабильно трансфицированные with G551D МТРП (колония клеток, экспрессирующих низкий МТРП-G551D и колония клеток, экспрессирующих высокий МТРП-G551D от Rosalind Franklin University of medecine and science, Chicago, Illinois) помещают на подложки Transwell (Costar диаметр 6,5 мм, размер пор 0,4 мкм). Клетки выращивают в течение 8-10 дней в условиях интерфейса жидкость-жидкость до считывания электрофизиологических данных. Для записи электрофизиологических данных клетки FRТРЕТ-G551D устанавливают на нагревательную пластину TECC для электрофизиологического измерения и выдерживают при 37°C. Эпителий промывают культуральной средой с буфером HEPES без ФРФБ на базально-латеральной и апикальной сторонах. Апикальный амилорид применяют для ингибирования эндогенных ENaC токов, а форколин наносят на апикальную и базально-латеральную стороны для стимулирования МТРП. После стимуляции форсколином, соединения добавляют на обе стороны для тестирования их потенциала на повышение открытия МТРП. Измерения проводят в течение 10 минут, записывая каждые 2 минуты. Повышение Iкз используют как меру повышенной активности МТРП, значения EC₅₀ получают через измерение влияния различных концентраций соединения на Iкз на первичных клетках, для этой цели каждый трансвел обрабатывают различной концентрацией соединения. Inh-172, ингибитор, специфический к МТРП, применяют для тестирования специфичности тестируемых соединений.

7.2.4 Измерения EC₅₀ в анализе МТРП G551D TECC

При следовании этому протоколу получают следующие значения EC₅₀.

Таблица XVIII Анализ TECC в МТРП G551D EC50 для иллюстративных соединений в соответствии с данным изобретением и сравнительных соединений в клетках с высокой экспрессией
Соед. №	EC50
2	66,16, 90,25, 85, 61,52, 57,84, 87,43
9	360,7, 527, 694,8, 400,1, 510,7
25	70
35	43,7
110	192,7
136	62470

7.3 Анализы с фиксацией потенциала

Фиксация потенциала является очень адаптивной и мощной методикой, которая может применяться для изучения активности отдельных ионных каналов в изолированном участке клеточной мембраны. Эксперименты с фиксацией потенциала могут проводиться для количественной оценки действия соединений на активность МТРП канала в вывернутых наружу участках, иссеченных из клеток, чрезмерно экспрессирующих каналы дикого МТРП, ΔF508 МТРП или G551D МТРП. Более конкретно, вероятность раскрытия ΔF508, дикого или G551D МТРП может быть рассчитана из различных участков для статистического анализа. Действие соединения на вероятность открытия МТРП канала может сравниваться с вероятностью открытия в отсутствии соединения, измеренной или описанной в литературе. Модуляторы МТРП повышают вероятность открытия мутантаного МТРП.

Эксперименты с фиксацией потенциала на цельных клетках позволяют определить мощность соединений. Для этого клетки, содержащие G551D МТРП (фон ЩРК) выдерживают при -40 мВ и линейно измеряют от -100 до +10 мВ каждые 5 секунд. Ток МТРП измеряют при -100 мВ и ток отслеживают при -50 мВ (близко к обратному для Cl-) для отслеживания стабильности клеток. Для каждой клетки записывают базовый ток, 10 мкм FSK применяют в течение 8-10 мин, затем добавляют различные концентрации соединения (4-5 мин каждая обработка) и затем 10 мкм соединения, которое служит в качестве 100% активации для нормализации. Наконец, смесь ингибиторов (10 мкм МТРП inh-172 и 20 мкм GlyH101) добавляют для подтверждения токов, возникающих из МТРП.

Пример 8. Анализы фармакокинетики, ФМЛС и токсичности

8.1 Термодинамическая растворимость

Раствор 1 мг/мл тестируемого соединения готовят в 0,2M фосфатном буфере, pH 7,4, или 0,1M цитратном буфере, pH 3,0, при комнатной температуре в стеклянной пробирке.

Образцы вращают в Rotator drive STR 4 (Stuart Scientific, Bibby) со скоростью 3,0 при комнатной температуре в течение 24 ч.

Через 24 ч 800 мкл образца переносят в пробирку Эппендорфа и центрифугируют в течение 5 мин при 14000 об/мин 200 мкл надосадочной жидкости образца затем переносят на MultiscreenR Solubility Plate (Millipore, MSSLBPC50), и надосадочную жидкость фильтруют (10-12" рт.ст.) с помощью вакуумного коллектора в чистый полипропиленовый 96-луночный планшет Greiner с V-образным дном (№ по каталогу 651201). 5 мкл фильтрата разводят в 95 мкл (F20) того же буфера, который применяли для инкубирования в планшете, содержащем стандартную кривую (Greiner, № по каталогу 651201).

Стандартную кривую для соединения готовят перед применением в ДМСО, начиная с 10 мМ разведенного базовым раствором ДМСО с коэффициентом 2 в ДМСО (5000 мкм), и затем далее разводят в ДМСО вплоть до 19,5 мкм. 3 мкл μL серии разведений от 5000 мкм затем переносят в 97 мкл буферированной ацетонитрилом смеси (50/50). Конечная концентрация варьируется от 2,5 до 150 мкм.

Планшет герметично закрывают герметизирующими матами (MA96RD-04S, www.kinesis.co.uk), и образцы измеряют при комнатной температуре на ЖХМС (ZQ 1525 от Waters) в оптимизированных условиях с применением Quanoptimize для определения подходящей массы молекулы.

Образцы анализируют на ЖХМС со скоростью потока 1 мл/мин. Растворитель А включает 15 мМ аммиака, и растворителем В является ацетонитрил. Образец испытывают при распылении положительных ионов на колонке XBridge C18 3,5 мкм (2,1×30 мм) от Waters. Градиент растворителя имеет общее время прогона 2 мин и варьируется от 5% B до 95% B.

Площади пика анализируют с помощью программного обеспечения Masslynx, и площади пиков образцов наносят на график к стандартной кривой с получением растворимости соединения.

Значения растворимости показаны в мкм или мкг/мл.

8.2 Растворимость в воде

Начиная с 10 мМ базового раствора в ДМСО, серии разведений соединения готовят в ДМСО. Серии разведений переносят в 96-луночный планшет NUNC Maxisorb с F-образным дном (№ по каталогу 442404) и добавляют 0,1M фосфатный буфер, pH 7,4, или 0,1M цитратный буфер, pH 3,0 при комнатной температуре.

Конечная концентрация варьируется от 300 мкм до 18,75 мкм в 5 равных стадиях разведения. Конечная концентрация ДМСО не превышает 3%. 200 мкм Пирена добавляют в угловые точки каждого 96-луночного планшета, и он служит в качестве ссылочных точек для калибровки оси Z на микроскопе.

Планшеты для анализа герметично закрывают и инкубируют в течение 1 ч при 37°C при встряхивании при 230 об/мин. Затем планшеты сканируют под микроскопом с белым светом с получением индивидуальных изображений осадка для каждой концентрации. Осадок анализируют и превращают в число с помощью программного обеспечения, которое может быть нанесено на график. Первая концентрация, при которой соединение полностью растворяется, является записанной концентрацией; однако реальная концентрация находится где-то между этой концентрацией и концентрацией разведения со стадии выше.

Значения растворимости, измеренные в соответствии с этим протоколом, показаны в мкг/мл.

8.3 Связывание с белком плазмы (равновесный диализ)

10 мМ базового раствора соединения в ДМСО разводят с коэффициентом 5 в ДМСО. Этот раствор далее разводят в свежеоттаявшей человеческой, крысиной, мышиной или собачьей плазме (BioReclamation INC) с конечной концентрацией 10 мкм и конечной концентрацией ДМСО 0,5% (5,5 мкл в 1094,5 мкл плазмы в 96-луночном планшете PP-Masterblock (Greiner, № по каталогу 780285)).

Планшеты со вставками Pierce Red Device (ThermoScientific, № по каталогу 89809) готовят и заполняют 750 мкл ФРФБ в буферной камере и 500 мкл плазмы с известным количеством определяемого вещества в плазменной камере. Планшет инкубируют в течение 4 ч при 37°C, встряхивая при 230 об/мин. После инкубирования 120 мкл обеих камер переносят в 360 мкл ацетонитрила в 96-луночные круглодонные планшеты PP с глубокими лунками (Nunc, № по каталогу 278743) и герметично закрывают крышкой из алюминиевой фольги. Образцы смешивают и помещают на лед в течение 30 мин. Этот планшет затем центрифугируют 30 мин при 1200 rcf при 4°C, и надосадочную жидкость переносят в 96-луночный планшет с v-образным дном PP (Greiner, 651201) для анализа на ЖХМС.

Планшет герметично закрывают герметизирующими матами (MA96RD-04S) от www.kinesis.co.uk, и образцы измеряют при комнатной температуре на ЖХМС (ZQ 1525 от Waters) в оптимизированных условиях с применением Quanoptimize для определения подходящей массы молекулы.

Образцы анализируют на ЖХМС со скоростью потока 1 мл/мин. Растворитель A содержит 15 мМ аммиак, и растворителем B является ацетонитрил. Образец исследуют при распылении положительных ионов на колонке XBridge C18 3,5 мкм (2,1×30 мм) от Waters. Градиент растворителя имеет общее время прогона 2 мин и варьируется от 5% B до 95% B.

Площадь пика соединения в буферной камере и плазменной камере считаются 100% соединением. Процент связывания с плазмой получают из этих результатов и показывают как процент, связанный с плазмой.

Растворимость соединения в конечной тестируемой концентрации в ФРФБ изучают под микроскопом для того, чтобы показать наличие или отсутствие микроскопа.

8.4 Проницаемость Caco2

Двухнаправленные анализы Caco-2 проводят, как описано ниже. Клетки Caco-2 получают от Европейской коллекции клеточных культур животных (ECACC, № по каталогу 86010202) и используют через 21 день культивирования клеток в 24-луночных планшетах Transwell (Fisher TKТРЕТ-545-020B).

2×10⁵ клеток/лунку высевают в среду для планшетов, состоящую из DMEM+GlutaMAXI+1% NEAA+10% ФТС (FetalClone II)+1% Pen/Strep. Среду меняют каждые 2-3 дня.

Тестируемые и ссылочные соединения (пропранолол и родамин123 или винбластин, все куплены у Sigma) готовят в сбалансированном солевом растворе Хэнкса, содержащем 25 мМ HEPES (pH 7,4) и добавляют либо в апикальную (125 мкл), либо в базально-латеральную (600 мкл) камеры планшета Transwell в концентрации 10 мкм с конечной концентрацией ДМСО 0,25%.

50 мкм Lucifer Yellow (Sigma) добавляют в донорный буфер во все лунки для оценки целостности клеточных слоев через отслеживание проникновения Lucifer Yellow. Так как Lucifer Yellow (LY) не может свободно преодолевать липофильные барьеры, высокая степень транспорта LY указывает на плохую целостность слоя клетки.

Через 1 ч инкубирования при 37°C при встряхивании на орбитальном встряхивателе при 150 об/мин, 70 мкл аликвот берут из апикальной (A) и базальной (B) камер и добавляют к 100 мкл 50:50 растовра ацетонитрил:вода, содержащего аналитический внутренний стандарт (0,5 мкм карбамазепина) в 96-луночном планшете.

Lucifer yellow измеряют на Spectramax Gemini XS (возб. 426 нм и испуск. 538 нм) в чистом 96-луночном планшете, содержащем 150 мкл жидкости из базально-латеральной и апикальной сторон.

Концентрации соединения в образцах измеряют высокоэффективной жидкостной хроматографией/масс спектрометрией (ЖХ-МС/МС).

Значения эффективной проницаемости (П_эфф) рассчитывают из отношения:

П_эфф=[соединение]_{конечный акцептор} × V_{акцептор}/([соединение]_{исходный донор} × V_донор)/В_инк × V_донор/площадь поверхности × 60 × 10^-6 см/с

V=объем камеры

В_инк=время инкубирования.

Площадь поверхности=0,33 см²

Соотношения вытекания, как показатель активного вытекания из апикальной поверхности клетки, рассчитывают с помощью соотношения П_эфф B>A/П_эфф A>B.

Применяют следующие критерии приемки анализа:

Пропранолол: значение П_эфф (A>B)≥20(×10^-6 см/с)

Родамин 123 или винбластин: значение П_эфф (A>B)<5(×10^-6 см/с) с соотношением вытекания ≥5.

Проницаемость Lucifer Yellow: ≤100 нм/с.

8.5 Проницаемость MDCKII-MDR1

Клетки MDCKII-MDR1 представляют собой клетки Мадин-Дарби эпителия почек собаки, чрезмерно экспрессирующие ген мультилекарственной резистентности человека (MDR1), кодирующий для P-гликопротеина (P-gp). Клетки получают из Института рака в Нидерландах и применяют через 3-4 дня культивирования клеток в 24-луночных планшетах Millicell с вкладышем с клеточной культурой (Millipore, PSRP010R5). Двухнаправленный анализ проницаемости MDCKII-MDR1 проводят, как описано ниже.

3×10⁵ клеток/мл (1,2×10⁵ клеток/лунку) высевают в среду для планшетов, состоящую из DMEM+1% Glutamax-100+1% антибиотик/противогрибковый агент+10% ФТС (Biowest, S1810). Клетки оставляют в CO₂ инкубаторе на 3-4 дня. Среду меняют каждые 24 ч после высевания и в день эксперимента.

Тестируемое и ссылочное соединения (ампренавир и пропранолол) готовят в физиологическом растворе с фосфатным буфером Дульбекко (D-ФРФБ, pH 7,4) и добавляют либо в апикальную (400 мкл), либо в базально-латеральную (800 мкл) камеры планшетов Millicell с вкладышем с клеточной культурой в конечной концентрации 10 мкм (0,5 мкм в случае ампренавира) с конечной концентрацией ДМСО 1%.

100 мкм Lucifer Yellow (Sigma) добавляют во все донорные буферные растворы для оценки целостности монослоев клетки через отслеживание проницаемости Lucifer Yellow. Lucifer Yellow является флуоресцентным маркером для параклеточного пути, и его применяют в качестве внутреннего контроля в каждом монослое для подтверждения плотной целостности соединения во время анализа.

Через 1 ч инкубирования при 37°C при встряхивании на орбитальном встряхивателе при 150 об/мин, 75 мкл аликвот берут из апикальной (A) и базальной (B) камер и добавляют к 225 мкл раствора ацетонитрил:вода (2:1), содержащего аналитический внутренний стандарт (10 нг/мл варфарина) в 96-луночном планшете. Аликвотирование также проводят в начале эксперимента из донорных растворов с получением исходной (C₀) концентрации.

Концентрацияю соединения в образцах измеряют высокоэффективной жидкостной хроматографией/масс спектрометрией (ЖХ-МС/МС).

Lucifer Yellow измеряют с помощью Fluoroscan Ascent FL Thermo Scientific (возб. 485 нм и испуск. 530 нм) в 96-луночном планшете, содержащем 150 мкл жидкости из всех принимающих лунок (базально-латеральной или апикальной сторон).

8.6 Микросомальная стабильность

10 мМ базового раствора соединения в ДМСО разводят до 6 мкм в 105 мМ фосфатного буфера, pH 7,4 в 96-глубоколуночном планшете (Greiner, № по каталогу 780285) и предварительно нагревают при 37°C.

Рабочий раствор глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы (G6PDH, Roche, 10127671001) 700Ед./мл разводят с коэффициентом 1:700 в 105 мМ фосфатном буфере, pH 7,4. Смесь кофактора, содержащую 0,528M MgCl₂, 6H₂O (Sigma, M2670), 0,528M глюкоза-6-фосфата (Sigma, G-7879) и 0,208M NADP+ (Sigma, N-0505) разбавляют с коэффициентом 1:8 в 105 мМ фосфатном буфере, pH 7,4.

Получают рабочий раствор, содержащий 1 мг/мл микросом печени (Provider, Xenotech) интересующих видов (человек, мышь, крыса, собака,...), 0,8 Ед./мл G6PDH и смесь кофактора (6,6 мМ MgCl₂, 6,6 мМ глюкоза-6-фосфата, 2,6 мМ NADP+). Эту смесь предварительно инкубируют в течение 15 мин, но не более 20 мин, при комнатной температуре.

После предварительного инкубирования разведение соединение и смесь, содержащую микросомы, добавляют вместе в равных количествах и инкубируют в течение 30 мин при 300 об/мин. В момент времени 0 мин добавляют два объема MeOH к разведению соединения, затем добавляют смесь микросом. Конечная концентрация во время инкубирования составляет: 3 мкМ тестируемого соединения или контрольного соедигнения, 0,5 мг/мл микросом, 0,4 Ед./мл G6PDH, 3,3 мМ MgCl₂, 3,3 мМ глюкоза-6-фосфата и 1,3 мМ NaDP+.

Через 30 мин инкубирования реакцию останавливают 2 объемами MeOH.

В оба момента времени образцы смешивают, центрифугируют и надосадочную жидкость собирают для анализа ЖХ-МС/МС. Аппаратные характеристики (т.е. высоты пиков) сравнивают с образцами в нулевой момент времени (как 100%) для определения процента оставшегося соединения. Стандартные соединения пропранолол и верапамил включены в анализ.

Данные микросомальной стабильности выражают как процент общего количества соединения, оставшегося через 30 мин.

8.7 Фармакокинетический анализ у грызунов

8.7.1 Животные

Крыс Sprague-Dawley (самцы, возраст 5-6 недель) получают от Janvier (France). Крыс акклиматизируют в течение, по крайней мере, 5 дней до обрабтки и держат при 12 ч цикле день/ночь. Температуру поддерживают на уровне приблизительно 22°C и пищу и воду предоставляют ad libitum. За два дня до введения тестируемых соединений крысам хирургически устанавливают катетер в яремную вену под анестезией изофлураном. После операции крыс размещают по-отдельности. Крыс не кормят в течение, по крайней мере, 16 до перорального дозирования и 6 ч после. Воду дают ad libitum.

8.7.2 Исследования фармакокинетики в плазме

Соединения формулируют в ПЭГ200/физиологическом растворе (25/75) для внутривенного введения, и в 0,5% метилцеллюлозе и EtOH/ПЭГ 200/метилцеллюлозе 0,5% (10/25/65 об./об./об.) для перорального введения. Тестируемые соединения перорально вводят в виде одного желудочного зонда в дозе 5 мг/кг при режиме дозирования 5 мл/кг, и внутривенно вводят в виде болюса через хвостовую вену в дозе 1 мг/кг при режиме дозирования 5 мл/кг. Каждая группа включает 3 крысы. Образцы крови берут через яремную вену с гепарином лития в качестве антикоагулянта в следующие моменты времени: 0,05 (внутривенное введение), 0,25 (пероральное введение), 0,5, 1, 3, 5, 8 и 24 ч. Альтернативно, образцы крови берут в ретроорбитальном синусе с гепарином лития в качестве антикоагулянта в следующие моменты времени: 0,25, 1, 3 и 6 ч (пероральное введение). Образцы цельной крови центрифугируют при 1500 g в течение 10 мин, и полученные образцы плазмы хранят при -20°C до анализа.

8.7.3 Исследования распределения в легких

Соединения формулируют в 0,5% метилцеллюлозе и EtOH/ПЭГ 200/метилцеллюлозе 0,5% (10/25/65 об./об./об.) для перорального введения. Тестируемые соединения вводят перорально в виде одного желудочного зонда в дозе 10 мг/кг при объеме дозирования 5 мл/кг. Каждая группа включает 12 крыс. В каждый момент времени, обычно 1, 3, 6 и 24 ч, животных умерщвляют и собирают образцы крови и легких. Образцы цельной крови центрифугируют при 1500 g в течение 10 мин, и полученные образцы плазмы, вместе с образцами легких, хранят при -20°C до анализа.

8.7.4 Количественная оценка уровней соединения в образцах плазмы и легких

Образцы легких размалывают в присутствии керамических шариков, и белки, присутствующие в образцах плазмы и легких, осаждают добавлением органического растворителя. Концентрации каждого тестируемого соединения определяют ЖХ-МС/МС методом, в котором масс спектрометр работает в режиме положительного или отрицательного электрораспыления.

8.7.5 Определение параметров фармакокинетики

Параметры фармакокинетики рассчитывают с применением Winnonlin® или Phoenix® (Pharsight®, United States).

8.7.6 Анализ данных

Для каждого животного соотношение легких к плазме определяют как отношение между концентрацией соединения в легких и в плазме. В какждый момент взятия образца, среднее, стандартную ошибку среднего (сос) и коэффициент изменения (КИ%) рассчитывают из данных для трех животных.

8.7.7 Результаты

При выполнении этого протокола были получены следующие величины экспозиции.

Таблица XIX Величины экпозиции иллюстративных соединений в соответствии с данным изобретением
Соед. №	ППК(0-t) (нг.ч/мл)
2	3659, 1540, 1214
9	38930
15	1509
15	467
17	290
25	439

8.7.8 Анализ клеточной активации ПХР

Анализ позволяет определить активность индукции CYP соединения с применением прегнан-Х-рецептора человека (ПХР), первичной функцией которого является активация синтеза цитохрома P450 в присутствии токсичных агентов.

Этот анализ активации осуществлялся внешней компанией Cyprotex. (15 Beech Lane, Macclesfield, Cheshire. SK10 2DR United Kingdom. Tel: [phone]).

Транскрипционную активацию отслеживают люминесценцией. Данные выражают как степень активации по отношению к контрольному носителю. Применение 5 или более доз тестируемого соединения и положительного контроля позволяет получить значения EC₅₀ и Emax с применением анализа нелинейной регрессии логарифма кривых доза-реакция.

Значения для тестируемого соединения сравнивают со значениями, полученными для положительного контроля (10 мкм рифампицина).

Значительный порог реакции устанавливают на 35% от максимальной реакции, полученной для положительного контроля.

8.7.9 Прямое CYP450 ингибирование в микросомах печени человека

В данном анализе измеряют потенциал ингибирования соединением основных CYP450 изоферментов.

5 мМ базовый раствор тестируемого соединения готовят в метаноле. Этот базовый раствор серийно разводят 1:3 в метаноле, затем 50-кратно разводят в 50 мМ буфера на основе фосфата калия, pH 7,4, с получением семи концентраций тестируемого соединения (0,14-100 мкм, 2% метанол).

Полученные разведения соединения добавляют к микросомам печени человека в дозе 20 мг белка/мл (BD Biosciences, № по каталогу 452161 или, альтернативно, № по каталогу 452117) и маркерному субстрату (см. таблицу ниже).

После предварительного нагревания раствора в течение 5 мин при 37°C, реакцию начинают добавлением смеси кофактора (7,65 мг/мл глюкоза-6-фосфата, 1,7 мг/мл NADP, 6 ед./мл глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы).

После инкубирования при 37°C (таблица ниже), реакцию (50 мкл) останавливают добавлением 150 мкл раствора ацетонитрил:метанол (2:1) с внутренним стандартом (варфарин). Образцы центрифугируют (535 г, 25 мин, +4°C), и надосадочную жидкость анализируют ЖХ-МС/МС.

Процент контроля рассчитывают как:

[Met]_тест=концентрация маркерного метаболита в контрольной лунке с тестируемым соединением

[Met]_{растворитель}=концентрация маркерного метаболита в контрольной лунке с растворителем

Графики процента активности контроля к концентрации создают и подгоняют с применением программного обеспечения GraphPad Prism для получения IC₅₀.

Таблица ХХ Изоформы и условия тестирования
P450 Изоформ	Микросомы (мг/мл)	Маркерный субстрат	Маркерный метаболит	Инкубирование (мин)	Положительный контроль	Отрицательный контроль
1A2	0,1	Фенацетин (35 мкм)	Ацетаминофен	10	Фурафиллин	Сульфафеназол
2C9	0,1	Диклофенак (10 мкм)	4'-OH-диклофенак	5	Сульфафеназол	Фурафиллин
2C19	0,25	S-(+)-Мефенитоин (30 мкм)	4’-OH-мефенитоин	15	Транилципромин	Фенацетин
2D6	0,1	Буфаралол (10 мкм)	OH-буфуралол	10	Квинидин	Сульфафеназол
3A4	0,1	Мидазолам (3 мкм)	1’-OH-мидазолам	5	Кетоконазол	Сульфафеназол
3A4	0,25	Тестостерон (100 мкм)	6β-OH-тестостерон	15	Кетоконазол	Сульфафеназол
3A4	0,1	Нифедипин (5 мкм)	окисленный нифедипин	5	Кетоконазол	Сульфафеназол
3A4	0,1	Аторвастатин (10 мкм)	2-OH Аторвастатин	10	Кетоконазол	Сульфафеназол

8.7.10 Фенотипирование реакции CYP450

8.7.10.1 Протокол

Целью этого анализа является оценка того, который из основных CYP450 изоферментов может быть вовлечен в метаболизм тестируемого соединения.

1 мМ базовый раствор тестируемого соединения получают в ДМСО. Этот базовый раствор разводят в 50 мМ буфере на основе фосфата калия, pH 7,4, что дает конечную аналитическую концентрацию тестируемого соединения 1 мкм, 01% ДМСО. Такое разведение соединения добавляют к экспрессированным кДНК изоферментам человеческого цитохрома P450 (BD Biosciences, № по каталогу CYP1A2: 456203; CYP2C19: 456259; CYP2C9: 456258; CYP3A4: 456202; CYP2D6: 456217), определенные условия зависят от исследования изоформа: см. таблицу ниже.

После предварительного нагревания в течение 10 мин при 37°C, реакцию начинают добавлением смеси кофактора (конечные реакционные концентрации в анализе: 0,6 ед./мл глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы (G6PDH), 3,3 мМ MgCl₂, 3,3 мМ глюкоза-6-фосфата и 1,3 мМ NADP+ для CYP3A4, CYP2C9, CYP2C19 и CYP1A2. И 0,6 ед./мл G6PDH, 0,41 мМ MgCl₂, 0,41 мМ глюкоза-6-фосфата и 8,2 мкМ NADP+ для CYP2D6).

Параллельно, контроль стабильности проводят инкубированием тестируемого соединения с денатурированными (нагреванием) ферментами и смесью кофактора для оценки его стабильности во время инкубации.

Для каждого момента времени, после инкубирования в течение 37°C (см. таблицу XXI), образцы (50 мкл) гасят 100 мкл раствора ацетонитрила с внутренним стандартом (варфарин). Образцы центрифугируют (805 г, 20 минут, +4°C), и фракции надосадочной жидкости фильтруют (Varian Captiva, № по каталогу: A5960002), разводят в воде/ацетонитриле (85/15) и анализируют ЖХ-МС/МС (см. таблицу 3). Аппаратные характеристики (отношение площадей пика тестируемого соединения и внутреннего стандарта) соотносят с образцами, взятыми в нулевой момент времени (100%) для определения процента оставшегося соединения. Графики % оставшегося тестируемого соединение применяют для определения профиля метаболизма тестируемого соединения с применением программного обеспечения Graph Pad Prism.

Таблица XXI Условия анализа фенотипирования реакции CYP
Цитохром P450 Изоформ	Фермент (мг/мл)	Инкубирование (мин)	Положительный контроль
1A2	0,1	0-30-60	Фенацетин (1 мкм)
2C9	0,1	0-30-60	Диклофенак (1 мкм)
2C19	0,1	0-30-60	Омепразол (1 мкм)
2D6	0,1	0-30-60	Дектрометорфан (1 мкм)
3A4	0,1	0-30-60	Тестостерон (1 мкм)

8.7.11 Времязависимое ингибирование (ВЗИ)

8.7.11.1 Протокол

Анализ основанного на механизме ингибирования для CYP3A4 проводят для оценки присутствия какого-либо ВЗИ.

5 мМ базовый раствор тестируемого соединения получают в метаноле. Этот базовый раствор серийно разводят 1:3 в метаноле и затем добавляют в двух экземплярах к смеси, содержащей 50 мМ буфера на основе фосфата калия, pH 7,4, и микросомам печени человека (BD Gentest). Конечные условия реакции следующие: семь концентраций тестируемого соединения (0,14-100 мкм), полученные в двух экземплярах, и 2% метанола.

Специфические условия показаны ниже.

Цитохром P450 Изоформ	Микросомы (мг/мл)	Маркерное соединение	Маркерный метаболит	Инкубирование (мин)	Положительный контроль	Отрицательный контроль
3A4	0,1	Мидазолам (3 мкм)	1’-OH-мидазолам	5	Тролеандомицин	Кетоконазол
3A4	0,25	Тестостерон (100 мкм)	6β-OH-тестостерон	15	Тролеандомицин	Кетоконазол

После предварительного нагревания в течение 5 минут при 37°C, начинают 20 мин предварительное инкубирование добавлением маркерного субстрата к первому интервалу концентраций (первая реплика) и смеси кофактора (7,65 мг/мл глюкоза-6-фосфата, 1,7 мг/мл NADP, 6 ед./мл глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы) ко второй реплике.

После завершения предварительного инкубирования, реакцию наконец начинают добавлением смеси кофактора к первой реплике и маркерного субстрата ко второй реплике (наоборот, по сравнению с предварительным инкубированием).

После инкубирования при 37°C, реакцию (аликвота 50 мкл) останавливают добавлением 150 мкл раствора ацетонитрил:метанол (2:1) с внутренним стандартом (варфарин). Образцы центрифугируют, и фракции надосадочной жидкости анализируют ЖХ-МС/МС.

Аппаратные характеристики (отношение площадей пиков тестируемого соединения и внутреннего стандарта) соотносят с характеристиками контрольного ратсворителя (признанными как 100%) для определения снижения процента в маркерном метаболизме.

Графики активности к концентрации контроля создают и подгоняют с применением программного обеспечения GraphPad Prism для определения IC₅₀ для предварительной инкубации субтрата и кофактора, а также IC₅₀ сдвига свертываемости.

8.7.11.2 Результаты

Например, при выполнении этого протокола, IC₅₀ для соединения 2 составляет >100 мкм, без или с предварительным инкубированием с применением Мидазолама или тестостерона в качестве маркерного субстрата, что является доказательством отсутствия времязависимого ингибирования CYP3A4.

Общие выводы

Данные, представленные в этой заявке, демонстрируют, что соединение в соответствии с данным изобретением обладает значительной активностью in vitro и может применяться in vivo для лечения КФ и являются улучшенными по сравнению со сравнительными соединениями.

В частности, соединения в соответствии с данным изобретением неожиданно демонстрируют значительное улучшение in vitro мощности в анализе миграции ЖФБ галогенида для МТРП-ΔF508 и МТРП-G551D мутации по сравнению с близкими аналогами: например, соединение 3 (соединение в соответствии с данным изобретением) vs сравнительное соединение D, или соединение 2 (соединение в соответствии с данным изобретением) vs сравнительное соединение E.

Более того, как показано в анализе TECC, например, соединение 2 неожиданно показывает активность, не наблюдаемую у близкородственных аналогов сравнительных соединений A, B или E.

Заключение

Специалисту в данной области техники будет понятно, что представленные выше описания являются примерными и объясняющими по природе и предназначены для иллюстрации изобретения и его предпочтительных вариантов. С посощью обычного экспериментирования, специалист в данной области техники сможет понять очевидные модификации и вариации, которые могут быть сделаны, не выходя за суть данного изобретения. Все такие модификации, попадающие в формулу изобретения, включены сюда. Таким образом, данное изобретение определено не указанным выше описанимем, а представленной ниже формулой изобретения и ее эквивалентами.

Все публикации, включая, но не ограничиваясь ими, патенты и заявки на патенты, цитированные в этом описании, включены сюда в качестве ссылки так, как будто каждая отдельная публикация конкретно и отдельно включена сюда в качестве ссылки в полном объеме.

Должно быть понятно, что факторы, такие как проникающая способность в дифференциальные клетки различных соединений, могут влиять на расхождение в активности соединений в in vitro биохимических и клеточных анализах.

По крайней мере, некоторые из химических наименований соединений в соответствии с данным изобретением, данных и указанных в этой заявке, могут быть созданы автоматически с применением коммерчески доступного программного обеспечения для создания химических наименований, и не были независимо подтверждены. Типовые программы, осуществляющие эту функцию, включают программу для присваивания наименований Lexichem, продаваемую Open Eye Software, Inc., и программу Autonom Software, продаваемую MDL, Inc. В случаях, когда указанное химическое наименование и изображенная структура отличаются, изображенная структура является основной.

Ссылки

Bobadilla, J.L., Macek, М., Jr, Fine, J.P., Fanell, Р.М., 2002. Cystic fibrosis: а worldwide analysis of CFTR mutations-correlation with incidence data and application to screening. Hum. Mutat. 19, 575-606. doi:10.1002/humu.10041

Bundgaard, Н., 1985. Design ofprodrugs. Elsevier.

Fulcher, M.L., Gabriel, S., Bums, К.А., Yankaskas, J.R., Randell, S.Н., 2005. Well-differentiated human airway epithelial cell cultures. Methods Mol. Med. 107, 183-206.

Galietta, L.J.V., Haggie, Р.М., Verkman, A.S., 2001. Green fluorescent protein-based halide indicators with improved chloride and iodide affinities. FEBS Lett. 499, 220-224. doi:10.1016/S0014-5793(01)02561-3

Kerem, В., Rommens, J.M., Buchanan, J.A., Markiewicz, D., Сох, Т.К., Chakravarti, А., Buchwald, М., Tsui, L.C., 1989. Identification ofthe cystic fibrosis gene: genetic analysis. Science 245, 1073-1080.

Morello, J.-P., Bouvier, М., Petäjä-Repo, U.E., Bichet, D.G., 2000. Pharmacological chaperones: а new twist on receptor folding. Trends Pharmacol. Sci. 21, 466-469. doi:10.1016/S0165-6147(00)01575-3

Nagai, Т., Ibata, К., Park, E.S., Kubota, М., Mikoshiba, К., Miyawaki, А., 2002. А variant of yellow fluorescent protein with fast and efficient maturation for cell-biological applications. Nat. Biotechnol. 20, 87-90. doi:10.1038/nbt0102-87

Pasyk, Е.А., Foskett, J.К., 1995. Mutant (8F508) Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Cl- Channel Is Functional When Retained in Endoplasmic Reticulum of Mammalian Cells. J. Biol. Chem. 270, 12347-12350.

Quinton, Р.М., 1990. Cystic fibrosis: а disease in electrolyte transport. FASEB J. 4, 2709-2717.

Remington, J.P., 1985. Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture, in: Gennaro, A.R. (Ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Pub. Со., Easton, РА 18042.

Rowe, S.M., Verkman, A.S., 2013. Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator Correctors and Potentiators. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 3, а009761. doi:10.1101/cshperspect.a009761

Shastry, B.S., 2003. Neurodegenerative disorders of protein aggregation. Neurochem. Int. 43, 1-7. doi:10.1016/S0197-0186(02)00196-1

Wuts, P.G.M., Greene, T.W., 2012. Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4 edition, ed. Wiley-Interscience.

Zhang, W., Fujii, N., Naren, А.Р., 2012. Recent advances and new perspectives in targeting CFTR for therapy of cystic fibrosis and enterotoxin-induced secretory diarrheas. Future Med. Chem. 4, 329-345. doi:10.4155/fmc.12.1.

1. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение выбирают из:

N-(3-карбамоил-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-2-ил)-1H-пиразол-5-карбоксамида и

2-(2-гидроксибензамидо)-5,5,7,7-тетраметил-5,7-дигидро-4H-тиено[2,3-c]пиран-3-карбоксамида.

2. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения кистозного фиброза, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество соединения по п.1.

3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, предназначенное для лечения кистозного фиброза.

4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, предназначенное для лечения хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ).

5. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения ХОЗЛ, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и фармацевтически эффективное количество соединения по п.1.