Способ определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства

Авторы патента:

ЧЖАН, Шуйин (CN)

ЧЖАО, Цянь (CN)

ЧЭНЬ, Юпэн (CN)

БИ, Дань (CN)

G01N30/02 - колоночная хроматография

Владельцы патента RU 2712775:

ШИЦЗЯЧЖУАН ИЛИН ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД. (CN)

Настоящее изобретение относится к способу определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства. Способ определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства, состоящей из: Fructus Forsythia, Flos Lonicerae, Radix Isatidis, Semen Armeniacae Amarum, ментол, Herba Houttuyniae, ревень, Herba Pogostemonis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Rhodiola rosea L., Herba Ephedrae, Radix Glycyrrhizae и гипса включает: 1) экстракцию композиции традиционного китайского лекарственного средства с применением неполярного растворителя с получением исследуемого раствора; 2) получение раствора сравнения с применением ментол-содержащего соединения сравнения и неполярного растворителя, такого же как на стадии 1); 3) определение при помощи газовой хроматографии содержания ментола в исследуемом образце и растворе сравнения, при этом условия хроматографирования следующие: слабополярная капиллярная хроматографическая колонка; начальная температура колонки 80-100°С; указанную температуру поддерживают в течение 10-15 минут, затем увеличивают до 120-160°С со скоростью 6-10°С в минуту, поддерживают в течение 1,5-3,5 минут, затем увеличивают до 240-300°С со скоростью 100-160°С в минуту и поддерживают в течение 5-20 минут. Техническим результатом является разработка эффективного метода определения ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства при помощи газовой хроматографии. 17 з.п. ф-лы, 5 ил., 18 табл.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к способу определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Газовая хроматография заключается в испарении аналитического образца во впускном отверстии с последующим переносом парообразного образца газом-носителем в хроматографическую колонку и разделении компонентов образца на хроматографической колонке за счет различных параметров удерживания компонентов исследуемой смеси, и затем последовательного введения в детекторы с получением сигналов обнаружения для указанных компонентов. В соответствии с порядком введения компонентов в детекторы при сравнении можно идентифицировать пики компонентов, и содержание каждого из компонентов можно рассчитывать в соответствии с высотой пика или площадью пика.

Ментол экстрагируют из листьев и стеблей мяты; он находится в форме белых кристаллов и является основным ингредиентом эфирных масел мяты и мяты перечной. Основным производителем натуральной мяты в мире является Индия. Как ментол, так и рацемический ментол можно применять в качестве ароматизаторов для зубных паст, духов, напитков и конфет. Ментол применяют в медицине в качестве стимулятора, его наносят на кожу или слизистые оболочки, и он оказывает охлаждающее и противозудное действие. При пероральном введении ментол можно применять в качестве лекарственного средства для устранения ревматических болей, простуды и т.д., которое применяют при головной боли и воспалениях носа, глотки и горла. Эфиры ментола применяют в специях и лекарственных средствах. В настоящее время газовую хроматографию широко применяют для контроля качества лекарственных средств традиционной китайской медицины, особенно для обнаружения легколетучих компонентов. Контроль качества и оценка соединений в составе лекарственных средств традиционной китайской медицины является одним из ключевых аспектов в области модернизации лекарственных средств традиционной китайской медицины и представляет собой непростую задачу, на решение которой направлены исследования, проводимые в области лекарственных средств традиционной китайской медицины, особенно в отношении контроля легколетучих химических компонентов. Целью контроля качества лекарственных средств традиционной китайской медицины является обеспечение их эффективности и безопасности. Контроль качества лекарственных средств традиционной китайской медицины заключается в мониторинге фармакодинамических веществ, токсичных веществ в составе лекарственных средств традиционной китайской медицины, а также изменении касающихся их правил, и в проведении проверки качества и контроле на каждом этапе процесса производства лекарственных средств традиционной китайской медицины на основе ряда стандартов качества. Кроме того, исследование методик, способов и стратегий оценки качества лекарственных средств традиционной китайской медицины является основой для разработки научных, рациональных и передовых стандартов качества.

Настоящее изобретение направлено на защиту способа определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства, состоящей из следующих лекарственных материалов: Fructus Forsythia, Flos Lonicerae, Radix Isatidis, Semen Armeniacae Amarum, ментол, Herba Houttuyniae, ревень, Herba Pogostemonis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Rhodiola rosea L., Herba Ephedrae, Radix Glycyrrhizae и гипс. В предложенном способе содержание ментола в композиции определяют при помощи газовой хроматографии с обеспечением эффективного контроля содержания ментола в композиции. Способ позволяет экономить энергию и снижать затраты на проведение анализа, при этом указанный способ не описан в предшествующем уровне техники.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении предложен способ определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства, полученной из следующих массовых количеств исходных материалов: Fructus Forsythia 200-300, Herba Ephedrae 60-100, ревень 40-60, Herba Houttuyniae 200-300, Flos Lonicerae 200-300, Radix Isatidis 200-300, Herba Pogostemonis 60-100, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 200-300, Rhodiola rosea L. 60-100, ментол 5-9, Semen Armeniacae Amarum 60-100, Radix Glycyrrhizae 60-100 и гипс 200-300, где содержание ментола определяют следующим образом:

1) экстрагируют композицию традиционного китайского лекарственного средства с применением неполярного растворителя с получением исследуемого раствора;

2) получают раствор сравнения с концентрацией ментола 4,80 мкг/мл или более, предпочтительно 17,65 мкг/мл или более, более предпочтительно 0,2-0,3 мг/мл, с применением ментол-содержащего соединения сравнения и неполярного растворителя, такого же как на стадии 1);

3) берут одинаковое количество раствора сравнения и исследуемого раствора, вводят указанные растворы в газовый хроматограф и определяют содержание ментола, где условия проведения хроматографии являются следующими:

колонка представляет собой слабополярную капиллярную хроматографическую колонку; температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурной программой: начальная температура 80-100°С; и указанную начальную температуру поддерживают в течение 10-15 минут, а затем увеличивают до 120-160°С со скоростью 6-10°С в минуту, затем поддерживают в течение 1,5-3,5 минут, а затем увеличивают до 240-300°С со скоростью 100-160°С в минуту и поддерживают в течение 5-20 минут.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения применяемое при получении исследуемого раствора отношение массы композиции традиционного китайского лекарственного средства к объему неполярного растворителя составляет от (1 г: 400 мл) до (1 г: 50 мл).

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения слабополярная капиллярная хроматографическая колонка содержит фенилметилполисилоксан в качестве неподвижной фазы, и предпочтительно фенилметилполисилоксан имеет содержание фенила 1-10%, более предпочтительно 5%, т.е. капиллярная хроматографическая колонка содержит полисилоксан, содержащий 5% фенила и 95% метила, в качестве неподвижной фазы. Особенно предпочтительно в настоящем изобретении применяют капиллярную хроматографическую колонку типа НР-5 или DB-5.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения раствор сравнения и исследуемый раствор вводят в количестве 0,5-2 мкл, соответственно, и их можно вводить в количестве 0,5 мкл, 1 мкл, 1,5 мкл или 2 мкл и т.п.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения в хроматографическом испытании раствор сравнения и исследуемый раствор вводят путем впрыскивания с делением потока с соотношением деления потока в диапазоне от 50:1 до 10:1, предпочтительно от 30:1 до 20:1, например, 25:1.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения отношение топливных газов также включено в условиях проведения хроматографии. Специалистам в данной области техники хорошо известно, что количества и отношение топливных газов, применяемых в газовой хроматографии, зависят от детектора, используемого в хроматографе. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения отношение топливных газов представляет собой отношение воздуха к водороду, которое составляет от 8:1 до 12:1, предпочтительно от 9:1 до 11:1, наиболее предпочтительно 10:1.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения условия проведения хроматографии дополнительно включают температуру детектора и температуру на впуске, которые составляют 300-400°С, соответственно. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения условия проведения хроматографии дополнительно включают газ-носитель и его расход, газ-носитель представляет собой азот, а его расход составляет 0,8-1,2 мл/мин.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения неполярный растворитель, применяемый для получения раствора сравнения и исследуемого образца, выбран из группы, состоящей из неполярных насыщенных алканов или галогенированных насыщенных алканов и неполярных сложноэфирных растворителей, в частности, н-гексана, дихлорметана, петролейного эфира и этилацетата, предпочтительно, н-гексана.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения способ получения исследуемого раствора заключается в следующем: равномерное размельчение и смешивание определенного количества композиции традиционного китайского лекарственного средства, помещение полученного вещества в емкость с узким горлом с пробкой, добавление неполярного органического растворителя, встряхивание в течение 20 секунд или более, фильтрование полученного исследуемого раствора. В некоторых предпочтительных вариантах реализации стадию фильтрования проводят с применением 0,2-0,4 мкм микропористого фильтра, предпочтительно с применением 0,22 мкм микропористого фильтра. В некоторых предпочтительных вариантах реализации способ получения исследуемого раствора дополнительно включает стадию замачивания или ультразвуковой экстракции при комнатной температуре перед стадией встряхивания.

Раствор сравнения согласно настоящему изобретению можно получать с применением способов, обычно применяемых в данной области техники. Предпочтительный способ заключается в отборе соответствующего количества ментола сравнения и его точного взвешивания с последующим добавлением неполярного органического растворителя с получением раствора сравнения с концентрацией 4,80 мкг/мл или более, предпочтительно 17,65 мкг/мл или более, более предпочтительно 0,2-0,3 мг/мл, особенно 0,23 мг/мл.

В варианте реализации согласно настоящему изобретению вещество, содержащееся в составе Lianhua Qingwen (таком как таблетки или гранулы), который уже представлен на рынке, можно применять непосредственно для получения исследуемой композиции традиционного китайского лекарственного средства, при этом исследуемую композицию традиционного китайского лекарственного средства также можно получать следующим способом:

(1) взвешивание традиционных китайских лекарственных средств в соответствии с массовым отношением компонентов растительного сырья, отбор частей лекарственных средств и их измельчение;

(2) добавление воды к Herba Pogostemonis (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляет 8-12) для экстракции легколетучего масла, при этом время экстракции масла составляет 6-10 часов, сбор легколетучего масла для последующего использования; после фильтрования экстракта фильтрат сохраняют для последующего использования;

(3) экстракция Fructus Forsythia, Herba Ephedrae, Herba Houttuyniae и ревеня 60%-80% (об./об.) этанолом (отношение объема этанола к массе лекарственных материалов (л/кг, мл/г) составляет 10-14) 2-4 раза, при этом каждый раз экстракция занимает 1,5-3 часа, объединение и фильтрование экстрактов, сохранение фильтрата для последующего использования;

(4) добавление воды к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L. (отношение объема воды к массе лекарственных материалов (л/кг, мл/г) составляет 10-14) и отваривание полученной смеси до кипения, добавление Semen Armeniacae Amarum, отваривание полученной смеси 2-4 раза, каждый раз в течение 0,5-2 часов, объединение и фильтрование экстрактов, объединение полученного фильтрата с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрирование полученной комбинации с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,10-1,15, определенной при 50-70°С, добавление этанола, доведение концентрации спирта до 65-80%, охлаждение, фильтрование и рециркуляция этанола до исчезновения запаха спирта, получение прозрачной пасты для последующего использования;

(5) объединение прозрачной пасты, полученной на стадии (4), с этанольным экстрактом со стадии (3), концентрирование с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,15-1,20, определенной при 50-70°С, высушивание с получением сухих порошкообразных паст для последующего использования;

(6) добавление сухих порошкообразных паст, полученных на стадии (5), к подходящему фармацевтически приемлемому вспомогательному материалу для гранулирования;

(7) добавление ментола и легколетучего масла, полученного на стадии (2), к этанолу и растворение ментола и легколетучего масла в этаноле, и распыление гранул, полученных на стадии (6), в полученную смесь, герметизация, равномерное перемешивание, таблетирование, инкапсулирование или пакетирование.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения фармацевтически приемлемый вспомогательный материал представляет собой крахмал.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложен способ определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства. Композицию традиционного китайского лекарственного средства получают из растительного сырья со следующим содержанием компонентов: Fructus Forsythia 200-300, Herba Ephedrae 60-100, ревень 40-60, Herba Houttuyniae 200-300, Flos Lonicerae 200-300, Radix Isatidis 200-300, Herba Pogostemonis 60-100, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 200-300, Rhodiola rosea L. 60-100, ментол 5-9, Semen Armeniacae Amarum 60-100, Radix Glycyrrhizae 60-100 и гипс 200-300, при этом способ определения содержания ментола включает:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,2-0,5 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 20-30 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 20-50 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора вещества сравнения: отбор требуемого количества ментола сравнения, точное взвешивание, добавление н-гексана с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл н-гексана с получением раствора сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляет 98°С, температуру поддерживают в течение 12 минут, увеличивают до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживают в течение 2,5 минут, а затем увеличивают до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживают в течение 5-20 минут; температура детектора составляет 300-400°С; температура на впуске составляет 300-400°С; газ-носитель представляет собой азот, расход: 0,8-1,2 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 0,5-2 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точный отбор 0,5-2 мкл раствора ментола и 0,5-2 мкл исследуемого раствора, соответственно, введение взятого раствора в газовый хроматограф для определения.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения композиция традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению получена из следующих количеств следующих исходных материалов:

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предпочтительными массовыми содержаниями в композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению являются следующие:

Fructus Forsythia 255, Flos Lonicerae 255, Radix Isatidis 255, ревень 51, Herba Pogostemonis 85, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 255, Rhodiola rosea L. 85, ментол 7,5, Herba Ephedrae 85, Semen Armeniacae Amarum 85, Herba Houttuyniae 255, Radix Glycyrrhizae 85 и гипс 255.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения способ получения композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению включает:

(1) взвешивание лекарственных средств традиционной китайской медицины в соответствии с массовым отношением компонентов растительного сырья, отбор частей лекарственных средств и их измельчение по мере необходимости;

(2) измельчение Herba Pogostemonis, добавление воды (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляет 10) для экстракции легколетучего масла, при этом время экстракции масла составляет 8 часов, сбор легколетучего масла для последующего использования; после фильтрования экстракта удаляют остаток и фильтрат сохраняют для последующего использования;

(3) экстракцию Fructus Forsythia, Herba Ephedrae, Herba Houttuyniae и ревеня 70% (об./об.) этанолом (отношение объема воды к массе лекарственных материалов (л/кг, мл/г) составляет 12) 3 раза, при этом каждый раз экстракция занимает 2,5 часа, объединение и фильтрование экстрактов, рециркуляция этанола, сохранение фильтрата для последующего использования;

(4) добавление воды к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L. (отношение объема воды к массе лекарственных материалов (л/кг, мл/г) составляет 12) и отваривание полученной смеси до кипения, добавление Semen Armeniacae Amarum, отваривание полученной смеси 2 раза, каждый раз в течение 1 часа, объединение и фильтрование экстрактов, объединение полученного фильтрата с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрирование полученной комбинации с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,10-1,15, определенной при 60°С, добавление этанола, доведение концентрации спирта до 70%, охлаждение, фильтрование, рециркуляция этанола до исчезновения запаха спирта, получение прозрачной пасты для последующего использования;

(5) объединение прозрачной пасты, полученной на стадии (4), с этанольным экстрактом со стадии (3), концентрирование с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,15-1,20, определенной при 60°С, высушивание с получением сухих порошкообразных паст для последующего использования;

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения способ определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства представляет собой:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,3 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 25 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 30 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора вещества сравнения: отбор требуемого количества ментола сравнения, точное взвешивание, добавление н-гексана с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл с получением раствора ментола сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляет 98°С, температуру поддерживают в течение 12 минут, увеличивают до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживают в течение 2,5 минут, а затем увеличивают до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживают в течение 10 минут; температура детектора составляет 300°С; температура на впуске составляет 300°С; газ-носитель представляет собой азот, расход: 1 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 1 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точный отбор 1 мкл раствора сравнения и 1 мкл исследуемого раствора, соответственно, введение растворов в газовый хроматограф, определение с последующим получением результатов.

Необязательно способ определения содержания согласно настоящему изобретению включает:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,2 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 20 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 20 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляет 98°С, температуру поддерживают в течение 12 минут, увеличивают до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживают в течение 2,5 минут, а затем увеличивают до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживают в течение 5-20 минут; температура детектора составляет 350°С; температура на впуске составляет 350°С; газ-носитель представляет собой азот, расход: 0,8 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 0,5 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точный отбор 0,5 мкл раствора сравнения и 0,5 мкл исследуемого раствора, соответственно, введение растворов в газовый хроматограф, определение с последующим получением результатов.

Необязательно способ определения содержания согласно настоящему изобретению включает:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,5 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 30 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 50 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляла 98°С, температуру поддерживают в течение 12 минут, увеличивают до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживают в течение 2,5 минут, а затем увеличивают до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживают в течение 5-20 минут; температура детектора составляет 400°С; температура на впуске составляет 400°С; газ-носитель представляет собой азот, расход: 1,2 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 2 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точный отбор 2 мкл раствора сравнения и 2 мкл исследуемого раствора, соответственно, введение растворов в газовый хроматограф, определение с последующим получением результатов.

Технико-экономическая оценка способа испытаний

Технико-экономическую оценку способа определения содержания для композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению проводили с применением композиции традиционного китайского лекарственного средства, полученной в соответствии с первым вариантом реализации согласно настоящему изобретению, и способ проведения оценки являлся следующим:

1. Инструменты, реагенты и лекарственное средство

Инструменты: газовый хроматограф PerKinElmer Clarus 680, электронные весы AL204 и AB135-S, капиллярные хроматографические колонки Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм), ультразвуковой очиститель с числовым программным управлением (модель: KQ-500DB, 500 Вт, 40 КГц), 0,22 мкм микропористая мембрана (Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.).

Реагенты: н-гексан (хроматографическая чистота, Fisher, U.S.), петролейный эфир, дихлорметан, этилацетат (чистый для анализа, Beijing Chemical Plant).

Лекарственное средство: ментол-содержащее соединение сравнения (приобретенный в SIGMA-ALDRICH, номер партии: M2772-100G-A, чистота 99%).

2. Условия проведения хроматографии

Хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивали в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляла 98°С, температуру поддерживали в течение 12 минут, увеличивали до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживали в течение 2,5 минут, а затем увеличивали до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживали в течение 10 минут; температура детектора составляла 300°С; температура на впуске составляла 300°С; газ-носитель представлял собой азот, расход: 1 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 1 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45).

3. Получение исследуемого раствора и раствора сравнения

3.1 Исследование способа получения исследуемого раствора

3.1.1 Исследование растворителей для экстракции

Отбирали вещество, содержащееся в композиции традиционного китайского лекарственного средства, из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелко измельчали, равномерно перемешивали, собирали 0,3 г полученного вещества, точно взвешивали, помещали в 100 мл коническую колбу с пробкой, параллельно готовили по 2 образца с 50 мл каждого из следующих растворителей для экстракции: петролейный эфир, дихлорметан, н-гексан, этилацетат. Точно отбирали петролейный эфир, дихлорметан, н-гексан, этилацетат (60-90°С), встряхивали колбу по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 30 секунд, отбирали подходящее количество раствора, фильтровали через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора.

Отбирали 1 мкл каждого из исследуемых растворов, вводили в газовый хроматограф, использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве контрольного образца, сравнивали процентное содержание ментола в исследуемых растворах. Результаты показали, что при использовании н-гексана в качестве растворителя для экстракции процентное содержание исследуемого вещества было относительно высоким, поэтому н-гексан выбрали в качестве растворителя для экстракции (таблица 1).

3.1.2 Исследование способов экстракции

Отбирали вещество, содержащееся в композиции традиционного китайского лекарственного средства, из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелко измельчали, равномерно перемешивали, отбирали 0,3 г, точно взвешивали и помещали в 100 мл коническую колбу с пробкой. Параллельно готовили по 2 образца при помощи экстракции путем холодного замачивания (т.е. экстракции путем замачивания при комнатной температуре) и ультразвуковой экстракции, соответственно. Экстракция путем холодного замачивания: точно отбирали 50 мл н-гексана, после 20 минут холодного замачивания колбу встряхивали по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение 30 секунд; ультразвуковая экстракция: точно отбирали 50 мл н-гексана, взвешивали перед обработкой ультразвуком, через 20 минут после обработки ультразвуком добавляли н-гексан для восполнения массы. В каждом способе экстракции отбирали подходящее количество раствора, фильтровали через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

Отбирали 1 мкл каждого из исследуемых растворов, вводили в газовый хроматограф, использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве контрольного образца, сравнивали процентное содержание ментола в исследуемых растворах. Результаты показали, что эффекты двух способов экстракции являлись схожими. Холодную экстракцию выбрали с учетом ее удобства (таблица 2).

3.1.3 Исследование времени экстракции

Отбирали 1 мкл каждого из исследуемых растворов, вводили в газовый хроматограф, использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве контрольного образца, сравнивали процентное содержание ментола в исследуемых растворах. Результаты показали, что процентные содержания ментола, полученные для трех времен экстракции, являлись схожими, поэтому выбрали время холодного замачивания, составляющее 0 минут (таблица 3).

3.1.4 Исследование количеств растворителей

Отбирали 1 мкл исследуемого раствора, вводили в газовый хроматограф, использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве контрольного образца, сравнивали процентное содержание ментола в исследуемых растворах. Результаты показали, что эффекты экстракции, полученные для 25 мл, 50 мл и 75 мл, являлись схожими, поэтому выбранное количество растворителя составляло 25 мл (таблица 4).

3.1.5 Определение способа получения исследуемого раствора

В соответствии с приведенными выше результатами испытаний окончательно определяли следующий способ получения исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в композиции традиционного китайского лекарственного средства, из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,3 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 25 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 30 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора.

3.2 Исследование способа получения раствора ментола сравнения

Получение раствора вещества сравнения

Отбирали и точно взвешивали подходящее количество ментола сравнения, добавляли н-гексан с получением раствора ментола с концентрацией 0,23 мг/1 мл.

3.2.1 Исследование специфичности

Растворитель (т.е. холостой реагент), раствор отрицательного контроля, раствор сравнения и исследуемый раствор испытывали в соответствии с определенными условиями, где раствор отрицательного контроля относится к раствору, полученному в соответствии со способом получения исследуемого раствора без добавления ментола. Результаты показали, что отрицательный контроль не проявлял негативного влияния на испытываемые компоненты и имел хорошую специфичность в отношении исследуемых компонентов (хроматограммы растворителя, отрицательного контроля, вещества сравнения, исследуемого образца приведены на фигурах 2-5).

3.2.2 Исследование линейной зависимости

Взвешивали 100,51 мг ментола сравнения, помещали в 50 мл мерную колбу и растворяли в н-гексане, к измеренному объему добавляли н-гексан, полученную смесь равномерно встряхивали и полученный раствор сохраняли для последующего использования, затем точно отбирали 1 мл, 1,5 мл, 2 мл, 2,5 мл, 3 мл, 3,5 мл раствора и помещали в 25 мл мерную колбу, разбавляли н-гексаном до метки, получали серии растворов сравнения с концентрациями 0,0804 мг/мл, 0,1206 мг/мл, 0,1608 мг/мл, 0,2010 мг/мл, 0,2412 мг/мл и 0,2814 мг/мл, точно отбирали по 1 мкл каждого из указанных выше растворов сравнения, вводили в газовый хроматограф, определяли площади пиков, осуществляли линейную регрессию с концентрациями вводимых образцов (мг/мл) в качестве х-координат и площадей пиков в качестве у-координат, результаты показали, что линейность являлась хорошей в диапазоне концентраций ментола от 0,0804 мг/мл до 0,2814 мг/мл, и уравнение регрессии имело вид у=48583,7941х+142,5821 (R²=0,9996). Результаты приведены в таблице 5 и на фигуре 1.

3.2.3 Определения предела обнаружения и предела количественного определения

Раствор сравнения с концентрацией 0,0804 мг/мл дополнительно разбавляли с получением серий растворов сравнения с концентрациями 28,944 мкг/мл, 24,120 мкг/мл, 19,296 мкг/мл, 17,688 мкг/мл, 16,080 мкг/мл, 12,060 мкг/мл, 8,040 мкг/мл, 6,432 мкг/мл, 4,824 мкг/мл, 3,216 мкг/мл, соответственно, отбирали по 1 мкл каждого из указанных выше растворов сравнения, вводили в газовый хроматограф, записывали отношение интенсивности сигнала к интенсивности шума. Концентрацию, при которой отношение интенсивности сигнала к интенсивности шума равнялось 3, использовали в качестве предела обнаружения. Концентрацию, при которой отношение интенсивности сигнала к интенсивности шума равнялось 10, использовали в качестве предела количественного определения. Предел обнаружения и предел количественного определения ментола составляли 4,824 мкг/мл и 17,688 мкг/мл, соответственно.

4. Методологическое исследование

4.1 Исследование точности

Результаты из таблицы 6 демонстрируют RSD площади пика ментола в исследуемом растворе и растворе вещества сравнения менее 2%, что указывает на хорошую точность устройства.

4.2 Испытание на стабильность

Отбирали подходящее количество композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению, равномерно измельчали, отбирали 0,3 г, точно взвешивали, испытываемые растворы получали в соответствии со способом получения исследуемого раствора, образцы вводили в соответствии с определенными условиями проведения хроматографии через 0 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч, 12 ч и 24 ч, соответственно, записывали площади пиков ментола, рассчитывали их RSD и исследовали стабильность раствора. Результаты приведены в таблице 7.

Результаты из таблицы 7 демонстрируют, что RSD площади пика ментола в исследуемом растворе менее 3% в течение 24 часов, что указывает на стабильность исследуемого раствора в течение 24 часов.

4.3 Испытание на воспроизводимость

Отбирали подходящее количество композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению, мелко измельчали, отбирали образцы в количестве, составляющем 80%, 100% и 120% от количеств, отобранных в соответствии со способом получения исследуемого раствора, т.е. отдельно отбирали примерно 0,24 г, 0,3 г, 0,36 г, для каждого количества параллельного отбирали по 3 образца, всего 9 образцов. Исследуемый раствор получали в соответствии со способом получения исследуемого раствора, определяли содержания (%) ментола в исследуемом растворе и рассчитывали в соответствии с определенными условиями проведения хроматографии, рассчитывали их RSD. Результаты приведены в таблице 8.

Результаты из таблицы 8 демонстрируют, что среднее содержание ментола в 9 исследуемых растворах составляло 1,86%, RSD содержания составляло 3%, что указывает на хорошую воспроизводимость способа.

4.4 Испытание на извлечение

Отбирали образец с массой, составляющей половину от 0,3 г количества образца, т.е. 0,15 г, точно взвешивали, параллельного получали 9 образцов, отбирали раствор сравнения с известным содержанием, растворы сравнения добавляли к образцам в отношении 80%, 100% и 120% от количества образца, соответственно. Параллельно получали по 3 образца, исследуемый раствор получали в соответствии со способом получения исследуемого раствора, проводили определение в соответствии с определенными условиями проведения хроматографии, рассчитывали извлечение ментола из композиции традиционного китайского лекарственного средства и рассчитывали его RSD. Результаты приведены в таблице 9.

Результаты из таблицы 9 демонстрируют, что среднее значение извлечения ментола для девяти исследуемых растворов составляло 97,68%, его RSD составляло 2,4%, что указывает на то, что способ характеризуется хорошим извлечением.

4.5 Испытание на пригодность системы

4.5.1 Влияние расхода газа-носителя на определение содержания ментола

Отбирали подходящее количество композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению, мелко измельчали, равномерно перемешивали, отбирали 0,3 г, точно взвешивали, параллельно готовили по 2 образца, исследуемый раствор получали в соответствии со способом получения исследуемого раствора, не изменяли другие условия проведения хроматографии, проводили измерения при расходе газа-носителя 0,80, 1,00 и 1,20 мл/минута (параллельно для каждого образца проводили два введения), соответственно, использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве вещества сравнения, рассчитывали содержание ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства, сравнивали влияние изменения расхода газа-носителя на результаты измерения. Результаты приведены в таблице 10.

Из приведенных выше результатов видно, что после изменения расхода газа-носителя значение RSD результатов измерения содержания ментола составляло менее 3%, что указывает на незначительное влияние изменения расхода газа-носителя на результаты измерения содержания в образце.

4.5.2 Влияние изменения температуры детектора на определение содержания ментола

Отбирали исследуемый раствор, не изменяли другие условия проведения хроматографии, проводили измерения при температурах ПИД-детектора 295°С, 300°С и 305°С, соответственно, и использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве вещества сравнения, рассчитывали содержание ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению, сравнивали влияние изменения температуры ПИД-детектора на результаты измерения. Результаты приведены в таблице 11.

Из приведенных выше результатов видно, что после изменения температуры детектора значение RSD результата измерения содержания ментола составляло менее 3%, что указывает на незначительное влияние изменения температуры детектора на результаты измерения содержания в образце.

4.5.3 Влияние изменения температуры на впуске на определение содержания ментола

Отбирали исследуемый раствор, не изменяли другие условия проведения хроматографии, проводили измерения при температурах на впуске 295°С, 300°С и 305°С, соответственно, и использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве вещества сравнения, рассчитывали содержание ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению, сравнивали влияние изменения температуры на впуске на результаты измерения. Результаты приведены в таблице 12.

Из приведенных выше результатов видно, что после изменения температуры на впуске значение RSD результата измерения содержания ментола составляло менее 3%, что указывает на незначительное влияние изменения температуры на впуске на результаты измерения содержания в образце.

4.5.3 Влияние разных капиллярных хроматографических колонок на определение содержания ментола

Отбирали исследуемый раствор, не изменяли другие условия проведения хроматографии, проводили измерения с применением разных капиллярных хроматографических колонок Agilent DB-5 и Agilent НР-5, соответственно, и использовали ментол-содержащее соединение сравнения в качестве вещества сравнения, рассчитывали содержание ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению, сравнивали влияние хроматографических колонок на результаты измерения. Результаты приведены в таблице 13.

Из приведенных выше результатов видно, что при выборе разных типов капиллярных хроматографических колонок одной и той же марки значение RSD результата измерения содержания ментола составляло менее 3%, что указывает на хорошую пригодность указанного способа определения содержания.

4.5.4 Результаты определения содержания ментола в разных партиях составов из традиционной китайской медицины согласно настоящему изобретению

При помощи способа определения состава определяли ментол, содержащийся в 10 партиях композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению (таблица ниже) производства Yiling Pharmaceutical Co., Ltd., Шицзячжуан. Результаты приведены в таблице 14.

Разработан способ определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению, и приведенные выше экспериментальные результаты демонстрируют, что способ обладает хорошей точностью, стабильностью и воспроизводимостью и обеспечивает новый способ улучшения качественного контроля составов из традиционной китайской медицины.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1: калибровочная кривая ментола

Фигура 2: хроматограмма холостого реагента

Фигура 3: хроматограмма раствора отрицательного вещества сравнения

Фигура 4: хроматограмма раствора вещества сравнения

Фигура 5: хроматограмма исследуемого раствора

ВАРИАНТЫ РЕАЛИЗАЦИИ

Устройства и реагенты

Устройство: газовый хроматограф PerKinElmer Clarus 680, электронные весы AL204 и AB135-S, капиллярные хроматографические колонки Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм), ультразвуковой очиститель с числовым программным управлением (модель: KQ-500DB, 500 Вт, 40 КГц), 0,22 мкм микропористая мембрана (Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.).

Каждый из следующих примеров проводили параллельно три раза в соответствии с перечисленными условиями, и номера записывали, как 1, 2 и 3, соответственно.

Пример 1

Следующие материалы взвешивали в приведенных ниже отношениях: Fructus Forsythia 200, Flos Lonicerae 300, Radix Isatidis 200, ревень 40, Herba Pogostemonis 60, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 300, Rhodiola rosea L. 100, ментол 9, Herba Ephedrae 60, Semen Armeniacae Amarum 100, Herba Houttuyniae 200, Radix Glycyrrhizae 100 и гипс 200, и экстрагировали в соответствии со следующим способом:

(1) взвешивали лекарственные средства традиционной китайской медицины в соответствии с массовым отношением компонентов растительного сырья, отбирали части лекарственных средств и измельчали их по мере необходимости;

(2) Herba Pogostemonis измельчали, добавляли воду (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляло 10) для экстракции легколетучего масла, время экстракции масла: 8 часов, собирали легколетучее масло для последующего использования; после фильтрования экстракта удаляли остаток и фильтрат сохраняли для последующего использования;

(3) Fructus Forsythia, Herba Ephedrae, Herba Houttuyniae и ревень экстрагировали 70% этанолом (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляло 12) 3 раза, при этом каждый раз экстракция занимала 2,5 часа, экстракты объединяли и фильтровали, этанол рециркулировали, фильтрат сохраняли для последующего использования;

(4) добавляли воду к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L. (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляло 12) и отваривали полученную смесь до кипения, добавляли Semen Armeniacae Amarum, отваривали полученную смесь 2 раза, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяли и фильтровали, объединяли полученный фильтрат с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрировали полученную комбинацию с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,15, определенной при 60°С, добавляли этанол, доводили концентрацию спирта в полученной смеси до 70%, охлаждали, фильтровали, рециркулировали этанол до исчезновения запаха спирта, получали прозрачную пасту для последующего использования;

(5) объединяли прозрачную пасту, полученную на стадии (4), с этанольным экстрактом со стадии (3), полученную комбинацию концентрировали с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,20, определенной при 60°С, прозрачную пасту высушивали с получением сухих порошкообразных паст для последующего использования;

(6) сухие порошки для получения паст, полученные на стадии (5), добавляли к подходящему фармацевтически приемлемому вспомогательному материалу для гранулирования; вспомогательный материал может представлять собой 35 г крахмала;

(7) ментол и легколетучее масло, полученное на стадии (2), добавляли к этанолу и растворяли ментол и легколетучее масло в этаноле, гранулы, полученные на стадии (6), распыляли в полученную смесь, после инкапсулирования получали продукт.

Способ определения содержания ментола:

получение исследуемого раствора: отбирали вещество, содержащееся в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелко измельчали, равномерно перемешивали, отбирали 0,3 г, точно взвешивали, помещали в коническую колбу с пробкой, точно добавляли 25 мл н-гексана, встряхивали колбу по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 30 секунд, отбирали подходящее количество раствора, фильтровали через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора вещества сравнения: отбирали подходящее количество ментол-содержащего соединения сравнения, точно взвешивали, добавляли н-гексан с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл с получением раствора сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивали в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляла 98°С, температуру поддерживали в течение 12 минут, увеличивали до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживали в течение 2,5 минут, а затем увеличивали до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживали в течение 10 минут; температура детектора составляла 300°С; температура на впуске составляла 300°С; газ-носитель представлял собой азот, расход: 1 мл/мин; вводили путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 1 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точно отбирали по 1 мкл раствора сравнения и исследуемого раствора, соответственно, и вводили в газовый хроматограф, определение с получением результатов.

Вывод: в результате ментол хорошо отделяли, и его можно применять для контроля качества композиции традиционного китайского лекарственного средства.

Пример 2

Следующие материалы взвешивали в приведенных ниже отношениях: Fructus Forsythia 300, Flos Lonicerae 200, Radix Isatidis 300, ревень 60, Herba Pogostemonis 100, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 200, Rhodiola rosea L. 60, ментол 5, Herba Ephedrae 100, Semen Armeniacae Amarum 60, Herba Houttuyniae 300, Radix Glycyrrhizae 60 и гипс 300, и экстрагировали в соответствии со следующим способом:

(1) взвешивали лекарственные средства традиционной китайской медицины в соответствии с массовым отношением исходных материалов, отбирали части лекарственных средств и измельчали их по мере необходимости;

(4) добавляли воду к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L. (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляло 12) и отваривали полученную смесь до кипения, добавляли Semen Armeniacae Amarum, отваривали полученную смесь 2 раза, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяли и фильтровали, объединяли полученный фильтрат с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрировали полученную комбинацию с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,10, определенной при 60°С, добавляли этанол, доводили концентрацию спирта в полученной смеси до 70%, охлаждали, фильтровали, рециркулировали этанол до исчезновения запаха спирта, получали прозрачную пасту для последующего использования;

(5) объединяли прозрачную пасту, полученную на стадии (4), с этанольным экстрактом со стадии (3), полученную комбинацию концентрировали с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,15, определенной при 60°С, прозрачную пасту высушивали с получением сухих порошкообразных паст для последующего использования;

(7) ментол и легколетучее масло, полученное на стадии (2), добавляли к этанолу и растворяли ментол и легколетучее масло в этаноле, гранулы, полученные на стадии (6), распыляли в полученную смесь, после таблетирования получали продукт.

Способ определения содержания ментола:

получение исследуемого раствора: отбирали вещество, содержащееся в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелко измельчали, равномерно перемешивали, отбирали 0,2 г, точно взвешивали, помещали в коническую колбу с пробкой, точно добавляли 20 мл н-гексана, встряхивали колбу по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 20 секунд, отбирали подходящее количество раствора, фильтровали через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора вещества сравнения: отбирали подходящее количество ментол-содержащего соединения сравнения, точно взвешивали, добавляли н-гексан с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл н-гексана с получением раствора сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивали в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляла 98°С, температуру поддерживали в течение 12 минут, увеличивали до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживали в течение 2,5 минут, а затем увеличивали до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживали в течение 5-20 минут; температура детектора составляла 350°С; температура на впуске составляла 350°С; газ-носитель представлял собой азот, расход: 0,8 мл/мин; вводили путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 0,5 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точно отбирали по 0,5 мкл раствора сравнения и исследуемого раствора, соответственно, и вводили в газовый хроматограф, определение с получением результатов.

Пример 3

Следующие материалы взвешивали в приведенных ниже отношениях: Fructus Forsythia 278, Flos Lonicerae 294, Radix Isatidis 285, ревень 55, Herba Pogostemonis 95, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 290, Rhodiola rosea L. 87, ментол 8,5, Herba Ephedrae 88, Semen Armeniacae Amarum 80, Herba Houttuyniae 284, Radix Glycyrrhizae 95 и гипс 277, и экстрагировали в соответствии со следующим способом:

(4) добавляли воду к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L. (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляло 12) и отваривали полученную смесь до кипения, добавляли Semen Armeniacae Amarum, отваривали полученную смесь 2 раза, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяли и фильтровали, объединяли полученный фильтрат с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрировали полученную комбинацию с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,13, определенной при 60°С, добавляли этанол, доводили концентрацию спирта в полученной смеси до 70%, охлаждали, фильтровали, рециркулировали этанол до исчезновения запаха спирта, получали прозрачную пасту для последующего использования;

(5) объединяли прозрачную пасту, полученную на стадии (4), с этанольным экстрактом со стадии (3), полученную комбинацию концентрировали с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,18, определенной при 60°С, прозрачную пасту высушивали с получением сухих порошкообразных паст для последующего использования;

(7) ментол и легколетучее масло, полученное на стадии (2), добавляли к этанолу и растворяли ментол и легколетучее масло в этаноле, гранулы, полученные на стадии (6), распыляли в полученную смесь, после пакетирования получали продукт.

Способ определения содержания ментола:

получение исследуемого раствора: отбирали вещество, содержащееся в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелко измельчали, равномерно перемешивали, отбирали 0,5 г, точно взвешивали, помещали в коническую колбу с пробкой, точно добавляли 30 мл н-гексана, встряхивали колбу по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 50 секунд, отбирали подходящее количество раствора, фильтровали через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора вещества сравнения: отбирали подходящее количество ментол-содержащего соединения сравнения, точно взвешивали, добавляли н-гексан с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл н-гексана с получением раствора сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивали в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляла 98°С, температуру поддерживали в течение 12 минут, увеличивали до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживали в течение 2,5 минут, а затем увеличивали до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживали в течение 5-20 минут; температура детектора составляла 400°С; температура на впуске составляла 400°С; газ-носитель представлял собой азот, расход: 1,2 мл/мин; вводили путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 2 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точно отбирали по 2 мкл раствора сравнения и исследуемого раствора, соответственно, и вводили в газовый хроматограф, определение с получением результатов.

Пример 4

Следующие материалы взвешивали в приведенных ниже отношениях: Fructus Forsythia 255, Flos Lonicerae 255, Radix Isatidis 255, ревень 51, Herba Pogostemonis 85, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 255, Rhodiola rosea L. 85, ментол 7,5, Herba Ephedrae 85, Semen Armeniacae Amarum 85, Herba Houttuyniae 255, Radix Glycyrrhizae 85 и гипс 255, и экстрагировали в соответствии со следующим способом:

(4) добавляли воду к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L. (отношение объема воды к массе лекарственного материала (л/кг, мл/г) составляло 12) и отваривали полученную смесь до кипения, добавляли Semen Armeniacae Amarum, отваривали полученную смесь 2 раза, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяли и фильтровали, объединяли полученный фильтрат с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрировали полученную комбинацию с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,14, определенной при 60°С, добавляли этанол, доводили концентрацию спирта в полученной смеси до 70%, охлаждали, фильтровали, рециркулировали этанол до исчезновения запаха спирта, получали прозрачную пасту для последующего использования;

(5) объединяли прозрачную пасту, полученную на стадии (4), с этанольным экстрактом со стадии (3), полученную комбинацию концентрировали с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,19, определенной при 60°С, прозрачную пасту высушивали с получением сухих порошкообразных паст для последующего использования;

Способ определения содержания ментола:

получение исследуемого раствора: отбирали вещество, содержащееся в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелко измельчали, равномерно перемешивали, отбирали 0,4 г, точно взвешивали, помещали в коническую колбу с пробкой, точно добавляли 20 мл н-гексана, встряхивали колбу по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 40 секунд, отбирали подходящее количество раствора, фильтровали через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивали в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляла 98°С, температуру поддерживали в течение 12 минут, увеличивали до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживали в течение 2,5 минут, а затем увеличивали до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживали в течение 5-20 минут; температура детектора составляла 350°С; температура на впуске составляла 350°С; газ-носитель представлял собой азот, расход: 1,1 мл/мин; вводили путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 1 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

1. Способ определения содержания ментола в композиции традиционного китайского лекарственного средства, где указанная композиция традиционного китайского лекарственного средства получена из следующих количеств исходных материалов: Fructus Forsythia 200-300, Herba Ephedrae 60-100, ревень 40-60, Herba Houttuyniae 200-300, Flos Lonicerae 200-300, Radix Isatidis 200-300, Herba Pogostemonis 60-100, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 200-300, Rhodiola rosea L. 60-100, ментол 5-9, Semen Armeniacae Amarum 60-100, Radix Glycyrrhizae 60-100 и гипс 200-300, где содержание ментола определяют следующим образом:

(1) экстрагируют указанную композицию традиционного китайского лекарственного средства с применением неполярного растворителя с получением исследуемого раствора;

(2) получают раствор сравнения с концентрацией ментола 4,80 мкг/мл или более, предпочтительно 17,65 мкг/мл или более, более предпочтительно 0,2-0,3 мг/мл, с применением ментолсодержащего соединения сравнения и неполярного растворителя, такого же, как на стадии 1);

(3) берут одинаковое количество раствора сравнения и исследуемого раствора, вводят указанные растворы в газовый хроматограф и определяют содержание ментола, где условия проведения хроматографии являются следующими:

колонка представляет собой слабополярную капиллярную хроматографическую колонку; температуру колонки увеличивают в соответствии со следующей температурной программой: начальная температура 80-100°С; указанную начальную температуру поддерживают в течение 10-15 минут, а затем увеличивают до 120-160°С со скоростью 6-10°С в минуту, затем поддерживают в течение 1,5-3,5 минут, а затем увеличивают до 240-300°С со скоростью 100-160°С в минуту и поддерживают в течение 5-20 минут.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в процессе получения исследуемого раствора отношение массы композиции традиционного китайского лекарственного средства к объему неполярного растворителя составляет от 1 г: 400 мл до 1 г: 50 мл.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что слабополярная капиллярная хроматографическая колонка содержит фенилметилполисилоксан в качестве неподвижной фазы, и предпочтительно указанный фенилметилполисилоксан имеет содержание фенила 1-10%, более предпочтительно 5%, более предпочтительно слабополярная капиллярная хроматографическая колонка представляет собой хроматографическую колонку типа НР-5 или типа DB-5.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что раствор сравнения и исследуемый раствор вводят в количестве 0,5-2 мкл.

5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что в процессе определения содержания ментола раствор сравнения и исследуемый раствор вводят путем впрыскивания с делением потока с соотношением деления потока в диапазоне от 50:1 до 10:1, предпочтительно от 30:1 до 20:1, более предпочтительно 25:1.

6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что условия проведения хроматографии также включают температуру детектора и температуру на впуске в диапазоне 300-400°С.

7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что условия проведения хроматографии также включают газ-носитель и его расход, при этом указанный газ-носитель представляет собой азот, а его расход составляет 0,8-1,2 мл/мин.

8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что условия проведения хроматографии также включают отношение топливных газов, где отношение топливных газов представляет собой отношение воздуха к водороду и составляет от 8:1 до 12:1, предпочтительно от 9:1 до 11:1, наиболее предпочтительно 10:1.

9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что неполярный растворитель выбран из группы, состоящей из неполярных насыщенных алканов или галогенированных насыщенных алканов и неполярных сложноэфирных растворителей, и предпочтительно неполярный растворитель выбран из группы, состоящей из н-гексана, дихлорметана, петролейного эфира и этилацетата, предпочтительно н-гексана.

10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что указанный способ получения исследуемого раствора заключается в следующем: равномерное размельчение и смешивание композиции традиционного китайского лекарственного средства, помещение полученного вещества в емкость с узким горлом с пробкой, добавление неполярного органического растворителя, встряхивание в течение 20 секунд или более, фильтрование полученного исследуемого раствора, где предпочтительно стадию фильтрования проводят с применением 0,2-0,4 мкм микропористого фильтра, предпочтительно с применением 0,22 мкм микропористого фильтра; предпочтительно способ получения исследуемого раствора дополнительно включает стадию замачивания или ультразвуковой экстракции при комнатной температуре перед стадией встряхивания.

11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что указанный способ получения композиции традиционного китайского лекарственного средства включает:

(1) взвешивание традиционных китайских лекарственных средств в соответствии с массовым отношением исходных материалов, отбор частей лекарственных средств и их измельчение;

(2) добавление воды к Herba Pogostemonis для экстракции легколетучего масла, при этом отношение объема воды к массе лекарственного материала составляет 8-12, время экстракции масла составляет 6-10 часов, сбор легколетучего масла для последующего использования; после фильтрования экстракта остаток удаляют, а фильтрат сохраняют для последующего использования;

(3) экстракцию Fructus Forsythia, Herba Ephedrae, Herba Houttuyniae и ревеня 60 об.%/об.%-80 об.%/об.% этанолом, при этом отношение объема этанола к массе лекарственных материалов составляет 10-14, экстракцию проводят 2-4 раза, при этом каждый раз экстракция занимает 1,5-3 часа, объединение и фильтрование экстрактов, рециркуляция этанола и сохранение фильтрата для последующего использования;

(4) добавление воды к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L., при этом отношение объема воды к массе лекарственных материалов составляет 10-14, и отваривание полученной смеси до кипения, добавление Semen Armeniacae Amarum, отваривание полученной смеси 2-4 раза, каждый раз в течение 0,5-2 часов, объединение и фильтрование экстрактов, объединение полученного фильтрата с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрирование полученной комбинации с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,10-1,15, определенной при 50-70°С, добавление этанола, доведение концентрации спирта до 65-80%, охлаждение и фильтрование, рециркуляцию этанола до исчезновения запаха спирта, получение прозрачной пасты для последующего использования;

(7) добавление ментола и легколетучего масла, полученного на стадии (2), к этанолу и растворение ментола и легколетучего масла в этаноле, и распыление гранул, полученных на стадии (6), в полученную смесь, герметизация, равномерное перемешивание, таблетирование, или инкапсулирование, или пакетирование.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый вспомогательный материал представляет собой крахмал.

13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что композиция традиционного китайского лекарственного средства получена из растительного сырья со следующим содержанием компонентов: Fructus Forsythia 200-300, Herba Ephedrae 60-100, ревень 40-60, Herba Houttuyniae 200-300, Flos Lonicerae 200-300, Radix Isatidis 200-300, Herba Pogostemonis 60-100, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 200-300, Rhodiola rosea L. 60-100, ментол 5-9, Semen Armeniacae Amarum 60-100, Radix Glycyrrhizae 60-100 и гипс 200-300, где способ определения содержания ментола включает:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,2-0,5 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 20-30 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 20-50 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора вещества сравнения: отбор требуемого количества ментолсодержащего соединения сравнения, точное взвешивание, добавление н-гексана с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл с получением раствора сравнения;

14. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что композиция традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению получена из лекарственного сырья со следующим содержанием компонентов:

Fructus Forsythia 200, Flos Lonicerae 300, Radix Isatidis 200, ревень 40, Herba Pogostemonis 60, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 300, Rhodiola rosea L. 100, ментол 9, Herba Ephedrae 60, Semen Armeniacae Amarum 100, Herba Houttuyniae 200, Radix Glycyrrhizae 100 и гипс 200; или композиция традиционного китайского лекарственного средства состоит из лекарственного сырья со следующим содержанием компонентов:

Fructus Forsythia 300, Flos Lonicerae 200, Radix Isatidis 300, ревень 60, Herba Pogostemonis 100, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 200, Rhodiola rosea L. 60, ментол 5, Herba Ephedrae 100, Semen Armeniacae Amarum 60, Herba Houttuyniae 300, Radix Glycyrrhizae 60 и гипс 300; или композиция традиционного китайского лекарственного средства состоит из растительного сырья со следующим содержанием компонентов:

Fructus Forsythia 278, Flos Lonicerae 294, Radix Isatidis 285, ревень 55, Herba Pogostemonis 95, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae 290, Rhodiola rosea L. 87, ментол 8,5, Herba Ephedrae 88, Semen Armeniacae Amarum 80, Herba Houttuyniae 284, Radix Glycyrrhizae 95 и гипс 277; или композиция традиционного китайского лекарственного средства состоит из растительного сырья со следующим содержанием компонентов:

15. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что композиция традиционного китайского лекарственного средства согласно настоящему изобретению получен следующим образом:

(2) измельчение Herba Pogostemonis, добавление воды для экстракции легколетучего масла, при этом отношение объема воды к массе лекарственного материала составляет 10, время экстракции масла составляет 8 часов, сбор легколетучего масла для последующего использования; после фильтрования экстракта удаление остатка и сохранение фильтрата для последующего использования;

(3) экстракция Fructus Forsythia, Herba Ephedrae, Herba Houttuyniae и ревеня 70 об.%/об.% этанолом, при этом отношение объема воды к массе лекарственного материала составляет 12, проведение экстракции 3 раза, при этом каждый раз экстракция занимает 2,5 часа, объединение и фильтрование экстрактов, рециркуляция этанола, сохранение фильтрата для последующего использования;

(4) добавление воды к Flos Lonicerae, гипсу, Radix Isatidis, Rhizoma Dryopteris Crassirhizomae, Radix Glycyrrhizae и Rhodiola rosea L., при этом отношение объема воды к массе лекарственного материала составляет 12, и отваривание полученной смеси до кипения смеси, добавление Semen Armeniacae Amarum, отваривание полученной смеси 2 раза, каждый раз в течение 1 часа, объединение и фильтрование экстрактов, объединение полученного фильтрата с фильтратом, полученным после экстракции масла Herba Pogostemonis на стадии (2), концентрирование полученной комбинации с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,10-1,15, определенной при 60°С, добавление этанола, доведение концентрации спирта до 70%, охлаждение, фильтрование и рециркуляция этанола до исчезновения запаха спирта, получение прозрачной пасты для последующего использования;

(5) объединение прозрачной пасты, полученной на стадии (4), с этанольным экстрактом со стадии (3), концентрирование с получением прозрачной пасты с относительной плотностью 1,15-1,20, определенной при 60°С, высушивание с получением сухих порошкообразных паст для последующего использования;

(7) добавление ментола и легколетучего масла, полученного на стадии (2), к этанолу, растворение ментола и легколетучего масла в этаноле, и распыление гранул, полученных на стадии (6), в полученную смесь, герметизация, равномерное перемешивание, таблетирование, инкапсулирование или пакетирование.

16. Способ по любому из пп. 1-15, отличающийся тем, что способ определения содержания включает:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,3 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 25 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 30 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора сравнения: отбор требуемого количества ментолсодержащего соединения сравнения, точное взвешивание, добавление н-гексана с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл с получением раствора вещества сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляет 98°С, температуру поддерживают в течение 12 минут, увеличивают до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживают в течение 2,5 минут, а затем увеличивают до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживают в течение 10 минут; температура детектора составляет 300°С; температура на впуске составляет 300°С; газ-носитель представляет собой азот, расход: 1 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 1 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точный отбор 1 мкл раствора сравнения и 1 мкл исследуемого раствора, соответственно, введение растворов в газовый хроматограф, определение с получением результатов.

17. Способ по любому из пп. 1-16, отличающийся тем, что способ определения содержания включает:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,2 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 20 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 20 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора вещества сравнения: отбор требуемого количества ментолсодержащего соединения сравнения, точное взвешивание, добавление н-гексана с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл н-гексана с получением раствора сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляет 98°С, температуру поддерживают в течение 12 минут, увеличивают до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживают в течение 2,5 минут, а затем увеличивают до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживают в течение 5-20 минут; температура детектора составляет 350°С; температура на впуске составляет 350°С; газ-носитель представляет собой азот, расход: 0,8 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 0,5 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точный отбор 0,5 мкл раствора сравнения и 0,5 мкл исследуемого раствора, соответственно, введение растворов в газовый хроматограф, определение с получением результатов.

18. Способ по любому из пп. 1-17, отличающийся тем, что способ определения содержания включает:

получение исследуемого раствора: отбор вещества, содержащегося в составе из образцов из испытания на различие под нагрузкой, мелкое измельчение, равномерное перемешивание, отбор 0,5 г, точное взвешивание, помещение в коническую колбу с пробкой, точное добавление 30 мл н-гексана, встряхивание колбы по часовой стрелке и против часовой стрелки в течение примерно 50 секунд, отбор требуемого количества раствора, фильтрование через 0,22 мкм микропористую мембрану с получением исследуемого раствора;

получение раствора сравнения: отбор требуемого количества ментолсодержащего соединения сравнения, точное взвешивание, добавление н-гексана с получением раствора ментола с концентрацией ментола 0,23 мг на 1 мл н-гексана с получением раствора сравнения;

условия проведения хроматографии: хроматографическая колонка: капиллярная хроматографическая колонка Agilent J&W Scientific НР-5 (30 м × 0,25 мм, 0,25 мкм); температуру колонки увеличивают в соответствии со следующим температурным режимом: начальная температура составляет 98°С, температуру поддерживают в течение 12 минут, увеличивают до 140°С со скоростью 8°С в минуту и поддерживают в течение 2,5 минут, а затем увеличивают до 280°С со скоростью 140°С в минуту и поддерживают в течение 20 минут; температура детектора составляет 400°С; температура на впуске составляет 400°С; газ-носитель представляет собой азот, расход: 1,2 мл/мин; введение путем впрыскивания с делением потока, соотношение деления потока: 25:1; объем вводимого образца: 2 мкл; отношение топливных газов: воздух-водород (450:45);

способ определения: точный отбор 2 мкл раствора сравнения и 2 мкл исследуемого раствора, соответственно, введение указанных растворов в газовый хроматограф, определение с получением результатов.

Изобретение относится к области здравоохранения, в частности к контролю качества биологических лекарственных препаратов, и может быть использовано для количественного определения глицина в биологических лекарственных препаратах, содержащих глицин в качестве вспомогательного вещества.

Способ определения наличия β-казеина аллелей а1 и/или а2 группы в молоке крс // 2697248

Изобретение относится к биотехнологии, аналитической химии и касается способа определения содержания β-казеина А1 и/или А2 групп в молоке, молочных продуктах, молочных составных продуктах, молокосодержащих продуктах.

Способ определения бацитрацина в мясе и мясных продуктах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии // 2696010

Изобретение относится к области аналитической химии и представляет собой способ определения бацитрацина в мясе и мясных продуктах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию, центрифугирование, фильтрацию, введение растворенного остатка в хроматограф с использованием элюента, обработку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве пробы берут навеску тканей или органов животных массой 5 г, экстракцию проводят 5 мл 1,5 мМ водным раствором трилона Б и 5 мл 1% раствором трихлоруксусной кислоты в течение 15 минут, раствор перемешивают 20 минут, центрифугируют 15 минут, фильтруют, после фильтрации проводят очистку экстракта путем твердофазной экстракции (ТФЭ) на картридже Oasis HLB 3 см3×60 мг, который предварительно перед использованием конденсируют 3 мл метанола и 3 мл водного раствора трихлоруксусной кислоты рН=4,0, полученный экстракт пропускают со скоростью 1 мл/мин через картридж, затем сушат в вакууме под давлением 20 мм рт.ст.

Способ газохроматографического анализа микропримесей веществ в газе и устройство для его реализации // 2694436

Изобретение относится к области аналитического приборостроения, в частности к способам и устройствам для хроматографического анализа веществ в газовых и/или паровых смесях и может быть использовано для определения микропримесей.

Способ количественного определения фенола в биологических лекарственных препаратах методом газожидкостной хроматографии // 2693518

Изобретение относится к области здравоохранения, в частности к контролю качества биологических лекарственных препаратов, и может быть использовано для количественного определения фенола в биологических лекарственных препаратах, содержащих фенол в качестве консерванта.

Картридж для пассивной адсорбции углеводородов // 2691711

Изобретение относится к картриджу для пассивной адсорбции углеводородов и может быть использовано для адсорбции углеводородов из газовоздушной смеси почвогрунта с последующим определением их массовой концентрации методом хромато-масс-спектрометрии.

Способ оценки термостойкости фосфорорганических пестицидов при выполнении дезинсекции // 2690705

Настоящее изобретение относится к области анализа небиологических материалов физическими и химическими методами. Способ оценки термостойкости фосфорорганических пестицидов путем определения степени разложения дисперсной фракции аэрозоля фосфорорганического соединения состоит из разделения аэрозоля на дисперсные фракции с помощью импактора и определения в экстрактах проб изменения доли «рабочего» фосфора в общем, отличающийся тем, что общий фосфор определяют по площади неразделенного хроматографического пика всех фосфорорганических компонентов пробы газохроматографическим методом с пламенно-фотометрическим детектированием, используя вместо хроматографической колонки полый капилляр, в условиях минимальной скорости азота через капилляр, равной 0,1 см3/мин, и постоянной температуры термостата капилляра 250°С, равной температуре детектора.

Хроматографический способ разделения компонентов смеси в растворе // 2688594

Способ относится к аналитической химии и может быть использован для разделения компонентов в растворе и количественного определения состава смеси. Хроматографический способ разделения компонентов смеси в растворе включает подачу подвижной фазы с введенной в нее смесью разделяемых компонентов в хроматографическую колонку хроматографа, содержащую, по крайней мере, одну неподвижную фазу, выполненную из пористого материала, и последующее измерение концентраций разделенных компонентов смеси.

Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии // 2687493

Настоящее изобретение относится к способу определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающему изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, отличающийся тем, что хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл.

Способ диагностики степени тяжести гнойного холангита у больных механической желтухой с установлением оптимальной хирургической тактики // 2686332

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики степени тяжести гнойного холангита у больных механической желтухой с установлением оптимальной хирургической тактики лечения, заключающийся в обследовании больного, отличающийся тем, что в крови больного газохроматографическим методом определяют количество уксусной кислоты и при концентрации уксусной кислоты, равной 0,31-0,34 ммоль/л, устанавливают наличие легкой степени тяжести гнойного холангита, при которой билиарная декомпрессия не показана, при концентрации уксусной кислоты, равной 0,35-0,41 ммоль/л, устанавливают наличие средней степени тяжести гнойного холангита, при которой билиарная декомпрессия показана при отсутствии эффекта от терапевтического лечения, а при концентрации уксусной кислоты, равной 0,42 ммоль/л или более, устанавливают наличие тяжелой степени гнойного холангита, при которой показана неотложная билиарная декомпрессия.