Супрамолекулярный антигельминтный комплекс для лечения и профилактики животных при основных гельминтозах

Настоящее изобретение относится к области ветеринарной фармакологии, а именно к супрамолекулярному антигельминтному комплексу для лечения и профилактики животных при основных гельминтозах, включающему нерастворимые в воде субстанции албендазола и триклабендазола с водорастворимыми полимерами - низкомолекулярным поливинилпирралидоном-17 и арабиногалактаном из лиственницы сибирской Larix sibirica, который представляет собой водорастворимый супрамолекулярный комплекс в виде твердодисперсного порошка с размером частиц 1-10 микрон, при следующем соотношении в масс. % (1:1:49:49): албендазол – 1; триклабендазол – 1; поливинилпирралидон - 17; низкомолекулярный – 49; арабиногалактан Larix sibirica – 49. Настоящее изобретение обеспечивает получение супрамолекулярного антигельминтного комплекса, который характеризуется повышенной растворимостью в воде и обладает широким спектром антигельминтного действия против преимагинальных и имагинальных форм паразита в 5 раз уменьшенной терапевтической дозе. 3 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарной фармакологии, биологии и предназначено для лечения и профилактики животных при нематодозах легких и пищеварительного тракта, фасциолезе и цестодозах. Антигельминтное средство супрамолекулярный комплекс содержит в качестве действующих веществ албендазол и триклабендазол и комплексообразователей водорастворимые полимеры: низкомолекулярный поливинилперролидон-17 и арабиногалактан полученный из лиственницы сибирской Larix sibirica растительный полимер, обладающий гепатопротекторными иммуномодулирующими свойствами.

Гельминтозы относятся к особо опасным паразитарным болезням человека, животных и растений, вызываемых паразитическими червями. По числу зараженных животных кишечными гельминтами занимает третье место в мире, а общее число падежа от гельминтозов выше, чем от бактериальных, вирусных инфекций и других паразитарных болезней, вместе взятых.

Большой ущерб животноводству наносят болезни, вызываемые нематодами из подотряда Strongylata. Они, как правило, носят массовый характер и протекают тяжело, особенно у молодняка овец. В большей степени поражается молодняк сельскохозяйственных животных, среди которого чаще, чем среди взрослых животных, наблюдается гибель.

Наиболее широко распространены стронгилята семейств: Trichostrongylidae (род Nematodirus, Haemonchus, Ostertagia, Trichostrongylus и др.), Strongylidae (род Chabertia), Ancylostomatidae (род Bunostomum). Все гельминты этого семейства относятся к гематофагам.

Фауна стронгилят пищеварительного канала чрезвычайно многообразна. Только в одном семействе Trichostrongylidae (подотряд Strongylata) в пищеварительном тракте жвачных паразитирует более 400 видов нематод. Нематоды локализуются в различных отделах пищеварительного канала: в желудке (гемонхусы, иногда остертагии, трихостронгилюсы), в тонкой (нематодирусы, буностомумы и др.) и толстой (эзофагостомумы, хабертии и др.) в кишечнике паразитируют как взрослые гельминты, так и их личинки.

В органах дыхания животных паразитируют Strongylata, которые относятся к семействам: Dictyocaulide, Protostrongylidae, Metastrongylidae и Syngamidae. Диктиокаулез животных вызывается паразитированием в трахее и бронхах крупного и мелкого рогатого скота стронгилят рода Dictyocaulus, болезнь протекает с нарушением функции дыхания и явлениями интоксикации всего организма.

Мониезиоз овец - это паразитарное заболевание, при котором в тонком кишечнике животных паразитируют ленточные черви - мониезии, принадлежащие к классу цестод. Мониезиоз чаще регистрируется летом, в пастбищный период. Он поражает всех животных, но наиболее остро протекает у молодняка в возрасте до 6 месяцев вызывая гибель. Заболевание наносит огромный ущерб фермерским хозяйствам, так как больные овцы теряют вес, а молодняк нередко погибает из-за гельминтов.

Часто у жвачных животных овцы, козы и крупного рогатого скота встречается фасциолез вызываемый фасциолой обыкновенной (Fasciola hepatica) и в южных районах страны фасциолой гигантской (F. gigantica), сем. Fasciolidae. Иногда фасциолезом заболевает человек. Паразитируют фасциолы - желчных ходах печени. В период миграции молодые формы фасциол вызывают острую форму заболевания и в зависимости от интенсивности инвазии с летальным исходом [2, 4, 5, 6, 8, 9].

Чаще всего перечисленные гельминты у жвачных животных паразитируют в ассоциации причиняя большой экономический ущерб животноводству.

В связи с этим, перед ветеринарной практикой встает вопрос о разработке новых высокоэффективных средств борьбы с инвазионными болезнями, удобных в применении, малотоксичных и обладающих широким спектром действия и созданию препаратов комбинированного действия с овоцидным действием необходимых в пастбищный период для предотвращения и накопления инвазионного начала. Животные в основном заражаются гельминтами перечисленных классов в пастбищный период, которые могут паразитировать совместно в организме животных, оказывая общее патогенное влияние на организм. Эффективность препаратов при паразитарных болезнях зависит не только от их активности, но и во многом и от сроков применения. Применение препаратов в пастбищный период позволяет предотвратить заражение животных паразитарными болезнями и тем самым избежать огромных потерь, причиняемых ими. Дегельминтизация животных отдельно от нематод- нематодоцидами, цестод-цестодоцидами и трематод- трематодоцидами это сложный организационный и тяжелый физический труд, вызывающий стрессы у животных, а также часто отмечаются травмы со стороны животных и операторов.

Целью данной работы являлась разработка комплексного препарата, который мог бы эффективно и без негативных последствий воздействовать против перечисленных 3-х классов гельминтов, паразитирующих в смешанном виде у животных, чтобы сократить трудоемкий труд по профилактике и лечению.

Благодаря успехам современной химии разработаны высокоэффективные средства, позволяющие воздействовать на возбудителей болезней на ранних фазах их развития и добиваться положительного результата.

Наиболее широко применяемыми антигельминтиками в ветеринарии является препараты из класса соединений бензимидазолов, это албендазол, обладающий широким спектром противогельминтной активностью, а также триклабендазол действующий против мигрирующих 2-х недельных преимагинальных и имагинальных фасциол [1].

Характеристика прототипов. Албендазол. Метил 5-(пропилтио)-2-бензимидазол-карбамат.Синонимы: валбазен, центел, вермитан, альбен, альбакс, атазол. Албендазол оказывает антигельминтный эффект путем воздействия на энергетический метаболизм гельминтов, ингибирует процесс митоза, снижая абсорбцию и транспорт глюкозы, нарушая полимеризацию тубулина в микротубулах. Албендазол является антигельминтиком широкого спектра действия, обладая губительным действием на нематод, трематод, цестод, а также обладает овоцидным действием, что имеет важное значение для предотвращения контаминации пастбищ инвазионным началом.

Недостатки албендазола: не растворим в воде, до 50-70% выводится из организма с фекалиями загрязняя окружающую среду; обладает эмбриотропными действиями, который в дозе 7,5 мг/кг при оральном введении белым крысам и мышам вызывает уродства плодов (гидроцефалия, волчья пасть и недоразвитие костей конечностей) Гаджиев И.М., 1985 [3]. Препарат применяют только молодым и не продуктивным животным, противопоказан лактирующим и беременным животным из-за возможного проявления эмбриотропных действий у животных и людей при поедании продуктов животноводства.

Последние годы была усовершенствована технология получения препарата за счет создания растворимого супрамолекулярного комплекса албендазола, в результате терапевтическая доза субстанции была снижена с 10 до 2,0 мг/кг по ДВ, что позволяет применение супрамолекулярного комплекса албендазола без ограничения, так как в этой дозе препарат не проявлял токсических действий [1,3

Триклабендазол (ТКБ). 5-хлоро-6-(2,3-дихлорофенокси)-2-(метилтио)1Н-бензимидазол. Синонимы: CGA 89317, фазинекс (Y.C. Boray, 1981) [26], триклафасцид. Препарат является лучшим средством для терапии острого фасциолеза, он также эффективен против взрослых фасциол. Механизм действия ТКБ аналогичен действию бензимидазолов: блокируется синтез ферментов у паразита и механизм образования микротрубочек в клетках.

Недостатки триклабендазола: в воде не растворим, до 70% выводится из организма с фекалиями загрязняя окружающую среду; Препарат долго (30 сут.) сохраняется в организме животных, мясо вынужденно убитых животных на этот период нельзя использовать в пищу. Имеются сообщения о развитии у фасциол резистентности к действию триклабендазола (Thomas et al., 2000) [27].

Из-за высокой цены на препарат владельцы животных не проводят массовые профилактические дегельминтизации, в результате накапливается инвазионное начало на пастбищах.

Для повышения антигельминтной и экономической эффективности триклабендазола была усовершенствована технология получения препарата, также, как и албендазола за счет создания растворимого супрамолекулярного комплекса [2, 3, 16, 17, 18, 19]. В результате терапевтическая доза препарата была снижена в 5 раз при высокой фасциолоцидной активности, через 15 суток после применения супрамолекулярного комплекса, триклабендазол и его метаболиты в органах и тканях животных не обнаруживались, что позволило сократить срок убоя животных в двое.

В окружающую среду ежегодно попадает большое количество антигельминтиков как в форме метаболитов, так и самих препаратов. Антигельминтики выделяясь из организма с фекалиями или мочой оказывают негативное влияние на энтомофауну окружающей среды, нарушая экологическое равновесие в природе.

Сущность изобретения и отличительные признаки. Разработка антигельминтиков для борьбы с гельминтозами животных способных эффективно действовать на все виды гельминтов паразитирующих в организме, быстро выделяющихся из организма и распадающиеся в почве, позволило бы значительно снизить отрицательное воздействие на окружающую среду. В случае дегельминтизации лактирующих животных в молоке не превышался бы допустимый уровень остаточных количеств антигельминтиков.

Используя разработанную нами инновационную технологию увеличения растворимости ряда известных бензимидазольных антигельминтиков путем механохимической модификации их субстанций водорастворимыми полимерами учитывая взаимосвязь параметров «растворимость-биодоступность-эффективность». Получен комплексный препарат на основе субстанций албендазола и триклабендазола и водорастворимых полимеров, низкомолекулярного поливинилпирралидона-17 (ПВП-17) и арабиногалактана (АГ) из лиственницы сибирской Larix sibirica с применением технологии получения комплексных химических полимерных лекарственных соединений, подвергающийся совместной механохимической обработке в валковой шаровой мельнице LE-101 с регулируемой энергонапряженностью в течение 8 часов и добавлением 800 г металлических шаров диаметром 12 мм при вращении барабана со скоростью 70 об/мин до получения твердодисперсного порошка с размером частиц 1-10 μn при следующем соотношении в масс. % (1:1:49:49).

Полученный супрамолекулярный комплексный препарат базируется на основе реакции стереоэлектронной комплементарности связывающихся центров молекул, т.е. на основе взаимодействия радикалов химических субстанций с функциональными группами полимера ПВП-17 и арабиногалактана по типу "хозяин-гость", при этом сохраняя действующие вещества препарата. В результате приобретаются такие физические свойства, как растворимость в воде, биологическая доступность, спектр антигельминтного действия и при 5- кратно сниженных дозах повышается 100%-я терапевтическая, а также экономическая эффективность [11].

Суть технологии заключается в твердофазной совместной механообработке субстанций антигельминтиков с синтетическим и растительным полимерами в измельчителях-активаторах с регулируемой энергонапряженностью. Получаемые при этом твердые дисперсии рассматриваются как системы доставки биологически активных молекул и используются для улучшения биофармацевтических характеристик уже известных лекарственных веществ (ЛВ), а именно, для увеличения растворимости, биодоступности, снижения токсических эффектов и повышения стабильности ЛВ при их хранении.

С применением методов ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и инфракрасной (ИК)-спектроскопии, а также анализа растворимости установлено, что эти твердые дисперсии представляют собой супрамолекулярный комплекс, обладающий повышенной растворимостью в 5,9 раз и антигельминтной активностью.

В отличии от межмолекулярного комплекса албендазола [28] и триклабендазола [29], получен супрамолекулярный комплекс антигельминтика на основе субстанций албендазола и триклабендазола с применением комплексообразующих водорастворимых полимеров ПВП и АГ, который представляет собой гигроскопический порошок бежевого цвета, со слабым хвойным запахом, обладающий повышенной растворимостью в воде по сравнению с субстанциями албендазола и триклабендазола, в соотношении масс., % 1:1:49:49, до образования частиц размером от 0,1 (70%) до 10 микрон, обладает широким спектром антигельминтного действия против преимагинальных и имагинальных форм паразита в 5 раз уменьшенной терапевтической дозе.

При этом сокращаются многочисленные трудоемкие противогельминтозных мероприятий, которые рекомендованы проводить особенно в пастбищный период ежемесячно и это позволяет повысить экономическую эффективность.

Примеры конкретного исполнения.

Пример 1. Изучение острой пероральной токсичности супрамолекулярного комплекса на основе субстанций албендазола и триклабендазола с полимерными наполнителями на лабораторных аутбредных белых мышах и крысах

В задачи настоящего исследования входила оценка острой токсичности препарата при внутрижелудочном введении мышам и крысам, определение его класса опасности в зависимости от степени воздействия на организм животных.

Материалы и методы. Определение параметров острой пероральной токсичности на лабораторных животных является необходимым этапом исследований для оценки безопасности и дальнейшего изучения лекарственного препарата для ветеринарного применения в рамках доклинических исследований [3].

Экспериментальная часть работы была выполнена в соответствии с требованиями ГОСТ 33044-2014 «Принципы надлежащей лабораторной практики», 2015 г; Приказа Министерства здравоохранения Российской Федерации от 01.04.2016 г. №199н «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики»; Руководству по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая (под ред. Миронов А.Н., 2012 г.); Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (под общей редакцией чл. - корр. РАМН, проф. Р.У. Хабриева, Москва, 2005); Федерального закона от 12.04.2010 г. №61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств» (ред. от 28.12.2017 г) и Приказа Минсельхоза России от 06.03.2018 N 101 «Об утверждении правил проведения доклинического исследования лекарственного средства для ветеринарного применения, клинического исследования лекарственного препарата для ветеринарного применения, исследования биоэквивалентности лекарственного препарата для ветеринарного применения» [12, 13, 20, 21, 22].

Острую токсичность препарата определяли на 20 белых аутбредных мышах-самцах массой 18-20 г по 10 особей в группе и на 30 белых аутбредных крысах-самцах массой 150-180 г по 6 особей в группе.

Исследуемый препарат вводили мышам опытной группы однократно внутрижелудочно, в виде суспензии с помощью металлического атравматического зонда в объеме 0,2 мл/10 г массы тела и крысам 2,0 мл/100 г, в качестве носителя при приготовлении суспензии использовали 1%-й крахмальный гель.

Результаты. Таким образом установлено, что при однократном пероральном введении препарата белым лабораторным мышам значение LDso составило более 5986 мг/кг, так как эта доза была максимально возможной для перорального введения мышам. В связи с этим, LDso тестируемого препарата будет превышать эту дозу. На основании данных, полученных в опыте на мышах и согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) исследуемый препарат относится к 4 классу опасности (вещества малоопасные) [23].

При однократном пероральном введении препарата белым лабораторным крысам значение LD₅₀, рассчитанное методом пробит-анализа по Миллеру и Тейнтеру составило 3103,1±748,5 мг/кг (2 354,6÷3 851,5 мг/кг). Согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) препарат по результатам эксперимента на крысах относится к 3 классу опасности (вещества умеренно опасные) [23].

Необходимо отметить, что у лабораторных животных существует видовая чувствительность к исследуемому супрамолекулярному комплексу - крысы оказались более чувствительным видом, чем мыши.

Пример 2. Изучение эффективности заявляемого антигельминтного средства на модели Hymenolepis nana. Испытание на цестодоцидную активность нового антигельминтного средства в разных дозах проводили на белых мышах, экспериментально инвазированных Н. папа. Мышей заражали перорально с помощью металлического атравматического зонда, из расчета 200 инвазионных яиц на животное. На 14-е сутки после заражения в желудок мышей трех первых подопытных групп вводили тестируемые препараты (№1-2,0; №4, и №3- 5,0 мг/кг по ДВ), соответственно по препарату 20,0; 40,0 и 50,0 мг/кг, однократно в виде водного раствора. Животные четвертой группы №4 получали смесь субстанций АБЗ и ТКБ в дозе 5,0 мг/кг (в соотношении 2,5: 2,5), однократно в 1%-м крахмальном геле. На 4-е сутки после введения препаратов мышей убивали декапитацией.

Активность препаратов учитывали по результатам гельминтологического вскрытия кишечника. Извлеченных при вскрытии цестод подсчитывали. Учет эффективности препаратов проводили по типу «контрольный тест» с расчетом среднего количества обнаруженных цестод и интенс- и экстенсэффективности (ИЭ; ЭЭ). Результаты приведены в таблице №1 (в прилож.).

В результате заявляемое антигельминтное средство в дозе 5,0 мг/кг по ДВ проявил 100%-ю эффективность при гименолепидозе мышей, а дозах 4,0 и 2,0 мг/кг по ДВ соответственно ИЭ=80,3; ЭЭ=50 и ИЭ=98,4; ЭЭ=80%.

Смесь субстанций АБЗ- 2,5 мг/кг и ТКБ 2,5 мг/кг в общей дозе 5,0 мг/кг проявил слабую активность против Н. nana (18,1%).

При вскрытии в кишечнике животных контрольной группы обнаруживали в среднем по 12,7±1,27 экз./гол. Н. nana, из них 33% составили неполовозрелые цестоды. Препарат в дозе 5,0 мг/кг проявил активность против имагинальных, так и преимагинальных цестод.

Опыт 3. Клиническое испытание супрамолекулярного комплексного антигельминтного препарата на основе субстанций албендазола и триклабендазола на продуктивных животных

Цель исследования: Определить эффективность и провести титрацию терапевтической дозы супрамолекулярного комплекса албендазола и триклабендазола при фасциолезе и нематодозах пищеварительного и легочного тракта овец.

Материалы и методы. Испытание эффективности супрамолекулярного комплекса албендазола и триклабендазола проводили в Северокавказском Федеральном округе, в декабре на 65 овцах тушинской породы спонтанно инвазированных одновременно нематодами пищеварительного, легочного трактов и фасциолами, принадлежащие частному предпринимателю.

Подопытных овец забирковали, индивидуально от каждой овцы ректально отобрали пробы фекалий и провели копроовоскопические исследования методом Фюллеборна с использованием раствора аммиачной селитры, с определением среднего количества яиц нематод и фасциол в г/фекалий с помощью камеры ВИГИС. Для определения легочных нематод в маленькие чашки Петри клали по 1 г горошек (5-6) фекалий слегка размягчали наливали их теплой водой и ставили на сутки в термостат при температуре +37°С и через сутки подсчитывали среднее количество личинок.

Отобранных в опыт овец распределили по принципу аналогов на 4 подопытных групп по 15 овец в каждой и контрольную (п=5). Первой подопытной группе овец препарат вводили в дозе 2,0 мг/кг по ДВ (по препарату 20 мг/кг) перорально в форме водного раствора с помощью бутылки, второй группе - 4,0 мг/кг (40 мг/кг), третьей группе - 5 мг/кг (50 мг/кг по препарату), четвертой группе овец для контроля вводили смесь триклабендазола и албендазола (в соотношении 1:1), в дозе 4 мг/кг, пятая группа из 5-ти овец служила чистым контролем и препарат не получали. После дачи препаратов в течение 3-х суток наблюдали за клиническим состоянием овец.

Для определения эффективности против фасциол, через 10 суток после дачи препаратов были убиты по 5 овец с каждой группы (25 овец) с гельминтологическим вскрытием печеней и легких, и исследованы на наличие фасциол и личинок легочных нематод, а также отобраны пробы фекалий индивидуально от каждого животного и исследованы, как при отборе животных в опыт.

Учет эффективности препаратов проводили методом «критический тест» и гельминтологическим вскрытием печеней после убоя «контрольный тест», согласно Руководству, одобренному Всемирной Ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии (1995 г).

Результаты исследований. Результаты титрации супрамолекулярного комплекса албендазол и триклабендазол при фасциолезе и нематодозах пищеварительного и легочного трактов овец отражены в табл.2 и 3 (приложение) из которой следует, что при подборе животных в опыт в первой группе среднее количество яиц фасциол в г/фек. равнялось 27,9 экз., яйца нематод желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) - 88,7; и личинки легочных нематод 32,4; во второй - 27,1, нематоды ЖКТ - 82,8 и личинки легочных нематод 30,8; в третьей - 28,7 экз., нематоды ЖКТ - 86,0 и личинки легочных нематод 34,4; в четвертой - 23,7, нематоды ЖКТ - 82,0 и личинки легочных нематод 33,1; пятой - 28,6; нематоды ЖКТ - 81,9 и личинки легочных нематод 35,3.

По данным копроовоскопических исследований после дегельминтизации овец, через 20 суток, в первой подопытной группе среднее количество яиц фасциол в г/фек. снизилось с 27,9 до 5,1 экз., яйца нематод - с 88,7 до 15,2 и личинки легочных нематод 32,4 до 8,2; во второй и третьей группах яиц фасциол и нематод ЖКТ не обнаружено, а личинки легочных нематод во 2-й группе снизилось с 30,8 до 1,8 экз.; в третьей группе личинок легочных нематод не обнаружено; в четвертой - с 23,7 до 18,4, нематоды ЖКТ - с 82,0 до 61,9 и личинки легочных нематод с 33,1 до 27,8 экз..

По данным убоя через 10 суток 5-ти овец 5-й контрольной группы с гельминтологическим вскрытием печеней интенсивность инвазии (ИИ) в среднем составило 18,8 экз. фасциол и в легких обнаружено в среднем 20 экз. нематод.

В 1-й подопытной группе после дегельминтизации супрамолекулярным комплексом в дозе 2,0 мг/кг по ДВ в форме водного раствора, из 5-ти овец одна освободилась от фасциол экстенсэффективность (ЭЭ)=20,0%, а у 4-х обнаружено в среднем 2,2 экз. фасциол, интенсэффективность (ИЭ) при этом составила 98,8%. Во 2 и 3-й группе после дачи супрамолекулярного комплекса в дозах, соответственно: 4,0 и 5,0 мг/кг фасциол не обнаружили, эффективность препарата составила 100%. В 4-й группе после введения смеси субстанций албендазола и триклабендазола (2:2) в дозе 4,0 мг/кг в 5 раз уменьшенной терапевтической дозе обнаружено фасциол в среднем 13,8 экз., эффективность составила 26,8%. При вскрытии легких в 1-й подопытной группе из 5-ти в 2-х обнаружено в среднем 2,8 экз. нематод (диктикаулы); во 2-й - 0,4; в 3-й нематод не обнаружено; в 4-й группе у 5-ти овец в легких обнаружено в среднем 14,8 экз. нематод.

Гельминтологическое вскрытие пищеварительных трактов, просеивание содержимого и отбор матриксов подопытных и контрольной групп овец для определения эффективности препаратов при нематодозах не проводили из-за отсутствия технической возможности в хозяйствах, ограничились копроовоскопией.

Результаты. Испытание эффективности супрамолекулярного комплекса на основе субстанций албендазола и триклабендазола при одновременном инвазировании фасциолами и нематодами пищеварительного овец, в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (40 мг/кг по препарату) однократно перорально в форме водного раствора, оказал 100%-ю эффективность и против легочных нематод ЭЭ=80,0-90,0%. А в дозе 5,0 мг/кг (по препарату 50 мг/кг) 100%-ю эффективность против фасциол нематод пищеварительного и легочных нематод по данным копроовоскопии и убое животных, эта доза была наименьшей при которой была получена высокая эффективность и она принята нами, как терапевтическая. Смесь субстанций албендазола и триклабендазола при той же дозе для вторичного контроля, оказал слабую эффективность соответственно, 22,0; 24,5 и 16,0%. Побочные действия после применения препаратов нами не отмечены.

Опыт 4. Производственного испытания эффективности супрамолекулярного комплекса албендазола и триклабендазола против нематод пищеварительного тракта и фасциол овец.

Цель исследования: провести испытание эффективности супрамолекулярного комплекса албендазола и триклабендазола при фасциолезе и нематодозах пищеварительного тракта в установленной терапевтической дозе и выявить возможные побочные действия препарата в условиях производства.

Материалы и методы. Испытание эффективности супрамолекулярного комплекса албендазола и триклабендазола проводили в Северо-Кавказском Федеральном округе на 205 овцах тушинской породы спонтанно инвазированных одновременно нематодами пищеварительного тракта и фасциолами, принадлежащие частному предпринимателю.

Для определения инвазированности животных гельминтозами были отобраны ректально 40 проб фекалий от общего поголовья овец (20%). Исследование проб фекалий проводили методом Фюллеборна также, как в примерах 2 и 3. После дачи препаратов в течение 3-х суток наблюдали за клиническим состоянием обработанных овец.

Для определения эффективности препарата, через 14 и 25 суток после дегельминтизации было отобрано такое же количество проб фекалий (по 40 проб), копроовоскопию проводили, как и при исходном исследовании. Препарат задавали в дозе 5,0 мг/кг по ДВ (соответственно по 2,5 мг албендазола и триклабендазола), по препарату 50 мг/кг в смеси с комбикормом групповым методом. На кг комбикорма добавляли 2 г препарата тщательно перемешивали и высыпали в кормушку на 10 овец с живой массой в среднем 40 кг.

Учет эффективности препарата проводили методом «критический тест» по данным копроовоскопических исследований. Для определения интенсивности инвазии фасциолами и нематодами пищеварительного тракта, проводили гельминтологическое вскрытие 3-х павших животных, а также для учета эффективности обработанных препаратом 5 овец, через 14 суток и 7 животных, на 25 сутки, согласно Руководству, одобренному Всемирной Ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии (1995 г).

Результаты исследований. При подборе животных в опыт было исследовано 40 проб фекалий и во всех из них были обнаружены одновременно яйца нематод и в 22-х пробах яйца фасциол, то есть, отмечена 100%-я экстенсинвазированность нематодами пищеварительного тракта и 55,0% фасциолами, при среднем количестве яиц стронгилят 523,5 экз. в г/фек., фасциол - 32,8 г/фек. При гельминтологическом вскрытие 3-х павших овец, обнаружено в среднем 9,7 экз. фасциол. В пищеварительном тракте находили большое количество нематод более 1000 экз.

В результате дегельминтизации овец супрамолекулярным комплексаом албендазол и триклабендазол групповым методом в смеси с комбикормом в дозе 5,0 мг/кг по ДВ, при копроовоскопии проб фекалий на 14-е сутки после дачи препарата яиц стронгилят в 40 пробах не обнаружено. Но в 4-х пробах из 22 находили по 1 яйцу фасциол (в среднем 12,7 экз. яиц в г/фек.). При повторном исследовании 40 проб фекалий через 25 суток после дегельминтизации, яиц стронгилят пищеварительного тракта и фасциол нами не обнаружены. Убой 5-ти овец инвазированных одновременно стронгилятами пищеварительного тракта и фасциолами на 14-е сутки и 7-ми овец на 25-е сутки. При гельминтологическом вскрытии были свободными от гельминтов.

Таким образом В результате испытания супрамолекулярного комплекса албендазол и триклабендазол в дозе 5,0 мг/кг по ДВ (50 мг/кг по препарату) групповым методом в смеси с комбикормом при фасциолезе и стронгилятозах пищеварительного тракта овец, получена 100%-я эффективность по данным копроовоскопии и убое животных. Смесь препарата с комбикормом овцы поедали охотно, его удобно задавать групповым методом, побочных действий после дегельминтизации нами не отмечены.

Заключение. Изучение острой пероральной токсичности супрамолекулярного комплекса на лабораторных аутбредных белых мышах и крысах установлено, что значение LD₅₀ составило более 5986 мг/кг. Согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) исследуемый препарат относится к 4 классу опасности (вещества малоопасные). При однократном пероральном введении препарата белым лабораторным крысам значение LD₅₀ составило 3103,1 мг/кг препарат относится к 3 классу опасности (вещества умеренно опасные). Крысы оказались более чувствительными видом к супрамолекулярному комплексу, чем мыши, что указывает на видовую чувствительность.

Изучение эффективности заявляемого антигельминтного средства на модели Hymenolepis nana. В результате заявляемое антигельминтное средство в дозе 5,0 мг/кг по ДВ проявил 100%-ю эффективность против имагинальных и преимагинальных цестод мышей.

При клиническом испытании супрамолекулярного комплексного установлена терапевтическая доза равная 5,0 мг/кг против фасциол, цестод и нематозодов пищеварительного и легочных трактов овец. Производственный опыт испытания заявляемого комплексного препарата на овцах, подтвердил высокую эффективность и широкий спектр антигельминтного действия против преимагинальных и имагинальных форм гельминтов трех классов в 5 раз уменьшенной терапевтической дозе.

При этом сокращаются многочисленные трудоемкие противогельминтозные мероприятия, которые рекомендованы проводить, особенно в пастбищный период, ежемесячно, при этом в 5 раз уменьшается расход антигельминтика, что позволяет снижение загрязнения окружающей среды и повысить экономическую эффективность.

При растворимости препарата в 5,9 раз, увеличилась его активность и биологическая доступность к гельминтам, снижение токсических эффектов и повышения стабильности ЛВ при их хранении.

Литература. 1. Архипов И.А. Антигельминтики: фармакология и применение // М. - 2009. - 406 с. [Arkhipov I.A. Anthelmintic: pharmacology and application // M - 2009. - 406 S.]

2. Архипов И.А., Халиков C.C., Душкин А.В., Поляков Н.А., Мусаев М.Б., Варламова А.И., Садов К.М., Лимова Ю.В. Применение нано- и механохимической технологии, и адресной доставки для разработки антигельминтных препаратов // Мат. докл. научной конференции "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями" вып. 17, М. 2016 - С. 30-36.

3. Архипов И.А., Мусаев М.Б. Разработка новых лекарственных форм антигельминтиков и перспективы их применения / Мат. Междунар. конфер. посвящ.80-летию Самарской НИВС, - 2009 - С.22-25.

4. Атаев A.M. Эколого-эпизоотологический анализ фасциолеза животных и совершенствование мер борьбы с ним в юго-восточном регионе Северного Кавказа: Автореф. дис. докт. вет. наук. - 1990. - 40 с.

5. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2-е изд., перераб. и доп.: монография. - Ленинград: Медгиз, 1963 - 146 с.

6. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности: ГОСТ 12.1.007-76. - Введ. 1977-01-01. - Стандарт информ., 2007. - 7 с.

7. Гаджиев И.М. Влияние антигельминтиков ивермектина, албендазола и фенотиазина на эмбриогенез и генетические структуры животных // Автореф. дис., канд. вет. наук, (Специальность 03.03.19 - паразитология и гельминтология) М., 1985, - 21 с.

8. Горохов В.В. Эпизоотический процесс при фасциолезе и биологические основы регуляции численности моллюсков промежуточных хозяев в профилактике гельминтозов: Дис. докт. биол. наук. - 1986. - 516 с.

9. Горохов В.В. Прогноз эпизоотической ситуации в РФ по основным гельминтозам на 2014 год // Российский паразитол. журнал, 2014, №2 - С. 32-33.

10. Сафиуллин Р.Т. Экономическое обоснование паразитарных болезней крупного рогатого скота // Матер, докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». М., 2002. - Вып. 3. - С. 297-300.

11. Диденко П.П., Архипов И.А., Успенский А.В., Мусаев М.Б. Способ получения растворимых комплексных препаратов из нерастворимых в воде субстанций лекарственных средств // Патент №2524652, Бюл. №21, 27.07.2014 г.

12. Каркищенко Н.Н. / Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских технологиях. - Москва, 2010. - 344 с.

13. СП 2.2.1.3218-14 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)».

14. Коляда Е.Е. Эпизоотология и терапия фасциолеза и дикроцелиоза крупного рогатого скота в Среднем Поволжье: Автореф. дис. канд. вет. наук - М., 2004. - 25 с.

15. Лошкарева В.В. Маритогония трематод у крупного рогатого скота и оптимизация сроков применения антигельминтиков в условиях Среднего Предьуралья: Автореф. дис. вет. наук. - М., 2005. - 25 с.

16. Мусаев М.Б. Изыскание отечественных препаратов для терапии трематодозов животных и их антигельминтная и фармакотоксикологическая характеристика // дис. докт. вет. наук., Москва-2010, - 321 с.

17. Мусаев М.Б, Миленина М.В., Архипов И.А., Халиков С.С, Михайлицын Ф.С., Варламова А.И. Эффективность супрамолекулярных комплексов триклабендазола с полимерными наполнителями при фасциолезе // Российский паразитологический журнал. - М. 2017. - Том. 41. - Вып. 3 - С. 271-276.

18. Мусаев М.Б., Миленина М.В, Джамалова A.З., Берсанова Х.И. и др. комиссионное испытание супрамолекулярного комплекса триклабендазола при фасциолезе овец // Мат. доклад, научной конференции "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями" Вып. 18, М., 2017 - С. 293-297.

19. Мусаев М.Б., Щумакович И.Е., Халиков М.С., Емельянова КБ., Кочетков П.П., Патюков Н.Е., Абрамов Е.В. Сроки выведения остаточных количеств триклабендазола и его метаболитов в результате применения триклафасцида на овцах // Российский паразитологический журнал М., Том. 12. Вып. №3, 2018, - С. 67-75.

20. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией член-корреспондента РАМН, профессора Хабриева Р.У. - 2 изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.

21. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под ред. А.Н. Миронова - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

22. Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами: ГОСТ 33216-2014. - Введ. впервые. - Стандартинформ, 2016 - 16 с.

23. Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур: ГОСТ 33215-2014. - Введ. впервые. - Стандартинформ, 2016 - 19 с.

24. Халиков С.С., Мусаев М.Б., Халиков М.С., Архипов И.А. Применение механохимической технологии при создании эффективного препарата для лечения фасциолеза // Х международная научная конференция «Кинетика и механизм кристаллизации. Кристаллизация и материалы нового поколения» 1-6 июля 2018, Суздаль, Россия - С. 237-238.

25. Boray J.C. Abstr. 9-th Int. WAAVP Conf. - Budapest, 1981. - P. 13-17.

26. Venkatesan PS, Deecaraman M, Vijayalakshmi M, Sakthivelan SM. / Sub-acute Toxicity Studies of Acetaminophen in Sprague Dawley Rats - Biol Pharm Bull. 2014; 37(7): 1184-90.

27. Thomas H., et. al., // Vet. Rec. - 2000. - V. 146, N 7. - P. 200.

28. Патент №2640482 Супрамолекулярный комплекс триклабендазола для лечения животных при фасциолезе // Бюл. №1. 09.01. 2018 г.

29. Патент №2546535 Противопаразитарное средство на основе албендазола и способ его использования для лечения гельминтозов млекопитающих // Бюл. 10, 10.04.2015.

Супрамолекулярный антигельминтный комплекс для лечения и профилактики животных при основных гельминтозах, включающий нерастворимые в воде субстанции албендазола и триклабендазола с водорастворимыми полимерами - низкомолекулярным поливинилпирралидоном-17 и арабиногалактаном из лиственницы сибирской Larix sibirica, который представляет собой водорастворимый супрамолекулярный комплекс в виде твердодисперсного порошка с размером частиц 1-10 микрон, при следующем соотношении, масс. % (1:1:49:49):

албендазол	1
триклабендазол	1
поливинилпирралидон-17 низкомолекулярный	49
арабиногалактан Larix sibirica	49