Способ диагностики вторичного иммунодефицита

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической иммунологии, и предназначено для диагностики вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов. В крови военнослужащего определяют относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺. Дополнительно определяют экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4. При одновременном выполнении условий CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺≥0,9 и TLR4≤16 диагностируют вторичный иммунодефицит. Изобретение обеспечивает упрощение способа, сокращение времени исследования и расширение функциональных возможностей способа диагностики вторичного иммунодефицита. 4 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно клинической иммунологии, и может найти применение для диагностики вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов.

Изменение реактивности организма, в особенности системы иммунитета, решающим образом определяет вредоносность для организма того или иного воздействия, в том числе и стресса (Хаитов P.M., Сагакянц А.Б. Система фагоиммуноцитов И. И. Мечникова и медицина экстремальных состояний // Медицина экстремальных ситуаций. - 2011. - №2 (36) - С. 88-96). Участие в военных конфликтах является главным этиологическим фактором формирования дисфункции иммунной системы у военнослужащих (Гажеева Т.П., Царегородцева С.А. Иммунологические аспекты ускоренного старения при посттравматическом стрессовом расстройстве / Вестник Марийского государственного университета. 2009. - №4. - 2009. - С. 145-148).

Развитие вторичного иммунодефицита утяжеляет течение заболеваний, снижает эффективность их терапии, способствует формированию осложнений. Вторичные иммунодефициты рассматриваются как факторы риска развития хронических инфекционных заболеваний, аутоиммунной патологии, аллергических болезней и опухолевого роста (Новикова И.А. Вторичные иммунодефициты: клинико-лабораторная диагностика / Проблемы здоровья и экологии. 2009. - №1 (19). - С. 29-34). Своевременная диагностика вторичных иммунодефицитов у военнослужащих-участников военных конфликтов имеет практическую значимость и является актуальной задачей современной клинической иммунологии.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе найдены различные способы диагностики вторичного иммунодефицита.

Авторским свидетельством СССР №1359745 (опубл. 15.12.1987) защищен «Способ определения иммунодефицитного состояния». У пациента берут кровь и определяют процентное и абсолютное содержание нейтрофилов, фагоцитирующих нейтрофилов, вычисляют фагоцитарный индекс, абсолютный фагоцитарный показатель, индекс завершенности фагоцитоза. По результатам обследования судят о фагоцитарной функции нейтрофилов.

Недостатком способа являются ограниченные функциональные возможности: диагностика частного случая вторичного иммунодефицита (с поражением фагоцитарного звена).

Авторским свидетельством СССР №1520447 (опубл. 07.11.1989) защищен «Способ определения нарушений специфического Т-клеточного иммунитета». Способ осуществляют следующим образом: в свежевзятой крови пациента в присутствии исследуемого антигена проводят реакцию конгломерации лейкоцитов. Для каждого антигена готовят по два одинаковых ряда разведений и устанавливают разницу между их концентрацией. При увеличении этой разницы более чем в 2 раза судят о недостаточности распознавательной и акцепторной функции Т-лимфоцитов, т.е. диагностируют только нарушения Т-клеточного иммунитета.

Авторским свидетельством СССР №1585707 (опубл. 15.08.1990) защищен «Способ диагностики Т-иммунодефицита». Способ осуществляется путем исследования лимфоцитов периферической крови, отличающийся тем, что параллельно определяют количество Е-розеткообразующих клеток и клеток, дающих положительную реакцию на неспецифическую кислую эстеразу и сравнивают показатели с показателями здоровых лиц. При снижении обоих показателей диагностируют Т-иммунодефицит.

Недостатком описанных выше способов являются ограниченные функциональные возможности: диагностика частного случая вторичного иммунодефицита (Т-иммунодефицита).

Авторским свидетельством СССР №1654748 (опубл. 07.06.1991) защищен «Способ определения иммунодефицитных состояний». Мононуклеарные клетки из периферической венозной крови культивируют в течение 16-18 ч в присутствии митогена, затем определяют уровень активации этих клеток экзогенными интерлейкинами (1 и 2) по сравнению с уровнем спонтанной хемилюминесценции. При иммунодефицитных состояниях отмечают резкое снижение активации хемилюминесценции интерлейкинами -1 и -2: для интерлейкина-1 - 18,5% и ниже, для интерлейкина-2 - 17% и ниже.

Недостатком способа является большая продолжительность исследования, составляющая, по сведениям авторов, более 16 часов.

Авторским свидетельством СССР №1689857 (опубл. 07.11.1991) защищен «Способ определения иммунологической реактивности организма». Иммунологическую реактивность определяют по температурной реакции после внутримышечного введения пациенту пирогенала. При повышении температуры до 37,0-37,5°С определяют иммунологическую реактивность в пределах нормы, при 36,6-36,9°С определяют недостаточность иммунологической реактивности, т.е. диагностируют вторичный иммунодефицит.

Недостатком способа является наличие побочных эффектов от воздействия пирогенала после его внутримышечного введения пациенту: злокачественные пирогенные реакции до 6-8 часов после введения, тошнота, рвота, боли в позвоночнике, высокий риск развития ДВС-синдрома, сепсисоподобных реакций, тяжелых нарушений функции печени, липидтранспотрной системы крови (Доченко Э.А., Рождественский Д.А., Юпатов Г.И. Иммунодефициты и некоторые иммуномодулирующие средства / Вестник ВГМУ. 2014. - Т. 13, №3 - С. 114).

Авторским свидетельством СССР №1698789 (опубл. 15.12.1991) защищен «Способ диагностики иммунодефицитного состояния». Для осуществления способа из периферической подкожной вены головы новорожденного с инфекционно-воспалительным заболеванием делают забор крови, которую помещают в прогретую кювету тромбоэластографа для графической записи свертывания крови. Оценивают следующие показатели: время реакции, время образования сгустка, время образования тромбопластина и тромбина. Хронометрическую гипокоагуляцию устанавливают при удлинении временных интервалов реакции и образования сгустка. Структурную гипокоагуляцию устанавливают при уменьшении параметров, характеризующих процессы свертывания в сгустке. Иммунодефицитное состояние диагностируют по наличию структурной и хроматографической гипокоагуляции в сравнении с нормальными значениями у детей в возрасте до 7 дней.

Недостатком описанного выше способа являются ограниченные функциональные возможности диагностики иммунодефицита только в определенной возрастной группе.

Авторским свидетельством СССР №1747987 (опубл. 15.07.1992) защищен «Способ определения вторичного иммунодефицита». У больных активным туберкулезом органов дыхания исследуют лейкограмму периферической крови, определяют лейкоцито-лимфоцитарный индекс (ЛЛИ) -отношение числа лейкоцитов к числу лимфоцитов, абсолютное число лимфоцитов. При количестве лимфоцитов 1,5*10⁹/л с ЛЛИ равным 3,5 и более и при количестве лимфоцитов 1,5*10⁹/л с ЛЛИ равным 4 и более определяют, т.е. диагностируют вторичный иммунодефицит.

Недостатком способа являются ограниченные функциональные возможности: диагностика вторичного иммунодефицита у больных активным туберкулезом органов дыхания.

Авторским свидетельством СССР №1807401 (опубл. 07.04.1993) защищен «Способ определения иммунодефицитного состояния». Осуществляют забор крови из пальца у молодых лиц, подвергающихся длительному воздействию смешанной внешней ионизирующей радиации в малых дозах, приготавливают мазок, в котором определяют содержание катионных белков в нейтрофилах, количество нейтрофильных гранулоцитов, содержащих аномальные гранулы, и среднее содержание аномальных гранул в одном нейтрофиле. При снижении первого показателя на 25% и более и увеличении второго показателя в 4 раза и более и третьего в 2 раза и более относительно нормы определяют иммунодефицитное состояние.

Недостатками способа являются ограниченные функциональные возможности применения: только у лиц, подвергающихся длительному воздействию смешанной внешней ионизирующей радиации в малых дозах, а также диагностика только частного случая вторичного иммунодефицита (с поражением фагоцитарного звена).

Авторским свидетельством СССР №1820330 (опубл. 06.07.1993) защищен «Способ определения нарушений иммунного статуса». Способ предусматривает инкубацию Т-лимфоцитов с эритроцитами барана в присутствии иммуномодулятора с последующим подсчетом розеткообразующих клеток и выявлением различий в показателях в пробах, содержащих и не содержащих иммуномодулятор. При увеличении числа розеткообразующих Т-лимфоцитов определяют нарушение иммунного статуса.

Недостатком способа является ограниченные функциональные возможности: диагностика нарушений только Т-клеточного звена иммунитета.

Авторским свидетельством СССР №1835925 (опубл. 27.04.1996) защищен «Способ определения иммунодефицитного состояния». У пациента при наличии воспалительного заболевания осуществляют забор крови, в которой исследуют количество розеткообразующих нейтрофилов и их фагоцитарную активность. При снижении количества и фагоцитарной активности нейтрофилов на 50% и ниже при незавершенном характере фагоцитоза определяют иммунодефицитное состояние.

Недостатком способа являются ограниченные функциональные возможности: диагностика только частного случая вторичного иммунодефицита (с поражением фагоцитарного звена).

Авторским свидетельством СССР №1837231 (опубл. 30.08.1993) защищен «Способ определения иммунодефицитного состояния». Осуществляют забор крови, в которой исследуют фагоцитарную активность лейкоцитов у больного одновременно с контрольным лицом (донором), служащим эталоном норматива среднего уровня фагоцитарного показателя. Величина фагоцитарного показателя у больного оценивают по отношению к эталону. В качестве показателя фагоцитоза дополнительно определяют отношение числа объектов, поглощенных активными фагоцитами к общему числу неактивных и малоактивных фагоцитов. Выход показателя за пределы нижней границы показателя указывает на недостаточность иммунной защиты, а именно на иммунодефицит.

Недостатком способа являются ограниченные функциональные возможности: диагностика только частного случая вторичного иммунодефицита (с поражением фагоцитарного звена).

Патентом РФ №2122209 (опубл. 20.11.1998) защищен «Способ выявления Т-зависимого иммунодефицита». В сыворотке крови пациента определяют антитела - иммуноглобулины класса G - к гормону тимуса. При повышенном уровне антител к гормону тимуса в сыворотке крови пациента на 20% по сравнению с уровнем антител к гормону тимуса в серонегативной контрольной сыворотке выявляют, то есть диагностируют Т-зависимый иммунодефицит.

Недостатком способа является ограниченные функциональные возможности: диагностика нарушений только Т-клеточного звена иммунитета.

Патентом РФ №2137129 (опубл. 10.09.1999) защищен «Способ диагностики вторичного иммунодефицита». Исследуют кровь пациента, в которой определяют содержание Т-, В-лимфоцитов и иммуноглобулинов А, М, G. Выявляют три наиболее отличающихся от нормы показателя, указывающих на направление динамики иммунологических параметров и имеющих свою характерную особенность для той или иной патологии. Совокупность этих трех показателей условно может быть названа формулой расстройств иммунной системы (ФРИС). Формула позволяет определить поврежденное звено иммунной системы, то есть диагностировать иммунодефицит.

Недостатком способа является большая длительность исследования: более 24 часов (Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA). Суть, принцип метода и этапы исследования. Анализ на антитела, классы антител, иммунный комплекс, https://www.kp.ru/guide/immunofermentnyi-analiz.html).

Патентом РФ №2179316 (опубл. 10.02.2002) защищен «Способ диагностики иммунодефицитного состояния». Исследуют венозную кровь, в которой выделяют мононуклеарные клетки, проводят реакцию розеткообразования in vitro с Т-активином и определяют показатель относительного содержания Т-клеток (ПОТ) и показатель реактивности Т-клеток (ПРТ). При значениях ПОТ>0,8, ПРТ<1,0 диагностируют компенсированный гипореактивный 1 тип иммунодефицитного состояния (ИДС), то есть иммунодефицита, при ПОТ<0,8, ПРТ≥1,0 судят о наличии компенсированного 2 типа иммунодефицита, при ПОТ<0,8, ПРТ<1,0 диагностируют декомпенсированный 3 тип иммунодефицита.

Недостатком способа являются ограниченные функциональные возможности: диагностика только частного случая иммунодефицита, а именно Т - клеточного иммунодефицита.

Патентом РФ № 2527332 (опубл. 08.27.2014) защищен «Способ диагностики спонтанной формы вторичной иммунной недостаточности». Исследуют венозную кровь у ребенка с первичным перитонитом, в которой определяют относительное содержание активированных классических моноцитов с фенотипом CD14^bnghtCD16"HLA-DR⁺ от общего количества моноцитов с фенотипом CD14^bnght методом многоцветной проточной цитометрии. При его значении более 68,8% диагностируют спонтанную форму вторичной иммунной недостаточности, то есть диагностируют иммунодефицит.

Недостатком способа являются ограниченные функциональные возможности: диагностика иммунодефицита только у детей с первичным перитонитом.

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является защищенный патентом РФ № 2504784 (опубл. 20.01.2014) «Способ диагностики вторичной иммунной недостаточности», включающий исследование венозной крови, в которой определяют относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, %, иначе говоря, количество регуляторных Т-клеток CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺, %. При этом исследуют кровь больного туберкулезом легких до назначения специфической химиотерапии. В ней определяют также клеточные, гуморальные и молекулярно-генетические параметры иммунного статуса пациента: количество у8Т-лимфоцитов, CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ регуляторных Т-клеток/Т-хелперов активированных, CD45R0⁺ Т-клеток памяти, CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ и CD3⁺CD4'CD25⁺ регуляторных Т-клеток, секрецию in vitro IL-2, IL-4, IL10, TGFp, а также аллельные варианты генов иммунорегуляторных цитокинов IL2, IL4, IL10, TGFB. При относительном содержании в периферической к рови CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺регуляторных Т-клеток более чем 2,6%, CD4⁺CD25Toxp3⁺регуляторных Т-клеток более чем 5,1%, CD3⁺CD4' CD25⁺регуляторных Т-клеток более чем 0,2%, CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ регуляторных Т-клеток/Т-хелперов активированных менее чем 25,5%, CD3⁺CD4⁺CD25⁺ Т-хелперов менее чем 35,4%, у8Т-лимфоцитов менее чем 4,9%, CD45R0⁺ Т-клеток памяти менее чем 8,9%; содержании IL-2 в супернатантах культуральных суспензий мононуклеарных лейкоцитов периферической крови менее чем 22,3 пг/мл, IL-4 - более чем 40,0 пг/мл, IL-10 более чем 25,3 пг/мл, TGFP - более чем 1109,0 пг/мл одновременно с носительством «низко продуцирующего» аллеля G и генотипа GG (T-330G) гена IL2 и «высоко продуцирующих» аллеля А и генотипа АА (С-592А) гена IL10, аллеля Т и генотипа ТТ (С-509Т) гена TGFB и аллеля Т и генотипа ТТ (С-590Т) гена IL4 диагностируют вторичную иммунологическую недостаточность, то есть диагностируют вторичный иммунодефицит.

Недостатками прототипа являются ограниченные функциональные возможности диагностики иммунодефицита только у больных туберкулезом легких до начала химиотерапии, сложность, а также большая длительность исследования (более 24 часов).

Задачей изобретения является разработка простого и достоверного способа диагностики вторичного иммунодефицита у военнослужащих участников военных конфликтов.

Техническим результатом, проявляющимся при реализации данного способа, является упрощение способа, сокращение времени исследования и расширение функциональных возможностей способа диагностики вторичного иммунодефицита.

Технический результат достигается тем, что у военнослужащегоучастника военного конфликта выполняют забор венозной крови, в которой определяют относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, % и экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4, %. При одновременном выполнении условий CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺>0,9 и TLR4<16 у военнослужащего-участника военного конфликта диагностируют вторичный иммунодефицит.

Подробное описание способа.

У военнослужащего-участника военного конфликта после возвращения из зоны военного конфликта выполняют забор венозной крови, в которой определяют относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺ (Черешнев В.А. Субпопуляционный состав регуляторных Т-лимфоцитов у пациентов с ВИЧ-инфекцией при эффективной антиретровирусной терапии / Бюллетень сибирской медицины. - 2019. - № 18 (1). - С. 249) и экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) (Ковальчук Л.В. и др. Изучение системы Toll-подобных рецепторов врожденного иммунитета в острый период после инфаркта миокарда / Весник РГМУ. - 2010. - № 1. - С. 19).

Относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3+CD4+Foxp3+, %, определяют методом проточной цитофлюориметрии на проточном цитометре, например, Becton Dickinson (США) (Черешнев В.А. Субпопуляционный состав регуляторных Т-лимфоцитов у пациентов с ВИЧ-инфекцией при эффективной антиретровирусной терапии / Бюллетень сибирской медицины. - 2019. - № 18 (1). - С. 247,249).

Экспрессию Toll-подобных рецепторов TLR4, %, определяют, например, по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91).

Для разработки способа диагностики вторичного иммунодефицита нами была проведена оценка иммунного статуса и проведено обследование 82 военнослужащих-участников военного конфликта после возвращения из зоны военного конфликта. Возраст военнослужащих составил 27 - 42 года.

Все военнослужащие были разделены на 2 группы: основная - 33 пациента с часто рецидивирующими острыми респираторными заболеваниями затяжного характера, обострением очагов хронической инфекции (верхних и нижних дыхательных путей, кожи, мочеполовой системы, желудочно-кишечного тракта), а также контрольная - 49 практически здоровых военнослужащих. В венозной крови пациентов обеих групп определяли абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов CD3⁺, Тлимфоцитов-хелперов CD3⁺CD4⁺, цитотоксических Т-лимфоцитов CD3⁺CD8⁺, клеток-натуральных киллеров CD3⁺CD16⁺, регуляторных Тлимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, В-лимфоцитов CD19⁺, величину иммунорегуляторного индекса, содержание основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgM, IgG, экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах: TLR2, TLR4 и TLR9 и величину коэффициента стимуляции нейтрофилов в НСТтесте.

Проведенная с помощью программы Statistica 12,0 (StatSoft, США) статистическая обработка результатов исследования определила статистически достоверные (р<0,05) значения параметров иммунного статуса военнослужащего-участника военного конфликта: минимальное значение содержания регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺ - 0,9% и максимальное значение экспрессии Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4 - 16%, позволившие разработать статистически достоверный (р<0,05) критерий диагностики вторичного иммунодефицита у военнослужащих участников-военных конфликтов: одновременное выполнение условий CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺>0,9 и TLR4<16.

Практическая реализуемость способа иллюстрируется примерами из клинической практики.

Пример 1: военнослужащий Н., 39 лет, проходил службу в течение 3 месяцев в зоне военного конфликта. По возвращении появился кашель, боль в грудной клетке почувствовал нарастающую слабость, поднялась температура тела до 38° С, обратился за медицинской помощью в Консультативно-диагностическую поликлинику ФГКУ «1602 Военный клинический госпиталь» Министерства обороны РФ (КДП ФГКУ «1602 ВКГ» МО РФ), где был установлен диагноз: «Правосторонняя нижнедолевая внебольничная пневмония», в связи с чем пациент был госпитализирован в ФГКУ «1602 Военный Клинический Госпиталь» МО РФ. При дополнительном обследовании был установлен сопутствующий диагноз: «Хроническая персистирующая герпесвирусная инфекция, ВЭБ-реактивация».

Военнослужащему Н. было выполнено обследование согласно заявленному способу. Военнослужащему Н. из локтевой вены выполнили забор крови, в которой определили относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, % и экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4, %. Относительное количество регуляторных Тлимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, %, определяли методом проточной цитофлюориметрии на проточном цитометре (Beckman Coulter, США). Экспрессию Toll-подобных рецепторов TLR4, %, определяли по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91). Время обследования составило 2 часа.

Было получено CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺=l,8% и TLR4=12%. Поскольку одновременно было выполнено условие CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺=1,8%>0,9 и TLR4=12%<16 у военнослужащего Н. диагностировали вторичный иммунодефицит. В дополнение в терапии основных заболеваний ему была назначена адекватная иммунокорригирующая терапия. Длительность пребывания в стационаре составила 12 дней, течение заболевания без осложнений. Результаты лечения подтвердили достоверность заявляемого способа диагностики вторичного иммунодефицита.

Пример 2: военнослужащий В., 28 лет, выполнял служебные обязанности в течение 3 месяцев в зоне военного конфликта. В течение этих 3 месяцев и по возвращению из зоны военного конфликта 4 раза отмечал эпизоды герпетических высыпаний на губах продолжительностью от 3 до 5 дней, беспокоили боли в горле, повышалась температура тела до 37,5°С. При обращении за медицинской помощью КДП ФГКУ «1602 ВКГ» МО РФ была назначена противовирусная терапия и выполнено обследование согласно заявляемому способу.

Военнослужащему В. выполнили забор венозной крови, в которой определяли относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, % и экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4, %. Относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, %, определяли методом проточной цитофлюориметрии на проточном цитометре (Beckman Coulter, США). Экспрессию Toll-подобных рецепторов TLR4, %, определяли по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91). Время обследования составило 2 часа.

Было получено CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺=l,2%, TLR4=14%. Поскольку одновременно было выполнено условие CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺=1,2>0,9 и TLR4=14<16, у военнослужащего В. диагностировали вторичный иммунодефицит. В дополнение к назначенной противовирусной терапии, военнослужащему В. была назначена адекватная иммунокорригирующая терапия. Длительность амбулаторного лечения составила 5 дней без освобождения от обязанностей военной службы, течение заболевания без осложнений. Результаты лечения подтвердили достоверность заявляемого способа диагностики вторичного иммунодефицита.

Пример 3: военнослужащий С., 36 лет, выполнял служебные обязанности в течение 6 месяцев в зоне военного конфликта. После возвращения при диспансеризации предъявил жалобы на слабость, снижение работоспособности после перенесенных в течение этих 6 месяцев 3 острых респираторных заболеваний. При иммунологическом обследовании была выявлена реактивация цитомегаловирусной инфекции, назначена противовирусная терапия и выполнено обследование согласно заявляемому способу.

Военнослужащему С. выполнили забор венозной крови, в которой определяли относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3+CD4+Foxp3+, % и экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4, %. Относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3+CD4+Foxp3+, %, определяли методом проточной цитофлюориметрии на проточном цитометре (Beckman Coulter, США). Экспрессию Toll-подобных рецепторов TLR4, %, определяли по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91). Время обследования составило 2 часа.

Было получено CD3+CD4+Foxp3+=0,9%, TLR4=11%. Поскольку одновременно было выполнено условие CD3+CD4+Foxp3+=0,9 и TLR4=11<16, у военнослужащего С. диагностировали вторичный иммунодефицит и была назначена адекватная иммунокорригирующая терапия. Длительность амбулаторного лечения составила 14 дней без освобождения от обязанностей военной службы, течение заболевания без осложнений. Результаты лечения подтвердили достоверность заявляемого способа диагностики вторичного иммунодефицита.

Пример 4: военнослужащий Б., 39 лет, выполнял служебные обязанности в течение 5 месяцев в зоне военного конфликта. После возвращения при диспансеризации предъявил жалобы на появление сухих чешуек на волосистой части головы, ломкость и выпадение волос. Установлен диагноз: «Микоз волосистой части головы», назначена системная антимикотическая терапия и было выполнено обследование согласно заявляемому способу.

Военнослужащему Б. выполнили забор венозной крови, в которой определяли относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3+CD4+Foxp3+, % и экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4, %. Относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3+CD4+Foxp3+, %, определяли методом проточной цитофлюориметрии на проточном цитометре (Beckman Coulter, США). Экспрессию То11подобных рецепторов TLR4, %, определяли по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91). Время обследования составило 2 часа.

Было получено CD3+CD4+Foxp3+=1%, TLR4=16%. Поскольку одновременно было выполнено условие CD3+CD4+Foxp3+=1>0,9 и TLR4=16, у военнослужащего Б. диагностировали вторичный иммунодефицит. В дополнение к системной атимикотической военнослужащему Б. была назначена адекватная иммунокорригирующая терапия. Длительность амбулаторного лечения составила 10 дней без освобождения от обязанностей военной службы, течение заболевания без осложнений. Результаты лечения подтвердили достоверность заявляемого способа диагностики вторичного иммунодефицита.

Согласно заявляемому способу в КДП ФГКУ «1602 ВКГ» МО РФ нами было обследовано 115 военнослужащих, вернувшихся из зоны военного конфликта. Возраст военнослужащих: от 27 до 48 лет. Продолжительность выполнения профессиональных обязанностей в зоне военного конфликта составила от 3 до 6 месяцев. Проводили забор венозной крови, в которой определяли относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, % и экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4, %. По результатам исследования венозной крови у 41 военнослужащего были получены значения относительного количества регуляторных-Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺ от 0,9% до 2,5% и диапазон экспрессии Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4 от 9% до 16%. Так как у этих 41 военнослужащих одновременно было выполнено условие CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺>0,9% и TLR4<16%, у них диагностировали вторичный иммунодефицит.

Этим 41 военнослужащим было назначена адекватная иммунокорригирующая терапия, эффективность которой подтвердила достоверность заявляемого способа диагностики вторичного иммунодефицита.

Таким образом, предложенный способ простой, достоверный, по сравнению с прототипом значительно сокращает время исследования и может быть использован для диагностики вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов.

Способ диагностики вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов, включающий исследование крови военнослужащего, в которой определяют относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺, %, отличающийся тем, что дополнительно определяют экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах TLR4, %; при одновременном выполнении условий CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺≥0,9 и TLR4≤16 диагностируют вторичный иммунодефицит.