Способ профилактики эймериоза кур
Владельцы патента RU 2750707:
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Сибирский федеральный научный центр агробиотехнологий Российской академии наук (СФНЦА РАН) (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и касается профилактики эймериоза кур. Для этого орально вводят биотинилированное производное окисленного декстрана, представляющее собой коньюгат, полученный реакцией гидрозида биотина и окисленного декстрана с молекулярной массой 40-70 кДа с образованием азометиновой связи, в дозе 0,06 мг/кг живого веса цыпленка первых дней жизни, каждые 72 часа. Способ обеспечивает эффективную профилактику эймериоза кур за счет стимуляции клеточного звена иммунитета и повышения резистентности организма. 3 табл., 4 ил.
Изобретение относится к области ветеринарии, ветеринарной иммунологии, в частности к способам повышения клеточного иммунитета и профилактики эймериоза (кокцидиоза) кур и может быть использовано в птицеводческих хозяйствах промышленного типа и частных подворьях для повышения естественной резистентности птицы из группы риска для снижения заболеваемости их эймериозом.
Одной из наиболее часто встречающихся патологий птиц, животных и человека являются протозойные заболевания.
Эймериоз (кокцидиоз) является реальной проблемой и одним из самых распространенных заболеваний птицы в мире. Возбудители заболевания (простейшие рода Eimeria), проникают в эпителий кишечника, вызывая энтерит и диарею. Птица не способна усваивать питательные вещества корма, что приводит к низким темпам роста и массовой гибели птицы.
Основным методом профилактики данных заболеваний является применение химиопрепаратов, уничтожающих возбудителя инфекции.
Известен способ профилактики и лечения эймериоза кур с применением ионофорных антибиотиков и кокцидиостатиков, полученные химическим путем. В зависимости от технологических условий содержания птицы, эти препараты применяют по схеме ротации в течение 3-4 последовательных циклов выращивания применяют один препарат, потом переходят на другой. (В.П. Музыка, Т.И. Стецко, О.И. Калинина, С.Д. Мурская. Современные подходы в борьбе с эймериозом кур // Ученые записки учреждения образования "Витебская ордена "Знак почета" государственная академия ветеринарной медицины". - Том 48. - №2-1. - 2012. - С. 9-13).
Недостатком этого способа является быстрое приспособление паразитов к препарату, который применяется, с последующим развитием длительной резистентности к его действию.
Так же недостатком этого способа является трудоемкость изготовления препарата.
Наиболее близким решением, принятым за прототип, являетсявакцина для профилактики кокцидиоза (эймериоза) кур (П РФ №2465313 от 09.02.20197, МПК C12N 1/10, А61K 39/012). При этом идет выработка гуморального звена иммунитета. Используемая культура кокцидий вводится цыплятам в зоб, что позволяет создать у птицы иммунитет к эймериямчетырех видов (Eimeriaacervulina Л-2-15 КЭ №2, Eimeriamaxima Л-3-2 КЭ №3, Eimerianecatrix Л-4-18 КЭ №4, Eimeriatenella Л-1-23 КЭ №1).
Однако в данном случае иммунитет формируется только против четырех видов эймерий, включенных в культуру, и, если в хозяйстве распространен другой патогенный вид, то он неизбежно вызовет вспышку болезни, так как гуморальный иммунитет к эймериям неспецифичен.
Так же в механизме данного препарата отсутствует стимулирующее действие на клеточное звено иммунитета, являющегося основным защитным механизмом в профилактики эймериоза кур.
Задача изобретения - расширение арсенала способов профилактики эймериоза кур, основанном на повышении клеточного иммунитета, посредством введения биологически активного препарата, в качестве последнего используют биотинилированное производное окисленного декстрана.
Поставленная задача решается тем, что в способе профилактики эймериоза кур, включающем применение биологически активного препарата, согласно изобретению, в качестве препарата используют биотинилированное производное окисленного декстрана, представляющее собой коньюгат, полученный реакцией гидрозида биотина и окисленного декстрана с молекулярной массой 40-70 кДа с образованием азометиновой связи, раствор биотинилированного производного окисленного декстрана, в дозе 0,06 мг/кг живого веса цыпленка первых дней жизни, орально, каждые 72 часа.
Способ осуществляется следующим образом.
Способ получения биологически активного препаратабиотинилированного производного окисленного декстрана (П РФ №2537246 от 27.12.2014).
Сухой окисленный декстран с молекулярной массой 40-70 кДа предварительно растворяют в трис-ацетатном буферном растворе с рН 5,0-5,5 до концентрации 5%. Для запуска реакции в реакционную смесь добавляют гидразид биотина в качестве активного реагента в весовом соотношении с декстраном 1:(20-25) в пересчете на массу сухого вещества. Реакцию проводят при температуре 80-90°С в течение 30-60 минут. Гидразид биотина взаимодействует с карбонильными группами окисленного декстрана с образованием азометиновой связи -C=N-.
Полученный биологически активный препаратбиотинилированного производного окисленного декстрана представляет собой конъюгат, в котором гидразид биотина и окисленный декстран связаны ковалентными связями. Именно наличие азометиновой связи в конъюгатегидразида биотина с окисленным декстраном обусловливает его специфические биологические свойства имитировать (моделировать) конъюгаты с лекарственными препаратами, имеющими в своей структуре первичные аминогруппы. Далее по тексту препарат обозначается «БОД».
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Определение дозировки препарата БОД цыплятам.
Для определения влияния стимуляции клеточного иммунитета на заболеваемость цыплят эймериозомсформировали по принципу аналогов 4 группы суточных цыплят яичного направления: три опытных и одна контрольная (n=10). Животным опытной группы внутримышечно и орально вводили препарат БОД по схеме, представленной в таблице 1.
На 10 сутки после начала опыта всем цыплятам (кроме цыплят 3 группы) производили внутрижелудочное введение культуры ооицст Е. acervulina и E.tenella в дозе 8*104 на голову, в соотношении 20% к 80%. Повторное заражение цыплят ооцистамиэймерий производили на 15 сутки опыта. Ежедневно проводили клинический осмотр животных. При возникновении заболевания фиксировали клинические признаки или сроки падежа птицы по группам.
Результаты стимуляции клеточного иммунитета на заболеваемость цыплят эймериозомпредставлены на фиг. 1.
Максимальный падеж птицы после первого заражения наблюдали в контрольной группе -37,5%. В первой опытной группе, где «БОД» вводился внутримышечно в дозе 0,02 мг/кг, данный показатель составил 28,5%, во второй, где «БОД» задавался орально в дозе 0,06 мг/кг - 14,2%.
После повторного заражения максимальный падеж птицы наблюдали в первой опытной группе, получавшей «БОД» внутримышечно, падеж составил 85,7% от общего количества животных. Во второй опытной группе данный показатель не изменился, в то время как в контроле пало 62,5% животных (фиг. 2).
Таким образом, максимально хорошие результаты наблюдали в группе, получавшая БОД орально в дозе 0,06 мг/кг с интервалом 72 часа и профилактирует заболевание цыплят эймериозом снижая падеж птицы на 48,3% по сравнению с контролем.
Пример 2. Влияние стимуляции клеточного иммунитета на длину кишечных ворсинок тощей кишки цыплят-бройлеров при экспериментально-мэймериозе.
На 19 день опыта произвели диагностический убой всех цыплят, отбор их внутренних органов и кишечного содержимого для гистологического и паразитологического исследований.
В конце опыта у цыплят второй и контрольной групп были взяты образцы тощей кишки для проведения люминесцентной микроскопии для сравнения длины кишечных ворсинок.
Результаты представлены в таблице 2.
Из таблицы 2 видно, что опытной группе длина кишечных ворсинок больше на 37,73% и составила 794,73 нм., в контрольной группе - 576,99 нм.
Таким образом, укорачивание ворсинок являлось защитной реакцией организма на развитие воспалительного процесса в просвете кишечника, для уменьшения площади поверхности всасывания. Следовательно, в контрольной группе, воспалительный процесс, вызванный эймериозом, наблюдали в более выраженной форме, чем в опытной группе получавшей «БОД» орально.
Так же полученные результаты подтвердились и результатами оценки гистологической структуры ворсинок (фото 1 и 2).Анализ микрофотографий ворсинок у цыплят опытной группы, получавших БОД орально в дозе 0,06 мг/кг, указывает на отсутствие признаков сосудистой гиперемии и кровоизлияний. В целом, структура кишечных ворсин соответствует критериям гистологической нормы (фото 1).
В контрольной группе наблюдали снижение тургора ворсинок, вследствие чего их верхушки лежат на боку. Заметны признаки точечных кровоизлияний. Площадь активного всасывания уменьшена, что привело к снижению привесов у цыплят контрольной группы (фото 2).
Таким образом, применение «БОД» в дозе 0,06 мг/кг орально, каждые 72 часа, способствует стимуляции клеточного звена иммунитета при экспериментальном заражении эймериозоми и помогает сохранить микроархитектонику ворсинок тощей кишки, что препятствует развитию гемморагического воспаления.
Пример 3. Профилактическое влияние «БОД» на привесы цыплят-бройлеров при экспериментальном эймериозе.
В начале опыта, а так же через каждые 7 суток опыта проводили взвешивание цыплят опытных и контрольных групп. Результаты представлены в таблице 3.
Из представленных данных таблицы 3 видно, что максимальный прирост живой массы (9,8%) на 21 сутки опыта наблюдали в опытной группе, получавшей «БОД» орально. Разница с приростом живой массы интактного контроля, на 21 сутки опыта составила 1,5%.
При сравнении с аналогичных показателей животных контроля разница составляет - 4,24% с опытной группой.
Таким образом, применение БОД стимулирует прирост живой массы новорожденных цыплят. Экспериментальное заражение ооцистамиэймерий лишь незначительно снижает данный эффект исследуемого препарата.
Эффективность профилактического действия проявляется в сокращении падежа, увеличением привесов и сокращении воспалительных процессов в желудочно-кишечном тракте цыплят.
Таким образом, предложен способ профилактики кокцидиоза кур, где в качестве средства профилактики применяются препарат, стимулирующий клеточное звено иммунитета, тем самым повышая общую резистентность организма после назначения препарата, что позволяет сократить падеж птицы и минимизировать потери их дальнейшей продуктивности. На основании полученных результатов лабораторных исследований, для профилактики эймериоза кур и повышения уровня клеточного иммунитета рекомендуем применение препарата «БОД» в дозе 0,06 мг/кг живого веса цыпленка первых дней жизни, орально, каждые 72 часа.
Способ профилактики эймериоза кур, включающий применение биологически активного препарата, отличающийся тем, что в качестве препарата используют биотинилированное производное окисленного декстрана, представляющее собой коньюгат, полученный реакцией гидрозида биотина и окисленного декстрана с молекулярной массой 40-70 кДа с образованием азометиновой связи в дозе 0,06 мг/кг живого веса цыпленка первых дней жизни, орально, каждые 72 часа.
