Способ выделения суммы таннинов, используемой для получения субстанции противоопухолевого препарата "ханерол" из кипрея узколистного (иван-чая) (chamaenerion angustifolium (l.)scop.)



Способ выделения суммы таннинов, используемой для получения субстанции противоопухолевого препарата ханерол из кипрея узколистного (иван-чая) (chamaenerion angustifolium (l.)scop.)
Способ выделения суммы таннинов, используемой для получения субстанции противоопухолевого препарата ханерол из кипрея узколистного (иван-чая) (chamaenerion angustifolium (l.)scop.)

Владельцы патента RU 2750730:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений" (ФГБНУ ВИЛАР) (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу выделения суммы таннинов для получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол». Способ выделения суммы таннинов для получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» на основе димерного макроциклического гидролизуемого таннина из кипрея узколистного (иван-чая) (Chamaenerion angustifolium (L.) Scop) включает: экстракцию 500 г соцветий или побегов кипрея узколистного (иван-чая) 5 л 25% водного раствора диметилформамида, фильтрацию, концентрирование полученного раствора до 1200-1300 мл, осаждение цинковых солей танниновой фракции в две стадии: путем прибавления 40 мл 20% раствора ацетата цинка при температуре 45°С, выпавший осадок центрифугируют и отделяют, к раствору снова при 45°С прибавляют для соцветий 140 мл, а для побегов 150 мл 20%-ного раствора ацетата цинка при перемешивании, охлаждают до комнатной температуры, выпавший осадок центрифугируют, промывают водой, спиртом, водой, разлагают катионитом КУ-2-8-(Н+), обессоливают раствор на колонке с катионитом КУ-2-8-(Н+), упаривают и высушивают лиофильно. Вышеописанный способ обеспечивает получение 4-5% продукта от веса исходного сырья. 2 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, в частности, к способу выделения из кипрея узколистного (иван-чая) суммы таннинов, входящей в состав субстанции препарата «Ханерол», обладающего противоопухолевой активностью.

Кипрей узколистный (иван-чай) (Chamaenerion angustifolium (L.) Scop.) (Epilobium angustifolium (L)) семейства кипрейных (Onagraceae) - растение, произрастающее на территории России, широко используется в традиционной медицине как лекарственное растение. Действующими веществами разработанного противоопухолевого препарата «Ханерол» являются макроциклические гидролизуемые таннины, структура которых доказана химическими и спектральными методами. Основным действующим компонентом препарата является димерный макроциклический таннин хаменерин-I состава C68H48O44⋅nH2O (до 60% от общего содержания биологически активных веществ препарата) (Сасов С.А. «Выделение противоопухолевого препарата ханерол из кипрея узколистного и данные о его структуре», автореферат диссертации, канд. хим. наук, Москва, 1986, 22 стр.; Спиридонов Н.А. и др. «Цитотоксичность таннинов Chamaenerium angustifolium (L.) Scop. и Hippophae rhamnoides L. и их влияние на дыхание митохондрий», Экспериментальная и клиническая фармакология, 1997, Т. 60, №4, С. 60-63; Сасов С.А. и др. «Макроциклические таннины кипрея узколистного», Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, 2010, №10, С. 24-29; Петрова М.Ф. и др. «Оригинальный противоопухолевый препарат - ханерол», Материалы Всесоюзного совещания «Актуальные проблемы экспериментальной химиотерапии опухолей», Черноголовка 1980, Том 1, С. 210-212).

Структура действующего начала «Ханерола» - хаменерина-1 идентифицирована с энотеином В, полученным из энотеры (Т. Hatano et al. «Oenothein В, a dimeric hydrolysable tannin of cyclic structure», Chem. Pharm. Bull., 1989, V. 37, №8, P. 2269-2271; Igor A. Schepetkin et al. «Therapeutic Potential of Polyphenols from Epilobium angustifolium (Fireweed), Phytother. Res. 2016 Aug; V 30, №8. P. 1287-1297).

Известен способ получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» из суммы таннинов (Т.А. Алиева и др. «Способ получения фитогемагглютинина, обладающего противоопухолевой активностью», А.с. СССР №396040, 01.10.1971), включающий стадии экстракции цветков кипрея узколистного 25% раствором диметилформамида, осаждение таннинов основным ацетатом, свинца, разложение свинцового комплекса сероводородом, последующий диализ и обессоливание на катионите КУ-2-8 (Н+)

Позже разработан способ получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол», включающий стадии экстракции цветков кипрея узколистного (иван-чая) 25% раствором диметилформамида, осаждение свинцового комплекса таннинов средним ацетатом свинца, промывание свинцового комплекса последовательно водой, спиртом и опять водой. Далее проводят частичное разложение свинцового комплекса катионитом КУ-2-8 (Н+) и окончательное обессоливание на колонке с катионитом КУ-2-8 (Н+), упаривание и лиофильную сушку, получение готового продукта. (Сасов С.А. «Выделение противоопухолевого препарата «Ханерол» из кипрея узколистного и данные о его структуре». Автореферат диссертации, канд. хим. наук, Москва, 1986, 22 стр.; Петрова М.Ф. и др. «Выделение активного начала Chamaenerion angustifolium», Химиотерапия опухолей в СССР. Выпуск 27, Москва, 1979, С. 9-11). Сасов С.А. и др. «Гидролизуемые гало-эллаго-танины кипрея узколистного Chamaenerion angustifolium (L.)) из биоколлекции питомника ботанического сада ФГБНУ ВИЛАР - перспективный источник для получения цитотоксических средств». Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, т. 22, 2019, №1) Последний способ был выбран нами в качестве прототипа.

К недостаткам прототипа относится использование в процессе выделения токсичного среднего ацетата свинца.

Нами предлагается новый способ выделения суммы таннинов для субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» из соцветий или побегов кипрея узколистного (Chamaenerion angustifolium (L.) Scop.), свободный от недостатков прототипа, в котором исключено использование токсичных солей свинца.

Задача решается тем, что при выделении суммы таннинов субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» для осаждения целевой фракции ацетат свинца заменен на ацетат цинка.

Технический результат

Разработан новый, простой в исполнении и экологически чистый способ выделения субстанции препарата «Ханерол» на основе димерного макроциклического гидролизуемого таннина из кипрея узколистного (иван-чая) (Chamaenerion angustifolium (L.) Scop) семейства кипрейных (Onagraceae), обладающего противоопухолевой активностью.

Заявляемый способ включает следующие стадии:

1. Экстракцию соцветий или побегов кипрея узколистного водным раствором диметилформамида.

2. Фильтрацию и концентрирование полученного раствора.

3. Двухстадийное осаждение цинковых солей танниновой фракции.

4. Отделение осадка и промывка водой, спиртом и водой.

5. Обработка предпочтительно катионитом КУ 2-8 (H+).

6. Концентрирование в вакууме, лиофильная сушка и получение готового продукта.

Способ осуществляется следующим образом:

Высушенное растительное сырье экстрагируют водным 25% диметилформамидом в течение 24 час, фильтруют, а затем концентрируют в вакууме. К полученному концентрату при температуре 45°С и перемешивании прибавляют 20%-ный раствор ацетата цинка. Выпавший осадок центрифугируют и отделяют.

К раствору снова при 45°С прибавляют 20%-ный раствор ацетата цинка при перемешивании, охлаждают до комнатной температуры, выпавший осадок центрифугируют, тщательно перемешивают с дистиллированной водой и снова центрифугируют.

Осадок повторно промывают 2 раза дистиллированной водой, далее его дважды обрабатывают этанолом ректификатом, центрифугируют, вновь промывают водой и центрифугируют.

Цинковую соль суспендируют с дистиллированной водой, к смеси прибавляют катионит КУ-2-8 в Н+ форме и интенсивно перемешивают в течение 20-30 мин. Далее осадок отделяют на центрифуге, промывают и вновь центрифугируют.

Объединенные растворы и промывные воды пропускают через колонку с катионитом КУ-2-8 в Н+ форме. Водный элюат концентрируют в вакууме, а затем его лиофилизируют. Выход препарата 4-5% от веса растительного сырья, [α]D+221 - 228°.

Пример осуществления способа выделения суммы таннинов для получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» на основе димерного гидролизуемого таннина из соцветий кипрея узколистного (иван-чая):

Пример 1. Экстракцию 500 г соцветий кипрея узколистного проводят в течение 24 часов 5 литрами 25% водного раствора диметилформамида. Экстракт отделяют и концентрируют в ваккууме до объема 1200-1300 мл. Осаждение цинковой соли танниновой фракции проводят в две стадии путем прибавления 20% раствора ацетата цинка, сначала 40 мл, потом еще 140 мл и отделяют центрифугированием. Осадок центрифугируют, промывают водой, спиртом и еще раз водой. Осадок суспендируют в 1 литре воды, добавляют 80 мл катионита КУ-2-8 (Н+) и перемешивают 20-30 минут. Раствор отделяют от осадка центрифугированием. Остатки солей отделяют пропусканием через колонку с катионитом КУ-2-8 (H+) в количестве 125-150 мл. Водный раствор концентрируют в вакууме до 100-150 мл и высушивают в лиофильной сушке. Выход субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» 20-25 г (4-5% от веса исходного сырья, [α]D+221 - 228° (вода).

Способ выделения противоопухолевого препарата из побегов кипрея узколистного осуществляют вышеописанным способом. Осаждение цинковых солей проводят в две стадии: вначале 40 мл, затем 150 мл. Выход препарата 4-5% от веса растительного сырья, [α]D+225°.

Пример 2. Экстракцию 500 г побегов кипрея узколистного проводят в течение 24 часов 5 литрами 25% водного раствора диметилформамида. Экстракт отделяют и концентрируют в ваккууме до объема 1200-1300 мл. Осаждение цинковых солей танниновой фракции проводят в две стадии путем прибавления 20% раствора ацетата цинка сначала 40 мл потом еще 150 мл. Осадок центрифугируют, промывают водой, спиртом и еще раз водой. Осадок суспендируют в 1 литре воды добавляют 80 мл катионита КУ-2-8 (Н+) и перемешивают 20-30 минут, осадок отделяют центрифугированием. Остатки солей отделяют пропусканием через колонку с катионитом КУ-2-8 (Н+) в количестве 125-150 мл. Водный раствор концентрируют в ваккууме до 100-150 мл и высушивают в лиофильной сушке. Выход субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» также 20-25 г (4-5% от веса исходного сырья, [α]D+225° (вода).

Контроль процессов разделения и подлинности соединений осуществляют методами препаративной и аналитической хроматографии на бумаге, на полиакриламидном геле (фракционирование по молекулярной массе) и использования специфических хромогенных реакций на полифенольные соединения, а также данными перманганатометрического титрования, удельного показателя поглощения и величины углов оптического вращения ([α]D+225°) в сравнении с заведомыми образцами суммы таннинов для получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол», полученными по прототипу.

Изобретение иллюстрируется фигурами 1 и 2.

На фиг. 1 - данные ВЭЖХ суммы таннинов для получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол», полученного из иван-чая узколистого (Chamaenerium angustifolium (L.) Scop) по предлагаемому способу с использованием солей цинка.

На фиг. 2 - данные ВЭЖХ суммы таннинов для получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол», полученной известным способом из иван-чая узколистого (Chamaenerion angustifolium (L.) Scop) с использованием солей свинца.

По данным ВЭЖХ исследования образцов, полученных по заявляемому способу и заведомых образцов субстанции «Ханерола», полученных ранее, образцы идентичны по своему составу. ВЭЖХ (фиг. 1 и 2) проводили на спектрографе Agilent Quaternary LC (US) с автомультисемплером, на колонке Eclipse plus 4,5×250 мм С18, зернением 5 мкм, детектирование при длине волны 265±2 нм с использованием фотодиодного детектора G7121B. Образец растворяли в элюенте, концентрация вводимого раствора 1 мг/мл, объем вводимого раствора 5 мкл. Для работы использовали ацетонитрил UN1648 квалификации ChromAR HPLC (Польша), деионизированную воду, очищенную в системе Milipore 0,2 mkm. Хроматографирование проводили в изократическом режиме при термостатировании 40°С, скорости элюирования 2,00 мл/мин в течение 20 мин. Элюент А:В=1:9, где А - 0,04 об. % муравьиновая кислота в ацетонитриле, В - вода.

Способ выделения суммы таннинов для получения субстанции противоопухолевого препарата «Ханерол» на основе димерного макроциклического гидролизуемого таннина из кипрея узколистного (иван-чая) (Chamaenerion angustifolium (L.) Scop), включающий: экстракцию 500 г соцветий или побегов кипрея узколистного (иван-чая) 5 л 25% водного раствора диметилформамида, фильтрацию, концентрирование полученного раствора до 1200-1300 мл, осаждение цинковых солей танниновой фракции в две стадии: путем прибавления 40 мл 20% раствора ацетата цинка при температуре 45°С, выпавший осадок центрифугируют и отделяют, к раствору снова при 45°С прибавляют для соцветий 140 мл, а для побегов 150 мл 20%-ного раствора ацетата цинка при перемешивании, охлаждают до комнатной температуры, выпавший осадок центрифугируют, промывают водой, спиртом, водой, разлагают катионитом КУ-2-8-(Н+), обессоливают раствор на колонке с катионитом КУ-2-8-(Н+), упаривают и высушивают лиофильно.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ получения пищевого концентрата полифенолов винограда, содержащего стильбены, предусматривает смешивание виноградного сырья, в качестве которого используется измельченная виноградная лоза от весенней обрезки виноградников, с этиловым спиртом, настаивание экстракционной смеси в герметических условиях, отделение экстракта от твердой фазы и его концентрирование отгонкой спирта под вакуумом, введение в концентрат глюкозо-фруктозного инвертированного сахарного сиропа, при этом концентрат после добавления сахарного сиропа повторно купажируют со спиртом этиловым ректификованным при соотношении 1:1 по массе, полученный купаж повторно концентрируют удалением спирта под вакуумом.

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ получения пищевого концентрата полифенолов винограда, содержащего стильбены, предусматривает смешивание виноградного сырья, в качестве которого используется измельченная виноградная лоза от весенней обрезки виноградников, с этиловым спиртом, настаивание экстракционной смеси в герметических условиях, отделение экстракта от твердой фазы и его концентрирование отгонкой спирта под вакуумом, введение в концентрат глюкозо-фруктозного инвертированного сахарного сиропа, при этом концентрат после добавления сахарного сиропа повторно купажируют со спиртом этиловым ректификованным при соотношении 1:1 по массе, полученный купаж повторно концентрируют удалением спирта под вакуумом.

Группа изобретений относится к стоматологии, а именно к композиции, обладающей антибактериальной и противовоспалительной активностью, для лечения и/или профилактики заболеваний полости рта. Композиция, обладающая антибактериальной и противовоспалительной активностью, для лечения и/или профилактики заболеваний полости рта, содержащая эффективное для лечения и/или профилактики количество водного и липофильного СО2 экстрактов коры осины, в соотношении 3:1-30:1 по массе, и по меньшей мере одно или несколько вспомогательных веществ.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к ингибитору репликации коронавируса SARS-CoV-2, вызывающего тяжелый острый респираторный синдром COVID-19. Применение природного меланина из базидального гриба Inonotus obliquus, полученного щелочным гидролизом Inonotus obliquus, осаждением кислотой, растворением осадка в аммиачной воде и сушкой конечного продукта при температуре не выше 30-40°С, в качестве ингибитора репликации коронавируса SARS, водный раствор которого в диапазоне 6,218-8,488 мкг/мл проявляет 50%-ную противовирусную дозозависимую активность против SARS-CoV-2 в тестах на клеточной культуре Vero.
Изобретение относится к области медицины, а именно к области травматологии, и раскрывает способ изготовления костнопластического материала. Способ обеспечивает глубокую и безопасную степень очистки костного матрикса, надежное сохранение структуры и остеокондуктивности, а также обеспечивает высокую биосовместимость и высокую степень снижения антигенности изготовленного костнопластического материала.

Изобретение относится к устройству обработки жидкости, к аппарату для перегонки, к способам обработки жидкостей и перегонки и к продуктам, получаемым указанными способами обработки жидкостей и перегонки. Перегонный аппарат содержит устройство для обработки жидкостей и испаритель, выполненный с возможностью подачи пара к впуску для пара.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению водного экстракта черники обыкновенной в качестве средства с церебропротекторным действием при психоэмоциональных нарушениях и снижении качества высшей нервной деятельности. Применение водного экстракта черники обыкновенной Vaccinium myrtillus L., полученного обработкой измельченных до 1-3 мм побегов черники, заготовленных после сбора ягод, водой при соотношении сырья к экстрагенту 1:10 на кипящей водяной бане в течение 30 мин с последующим охлаждением до комнатной температуры, фильтрованием и удалением растворителя в вакууме досуха, повторением процесса еще дважды, используя каждый раз новую порцию экстрагента, при этом экстракт в качестве активных веществ содержит 7,6% гидролизуемых таннидов, 5,5% полисахаридов и 2,0% макро- и микроэлементов, в качестве средства с церебропротекторным действием при психоэмоциональных нарушениях и снижении качества высшей нервной деятельности.

Изобретение относится к массообменным аппаратам, которые могут использоваться в химической, фармацевтической, пищевой и других отраслях промышленности для проведения процессов экстракции и концентрирования в системе «твердое тело-жидкость» посредством использования экстрагента, интенсивного механического перемешивания и растирания компонент дисперсной твердой фазы и экстрагента до образования тонкого слоя с одновременной фильтрацией в месте перемешивания.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению экстракта базидального гриба Inonotus obliquus для ингибирования репликации коронавируса SARS-CoV-2. Применение экстракта базидального гриба Inonotus obliquus, полученного водной экстракцией при температуре 50-95°С в течение от 1,0 до 72 часов, для ингибирования репликации коронавируса SARS-CoV-2, который при концентрации в диапазоне 0,75-11,6 мкг/мл проявляет 50%-ную противовирусную дозазависимую активность против SARS-CoV-2 в тестах на клеточных культурах Vero Е6 и Vero.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу извлечения биологически активных фенольных кислот. Способ извлечения биологически активных фенольных кислот - розмариновой, литоспермовой и сальвианоловой из растительного сырья в виде линделофии столбиковой Lindelofia stylosa, включает предварительную сушку и измельчение стеблей и листьев Lindelofia stylosa, приготовление эвтектической смеси хлорида холина и малоновой кислоты, выдерживание смеси до образования прозрачной гомогенной жидкости с последующим добавлением воды до образования экстрагента, смешивание подготовленного растительного сырья с экстрагентом и экстракцию фенольных кислот при нагревании и ультразвуковом воздействии с получением экстракта фенольных кислот - розмариновой, литоспермовой и сальвианоловой при определенных условиях.

Настоящее изобретение относится к новым соединениям, которые являются ингибиторами рецепторной тирозинкиназы (РТК) семейства и Met и имеющим общую формулу I, где X1 независимо в каждом случае выбран из СН и N; X2 независимо в каждом случае выбран из СН и N; Y1 независимо в каждом случае выбран из СН2, СН(СН3)СН2, С(СН3)2, С(СН3)2СН2 и СН2СН2; n независимо в каждом случае выбрано из 0 и 1; R1 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из С1-С6 алкила и С1-С3 галогеналкила; R2 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из С1-С6 алкила и С1-С3 галогеналкила; R3 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, С1-С3 алкила и NHCH(CH3)CH3; R4 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, -СН2ОН и -CF3; R5 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из С1-С6 алкила, С1-С6 алкила, замещенного С3-С6 циклоалкилом, оксетанилом, азетидинилом или O-(С1-С6 алкилом), С1-С3 галогеналкила, N,N-диметилэтанамино, N,N-диметилпропан-1-амино; R6 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода и СН3; Z1 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, С1-С6 алкила, C(O)R7, C(O)NHR7, C(O)OR7, CN, N(R7)2, OR7, OCH2F, OCHF2, OCF3 и любой структуры из группы А (см.
Наверх