Pd-l1 специфические антитела
Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфически связываются с лигандом 1 рецептора программируемой клеточной смерти (PD-L1) человека. Также раскрыты экспрессирующий вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует антитело или его антигенсвязывающий фрагмент; композиция, набор, гибридный белок, содержащие указанное антитело. Раскрыты способ лечения с помощью указанного антитела и применение указанного антитела при изготовлении лекарственного средства для лечения или профилактики опосредованного hPD-L1 заболевания. Изобретение обладает способностью эффективно лечить заболевания, ассоциированные с лигандом 1 рецептора программируемой клеточной смерти (PD-L1) человека. 12 н. и 34 з.п. ф-лы, 37 ил., 22 табл., 32 пр.
Область изобретения
Описаны антитела и способы использования антител. В частности, описаны антитела, которые специфически связывают антиген PD-L1 человека, и их использование при лечении различных заболеваний.
Вступление
Иммуноцитокины (гибридные белки антитело-цитокин) впервые были описаны в литературе в начале 1990-х годов и представляли собой продукты слияния цельных антител с цитокинами, такими как лимфотоксин (ФНО-α) или интерлейкин 2 (IL-2). Последующие исследования на моделях экспрессирующих GD2 опухолей у мышей показали, что антитело ch14.18 и иммуноцитокин ch14.18-IL2 оба обладают противоопухолевой активностью, но иммуноцитокин является гораздо более сильнодействующим, чем антитело, даже в сочетании со свободным IL-2 (см. Sabzevari H et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, 91:9626-30; Pancook JD, et al., Cancer Immunol. Immunother., 1996, 42:88-92; Becker JC, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93:2702-7). Кроме того, у иммунокомпетентных мышей, получавших иммуноцитокин, но не антитело плюс IL-2, вырабатывался адаптивный иммунный ответ, зависимый от CD8* Т-клеток, который предотвращал последующую стимуляцию опухолью (Becker JC, et al., J. Exp. Med., 1996, 183:2361-6; Becker JC, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93:7826-31). Таким образом, нацеливание IL-2 на микроокружение опухоли индуцирует эффект противоопухолевой вакцины, что невозможно в случае антитела, будь то отдельно взятого либо вместе с свободным цитокином. Родственный гуманизированный иммуноцитокин, hu 14.18-IL2, обеспечил клиническое доказательство концепции при рецидивирующей нейробластоме без массивных поражений в качестве монотерапии, где он вызвал значительное количество полных ремиссий у пациентов без других вариантов лечения (см. Shusterman et al., Journal of Clinical Oncology, 2010, 28 (33), 4969-4975). В ряде публикаций описывается способность этой молекулы активировать несколько компонентов иммунной системы для уничтожения опухолевых клеток (в частности, NK-клеток и CD8+ Т-клеток), и создавать Т-клеточную память для противодействия последующей стимуляции опухолью (Yamane et и др. 2009; Expert Opi, Investig. Drugs, 18(7): 991-1000; Neal et al., 2004, Clin. Cancer Res., 1010, 4839-4847).
Поскольку иммуноцитокины на основе IL-2 могут иметь значительные побочные эффекты, в последнее время усилия были направлены на снижение токсичности при сохранении эффективности. Одним из примеров является селектикин (Selectikine, EMD 521873), имеющий замену аспарагиновой кислоты на треонин в положении 20 IL-2, являющимся ключевым остатком для связывания IL-2Rβ (Gillies et al., Clinical Cancer Research, 2011, 17 (11), 3673-3685). Было показано, что селектикин, который связывает некротическую ткань, обладает хорошей противоопухолевой активностью, несмотря на его селективность к высокоаффинному IL-2R по сравнению с промежуточным IL-2R, и хорошей переносимостью в исследованиях фазы I (Laurent et al., Journal of Translational Medicine, 2013, 11 (1), 5. http://doi.org/10.1186/1479-5876-11-5)
WO 02012/178137 (Gillies) и соответствующая журнальная статья (Gilles, Protein Engineering, Design and Selection, 2013, 26 (10), 561-569) описывают продукты слияния иммуноцитокинов легких цепей с нацеленными на опухоль антителами, и модуляцию активности IL-2 посредством укорачивания N-концевой части цитокина, что снижает передачу сигналов через IL-2R. Было показано, что гибридные белки IL-2, специфически нацеленные на IL-2R, обладают повышенной токсичностью по сравнению с диким типом (Vasquez-Lombardi et al. Nat Comm, 2017, DOI: 10.1038 / ncomms15373), что поддерживает точку зрения, в соответствии с которой уменьшение связывания IL-2R может быть полезным в отношении побочных эффектов.
Адаптивный иммунный ответ включает активацию, селекцию и клональную пролиферацию двух основных классов лимфоцитов, называемых Т-клетками и В-кпетками. После встречи с антигеном Т-клетки пролиферируют и дифференцируются в антигенспецифические эффекторные клетки, тогда как В-клетки пролиферируют и дифференцируются в антителосекретирующие клетки. Активация Т-клеток представляет собой многоступенчатый процесс, требующий нескольких сигнальных явлений между Т-клеткой и антигенпредставляющей клеткой (АПК). Для активации Т-клеток в покоящуюся Т-клетку должны быть доставлены два типа сигналов. Первый тип опосредуется антигенспецифическим Т-клеточным рецептором (TcR) и придает специфичность иммунному ответу.
Второй сигнал, являющийся сигналом костимуляторного типа, регулирует величину ответа и доставляется через вспомогательные рецепторы Т-клетки.
Первичный костимуляторный сигнал доставляется через активирующий рецептор CD28 после связывания с его лигандами В7-1 или В7-2. Напротив, связывание ингибирующего рецептора CTLA-4 с теми же лигандами В7-1 или В7-2 приводит к ослаблению ответа Т-клеток. Таким образом, сигналы CTLA-4 антагонизируют костимуляцию, опосредованную CD28. При высоких концентрациях антигена костимуляция CD28 перевешивает ингибирующий эффект CTLA-4. Временное регулирование экспрессии CD28 и CTLA-4 поддерживает баланс между активирующими и ингибирующими сигналами и обеспечивает развитие эффективного иммунного ответа, одновременно защищая от развития аутоиммунитета.
Рецептор программируемой смерти-1 (PD-1) представляет собой трансмембранный рецептор 50-55 кДа типа I, который является членом семейства CD28. PD-1 участвует в регуляции Т-клеточной активации и экспрессируется на Т-клетках, В-клетках и миелоидных клетках. Были идентифицированы два лиганда для PD-1 - лиганд 1 PD (PD-L1) и лиганд 2 (PD-L2), имеющие костимулирующие свойства.
Лиганд 1 рецептора программируемой клеточной смерти (PD-L1), также известный как кластер дифференцировки (CD274) или гомолог 1 В7 (В7-Н1), является членом семейства В7, который модулирует активацию или ингибирование рецептора PD-1. Открытая рамка считывания PD-L1 кодирует предполагаемый трансмембранный белок 1-го типа из 290 аминокислот, который включает два внеклеточных домена Ig (N-концевой V-подобный домен и С-подобный домен Ig), гидрофобный трансмембранный домен и цитоплазматический хвост из 30 аминокислот. Внутриклеточный (цитоплазматический) домен из 30 аминокислот не содержит явных сигнальных мотивов, но имеет потенциальный сайт фосфорилирования протеинкиназы С.
Полная аминокислотная последовательность для PD-L1 приведена в NCBI Reference Sequence: NP_054862.1 (SEQ ID NO: 1), которая ссылается на многие журнальные статьи, включая, например, Dong, H., et al. (1999), "PD-L1, a third member of the В7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion," Nat. Med. 5 (12), 1365-1369. Ген PD-L1 сохраняется у шимпанзе, макаки-резус, собаки, коровы, мыши, крысы, курицы и полосатого данио. Мышиная форма PD-L1 имеет 69% аминокислотной идентичности с человеческой формой PD-L1, и также сохраняет консервативную структуру.
У людей PD-L1 экспрессируется на ряде типов иммунных клеток, включая активированные и анергические/истощенные Т-клетки, на наивных и активированных В-клетках, а также на миелоидных дендритных клетках (DC), моноцитах и тучных клетках. Он также экспрессируется на неиммунных клетках, включая островки поджелудочной железы, купферовые клетки печени, сосудистый эндотелий и выбранные эпителиальные ткани, например, эпителии дыхательных путей и эпителии почечных канальцов, где его экспрессия усиливается во время воспалительных эпизодов. Экспрессия PD-L1 также детектируется на повышенных уровнях на ряде опухолей, включая, без ограничений, рак молочной железы (включая, без ограничений, тройной отрицательный рак молочной железы и воспалительный рак молочной железы), яичников, шейки матки, толстой кишки, колоректальный, легкого, включая немелкоклеточный рак легкого, почек, в том числе карциному почек, желудка, пищевода, мочевого пузыря, гепатоцеллюлярный рак, плоскоклеточный рак головы и шеи (SCCHN) и рак поджелудочной железы, меланому и увеальную меланому.
Считается, что передача сигналов PD-1/PD-L1 служит критической нерезервированной функцией иммунной системы через отрицательную регуляцию ответов Т-клеток. Эта регуляция участвует в развитии Т-клеток в тимусе, в регуляции хронических воспалительных реакций и в обеспечении как периферической толерантности, так и иммунных привилегий. По-видимому, повышенная экспрессия PD-L1 может позволять раковым заболеваниям уклоняться от иммунной системы хозяина, и для многих раковых опухолей экспрессия PD-L1 ассоциирована с пониженной выживаемостью и неблагоприятным прогнозом. Терапевтические моноклональные антитела, способные блокировать путь PD-1/PD-L1, могут усилить противоопухолевые иммунные ответы у пациентов с раком. Опубликованные клинические данные позволяют предположить наличие корреляции между клиническими ответами и опухолевой мембранной экспрессией PD-L1 (Brahmer et al., Journal of Clinical Oncology, 2010, Topalian et al., NEJM, 2012) и более сильной корреляции между отсутствием клинических ответов и отсутствием белка PD-L1, локализованного на мембране (Brahmer et al., Journal of Clinical Oncology, 2010, Topalian et al., NEJM, 2012). Таким образом, экспрессия PD-L1 в опухолях или опухолепроникающих лейкоцитах (Herbst RS, et al., «Predictive correlates of response to the анти-PD-L1 antibody MPDL3280A in cancer patients», Nature, 2014, 27 Nov 515(7528)):563-7, doi: 10.1038/nature14011) является кандидатом молекулярного маркера для использования при отборе пациентов для иммунотерапии, например, иммунотерапии с использованием антител против PD-L1. Направленный отбор (enrichment) пациентов на основе поверхностной экспрессии PD-L1 может значительно улучшить клинический успех лечения препаратами, нацеленными на путь PD-1/PD-L1. Имеются также данные о сохраняющемся иммунном ответе, таком как опухолепроникающие CD8+ Т-клетки, или наличие характерных признаков активации цитокинов, таких как IFNγ ти
Дополнительные данные об экспрессии PD-L1 и корреляции с болезнью будут получены из многочисленных продолжающихся клинических испытаний. Атезолизумаб (Atezolizumab) является новейшим средством, и последние данные испытаний фазы II демонстрируют терапевтический эффект при метастатической уротелиальной карциноме и НМКРЛ, особенно у пациентов с PD-L1+ иммунными клетками в микроокружении опухоли (см. Fehrenbacher et al., 2016, The Lancet, http://doi.org/10.1016/S0140-6736 (16) 00587-0; Rosenberg et al., 2016, The Lancet, http://doi.org/10.1016/80140-6736(16)00561-4). Недавние результаты исследования III фазы на 1225 пациентах с НМКРЛ показали улучшенную выживаемость пациентов, принимавших атезолизумаб, по сравнению с химиотерапией, независимо от экспрессии PD-L1 опухолью (Rittmeyer et al., 2017, The Lancet, 389 (10066), 255-265).
Краткое описание сущности изобретения
Антитела
В данном документе раскрыты антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфически связываются с PD-L1. В одном варианте реализации, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с поверхностно экспрессированным PD-L1.
В первой конфигурации предусматривается антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с hPD-L1, представленны SEQ ID NO: 1, и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который включает CDRH3, содержащий мотив X1GSGX2YGX3X4FD, где X1, X2 и Х3 независимо представляют собой любую аминокислоту, а Х4 присутствует или отсутствует, и в случае присутствия может означать любую аминокислоту.
Во второй конфигурации предусматривается антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05, где антитело или фрагмент включают домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
В третьей конфигурации предусматривается антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 1D05.
В четвертой конфигурации предусматривается антитело или его фрагмент, который конкурирует за связывание с hPD-L1 с антителом 1D05.
В пятой конфигурации предусматривается биспецифическое антитело или гибридный белок, содержащие антитело или его фрагмент, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции.
В шестой конфигурации предусматривается антитело или фрагмент, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, для использования при лечении или профилактике опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния.
В седьмой конфигурации предусматривается использование антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, при изготовлении лекарственного средства для введения человеку с целью лечения или профилактики опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния человека.
В восьмой конфигурации предусматривается способ лечения или профилактики опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния у человека, включающий введение указанному человеку терапевтически эффективного количества антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, в котором, тем самым, проводится лечение или профилактика опосредуемого hPD-L1 заболевания или состояния.
В девятой конфигурации предусматривается фармацевтическая композиция, содержащая антитело или фрагмент, определенные в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, и фармацевтически приемлемом эксципиенте, разбавителе или носителе.
В десятой конфигурации предусматривается набор, включающий фармацевтическую композицию, содержащую антитело или фрагмент, определенные в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, и фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель.
В одиннадцатой конфигурации предусматривается способ модуляции взаимодействия PD-1/PD-L1 у пациента, включающий введение эффективного количества антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, указанному пациенту.
В двенадцатой конфигурации предусматривается способ ингибирования активности PD-L1 у пациента, включающий введение эффективного количества антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, указанному пациенту.
В тринадцатой конфигурации предусматривается способ лечения пролиферативного заболевания у животного (например, человека), включающий введение эффективного количества антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, указанному пациенту.
В четырнадцатой конфигурации предусматривается способ детектирования экспрессии PD-L1 в образце, включающий введение в контакт образца с антителом или фрагментом, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции.
В пятнадцатой конфигурации предусматривается способ, включающий введение в контакт биологического образца с антителом или фрагментом, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, для образования комплекса с PD-L1, присутствующим в образце, и измерения присутствия, отсутствия или уровня комплекса в биологическом образце.
В шестнадцатой конфигурации предусматривается способ детектирования экспрессии PD-L1 в образце, включающий введение в контакт образца с антителом или фрагментом, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции.
В семнадцатой конфигурации предусматривается способ, включающий введение в контакт биологического образца с антителом или фрагментом, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции, для образования комплекса с PD-L1, присутствующим в образце, и измерения присутствия, отсутствия или уровня комплекса в биологическом образце.
В восемнадцатой конфигурации предусматривается способ идентификации партнеров по связыванию для PD-L1, который включает иммунопреципитацию интактного белкового комплекса, содержащего PD-L1, с использованием антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции.
В девятнадцатой конфигурации предусматривается способ диагностики у человека заболевания, связанного с измененной экспрессией PD-L1, включающий стадии введения в контакт биологического образца человека с антителом, по результатам определения в другой конфигурации, варианте реализации или концепции, для образования комплекса между антителом и PD-L1, присутствующим в образце; и определения количества комплекса.
В двадцатой конфигурации предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая CDRH3 антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции.
В двадцать первой конфигурации предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая домен VH и/или домен VL антитела или фрагмента, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или концепции.
В двадцать второй конфигурации предусматривается вектор, содержащий нуклеиновую кислоту в соответствии с любой другой конфигурацией, вариантом реализации или концепцией; где вектор, необязательно, представляет собой вектор СНО или HEK293.
В двадцать третьей конфигурации предусматривается хозяин, содержащий нуклеиновую кислоту в соответствии с любой другой конфигурацией, вариантом реализации или концепцией, или вектор в соответствии с любой другой конфигурацией, вариантом реализации или концепцией.
Иммуноцитокины
В первой конфигурации предусматривается иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, где тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CJ;
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с hPD-L1, представленным SEQ ID No: 1, и конкурирует за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05; и
иммуноцитокин содержит домен VH, который содержит CDRH3, содержащий мотив X1GSGX2YGX3X4FD, где X1, X2 и Х3 независимо обозначают любую аминокислоту, и Х4 присутствует или отсутствует и, в случае его присутствия, может обозначать любую аминокислоту.
Во второй конфигурации предусматривается иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, где тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
где домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с hPD-L1 и конкурирует за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05, причем антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
В третьей конфигурации предусматривается иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, где тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с hPD-L1; и
причем домен VH содержит CDRH3, который состоит из 12-20 аминокислот и получен путем рекомбинации VH генного сегмента человека, D генного сегмента человека и JH генного сегмента человека, причем JH генный сегмент человека представляет собой IGHJ5 (например, IGHJ5*02).
В четвертой конфигурации предусматривается иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, где тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 1D05.
В пятой конфигурации предусматривается иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, где тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
а) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который конкурирует за связывание с hPD-L1 с антителом 1D05.
В шестой конфигурации предусматривается иммуноцитокин, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте, для использования при лечении или профилактике опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния.
В седьмой конфигурации предусматривается использование иммуноцитокина, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте, при изготовлении лекарственного средства для введения человеку с целью лечения или профилактики опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния у человека.
В восьмой конфигурации предусматривается способ лечения или профилактики опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния у человека, включающий введение указанному человеку терапевтически эффективного количества иммуноцитокина, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте, причем, тем самым, проводится лечение или профилактика опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния.
В девятой конфигурации предусматривается фармацевтическая композиция, содержащая иммуноцитокин, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте, и фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель.
В десятой конфигурации предусматривается набор, включающий фармацевтическую композицию, содержащую иммуноцитокин, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте, и фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель.
В одиннадцатой конфигурации предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь и/или легкую цепь иммуноцитокина, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте.
В двенадцатой конфигурации предусматривается вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует тяжелую цепь и/или легкую цепь иммуноцитокина, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте.
В тринадцатой конфигурации предусматривается хозяин, содержащий нуклеиновую кислоту в соответствии с любой другой конфигурацией, вариантом реализации или аспектом, или вектора, по результатам определения в любой другой конфигурации, варианте реализации или аспекте.
Биспецифические анти-ICOS антитела
В первой конфигурации предусматривается мультиспецифическое антитело (например, биспецифическое антитело или антитело с двойным связыванием), которое связывается с (и, необязательно, имеет специфичность к) ICOS (индуцируемый Т-клеточный ко-стимулятор) (например, человеческому ICOS) и другому целевому антигену.
Во второй конфигурации предусматривается композиция, содержащая мультиспецифическое, биспецифическое антитело или антитело с двойным связыванием, как описано в данном документе, и фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель.
В третьей конфигурации предусматривается мультиспецифическое, биспецифическое антитело или антитело с двойным связыванием, как описано в данном документе, для использования при лечении или профилактике заболевания или состояния, выбранного из неврологического заболевания, неопластического или не связанного с новообразованиями заболевания, хронических вирусных инфекций и злокачественных опухолей; таких как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома, вирусно индуцируемые раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки), саркомы мягких тканей, гематологические злокачественные опухоли, такие как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома и диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (например, меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи и мезотелиома или, например, вирусно-индуцируемые раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки) и саркомы мягких тканей).
В четвертой конфигурации предусматривается использование мультиспецифического, биспецифического антитела или антитела с двойным связыванием, как описано в данном документе, при изготовлении лекарственного средства для введения человеку с целью лечения или профилактики заболевания или состояния у человека, выбранного из неврологического заболевания, неопластического или не связанного с новообразованиями заболевания, хронических вирусных инфекций и злокачественных опухолей, таких как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома, вирусно индуцируемые раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки), саркомы мягких тканей, гематологические злокачественные опухоли, такие как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома и диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (например, меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскокпеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи и мезотелиома или, например, вирусно-индуцированные раковые заболевания (таких как рак шейки матки и рак носоглотки) и саркомы мягких тканей).
В пятой конфигурации предусматривается способ лечения или профилактики заболевания или состояния, выбранного из неврологического заболевания, неопластического или не связанного с новообразованиями заболевания, хронических вирусных инфекций и злокачественных опухолей, таких как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскокпеточный и плоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома, вирусно-индуцированные раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки), саркомы мягких тканей, гематологические злокачественные опухоли, такие как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома и диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (например, меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи и мезотелиома, или, например, вирусно индуцируемые раки (например, рак шейки матки и рак носоглотки) и саркомы мягких тканей) у человека, включающий введение указанному человеку терапевтически эффективного количества мультиспецифического, биспецифического антитела или антитела с двойным связыванием, как описано в данном документе, причем таким образом проводится лечение или профилактика заболевания или состояния.
В шестой конфигурации предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь и/или легкую цепь мультиспецифического антитела, как описано в данном документе.
В седьмой конфигурации предусматривается вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует тяжелую цепь и/или легкую цепь мультиспецифического антитела, как описано в данном документе.
Описание Фигур
Фиг. 1: Анализ выбранных антител в реакции смешанной культуры лимфоцитов дендритных клеток-Т-клеток. Моноциты культивировали с GM-CSF (фактор, стимулирующий образование колоний гранулоцитов и макрофагов) и IL-4 в течение семи дней перед добавлением аллогенных очищенных CD3+ Т-клеток и титрованных антител. Супернатанты брали на 5-й день для анализа продуцирования IFNγ. Приведены данные для одного эксперимента. Следует отметить, что для 84G09 имеется по одной точке данных на концентрацию, поскольку одна репликация не удалась.
Фиг. 2: ИФА с прямой нейтрализацией PD-L1 с рецептором PD-1. Профили нейтрализации 1D05 и 84G09 по сравнению с калибровочным (benchmark) анти-PD-L1 антителом и изотипическим контролем. Данные представляют три независимых эксперимента
Фиг. 3: Анализ методом FACS нейтрализации CHO-S с PD-L1 человека с помощью рецептора PD-1. Профили нейтрализации 1D05 и 84G09 по сравнению с калибровочным (benchmark) анти-PD-L1 антителом и изотипическим контролем. Данные представляют три независимых эксперимента
Фиг. 4: Анализ методом FACS нейтрализации CHO-S с PD-L1 человека с помощью рецептора CD80. Профили нейтрализации 1D05 и 84G09 по сравнению с калибровочным анти-PD-L1 антителом и изотипическим контролем. Данные представляют три независимых эксперимента
Фиг. 5: Связывание оптимизированных прототипов антитела (lead antibodies) с PD-L1, но не с PD-L2. Оптимизированные прототипы антител связываются с иммобилизованным на планшете PD-L1 (Фиг. 5а), но не с PD-L2 (Фиг. 5b). В качестве контроля использовали антитело против PD-L2. Данные выражены в единицах флуоресценции с временным разрешением при 615 нм. Данные представляют два независимых эксперимента
Фиг. 6: Оптимизированные прототипы антител индуцируют продуцирование IFNγ в реакции смешанной культуры лимфоцитов дендритных клеток-Т-клеток. Незрелые дендритные клетки совместно культивировали с аллогенными CD4+ Т-клетками в присутствии антител в течение 5 дней. Измеряли IFNγ в супернатантах методом ИФА. Данные представляют три независимых экспериментов. В1 относится к калибровочным антителам
Фиг. 7: Оптимизированные прототипы антител связываются с нативно экспрессируемым PD-L1 на дендритных клетках. Дендритные клетки были получены из моноцитарных предшественников с использованием GM-CSF и IL-4, и окрашивались оптимизированными прототипами антител (a) 1D05 и (b) 84G09 и изотипическим контролем, непосредственно помеченным AlexaFluor647. Приведены данные для одного донора крови, представляющего четырех доноров
Фиг. 8а: Анализ методом ИФА прямой нейтрализации PD-L1 рецептором PD-1. Профили нейтрализации первично отбранных антител (hits) KM121, по сравнению с калибровочным анти-PD-LI-антителом и изотипическим контролем. Данные представляют три независимых эксперимента
Фиг. 8b: Анализ методом ИФА прямой нейтрализации PD-L1 рецептором PD-1. Профили нейтрализации молекул-кандидатов оптимизированных прототипов антител КМ122 по сравнению с калибровочным анти-PD-L1 антителом. Данные для одного эксперимента
Фиг. 8с: ИФА с прямой нейтрализацией PD-L1 рецептором PD-1. Профиль нейтрализации молекулы-кандидата 416Е01 оптимизированного прототипа антитела КМ122 по сравнению с калибровочным анти-PD-LI-антителом. Данные для одного эксперимента
Фиг. 9а: Анализ методом ИФА прямой нейтрализации PD-L1 рецептором CD80. Профили нейтрализации первично отбранных антител (hits) KM121, по сравнению с калибровочным анти-PD-LI-антителом и изотипическим контролем. Данные представляют три независимых эксперимента
Фиг.9b: Анализ методом ИФА прямой нейтрализации PD-L1 рецептором CD80. Профили нейтрализации молекул-кандидатов оптимизированных прототипов антител KM122 по сравнению с калибровочным анти-PD-L1 антителом. Данные для одного эксперимента
Фиг. 9с: Анализ методом ИФА прямой нейтрализации PD-L1 рецептором CD80. Профили нейтрализации молекулы-кандидата 416Е01 оптимизированного прототипа антитела КМ122 по сравнению с калибровочным анти-PD-L1 антителом. Данные для одного эксперимента
Фиг. 10: Биспецифическое связывание, измеренное методом SPR, с PD-L1 в качестве первого антигена и TIGIT в качестве второго антигена. А) Биспецифическое 1, В) Биспецифическое 2, С) Биспецифическое 3, D) Биспецифическое 4. Подробная информация о получении каждого биспецифического конструкта приведена в Таблице 6
Фиг. 11: Биспецифическое связывание, измеренное методом SPR, с TIGIT в качестве первого антигена и PD-L1 в качестве второго антигена. А) Биспецифическое 1, В) Биспецифическое 2, С) Биспецифическое 3, D) Биспецифическое 4. Подробная информация о получении каждого биспецифического конструкта приведена в Таблице 6
Фиг. 12 (а): Способность конструктов иммуноцитокинов индуцировать пролиферацию в клетках TF-1, экспрессирующих IL-2Rαβγ, по сравнению с эквимолярными концентрациями свободного IL-2. Приведены данные для одного эксперимента, представляющего три эксперимента
Фиг. 12 (b): Способность конструктов иммуноцитокинов индуцировать пролиферацию в клетках TF-1, экспрессирующих IL-2Rβγ, по сравнению с эквимолярными концентрациями свободного IL-2. Приведены данные для одного эксперимента, представляющего четыре эксперимента
Фиг. 13 (а): Способность антитела 1D05 нейтрализовать взаимодействие между PD-1 и PD-L1 не зависит от слияния IL-2 с антителом, по результатам анализа нейтрализации методом ИФА. Приведены данные для одного эксперимента, представляющего три эксперимента
Фиг. 13 (b): Способность антитела 1D05 нейтрализовать взаимодействие между CD80 и PD-L1 не зависит от слияния IL-2 с антителом, по результатам анализа нейтрализации методом ИФА. Приведены данные для одного эксперимента, представляющего три эксперимента
Фиг. 14: Кривые роста NOD/SCID : ксенотрансплантат для in vivo исследований эффективности по группам в среднем и для индивидуальных животных
Фиг. 14 (а): показывает среднюю для группы кривую роста опухоли (n=8/9), для этого графика, если животное исключалось из исследований из-за размера опухоли, последний результат измерений использовался для оставшейся части исследования. Заштрихованный участок показывает область, в которой использовался последний результат измерений
На рисунках 14(b)-(е): показаны кривые роста опухолей индивидуальных животных для каждой группы, (б) только опухоли А375; (с) опухоли А375, введенные совместно с CD4+/8+ T-клетками в соотношении 6:1. Для панелей (d) и (е) опухолевые клетки А375 вводили совместно с CD4+/8+ Т-клетками в соотношении 6:1; (d) изотипическое контрольное антитело в дозе 10 мг/кг и (е) анти-PD-L1 -антитело 1D05 в дозе 10 мг/кг. Введение дозы проводилось через 1 час после имплантации опухоли/Т-клеток и в дни 3, 6, 8 и 10, как показано на графике пунктирными линиями
Фиг. 15: График Каплана-Мейера для in vivo исследований эффективности МСЮ/ЗСЮжсенотрансплантат, показывающий количество животных, продолжающих участвовать в исследованиях. Этот график показывает небольшое увеличение времени участия в исследованиях при совместном введении CD4+/CD8+ Т-клеток с опухолевыми клетками (Т-клетки/А375) (n=9) по сравнению с одними лишь опухолевыми клетками А375 (п=9). Лечение с использованием изотипического контроля (Т-клетки/А375-изотип (n=8)) не влияло на выживаемость по сравнению с Т-клетками, вводимыми совместно с опухолевыми клетками без антитела. Лечение с использованием 10 мг/кг анти-PD-LI-антитела 1D05 (Т-клетки/А375-анти-РО-1-1 (n=8)) значительно увеличивало время участия в исследованиях по сравнению с группой изотипического контроля. Введение дозы осуществляли через 1 час после инъекции Т-клеток/опухолевых клеток и в дни 3, 6, 8 и 10, как показано на графике пунктирными линиями
Фиг. 16: Расширение лимфоцитов в ответ на дозирование иммуноцитокинов. Образцы крови натощак брали в предварительно обработанные ЭДТА пробирки перед введением исследуемых препаратов (0) и через 2, 5 и 7 дней после их введения. Количество клеток измеряли с помощью Bayer Advia 120. Результаты выражены в виде кратности изменения количества лимфоцитов
Фиг. 17: Анализ стандартных гематологических параметров в ответ на дозирование иммуноцитокинов. Образцы крови натощак брали в предварительно обработанные ЭДТА пробирки перед введением исследуемых препаратов и через 7 дней после их введения. Анализ гемоглобина, гематокрита, количества эритроцитов и количества тромбоцитов проводили с использованием Bayer Advia 120. Результаты выражены как процент изменения параметра через 7 дней после введения дозы
Фиг. 18: Уровни цитокинов в плазме яванских макак, получивших дозу молекул иммуноцитокина. Образцы плазмы получали до введения исследуемого препарата (РТ) и через 3 дня после введения дозы (D3) и анализировали методом MSD на уровни a) TNF-α; б) ИЛ-8; с) ИЛ-6; d) IFNγ; e) G-CSF и f) IL-2. Отсутствие столбиков показывает, что уровни цитокинов были ниже предела количественной оценки метода анализа. IL-4, ИЛ-5 и ИЛ-1β не были обнаружены ни в одном из образцов в любые моменты времени и потому не были включены в графики
Фиг. 19: Уровни растворимого CD25 в плазме яванских макак, получивших дозу молекул иммуноцитокина. Образцы плазмы получали перед введением исследуемого препарата (РТ) и через 3 дня после введения дозы (D3) и анализировали с использованием коммерческого набора ИФА. * указывает, что значения уровней были выше верхнего предела количественной оценки (20000 пг/мл)
Фиг. 20: Проточный цитометрический анализ субпопуляций МКПК (мононуклеарные периферические клетки крови). Цельную кровь окрашивали для маркеров а) Т-клеток и b) В-клеток, NK-клеток, нейтрофилов и моноцитов до лизиса и фиксации эритроцитов. Данные выражены как кратность изменения числа клеток через 5 дней после введения дозы. Данные для 1D05 LC D9-7 ICK отсутствуют из-за непригодности образца
Фиг. 21: Фармакокинетический (ФК) анализ иммуноцитокинов. Сыворотку получали из образцов крови, взятых в различные моменты времени на протяжении 96 часов. На панелях а) и b) сыворотку инкубировали на планшетах, покрытых PD-L1, и иммуноцитокины детектировали с помощью детекторного биотинилированного анти-Fc человека антитела, и стрептавидина, меченого европием. На панелях с) и d) сыворотку инкубировали на планшетах, покрытых PD-L1, и иммуноцитокины детектировали с помощью биотинилированного анти-IL-2 человека антитела, и меченого европием стрептавидина. Результаты выражены в нг/мл
Фиг. 22а: Индуцирование продуцирования IFNγ в анализе совместного культивирования моноцитов-Т-клеток анти-PD-L1 антителами в формате человеческого IgG1. Каждая точка данных представляет собой среднюю кратность индукции по результатам по меньшей мере из трех независимых экспериментов ± стандартная ошибка среднего
Фиг. 22b: Индуцирование продуцирования IFNγ в анализе совместного культивирования моноцитов-Т-клеток анти-PD-L1 -антителом в формате IgG4(PE) человека. Каждая точка данных представляет собой среднюю кратность индуцирования по результатам двух независимых экспериментов ± стандартное отклонение
Фиг. 23 (а): Индукция IL-2 в анализе мышиной Т-клеточной гибридомы. Клетки LK35.2, трансфицированные человеческим PD-L1, нагружали пептидом овальбумина и совместно культивировали в течение ночи с клетками Т-клеточной гибридомы DO-11-10 в присутствии анти-PD-L1 антител или контролей, с последующим сбором супернатантов и анализом высвобождения IL-2. Каждая точка данных соответствует среднему значению высвобождения IL-2, скорректированному по фону, для трех независимых экспериментов ± стандартное отклонение
Фиг. 23 (b): Индукция IL-2 в анализе мышиной Т-клеточной гибридомы. Клетки LK35.2, трансфицированные человеческим PD-L1, нагружали пептидом овальбумина и совместно культивировали в течение ночи с клетками Т-клеточной гибридомы DO-11-10 в присутствии биспецифических молекул ICOS/PD-L1 или отдельных антител, с последующим сбором супернатантов и анализом высвобождения IL-2. Каждая точка данных соответствует среднему значению высвобождения IL-2, скорректированному по фону, для трех независимых экспериментов ± стандартное отклонение
Фиг. 24 (а): Индукция IFNγ в анализе DC-T-клеток методом MLR. Дендритные клетки, полученные из моноцитов (DC), активировали с помощью LPS E coli и совместно культивировали с аллогенными CD3+ Т-клетками в соотношении 1:1. IFNγ измеряли методом DELFIA после 5 дней совместного культивирования. Данные для одного эксперимента
Фиг.24 (b): Индукция IL-2 в анализе DC-T-клеток методом MLR. Дендритные клетки, полученные из моноцитов (DC), активировали с помощью LPS E. coli и совместно культивировали с аллогенными CD3+ Т-клетками в соотношении 1:1. IL-2 измеряли методом DELFIA после 3-х дней совместного культивирования. Данные для одного эксперимента
Фиг. 25: Титрование молекул FIT-Ig, исходных моноспецифических антител и контрольных антител в анализе связывания PD-L1/TIGIT AlphaScreen® с использованием метода 1. Антитела инкубируют с белками PD-L1 и TIGIT в течение часа перед добавлением бусин с акцептором AlphaScreen® на один час с последующим добавлением бусин с донором AlphaScreen® еще на один час с последющим детектированием флуоресценции. А) титрование молекул FIT-Ig; В) Титрование моноспецифических антител. Представленные данные относятся к одному уникальному эксперименту
Фиг. 26: титрование молекул FIT-Ig, исходных моноспецифических антител, а также контрольных антител в анализе связывания PD-L1/TIGIT AlphaScreen® с использованием метода 2. На бусины с донором и акцептором AlphaScreen® наносили в течение одного часа белки PD-L1 и TIGIT, соответственно, перед добавлением антител в течение одного часа с последующим детектированием флуоресценции. А) титрование молекул FIT-Ig; В) Титрование моноспецифических антител. Представленные данные относятся к одному уникальному эксперименту
Фиг. 27: Титрование молекул FIT-Ig и контрольного антитела в анализе рекрутмента клеток с использованием PD-L1/TIGIT методом проточной цитометрии. СНО с PD-L1 человека и HEK с TIGIT человека окрашивали CellTrace™ Far Red и CellTrace™ Violet, соответственно, и совместно культивировали в присутствии антител в течение одного часа, после чего проводили детектирование флуоресценции и идентификацию дважды положительной популяции. Представленные данные относятся к одному уникальному эксперименту
Фиг. 28: Расширение лимфоцитов в ответ на введение дозы иммуноцитокинов. Образцы крови натощак брали в пробирки, предварительно обработанные ЭДТА, перед введением исследуемых препаратов (0) и через 2, 5 и 7, 10, 14 и 23 дня после их введения. Количество клеток измеряли с помощью Bayer Advia 120. Результаты выражены в виде кратности изменения количества лимфоцитов
Фиг. 29: Уровни растворимого CD25 в плазме яванских макак, получивших дозу молекул иммуноцитокина. Образцы плазмы получали перед введением исследуемых препаратов (0) и через 3, 7 и 10 дней после введения дозы и анализировали с использованием коммерческого набора ИФА
Фиг. 30: Анализ стандартных гематологических параметров в ответ на введение доз иммуноцитокинов. Образцы крови натощак брали в пробирки, предварительно обработанные ЭДТА, перед введением исследуемых препаратов (0) и через 2, 5, 7, 10, 14 и 23 дней после их введения. Анализ А) гемоглобина, В) гематокрита, С) количества эритроцитов и D) количества тромбоцитов проводили с использованием Bayer Advia 120. Результаты выражены как кратность изменения параметра в каждый момент времени
Фиг. 31: Уровни цитокинов в плазме яванских макак, получивших дозу молекул иммуноцитокина. Образцы плазмы брали перед введением исследуемых препаратов (0) и через 1, 3, 7, 10, 14 и 23 дня после введения доз, и анализировали методом MSD для определения уровней a) TNF-α; б) IL-8; с) IL-6; d) IFNγ; e) G-CSF, f) IL-2, g) IL-4 и h) IL-5. Отсутствие столбиков показывает, что уровни цитокинов были ниже предела количественной оценки метода анализа. IL-1β не обнаруживался ни в каких образцах и потому не был включен в графики
Фиг. 32: Фармакокинетический (ФК) анализ иммуноцитокинов. Сыворотку получали из образцов крови, взятых в различные моменты времени на протяжении 96 часов. Сыворотку инкубировали на планшетах, покрытых PD-L1, и иммуноцитокины детектировали с использованием биотинилированного детекторного антитела против Fc человека, и меченого европием стрептавидина. Результаты выражены в % от пиковой концентрации
Фиг. 33: Расширение субпопуляций специфических Т-клеток молекулами ICK. Цельную кровь инкубировали с антителами для окрашивания перед лизисом эритроцитов, фиксацией и анализом методом проточной цитометрии. Результаты выражены в виде кратности изменения абсолютной численности (а) CD4+ Т-клеток и (b) CD8+ Т-клеток в каждый момент времени.
Фиг. 34: Эффекторная функция оптимизированных прототипов антител в анализе репортерных клеток. Клетки-мишени (ES2), экспрессирующие PD-L1, совместно культивировали в течение ночи с клетками Jurkat, генетически модифицированными для индуцированной NFAT экспрессии люциферазы, и FcγRIIIa, в присутствии PD-L1-антител. Каждая точка данных соответствует средней кратности индуцирования относительных световых единиц ± стандартное отклонение. Приведены данные для одного типичного эксперимента из трех независимых экспериментов
Фиг. 35: Связывание оптимизированных прототипов антитела с клеточно экспрессируемым PD-L1 яванского макака. Антитела титровали на клетках СНО, экспрессирующих PD-L1 яванского макака, и связанное антитело детектировали с помощью AlexaFluor 647 против IgG человека. Данные для одного эксперимента
Фиг. 36 (а): Анализ методом FACS нейтрализации CHO-S с PD-L1 человека рецептором PD-1. Профили нейтрализации оптимизированных прототипов антител по сравнению с калибровочным анти-PD-L1 антителом и изотипическим контролем. Данные представляют два независимых эксперимента
Фиг. 36 (b): Анализ нейтрализации методом FACS CHO-S с PD-L1 человека рецептором CD80. Профили нейтрализации оптимизированных прототипов антител по сравнению с калибровочным анти-PD-L1 антителом и изотипическим контролем. Данные представляют два независимых эксперимента
Фиг. 37: Индуцирование продуцирования IFNγ в анализе совместного культивирования моноцитов-Т-клеток анти-PD-L1 антителами в формате человеческого IgG1. Каждая точка данных представляет собой среднюю кратность индуцирования IFNγ по результатам по меньшей мере трех независимых экспериментов, ± стандартная ошибка среднего
Детальное описание
1. Определения
Если иное не определено в данном документе, научные и технические термины должны иметь значения, являющиеся общепринятыми для рядовых специалистов в данной области техники. Кроме того, если иное не требуется по контексту, термины в единственном числе должны включать множественное число, а термины во множественном числе должны включать единственное число.
Термины в единственном числе (в английском тексте - с артиклями «а», «an» и «the») включают обозначаемые объекты во множественном числе, если контекст явно не указывает иное. Аналогично, слово «или» должно включать «и», если контекст явно не указывает иное. Хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные описанным в данном документе, могут быть использованы в практике или при тестировании данного изобретения, пригодные способы и материалы описаны ниже. Аббревиатура "e.g." происходит от латинского выражения «exempli gratia» и используется в данном документе для обозначения неограничивающего примера. Таким образом, аббревиатура "e.g." является синонимом термина «например».
В описании и формуле изобретения термин «приблизительно» используется для модификации, например, количества ингредиента в композиции, концентрации, объема, температуры процесса, времени процесса, выхода, расхода, давления и подобных значений, и их диапазонов, используемых при описании вариантов реализации изобретения. Термин «приблизительно» относится к изменению численной величины, которое может иметь место, например, при типичных процедурах измерения и обработки, используемых для получения соединений, композиций, концентратов или применения композиций;
вследствие непреднамеренной ошибки в этих процедурах; вследствие различий в производстве, источниках или в чистоте исходных материалов или ингредиентов, используемых для осуществления этих методов, и из-за подобных соображений. Термин «приблизительно» также охватывает количества, которые отличаются из-за старения композиции с определенной начальной концентрацией или смесью, и количества, которые отличаются из-за смешивания или обработки композиции с определенной начальной концентрацией или смесью. В случае изменения с помощью термина «приблизительно», связанные с ним притязания включают эквиваленты этих величин.
В используемом в данном документе значении, термин «вводить» или «введение» относится к акту инъекции или физической доставки иным образом вещества, существующего вне организма (например, антитела против hPD-L1, предложенного в данном документе), пациенту, например, через слизистую оболочку, путем внутрикожной, внутривенной, внутримышечной доставки и/или любы другим способом физической доставки, описанным в данном документе или известным в данной области. При лечении заболевания или его симптома, введение вещества обычно происходит после начала проявления заболевания или его симптомов. При профилактике болезни или ее симптомов, введение вещества обычно происходит до начала проявления заболевания или его симптомов.
Термины «антитело», «иммуноглобулин» или «Ig» могут использоваться в данном документе взаимозаменяемо и означают молекулу иммуноглобулина, которая распознает и специфически связывается с мишенью, такой как белок, полипептид, пептид, углевод, полинуклеотид, липид или комбинации вышеуказанных, посредством по меньшей мере одного сайта распознавания антигена в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. В используемом в данном документе значении, термин «антитело» включает интактные поликпональные антитела, интактные моноклональные антитела, фрагменты антител (такие как фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и Fv), одноцепочечные мутанты Fv (scFv), мультиспецифические антитела такие как биспецифические антитела (включая антитела с двойным связыванием), химерные антитела, гуманизированные антитела, человеческие антитела, гибридные белки, содержащие антигенопределяющую область антитела, и любую другую модифицированную молекулу иммуноглобулина, содержащую антигенраспознающий сайт, при условии, что антитела проявляют желательную биологическую активность. Термин «антитело» также может относиться к Y-образному гликопротеину с молекулярным весом приблизительно 150 кДа, состоящему из четырех полипептидных цепей: двух легких (L) цепей и двух тяжелых (Н) цепей. Существует пять типов изотипов тяжелой цепи Ig млекопитающих, обозначаемых греческими буквами альфа (α), дельта (δ), эпсилон (ε), гамма (γ) и мю (μ). Тип тяжелой цепи определяет класс антитела, т.е. IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, соответственно. Классы γ и α дополнительно делятся на подклассы на основе различий в последовательности и функции константной области, например, IgG1, hlgG2, mlgG2A, mlgG2B, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. У млекопитающих существуют два типа легких цепей иммуноглобулина, λ и κ. «Вариабельная область» или «вариабельный домен» антитела относится к аминоконцевым доменам тяжелой или легкой цепи антитела. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи могут обозначаться «VH» и «VL», соответственно. Эти домены обычно являются наиболее вариабельными частями антитела (по сравнению с другими антителами того же класса) и содержат антигенсвязывающие сайты.
Антитела, раскрытые в данном документе, могут быть олигоклональными, поликлональными, моноклональными (включая полноразмерные моноклональные антитела), камелизированными, химерными, CDR-привитыми, мультиспецифическими, биспецифическими (включая антитела с двойным связыванием), каталитическими, химерными, гуманизированными, полностью человеческими, антиидиотипическими, включая антитела, которые могут быть мечеными в растворимой или связанной форме, а также их фрагментами, вариантами или производными, взятыми либо отдельно, либо в сочетании с другими аминокислотными последовательностями, обеспечиваемыми известными способами. Антитело может принадлежать любому виду. Антитела, раскрытые в данном документе, могут быть голыми или конъюгированными с другими молекулами, такими как токсины, радиоизотопы и т.д.
Термин «антигенсвязывающий домен», «антигенсвязывающая область», «антигенсвязывающий фрагмент» и подобные термины относятся к той части антитела, которая содержит аминокислотные остатки, взаимодействующие с антигеном, и придающие связывающему агенту его специфичность и аффинность к антигену (например, гипервариабельные участки (CDR)). Антигенсвязывающая область может быть получена от любых видов животных, таких как грызуны (например, кролик, крыса или хомяк) и люди. Предпочтительно, антигенсвязывающая область, будет иметь человеческое происхождение.
Описанные в данном документе антигенсвязывающие фрагменты могут включать одноцепочечные Fv (scFv), одноцепочечные антитела, однодоменные антитела, доменные антитела, фрагменты Fv, фрагменты Fab, фрагменты F(ab'), фрагменты F(ab')2, фрагменты антител, проявляющие желательную биологическую активность, стабилизированную дисульфидными связями вариабельную область (dsFv), димерную вариабельную область (диатело), антиидиотипические (анти-Id) антитела (включая, например, антитела против Id к антителам), внутриклеточные антитела, линейные антитела, одноцепочечные молекулы антител и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител и эпитопсвязывающих фрагментов любого из вышеуказанного. В частности, антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, могут включать молекулы иммуноглобулина и иммунологически активные фрагменты молекул иммуноглобулина, т.е. молекулы, содержащие антигенсвязывающий сайт. Гидролиз антител с ферментом папаином дает два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, известных также как фрагменты «Fab», и фрагмент «Fc», не обладающий антигенсвязывающей активностью, но способный кристаллизоваться. «Fab» при использовании в данном документе относится к фрагменту антитела, который включает один константный и один вариабельный домен каждой из тяжелой и легкой цепей. Термин «область Fc» используется в данном документе для определения С-концевого участка тяжелой цепи иммуноглобулина, включая Fc-области с нативной последовательностью и варианты Fc-областей. «Fc-фрагмент» относится к карбоксиконцевым частям обеих Н-цепей, удерживаемых вместе дисульфидными связями. Эффекторные функции антител определяются последовательностями в области Fc - области, которая также распознается Fc-рецепторами (FcR), присутствующими на определенных типах клеток. Гидролиз антител с ферментом пепсином дает фрагмент F(ab')2, в котором два плеча молекулы антитела остаются связанными и содержат два антигенсвязывающих сайта. Фрагмент F(ab')2 обладает способностью сшивать антиген.
«Fv» при использовании в данном документе относится к минимальному фрагменту антитела, которое сохраняет как антигенраспознающие, так и антигенсвязывающие сайты. Эта область состоит из димера вариабельного домена одной тяжелой и одной легкой цепи с сильной нековалентной или ковалентной связью. В такой конфигурации три CDR каждого вариабельного домена взаимодействуют, образуя антигенсвязывающий сайт на поверхности димера VH-VL. В совокупности, шесть CDR обеспечивают антигенсвязывающую специфичность антитела. Однако, даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только три CDR, специфичных по отношению к антигену) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя и с более низким сродством, чем цельный сайт связывания.
В используемом в данном документе значении, термин «моноклональное антитело» относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, то есть индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных естественных мутаций и/или посттрансляционных модификаций (например, изомеризации, амидирования) которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены против одной антигенной детерминанты или эпитопа. В отличие от них, препараты поликлональных антител обычно включают различные антитела, направленные против различных антигенных детерминант (или эпитопов). В используемом в данном документе значении, термин «моноклональное антитело» охватывает как интактные, так и полноразмерные моноклональные антитела, а также фрагменты антител (такие как Fab, Fab', F(ab')2, Fv), одноцепочечные (scFv) мутанты, гибридные белки, содержащие часть антитела и любую другую модифицированную молекулу иммуноглобулина, содержащую антигенараспознающий сайт.Кроме того, «моноклональное антитело» относится к таким антителам, полученным любым количеством способов, включая, без ограничений, гибридому, фаговую селекцию, рекомбинантную экспрессию и трансгенных животных.
Моноклональные антитела в данном документе могут включать «химерные» антитела (иммуноглобулины), в которых часть тяжелой и/или легкой цепи является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям в антителах, полученных от определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи (цепей) является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям в антителах, полученных от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антитела, а также к фрагментам таких антител, проявляющим желательную биологическую активность.
Термин «гуманизированное антитело» относится к субпопуляции химерных антител, в которых «гипервариабельная область» из нечеловеческого иммуноглобулина (донорное антитело) заменяет остатки из гипервариабельной области в иммуноглобулине человека (антитело-реципиент). В общем, гуманизированное антитело будет включать по существу все из по меньшей мере одного, и типично двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют последовательности нечеловеческого иммуноглобулина, и все или по существу все каркасные области представляют собой последовательность человеческого иммуноглобулина, хотя каркасные области могут включать одно или несколько замещений, которые улучшают характеристики антител, такие как аффинность связывания, изомеризация, иммуногенность и т.д.
Термин «биспецифическое антитело» означает антитело, которое содержит специфичность к двум молекулам-мишеням и включает, без ограничений, такие форматы, как DVD-Ig (см. DiGiammarino et al., "Design and generation of DVD-Ig™ molecules for dual-specific targeting", Meth. Mol. Biol., 2012, 889, 145-156), mAb2 (см. WO 2008/003103, описание формата mAb2 включено в данный документ посредством ссылки), FIT-Ig (см. WO 2015/103072, описание каркаса FIT-Ig включено в данный документ посредством ссылки), mAb-dAb, dock and lock, обмен Fab-плечо, SEEDbody, Triomab, LUZ-Y, Fcab, κλ-body (антитело к каппа-лямбда легким цепям иммуноглобулинов), ортогональный Fab, scDiabody-Fc (одноцепочечное диатело-Fc), диатело-Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутриклеточное антитело, BiTE, диатело, DART, TandAb, scDiabody (одноцепочечное диатело), scDiabody-СН3 (одноцепочечное диатело-СН3), Diabody-СН3 (диатело-СН3), Triple body (тройное антитело), миниантитело, минитело, минитело TriBi, scFv-СН3 KIH, scFv-CH-CL-scFv, F(ab')2-scFv, scFv-KIH, Fab-scFv-Fc, тетравалентный HCab, ImmTAC, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами (charge pairs), заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, DT-IgG, DutaMab, IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG-scFab, 2scFv-IgG, IgG-2scFv, scFv4-Ig и zybody. Обзор биспецифических форматов приведен в Spiess, С., et al., Mol. Immunol. (2015). В другом варианте реализации, биспецифическая молекула содержит антитело, слитое с другим не-Ig-форматом, например, связывающий домен Т-клеточного рецептора; домен суперсемейства иммуноглобулина; вариабельный лимфоцитарный рецептор бесчелюстных; домен фибронектина (например, аднектин (Adnectin™)); константный домен антитела (например, домен СН3, например, СН2 и/или СН3, принадлежащий Fcab™), где константный домен не является функциональным доменом CH1; scFv; (scFv)2; одноцепочечное диатело (sc-diabody); scFab; центирин и эпитопсвязывающий домен, полученный из каркаса, выбранного из CTLA-4 (Evibody™); липокалиновый домен; белок А, такой как Z-домен белка А (например, Affibody™ или SpA); А-домен (например, Avimer™ или Maxibody™); белок теплового шока (такой как эпитопсвязывающий домен, полученный из GroEI и GroES); трансферриновый домен (например, trans-body); белок с анкириновым повтором (например, DARPin™); пептидный аптамер; пектиновый домен С-типа (например, тетранектин (Tetranectin™)); человеческий у-кристаллин или убиквитин человека (аффилин); домен PDZ; токсин скорпиона; и домен Кунитц-типа ингибитора протеазы человека.
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело представляет собой mAb2. MAb2 содержит домен VH и VL интактного антитела, слитый с модифицированной константной областью, которая была генетически модифицирована для образования антигенсвязывающего сайта, известного как «Fcab». Технология, лежащая в основе формата Fcab/mAb2, более подробно описана в WO 2008/003103, и описание формата mAb2 включено в данный документ посредством ссылки.
В одном варианте реализации, «биспецифическое антитело» не включает формат FIT-Ig. В одном варианте реализации, «биспецифическое антитело» не включает формат mAb2. В одном варианте реализации, «биспецифическое антитело» не включает ни формат FIT-Ig, ни формат mAb2.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело представляет собой «антитело с двойным связыванием». В используемом в данном документе значении, термин «антитело с двойным связыванием» представляет собой биспецифическое антитело, в котором оба антигенсвязывающих домена образованы парой VH/VL и включают FIT-Ig (см. W02015/103072, включенную в данный документ посредством ссылки), mAb-dAb, dock and lock, обмен Fab-плечо, SEEDbody, Triomab, LUZ-Y, Fcab, κλ-body, ортогональный Fab, scDiabody-Fc, диатело-Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab- scFv, внутриклеточное антитело, BiTE, диатело, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, Diabody-СН3, Triple body, миниантитело, минитело, scFv-СН3 KIH, scFv-CH-CL-scFv, F(ab')2-scFv, scFv-KIH, Fab-scFv-Fc, тетравалентный HCab, ImmTAC, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, DT-IgG, DutaMab, IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG-scFab, 2scFv-IgG, IgG-2scFv и scFv4-Ig.
Термины «гипервариабельная область», «область CDR» или «CDR» относятся к областям вариабельного домена антитела, являющимся гипервариабельными в последовательности и/или образующим структурно определенные петли. Как правило, сайты связывания антигена антитела включают шесть гипервариабельных областей: три в VH (CDRH1, CDRH2, CDRH3) и три в VL (CDRL1, CDRL2, CDRL3). Эти области тяжелой и легкой цепей антитела обеспечивают антигенсвязывающую специфичность антитела. CDR (гипервариабельные участки) могут быть определены в соответствии с системой Кабата (см. Kabat, E.A. et al., 1991, "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th edit., NIH Publication no. 91-3242, U.S. Department of Health and Human Services). Для определения CDR могут использоваться другие системы, такие как (which as) система, разработанная Chothia et al. (см. Chothia, С.& Lesk, A.M., 1987, "Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins", J. Mol. Biol., 196, 901-917) и система IMGT (см. Lefranc, M.P., 1997, "Unique database numbering system for immunogenetic analysis", Immunol. Today, 18, 50). Антитело обычно содержит 3 CDR тяжелой цепи и 3 CDR легкой цепи. Термин CDR или CDRs используется в данном документе для обозначения одной или нескольких из этих областей. Специалист в данной области способен легко сравнить различные системы номенклатуры и определить, может ли конкретная последовательность быть определена как CDR.
«Человеческое антитело» представляет собой антитело, которое обладает аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности антитела, продуцируемого человеком, и/или было получено с использованием любого из способов получения человеческих антител и определенно исключает гуманизированное антитело, содержащее нечеловеческие антигенсвязывающие остатки. Термин «специфически связывается» относится к измеримым и воспроизводимым взаимодействиям, таким как связывание между мишенью и антителом, которое позволяет определить присутствие мишени в присутствии гетерогенной популяции молекул, включая биологические молекулы. Например, антитело, специфически связывающееся с мишенью (которая может быть эпитопом), представляет собой антитело, которое связывает эту мишень с большей аффинностью, авидностью, более легко и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими мишенями. В одном варианте реализации, степень связывания антитела с несвязанной мишенью составляет менее примерно 10% от связывания антитела с мишенью, при измерении, например, методом радиоиммуноанализа (RIA).
Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с антигеном hPD-L1, могут быть перекрестно-реактивными с родственными антигенами. Предпочтительно, антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с антигеном hPD-L1, не реагируют перекрестно с другими антигенами (но могут, необязательно, перекрестно реагировать с PD-L1 другого вида, например, макака-резуса или мыши). Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с антигеном hPD-L1, можно идентифицировать, например, с помощью иммуноанализов, BIAcore™ или других методов, известных специалистам в данной области. Антитело или его фрагмент специфически связываются с антигеном PD-L1, если они связываются с антигеном hPD-L1 с более высокой аффинностью, чем с любым перекрестно-реактивным антигеном, при определении с использованием экспериментальных методов, таких как радиоиммуноанализы (RIA) и твердофазовые иммуноферментные анализы (ИФА). Как правило, специфическая или селективная реакция будет по меньшей мере вдвое превышать фоновый сигнал или шум, и наиболее характерно, будет превышать фон более чем в 10 раз (например, более чем в 15 раз, более чем в 20 раз, более чем в 50 раз или более чем в 100 раз). См., например, Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York, где на стр. 332-336 приведено обсуждение специфичности антител.
Термин «алифатическая аминокислота» означает, что группы R аминокислот являются неполярными и гидрофобными. Гидрофобность возрастает с увеличением числа атомов С в углеводородной цепи. Алифатическими аминокислотами являются глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин.
Термин «ароматическая аминокислота» означает, что группы R аминокислот содержат ароматическую кольцевую систему. Ароматическими аминокислотами являются фенилаланин, тирозин и триптофан.
Термин «гидроксилсодержащая аминокислота» означает, что группы R аминокислот содержат гидроксильную группу и являются гидрофильными. Гидроксилсодержащими аминокислотами являются серин, цистеин, треонин и метионин.
Термин «основная аминокислота» означает, что группы R аминокислот содержат азот и являются основными при нейтральном рН. Основными аминокислотами являются гистидин, лизин и аргинин.
Термин «циклическая аминокислота» означает, что группы R аминокислот имеют алифатическую циклическую структуру. Единственной циклической алифатической аминокислотой является пролин.
Термин «кислотная аминокислота» означает, что группы R аминокислот являются полярными и отрицательно заряжены при физиологическом рН. Кислотными аминокислотами являются аспартат и глутамат.
Термин «амидная аминокислота» означает, что группы R аминокислот содержат амидную группу. Амидными аминокислотами являются аспарагин и глутамин.
В используемом в данном документе значении, термин «номер авторизации» или «номер разрешения на продажу» относится к номеру, присвоенному регулирующим органом после того, как данный орган определит, что конкретный медицинский продукт и/или композиция могут быть выпущены на рынок и/или в продажу на территории, находящейся под юрисдикцией органа. В используемом в данном документе значении, термин «регулирующий орган» относится к одному из агентств, ответственных за оценку, например, безопасности и эффективности медицинского продукта и/или композиции, а также за контроль продаж/сбыта таких продуктов и/или композиций на данной территории. Управление по контролю за пищевыми продуктами и лекарствами (FDA) в США и Европейское агентство по лекарственным средствам (ЕРА) в Европе являются всего лишь двумя примерами таких регулирующих органов. Другие неограничивающие примеры могут включать SDA, МРА, MHPRA, IMA, ANMAT, отдел лекарственных средств Департамента здравоохранения Гонконга, CDSCO, Medsafe и KFDA.
В используемом в данном документе значении, термин «биомаркер» относится к гену, который дифференциально экспрессируется у особ, имеющих представляющее интерес заболевание, например, ген, дифференциально экспрессирующийся у особ с раком. В одном варианте реализации, PD-L1 представляет собой биомаркер, экспрессия которого в опухолях может указывать, будет ли пациент реагировать на конкретный тип лечения, в частности, будет ли пациент отвечать на лечение, нацеленное на PD-L1, например, иммунотерапию с использованием антител против PD-L1. В одном варианте реализации, PD-L1 представляет собой биомаркер, экспрессия которого в опухолях может указывать на то, будет ли пациент реагировать на конкретный вид лечения, в частности, будет ли пациент отвечать на лечение, нацеленное на PD-1, например, иммунотерапию с использованием антител против PD-1. В другом варианте реализации, PD-L1 может быть свободным или мембранно-связанным. В другом варианте реализации, PD-L1 может быть зафиксированным или нефиксированным.
В используемом в данном документе значении, термин «буфер» относится к химическому агенту, который способен поглощать определенное количество кислоты или основания без значительного изменения рН.
В используемом в данном документе значении, термин «носитель» относится к разбавителю, адъюванту (например, адъюванту Фрейнда (полному и неполному)), эксципиенту или носителю, с которым вводится терапевтическое средство. Такие фармацевтические носители могут быть стерильными жидкостями, такие как вода и масла, в том числе минерального, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п.Вода является предпочтительным носителем, когда фармацевтическая композиция вводится внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также могут быть использованы в качестве жидких носителей, особенно для инъекционных растворов.
Термин «химиотерапевтическое средство» или «химиотерапия» относится к терапевтическому агенту, основной целью которого является уничтожение раковых клеток, как правило, путем нарушения способности опухолевых клеток к росту или размножению. Существует много разных типов химиотерапевтических средств, причем доступными являются более 50 одобренных препаратов для химиотерапии. Химиотерапевтические препараты можно классифицировать в зависимости от способа их действия. Алкилирующие препараты убивают раковые клетки, непосредственно атакуя ДНК, являющуюся генетическим материалом генов. Циклофосфамид представляет собой алкилирующий препарат. Антиметаболиты препятствуют продуцированию ДНК и препятствуют росту и размножению клеток. Примером анти метаболита является 5-фторурацил (5-FU). Противоопухолевые антибиотики производят из природных веществ, таких как почвенные грибки. Они нарушают важным функциям клетки, включая продуцирование ДНК и клеточных белков. К этой группе химиотерапевтических препаратов относятся доксорубицин и блеомицин. Алкалоиды растений препятствуют нормальному делению клеток. Винбластин и винкристин являются растительными алкалоидами, полученными из растения барвинка. Стероидные гормоны замедляют рост некоторых видов рака, зависящих от гормонов. Например, тамоксифен используется для лечения рака молочной железы, рост которого зависит от гормона эстрогена. Ингибиторы ответа на повреждения ДНК (DDR), такие как ингибиторы PARP, блокируют механизмы репарации ДНК после одно- или двухцепочечных разрывов.
Примеры химиотерапевтических средств включают адриамицин, доксорубицин, 5-фторурацил, цитозин-арабинозид (Аrа-С), циклофосфамид, тиотепа, таксотер (доцетаксел), бусульфан, цитоксин, таксол, метотрексат, цисплатин, мелфалан, винбластин, блеомицин, этопозид, ифосфамид, митомицин С, митоксантрон, винкристин (Vincreistine), винорелбин, карбоплатин, тенипозид, дауномицин, карминомицин, аминоптерин, дактиномицин, митомицины, эсперамицины (см. патент США №4675187), мелфалан и другие родственные производные азотных ипритов. Пригодные токсины и химиотерапевтические средства описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, 19 Ed. (Mack Publishing Co. 1995), а также в Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 7th Ed. (MacMillan Publishing Co. 1985). Другим примером химиотерапевтических средств является класс антитело-конъюгированных токсинов, включая, без ограничений, пирролобензодиазепины (pyrrolobenzodiazepiness), майтансаноиды, калихеамицин и т.д. Другие пригодные токсины и/или химиотерапевтические средства известны специалистам в данной области.
В используемом в данном документе значении, термин «композиция» должен охватывать продукт, содержащий указанные ингредиенты (например, антитело по изобретению), необязательно, в указанных количествах, а также любой продукт, который прямо или косвенно образуется при сочетании указанных ингредиентов, необязательно, в указанных количествах.
В используемом в данном документе значении, термин «содержащий» или «содержит» используется по отношению к антителам, фрагментам, применениям, композициям, способам и их соответствующему компоненту (компонентам), являющимся существенными для способа или композиции, но допускает возможность включения неуточненных элементов, независимо от того, являются они существенными или нет.
Термин «состоящий из» относится к антителам, фрагментам, применениям, композициям, методам и их соответствующим компонентам, как описано в данном документе, которые не содержат какого-либо элемента, не указанного в данном описании варианта реализации.
В используемом в данном документе значении, термин «состоящий по существу из» относится к элементам, необходимым для данного варианта реализации. Этот термин предусматривает возможность присутствия элементов, не оказывающих существенного влияния на основную и новую или функциональную характеристику (характеристики) этого варианта реализации.
В контексте полипептида, используемый в данном документе термин «производное» относится к полипептиду, который содержит аминокислотную последовательность полипептида hPD-L1, фрагмента полипептида hPD-L1 или антитела, специфически связывающегося с hPD-L1, которая была изменена путем введения замещений, делеций или аддиций аминокислот.В используемом в данном документе значении, термин «производное» также относится к полипептиду hPD-L1, фрагменту полипептида hPD-L1 или антителу, которое специфически связывается с полипептидом hPD-L1, которые были химически модифицированы, например, путем ковалентного присоединения к полипептиду молекулы любого типа. Например, но не в качестве ограничения, полипептид hPD-L1, фрагмент полипептида hPD-L1 или антитело hPD-L1 могут быть химически модифицированы, например, путем гликозилирования, ацетилирования, пегилирования, фосфорилирования, амидирования, дериватизации известными защитными/блокирующими группами, протеолитического расщепление, связывания с клеточным лигандом или другим белком и т.д. Производные модифицируют таким образом, чтобы они отличались от встречающегося в природе или исходного пептида или полипептидов по типу или месту присоединения молекул. Производные дополнительно включают делецию одной или нескольких химических групп, которые естественно присутствуют на пептиде или полипептиде. Производное полипептида hPD-L1, фрагмент полипептида hPD-L1 или антитело hPD-L1 могут быть химически модифицированы путем проведения химических модификаций с использованием методов, известных специалистам в данной области, включая, без ограничений, специфическое химическое расщепление, ацетилирование, формилирование (formulation), метаболический синтез туникамицина и т.д. Кроме того, производное полипептида hPD-L1, фрагмент полипептида hPD-L1 или антитело hPD-L1 могут содержать одну или несколько неклассических аминокислот. Полипептидное производное обладает функцией, аналогичной или идентичной полипептиду hPD-L1, фрагменту полипептида hPD-L1 или антителу hPD-L1, описанным в данном документе.
В используемом в данном документе значении, термин «эффекторная функция» относится к чему-то одному или нескольким из опосредованной антителами клеточной цитотоксичности (ADCC), ответов, опосредованных комплементзависимой цитотоксичностью (CDC), опосредованного Fc фагоцитоза, или антителозависимого клеточного фагоцитоза (ADCP) и рециркуляции антител через рецептор FcRn.
«Эффективное количество» относится к количеству, эффективному при дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желательного эффекта, включая терапевтический или профилактический результат.«Терапевтически эффективное количество» относится к минимальной концентрации, необходимой для достижения измеримого улучшения или профилактики конкретного расстройства. Терапевтически эффективное количество здесь может меняться в зависимости от таких факторов, как состояние болезни, возраст, пол и вес пациента, а также способность антитела вызывать желательный ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также является таким, при котором токсические или вредные эффекты антитела перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами. «Профилактически эффективное количество» относится к количеству, эффективному при дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения желательного профилактического результата. В некоторых вариантах реализации, эффективное количество антитела по изобретению составляет от примерно 0,1 мг/кг (мг антитела на кг веса пациента) до примерно 100 мг/кг. В некоторых вариантах реализации, эффективное количество предусматриваемого в них антитела составляет около 0,1 мг/кг, около 0,5 мг/кг, около 1 мг/кг, 3 мг/кг, 5 мг/кг, около 10 мг/кг, около 15 мг/кг, около 20 мг/кг, около 25 мг/кг, около 30 мг/кг, около 35 мг/кг, около 40 мг/кг, около 45 мг/кг, около 50 мг/кг, около 60 мг/кг, около 70 мг/кг, около 80 мг/кг около 90 мг/кг или около 100 мг/кг (или представляет собой диапазон в указанных пределах). В некоторых вариантах реализации, «эффективное количество», в используемом в данном документе значении, также относится к количеству антитела по изобретению, (необходимому) для достижения определенного результата (например, ингибирования связанной с DPD-L1 биологической активности клетки).
В используемом в данном документе значении, термин «эпитоп» относится к локализованной области на поверхности антигена, такого как полипептид hPD-L1 или фрагмент полипептида hPD-L1, способного связываться с одной или несколькими антигенсвязывающими областями антитела, и обладающего антигенной или иммуногенной активностью у животного, предпочтительно, млекопитающего, и наиболее предпочтительно, у человека, которая способна вызывать иммунный ответ. Эпитоп, обладающий иммуногенной активностью, представляет собой часть полипептида, которая вызывает гуморальный иммунный ответ у животного. Эпитоп, обладающий антигенной активностью, представляет собой часть полипептида, с которым специфически связывается антитело, по результатам определения любым способом, хорошо известным в данной области, например, с помощью описанных в данном документе иммуноанализов. Антигенные эпитопы необязательно, должны быть иммуногенными. Эпитопы обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи Сахаров, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Область полипептида, участвующая в образовании эпитопа, может состоять из последовательно расположенных аминокислот полипептида, или эпитоп может быть образована двумя или более несмежными областями полипептида. Эпитоп может быть или не быть трехмерным поверхностным образованием антигена. В некоторых вариантах реализации, эпитоп hPD-L1 представляет собой трехмерное поверхностное образование полипептида hPD-L1 (например, в тримерной форме полипептида hPD-L1). В других вариантах реализации, эпитоп hPD-L1 является линейной структурой полипептида hPD-L1 (например, в тримерной форме или мономерной форме полипептида hPD-L1). Антитела, представленные в данном документе, могут специфически связываться с эпитопом мономерной (денатурированной) формы hPD-L1, эпитопом тримерной (нативной) формы hPD-L1, или как с мономерной (денатурированной) формой, так и с тримерной (нативной) формой hPD-L1. В конкретных вариантах реализации, антитела, представленные в данном документе, специфически связываются с эпитопом тримерной формы hPD-L1, но не связываются специфически с мономерной формой hPD-L1.
В используемом в данном документе значении, термин «эксципиенты» относится к инертным веществам, которые обычно используются в качестве разбавителя, носителя, консервантов, связующих веществ или стабилизирующего агента для лекарственных средств и включают, без ограничений, белки (например, сывороточный альбумин и т.д.), аминокислоты (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин, аргинин, глицин, гистидин и т.д.), жирные кислоты и фосфолипиды (например, алкилсульфонаты, каприлат и т.д.), поверхностно-активные вещества (например, ДСН, полисорбат, неионное поверхностно-активное вещество и т.д.), сахариды (например, сахароза, мальтоза, трегалоза и т.д.) и полиолы (например, маннит, сорбит и т.д.). См. также Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa., которая включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
В используемом в данном документе значении, термин «фиксированный» или «фиксация» относится к химическому процессу, посредством которого биологические ткани сохраняются от разложения, для предотвращения аутолиза или гниения. В общем, фиксация включает воздействие на ткань химическими соединениями, такими как спирты или альдегиды, такие как формальдегид, для остановки протекающих биохимических реакций. В некоторых случаях фиксация может также увеличивать механическую прочность или стабильность обработанных тканей. Термин «нефиксированный» относится к ткани, которая не подвергалась химической обработке для предотвращения разложения ткани. В используемом в данном документе значении, термин «поверхностно экспрессируемый» означает, что белок внедрен в клеточную мембрану или проходит через нее, или связан с белком, который внедрен в или проходит через клеточную мембрану (т.е. мембранно-связанный белок). В одном варианте реализации, поверхностно экспрессируемый белок включает один или несколько трансмембранных доменов. В другом варианте реализации, белок связан с наружной или внутренней поверхностью клеточной мембраны опосредованно посредством ассоциации с другим белком, «прошивающим» мембрану (т.е. сам поверхностно экспрессируемый белок не проходит через клеточную мембрану). В общем, поверхностно экспрессируемые белки, которые интегрированы в клеточную мембрану или экспрессируются эндогенно внутри клетки, имеют большую склонность складываться в правильной конформации, чем рекомбинантно полученные свободные формы этого же белка.
В контексте пептида или полипептида термин «фрагмент», в используемом в данном документе значении, относится к пептиду или полипептиду, содержащему менее чем полноразмерную аминокислотную последовательность. Такой фрагмент может образовываться, например, в результате усечения на аминоконце, усечения на карбоксильном конце и/или внутренней делеции остатка (остатков) из аминокислотной последовательности. Фрагменты могут, например, образовываться в результате альтернативного сплайсинга РНК или активности протеазы in vivo. В некоторых вариантах реализации, фрагменты PD-L1 включают полипептиды, содержащие аминокислотную последовательность из по меньшей мере 5 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 10 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 15 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 20 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 25 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 40 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 50 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 60 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 70 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 80 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 90 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 100 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 125 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 150 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 175 смежных аминокислотных остатков, по меньшей мере 200 смежных аминокислотных остатков или по меньшей мере 250 смежных аминокислотных остатков аминокислотной последовательности полипептида hPD-L1 или антитела, специфически связывающегося с полипептидом hPD-L1. В конкретном варианте реализации, фрагмент полипептида hPD-L1 или антитело, которое специфически связывается с антигеном hPD-L1, сохраняет по меньшей мере 1, по меньшей мере 2 или по меньшей мере 3 функции полипептида или антитела.
Термин «свободный» относится к полипептиду, например, PD-L1 или его фрагментам и его вариантам, которые объединены с буфером, причем полипептид не связан с клеточной поверхностью или клеточной мембраной. По существу, термин «свободный» может относиться к полипептиду, который способен к поверхностной экспрессии (т.е. включает один или несколько трансмембранных доменов или ассоциациированных с мембраной доменов), но, в его текущем состоянии, не экспрессируется на поверхности клетки или не связан с белком, экспрессирующимся на поверхности клетки. Свободный полипептид может также относиться к свободному рекомбинантному или нативному или несвязанному полипептиду. В контексте фагового дисплея, выбор свободного антигена может проводиться в растворе (называется в данном документе «выбором в растворе») или в адсорбированном на поверхности состоянии, например, адсорбированным на поверхности 96-луночного планшета (называется в данном документе «выбор методом биопэннинга»).
В используемом в данном документе значении, термин «гибридный белок» относится к полипептиду, который содержит аминокислотную последовательность антитела и аминокислотную последовательность гетерологичного полипептида или белка (т.е. полипептида или белка, обычно не являющегося частью антитела (например, антитела, не направленного против hPD-L1-антигена)). Термин «слияние» при использовании по отношению к hPD-L1 или к антителу против hPD-L1 относится к соединению пептида или полипептида, или его фрагмента, варианта и/или производного, с гетерологичным пептидом или полипептидом. Предпочтительно, гибридный белок сохраняет биологическую активность hPD-L1 или анти-hPD-L1 антитела. В некоторых вариантах реализации, гибридный белок содержит домен VH, домен VL,CDR VH (один, два или три CDR VR) и/или CDR VL (один, два или три CDR VL) антитела hPD-L1, где гибридный белок специфически связывается с эпитопом hPD-L1.
Термин «тяжелая цепь» при использовании по отношению к антителу касается пяти различных типов, называемых альфа (а), дельта (б), эпсилон (е), гамма (у) и мю (р), на основе аминокислотной последовательность константного домена тяжелой цепи. Эти различные типы тяжелых цепей хорошо известны и обусловливают существование пяти классов антител, IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, соответственно, включая четыре подкласса IgG, а именно IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Предпочтительно, тяжелая цепь представляет собой тяжелую цепь человека. В человеческой популяции существуют множественные аллели константной области тяжелой цепи каждого иммуноглобулина или подкласса иммуноглобулина. Нуклеотидные и аминокислотные последовательности этих аллельных вариантов представлены в общедоступных базах данных, таких как IMGT, ENSEMBL Swiss-Prot и Uniprot. Аллельные варианты также могут быть идентифицированы в различных проектах секвенирования генома. В одном варианте реализации, антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат тяжелую цепь, кодируемую аллелем константной области IgG1, который включает, без ограничений, человеческие IGHG1*01 (SEQ ID NOs: 340, 341 и 537), IGHG1*02 (SEQ ID NOs: 340, 341 и 537), IGHG1*03 (SEQ ID NOs: 523 и 524), IGHG1*04 (SEQ ID NOs: 525 и 526) и IGHG1*05 (SEQ ID NOs: 340, 341 и 537). В одном варианте реализации, антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат белок, кодируемый аллелем константной области IgG2, который включает, без ограничений, человеческие IGHG2*01 (SEQ ID NOs: 527 и 528), IGHG2*02 (SEQ ID NOs: 529 и 530), IGHG2*03 (SEQ ID NOs: 527 и 528), IGHG2*04 (SEQ ID NOs: 531 и 532), IGHG2*05 (SEQ ID NOs: 527 и 528) и IGHG2*06 (SEQ ID NOs: 533 и 534). В одном варианте реализации, антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат белок, кодируемый аллелем константной области IgG3, который включает, без ограничений, человеческие IGHG3*01, IGHG3*02, IGHG3*03, IGHG3*04, IGHG3*05, IGHG3*06, IGHG3*07, IGHG3*08, IGHG3*09, IGHG3*10, IGHG3*11, IGHG3*12, IGHG3*13, IGHG3*14, IGHG3*15, IGHG3*16, IGHG3*17, IGHG3*18 и IGHG3*19. В одном варианте реализации, антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат белок, кодируемый аллелем константной области IgG4, который включает, без ограничений, IGHG4*01 (SEQ ID NOs: 192 и 193), IGHG4*02 (SEQ ID NOs: 194 и 195), IGHG4*03 (SEQ ID NOs: 196 & 197) и IGHG4*04 (SEQ ID NOs: 192 и 193) человека. В другом примере, тяжелая цепь представляет собой инактивированный изотип IgG, например, инактивированный IgG4. В некоторых вариантах реализации, антитела по изобретению содержат константную область гамма-4 человека. В другом варианте реализации, константная область тяжелой цепи не связывает Fc-Y-рецепторы и, например, включает мутацию Leu235Glu. В другом варианте реализации, константная область тяжелой цепи содержит мутацию Ser228Pro для повышения стабильности. В другом варианте реализации, константная область тяжелой цепи представляет собой IgG4-PE (SEQ ID NO: 199). В другом варианте реализации, антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат константную область тяжелой цепи, кодируемую аллелем константной области мышиного IgG1, который включает, без ограничений, IGHG1*01 или IGHG1*02 мыши. В одном варианте реализации, антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат константную область тяжелой цепи, кодируемую аллелем константной области мышиной IgG2, который включает, без ограничений, мышиные IGHG2A*01, IGHG2A*02, IGHG2B*01, IGHG2B*02, IGHG2C*01, IGHG2C*02 или IGHG2C*03. В одном варианте реализации, антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат белок, кодируемый аллелем константной области мышиного IgG3, который включает, без ограничений, IGHG3*01 мыши.
В используемом в данном документе значении, термин «хозяин» относится к животному, предпочтительно, млекопитающему и наиболее предпочтительно, человеку.
В используемом в данном документе значении, термин «клетка-хозяин» относится к конкретной клетке субъекта, трансфицированной молекулой нуклеиновой кислоты, и потомству или потенциальному потомству такой клетки. Потомство такой клетки не может быть идентично родительской клетке, трансфицированной молекулой нуклеиновой кислоты, из-за мутаций или воздействий окружающей среды, которые могут возникать в последующих поколениях, или интеграции молекулы нуклеиновой кислоты в геном клетки-хозяина.
В используемом в данном документе значении, термин «цитокин IL-2» относится к цитокиноподобной молекуле, имеющей активность, схожую с IL-2 дикого типа. Он может проявлять активность по высокоаффинному (αβγ) рецептору IL-2 и/или по рецептору IL-2 промежуточной аффинности (αβ). Цитокин может быть вариантом цитокина IL-2, имеющим одну или несколько делеций, замещений или вставок аминокислот.Варианты цитокинов описаны более подробно ниже.
Используемый в данном документе термин «иммуномодулирующее средство» и его варианты, включая, без ограничений, иммуномодулирующие средства, относится к агенту, который модулирует иммунную систему хозяина. В некоторых вариантах реализации, иммуномодулирующим агентом является иммунодепрессант. В некоторых других вариантах реализации, иммуномодулирующим агентом является иммуностимулирующий агент. В соответствии с изобретением, иммуномодулирующий агент, используемый в комбинированных терапиях по изобретению, не включает антитело против hPD-L1 или антигенсвязывающий фрагмент. Иммуномодулирующие агенты включают, без ограничений, малые молекулы, пептиды, полипептиды, белки, гибридные белки, антитела, неорганические молекулы, миметики и органические молекулы.
Термин «в комбинации» в контексте проведения других методов лечения относится к использованию более чем одной терапии. Использование термина «в комбинации» не ограничивает порядок проведения терапий для субъекта с заболеванием. Первую терапию можно вводить до (например, за 1 минуту, 45 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 8 недель или 12 недель), одновременно или после (например, через 1 минуту, 45 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 8 недель или 12 недель) введения второй терапии субъекту, имевшему, имеющему или являющемуся восприимчивым к опосредованному hPD-L1 заболеванию. Любая дополнительная терапия может проводиться в любом порядке с другими дополнительными терапиями. В некоторых вариантах реализации, антитела по изобретению можно вводить в комбинации с одной или несколькими терапиями (например, терапиями, которые не являются антителами по изобретению, применяемыми в настоящее время для профилактики, лечения, ведения и/или облегчения hPD-L1-опосредованного заболевания. Неограничивающие примеры методов лечения, которые можно проводить в комбинации с антителом по изобретению, включают анальгетики, анестетики, антибиотики или иммуномодулирующие средства или любое другое средство, указанное в Фармакопее США и/или в справочнике врача (Physician's Desk Reference).
В используемом в данном документе значении, термин «иммуноцитокин» относится к формату антител, слитых с молекулой цитокина. Формат антител может быть любым из описанных в данном документе, и цитокин может быть присоединен непосредственно или с помощью линкера или химической связи к N-либо к С-концу тяжелой или легкой цепи формата антитела.
В используемом в данном документе значении, термин «инъекционное устройство» относится к устройству, предназначенному для выполнения инъекций, где инъекция включает стадии установления временного канала прохождения жидкости между инъекционным устройством и тканью особы, обычно, подкожной тканью. Инъекция дополнительно включает введение некоторого количества жидкого лекарственного средства в ткань и отсоединение или удаление инъекционного устройства из ткани. В некоторых вариантах реализации, инъекционное устройство может быть внутривенным устройством или схеме для внутривенного введения (IV), которое является типом инъекционного устройства, используемым, когда целевой тканью является кровь в системе кровообращения, например, кровь в вене. Обычным, но не ограничивающим примером инъекционного устройства являются игла и шприц.
В используемом в данном документе значении, термин «инструкции» относится к отображению письменного, печатного или графического материала на первичном контейнере изделия, например, к письменному материалу, отображаемому на флаконе, содержащем фармацевтически активный агент, или к подробной информации о составе и использовании представляющего интерес продукта, включенного в набор, содержащий представляющую интерес композицию. В инструкциях излагается способ лечения, который предполагается провести или выполнить.
«Выделенным» или «очищенным» антителом или белком являются материалы, которые были идентифицированы, выделены и/или извлечены из компонента его производственной среды (например, природного или рекомбинантного). Например, антитело или белок по существу не содержат клеточного материала или других загрязняющих белков из источника клеток или ткани, из которого было получено антитело, или по существу не содержит химических прекурсоров или других химических веществ при использовании химического синтеза. Фраза «по существу не содержащий клеточного материала» включает препараты антитела, в которых антитело отделено от клеточных компонентов клеток, из которых оно было выделено или получено рекомбинантными способами. Таким образом, антитело, по существу не содержащее клеточного материала, включает препараты антитела, имеющие менее 30%, 20%, 10% или 5% (по сухой массе) гетерологичного белка (также называемого в данном документе «загрязняющий белок»)). Когда антитело получают рекомбинантными методами, оно также, предпочтительно, по существу не содержит культуральной среды, то есть культуральная среда составляет менее примерно 20%, 10% или 5% от объема белкового препарата. Когда антитело получают методом химического синтеза, оно, предпочтительно, по существу не содержит химических прекурсоров или других химических веществ, то есть оно отделено от химических прекурсоров или других химических веществ, принимающих участие в синтезе белка. Соответственно, такие препараты антитела содержат менее примерно 30%, 20%, 10%, 5% (по сухой массе) химических прекурсоров или соединений, отличных от представляющего интерес антитела. В предпочтительном варианте реализации, антитела по изобретению являются выделенными или очищеными.
Термины «нумерация по Кабату» и подобные термины являются общеизвестными в данной области техники и относятся к системе нумерации аминокислотных остатков, являющихся более вариабельными (т.е. гипервариабельными), чем другие аминокислотные остатки в вариабельных областях тяжелой цепи антитела, или его антигенсвязывающей части (Kabat et al., (1971) Ann. NY Acad. Sci., 190: 382-391 и, Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Для вариабельной области тяжелой цепи, гипервариабельная область обычно находится в диапазонах положений аминокислот 31-35 для CDR1, положений аминокислот 50-65 для CDR2 и положений аминокислот 95-102 для CDR3.
«Метка» или «меченый», в используемом в данном документе значении, относится к добавлению к полипептиду детектируемого фрагмента, например, радиоактивной метки, флуоресцентной метки, ферментативной метки, хемилюминесцентной метки или биотинильной группы или золота. Радиоизотопы или радионуклиды могут включать 3Н, 14С, 15N, 35S, 90Y, 99Тс, 115In, 125I, 131I, флуоресцентные метки могут включать родамин, лантаноидные люминофоры или FITC, и ферментативные метки могут включать пероксидазу хрена, β-галактозидазу, люциферазу, щелочную фосфатазу. Дополнительные метки включают, в качестве иллюстрации и без ограничений: ферменты, такие как глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа («G6PDH»), альфа-D-галактозидаза, глюкозооксидаза, глюкоамилаза, карбоангидраза, ацетилхолинэстераза, лизоцим, малатдегидрогеназа и пероксидаза; красители (например, цианиновые красители, например, Су5™, Су5.5™ или Су7™); дополнительные флуоресцентные метки или флуоресцирующие агенты включают флуоресцеин и его производные, флуорохром, GFP (GFP означает «зеленый флуоресцентный белок»), другие флуоресцентные белки (например, mCherry, mTomato), дансил, умбеллиферон, фикоэритрин, фикоцианин, аллофикоцианин, о-фтальдегид, и флуорескамин; флуорофоры, такие как криптаты лантанидов и хелаты, например, европия и т.д. (Perkin Elmer и Cisbio Assays); хемилюминесцентные метки или хемилюминесцентные агенты, такие как изолюминол, люминол и диоксетаны; сенсибилизаторы; коферменты; ферментные субстраты; частицы, такие как латексные или углеродные частицы; металлический золь; кристаллиты; липосомы; клетки и т.д., которые могут быть дополнительно мечены красителем, катализатором или другой детектируемой группой; такие молекулы, как биотин, дигоксигенин или 5-бромдезоксиуридин; фрагменты токсинов, такие как, например, фрагмент токсина, выбранный из группы экзотоксина Pseudomonas (РЕ или его цитотоксический фрагмент или мутант), дифтерийный токсин или его цитотоксический фрагмент или мутант, ботулинический токсин А, В, С, D, Е или F, рицин или его цитотоксический фрагмент, например, рицин А, абрин или его цитотоксический фрагмент, сапорин или его цитотоксический фрагмент, противовирусный токсин фитолакки или его цитотоксический фрагмент и бриодин 1 или его цитотоксический фрагмент.
Термин «легкая цепь» при использовании по отношению к антителу относится к легким цепям иммуноглобулина, два типа которых встречаются у млекопитающих - лямбда (λ) и каппа (к). Предпочтительно, легкая цепь представляет собой легкую цепь человека. Предпочтительно, константная область легкой цепи является константной областью человека. В человеческой популяции существуют множественные аллели константной области легкой цепи. Нуклеотидные и аминокислотные последовательности этих аллельных вариантов представлены в общедоступных базах данных, таких как IMGT, ENSEMBL, Swiss-Prot и Uniprot. В одном варианте реализации, антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат белок, кодируемый аллелем к константной области человека, который включает, без ограничений, IGKC*01 (SEQ ID NOs: 206 и 207), IGKC*02 (SEQ ID NOs: 208 и 209), IGKC*03 (SEQ ID NOs: 210 и 211), IGKC*04 (SEQ ID NOs: 212 и 213) и IGKC*05 (SEQ ID NOs: 214 и 215). В одном варианте реализации, антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат белок, кодируемый аллелем λ константной области человека, который включает, без ограничений, IGLC1 *01 (SEQ ID NOs: 216 и 217), IGLC1*02 (SEQ ID NOs: 218, 219 и 220), IGLC2*01 (SEQ ID NOs: 221, 222 и 538), IGLC2*02 (SEQ ID NOs: 224 и 225), IGLC2*03 (SEQ ID NOs: 224 и 225), IGLC3*01 (SEQ ID NOs: 226 и 227), IGLC3*02 (SEQ ID NOs: 228 и 229), IGLC3*03 (SEQ ID NOs: 230 и 231), IGLC3*04 (SEQ ID NOs: 232 и 233), IGLC6*01 (SEQ ID NOs: 234 и 235), IGLC7*01 (SEQ ID NOs: 236 и 237), IGLC7*02 (SEQ ID NOs: 236 и 237), IGLC7*03 (SEQ ID NOs: 535 и 536). В другом варианте реализации, антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат константную область легкой цепи, кодируемую аллелем константной области к мыши, который включает, без ограничений, IGKC*01, IGKC*03 или IGKC*03. В другом варианте реализации, антитела и фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат константную область легкой цепи, кодируемую аллелем константной области λ мыши, который включает, без ограничений, IGLC1*01, IGLC2*01 или IGLC3*01.
«Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» и «гомология», по отношению к последовательности пептида, полипептида или антитела, определяются как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной пептидной или полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения разрывов, при необходимости, для достижения максимальной процентной идентичности последовательностей и без учета каких-либо консервативных замещений как части идентичности последовательностей. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть осуществлено различными способами, доступными специалистам в данной области, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как прикладные программы BLAST, BLAST-2, ALIGN или MEG ALIGN™ (DNASTAR), В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 70%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 75%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 80%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 85%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 90%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 92%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 95%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 97%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 98%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет примерно 99%. В одном варианте реализации, % гомологии составляет 100%.
Термин «природный» или «нативный» при использовании в связи с биологическими материалами, такими как молекулы нуклеиновых кислот, полипептиды, клетки-хозяева и т.п., относится к материалам, существующим в природе и не подвергнутым манипуляциям со стороны человека.
В используемом в данном документе значении, термин «упаковка» относится к тому, каким образом компоненты организованы и/или удерживаются в единице, пригодной для распространения и/или использования. Упаковка может включать, например, коробки, мешки, шприцы, ампулы, флаконы, пробирки, двустворчатые упаковки типа раковины-складня, изолирующие слои (barriers) и/или контейнеры для поддержания стерильности, маркировки и т.д.
В используемом в данном документе значении, термин «фармацевтически приемлемый» означает получивший одобрение регулирующего органа федерального правительства или правительства штата или включенный в Фармакопею США, Европейскую фармакопею или другую общепризнанную фармакопею для использования у животных и, более конкретно, у людей.
В используемом в данном документе значении, термины «полинуклеотид», «нуклеотид», «нуклеиновая кислота» «молекула нуклеиновой кислоты» и другие подобные термины используются взаимозаменяемо и включают ДНК, РНК, мРНК и т.п.
Используемые здесь термины «предотвращать», «профилактический» и «профилактика» относятся к полному или частичному ингибированию развития, рецидива, начала или распространения опосредованного hPD-L1 заболевания и/или связанного с ним симптома, в результате проведения терапии или комбинации предлагаемых в данном документе терапий (например, комбинации профилактических или терапевтических средств, таких как антитело по изобретению).
Термин «растворимый» относится к полипептиду, такому как PD-L1, и его вариантам или фрагментам, не содержащим одного или нескольких трансмембранных или цитоплазматических доменов, присутствующих в нативной или мембранно-связанной форме. В одном варианте реализации, «растворимая» форма PD-L1 не содержит ни трансмембранного домена, ни цитоплазматического домена.
Термин «субъект» или «пациент» относится к любому животному, включая, без ограничений, млекопитающих. В используемом в данном документе значении, термин «млекопитающее» относится к любому позвоночному животному, которое вскармливает своих детенышей и либо рождает живых детенышей (плацентарные (eutharian or placental) млекопитающие), либо является яйцекладущим (сумчатые (metatharian) или неплацентарные млекопитающие). Примеры видов млекопитающих включают, без ограничений, людей и других приматов, включая не являющихся человеком приматов, таких как шимпанзе и другие виды человекообразных обезьян и не-человекообразных обезьян; сельскохозяйственных животных, таких как крупный рогатый скот, овец, свиней, коз и лошадей; домашних млекопитающих животных, такие как собаки и кошки; лабораторных животных, включая грызунов, таких как мыши, крысы (включая хлопковых хомяков) и морских свинок; птиц, включая домашних, диких и охотничьих птиц, таких как куры, индейки и другие куриноподобные птицы, утки, гуси и т.п.
В используемом в данном документе значении, термин «по существу все» означает по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере, примерно 75%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 85%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или примерно 100%.
В используемом в данном документе значении, термин «по существу не содержащий поверхностно-активного вещества» относится к композиции антитела, которое специфически связывается с антигеном hPD-L1, причем указанная композиция содержит менее 0,0005%, менее 0,0003% или меньше 0,0001% поверхностно-активных веществ и/или меньше 0,0005%, менее 0,0003% или меньше 0,0001% поверхностно-активных веществ.
В используемом в данном документе значении, термин «по существу не содержащий соли» относится к композиции антитела, которое специфически связывается с антигеном hPD-L1, причем указанная композиция содержит менее 0,0005%, менее 0,0003% или меньше 0,0001% неорганических солей.
В используемом в данном документе значении, термин «поверхностно-активное вещество» относится к органическим веществам, имеющим амфипатическое строение; а именно, они состоят из групп с противоположными тенденциями растворимости, как правило, маслорастворимой углеводородной цепи и водорастворимой ионной группы. Поверхностно-активные вещества можно классифицировать в зависимости от заряда поверхностно-активного фрагмента на анионные, катионные и неионные поверхностно-активные вещества. Поверхностно-активные вещества часто используются в качестве смачивающих, эмульгирующих, солюбилизирующих и диспергирующих агентов для различных фармацевтических композиций и препаратов биологических материалов.
В используемом в данном документе значении, термин «метка» относится к любому типу фрагмента, который присоединен к, например, полипептиду и/или полинуклеотиду, кодирующему hPD-L1 или антитело hPD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент. Например, полинуклеотид, кодирующий hPD-L1, антитело hPD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент, может содержать одну или несколько дополнительных кодирующих метку нуклеотидных последовательностей, которые кодируют, например, детектируемый фрагмент или фрагмент, способствующий аффинной очистке. При трансляции, метка и антитело могут представлять собой гибридный белок. Термин «детектируемый» или «детектирование» по отношению к метке относится к любой метке, которая может быть визуализирована, или к случаям, когда присутствие метки может быть определено и/или измерено иными способами (например, путем количественной оценки). Неограничивающим примером детектируемой метки является флуоресцентная метка.
В используемом в данном документе значении, термин «терапевтическое средство» относится к любому агенту, который может быть использован для лечения, ведения или улучшения опосредованного hPD-L1 заболевания и/или связанного с ним симптома. В некоторых вариантах реализации, термин «терапевтическое средство» относится к антителу по изобретению. В некоторых других вариантах реализации, термин «терапевтическое средство» относится к агенту, отличному от антитела по изобретению. Предпочтительно, терапевтическое средство является агентом, который, как известно, является полезным, или использовался, или в настоящее время используется для лечения, ведения или улучшения опосредованного hPD-L1 заболевания или одного или нескольких связанных с ним симптомов. В конкретных вариантах реализации, терапевтическое средство представляет собой полностью человеческое антитело против hPD-L1, такое как полностью человеческое анти-hPD-LI моноклональное антитело.
В используемом в данном документе значении, термин «терапия» относится к любому протоколу, способу и/или агенту, которые могут использоваться для профилактики, ведения, лечения и/или улучшения опосредованного hPD-L1 заболевания (например, рака). В некоторых вариантах реализации, термины «терапии» и «терапия» относятся к биологической терапии, поддерживающей терапии и/или другим методам лечения, полезным для профилактики, ведения, лечения и/или улучшения опосредованного hPD-L1 заболевания, известным квалифицированным специалистам в данной области, таким как медицинский персонал.
Термины «лечить», «лечение» и «проведение лечения» относятся к ослаблению или улучшению прогрессирования, тяжести и/или продолжительности опосредованного hPD-L1 заболевания (например, рака), возникающим в результате проведения одной или нескольких терапий (включая, без ограничений, введение одного или нескольких профилактических или терапевтических средств, таких как антитело по изобретению). В конкретных вариантах реализации, такие термины относятся к снижению или ингибированию связывания hPD-L1 с PD-1, снижению или ингибированию связывания hPD-L1-CD80 и/или ингибированию или снижению одного или нескольких симптомов, связанных с опосредованным hPD-L1 заболеванием, таким как рак. В конкретных вариантах реализации, такие термины относятся к снижению или ингибированию связывания hPD-L1 с PD-1 и/или CD80, и/или ингибированию или ослабению одного или нескольких симптомов, связанных с опосредованным hPD-L1 заболеванием, таких как рак. В примере, клетка представляет собой человеческую клетку. В конкретных вариантах реализации, профилактический агент представляет собой полностью человеческое антитело против hPD-L1, такое как полностью человеческое анти-hPD-L1 моноклональное антитело.
Термин «вариабельная область» или «вариабельный домен» относится к части легкой и тяжелой цепей, обычно к примерно 120-130 аминоконцевым аминокислотам тяжелой цепи и примерно от 100 до 110 аминокислотам легкой цепи, последовательности которых сильно различаются в разных антителах, и которые участвуют (are used) в связывании и специфичности каждого конкретного антитела с его конкретным антигеном. Изменчивость последовательностей сосредоточена в областях, которые называются гипервариабельными участками (участками, определяющими комплементарность (CDR)), в то время как более высококонсервативные области вариабельного домена называются каркасными областями (FR). CDR PD-L1 и тяжелые цепи несут основную ответственность за взаимодействие антитела с антигеном. Нумерация положений аминокислот, используемая в данном документе, соответствует индексу EU, как описано у Kabat et al. (1991) Sequences of proteins of immunological interest. (U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.) 5th ed. ("Kabat et al."). В предпочтительных вариантах реализации, вариабельная область представляет собой вариабельную область человека.
Определения общих терминов клеточной биологии и молекулярной биологии можно найти в "The Merck Manual of Diagnosis and Therapy", 19th Edition, опубликовано Merck Research Laboratories, 2006 (ISBN 0-911910-19-0); Robert S. Porter et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, опубликовано Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); Benjamin Lewin, Genes X, опубликовано Jones & Bartlett Publishing, 2009 (ISBN-10: 0763766321); Kendrew et al. (Eds.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, опубликовано VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8) и Current Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan etal., eds.
Если не указано иное, настоящее изобретение было выполнено с использованием стандартных процедур, как описано, например, в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4 ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2012); Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995); или Methods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques Vol. 152, S. L. Berger and A. P. Kimmel Eds., Academic Press Inc., San Diego, USA (1987); Current Protocols in Protein Science (CPPS) (John E. Coligan, et al., ed., John Wiley and Sons, Inc.), Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacino et al. ed., John Wiley and Sons, Inc.), и Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, Publisher: Wiley-Liss; 5th edition (2005), Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology, Vol. 57, Jennie P. Mather and David Barnes editors, Academic Press, 1st edition, 1998), которые все включены в данный документ посредством ссылок в полном объеме.
Определения других терминов приведены в данном документе в описании различных аспектов изобретения.
2. Антитела PD-L1
Многие опухолевые клетки экспрессируют поверхностные молекулы, являющиеся специфическими для рака, которые могут служить диагностическими и/или терапевтическими мишенями для антител. Примеры белков клеточной поверхности, экспрессируемых опухолями, представляющих собой молекулы, которые могут быть полезны в качестве биомаркеров, включают, например, члены семейства В7 белков, молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНС), рецепторы цитокинов и факторов роста, такие как рецептор эпидермального фактора роста (EGFR). Семейство В7 представляет собой группу белков, являющихся членами иммуноглобулинового суперсемейства (Ig) белков клеточной поверхности, которые связываются с рецепторами на лимфоцитах для регулирования иммунных реакций. Это семейство включает трансмембранные или гликозилфосфатидилинозит(GPl)-связанные белки, характеризующиеся внеклеточными Ig-подобными доменами (IgV и IgC-домены, родственные с вариабельными и константными доменами иммуноглобулинов). Все члены имеют короткие цитоплазматические домены. Существует семь известных членов семейства В7: В7-1, В7-2, PD-L1 (В7-Н1), PD-L2, В7-Н2, В7-Н3 и В7-Н4.
Полная аминокислотная последовательность PD-L1 представлена NCBI Reference Sequence: NP_054862.1 (SEQ ID NO: 1), которая имеет ссылки (refers to) на многие журнальные статьи, включая, например, Dong, Н., et al. (1999), "PD-L1, а third member of the B7 family, co-stimulates T- cell proliferation and interleukin-10 secretion," Nat. Med. 5 (12), 1365-1369, описание которой включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Аминокислотная последовательность PD-L1 включает цитоплазматический домен длиной 30 аминокислот, являющийся уникальным для PD-L1, который демонстрирует незначительную гомологию с другими молекулами, включая другие члены семейства В7.
В одном варианте реализации, антитело представляет собой поликлональное антитело. Способы получения поликлональных антител известны и включают, например, инокуляцию пригодного млекопитающего антигеном для индуцирования иммунной системы животного с целью получения иммуноглобулинов (IgG), специфически связывающих введенный антиген. Примеры пригодных млекопитающих включают, например, мышь, морскую свинку, хомяка, крысу, кролика, овцу или козу. Поликлональный IgG затем обычно очищают от сыворотки млекопитающего. В одном варианте реализации, антитело представляет собой поликлональное антитело, которое связывается с поверхностно экспрессированным белком. В другом варианте реализации, антитело представляет собой поликлональное антитело, которое специфически связывается с членом семейства В7 белков. В более конкретном варианте реализации, антитело представляет собой поликлональное антитело, которое специфически связывает PD-L1. В другом варианте реализации, антитело представляет собой поликлональное антитело, которое специфически связывает поверхностно экспрессированный PD-LI. В более конкретном варианте реализации, поликлональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывают PD-L1 человека. В другом варианте реализации, антитело представляет собой поликлональное антитело, которое специфически связывает растворимый PD-L1. Термин «растворимый» также относится к белку, такому как PD-L1, не имеющему одного или нескольких из трансмембранного домена или цитоплазматических доменов. В одном варианте реализации, «растворимая» форма PD-L1 не содержит ни трансмембранного домена, ни цитоплазматического домена. В одном варианте реализации, антитело представляет собой поликлональное антитело, которое связывает «свободный» PD-L1 (т.е. PD-L1, не связанный с клеточной мембраной или поверхностью, прямо или косвенно).
В другом варианте реализации, антитело может быть моноклональным антителом. Способы получения моноклональных антител известны и включают, например, слияние клеток миеломы с клетками животного, которое было иммунизировано желательным антигеном. В других вариантах реализации, моноклональные антитела могут быть получены с использованием технологии рекомбинантной ДНК. В одном варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывает поверхностно экспрессируемый белок. В одном варианте реализации, антитело является полностью человеческим моноклональным антителом. В другом варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с членом семейства В7 белков. В более конкретном варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывает PD-L1. В другом варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с поверхностно экспрессированным PD-L1. В более конкретном варианте реализации, моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывают PD-L1 человека. В другом варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывает растворимый PD-L1. В одном варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, специфически связывающее растворимый PD-L1, в котором отсутствует один или несколько из трансмембранного домена или цитоплазматических доменов. В одном варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывает растворимый PD-L1, не имеющий ни трансмембранного домена, ни цитоплазматического домена. В одном варианте реализации, антитело представляет собой моноклональное антитело, связывающее «свободный» PD-L1 (т.е. PD-L1, который не связан с клеточной мембраной или поверхностью, прямо или косвенно).
В примере, сайт (сайты) связывания антитела или фрагмента выбирают из множества (например, библиотеки) сайтов связывания. Например, множество сайтов связывания содержит или состоит из множества 4-цепочечных антител или их фрагментов, например, dAb, Fab или scFv. Пригодные способы получения множеств сайтов связывания для скрининга включают фаговый дисплей (получение библиотеки фагового дисплея сайтов связывания антител), рибосомный дисплей (создание библиотеки рибосомного дисплея сайтов связывания антител), дрожжевой дисплей (создание библиотеки дрожжевого дисплея сайтов связывания антител), или иммунизацию неявляющегося человеком позвоночного животного (например, грызуна, например, мыши или крысы, например, Velocimouse™, Kymouse™, Xenomouse™, Aliva Mouse™, HuMAb Mouse™, Omnimouse™, Omnirat™ или Memo Mouse™) hPD-L1 или эпитопом hPD-L1 и выделение репертуара антителопродуцирующих клеток (например, репертуара В-клеток, плазматических клеток или плазмобластов) и/или репертуара выделенных антител, фрагментов или сайтов связывания.
Связывающая способность, специфичность и аффинность PD-L1 (Kd, Koff и/или Kon) могут быть определены любым обычным способом в данной области техники, например, методом поверхностного плазмонного резонанса (SPR). В используемом в данном документе значении, термин «Kd» или «KD» предназначен для обозначения равновесной константы диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Такие измерения связывания могут быть проведены с использованием различных анализов связывания, известных в данной области, например, с использованием метода поверхностного плазмонного резонанса (SPR), такого как Biacore™, или с использованием ProteOn XPR36™ (Bio-Rad®), с использованием KinExA® (Sapidyne Instruments, Inc), или с использованием ForteBio Octet (Pall ForteBio Corp.).
В одном варианте реализации, поверхностный плазмонный резонанс (SPR) проводят при 25°С. В другом варианте реализации, SPR проводят при 37°С.
В одном варианте реализации, SPR проводят при физиологическом рН, таком как рН 7 или рН 7,6 (например, с использованием забуференного Hepes физиологического раствора при рН 7,6 (также называемого HBS-EP)).
В одном варианте реализации, SPR проводят при физиологическом уровне содержания соли, например 150 мМ NaCl.
В одном варианте реализации, SPR проводят при уровне содержания детергента не более 0,05% об., например, в присутствии Р20 (полисорбат 20, например, Tween 20™), в количестве 0,05%, и 3 мМ ЭДТА.
В одном примере, SPR проводят при 25°С или 37°С в буфере при рН 7,6, 150 мМ NaCl, 0,05% детергента (например, Р20) и 3 мМ ЭДТА. Буфер может содержать 10 мМ Hepes. В одном примере, SPR проводят при 25°С или 37°С в HBS-EP. HBS-EP поставляется фирмой Teknova Inc. (California, номер по каталогу Н8022).
В примере, аффинность антитела или фрагмента определяют методом SPR путем:
1. Связывания анти-мышиного (или другого соответствующего человеческого, крысиного или принадлежащего не являющемуся человеком позвоночному животному, подобранного с учетом видового соответствия константной области антитела) IgG (например, Biacore™ BR-1008-38) с биосенсорным чипом (например, чипом GLM), например, с помощью первичной аминной связи;
2. Воздействия на анти-мышиный IgG (или другое антитело, подобранное с учетом видового соответствия) тестируемым IgG-антителом для связывания тестируемого антитела на чипе;
3. Пропускания тест-антигена по поверхности связывания чипа при концентрации 1024 нМ, 256 нМ, 64 нМ, 16 нМ, 4 нМ и 0 нМ (т.е. только буфер); и
4. И определения аффинности связывания тестируемого антитела с тест-антигеном с использованием метода поверхностного плазмонного резонанса, например, в условиях SPR, описанных выше (например, при 25°С в физиологическом буфере). SPR может выполняться с использованием любого стандартного аппарата SPR, такого как Biacore™, или с использованием ProteOn XPR36™ (Bio-Rad®).
Регенерацию поверхности связывания можно проводить с помощью 10 мМ глицина при рН 1,7. Такая обработка удаляет связанное антитело и позволяет использовать поверхность для другого взаимодействия. Данные связывания могут быть аппроксимированы моделью 1:1, обычно используемой в стандартных методах, например, путем использования модели, заложенной в прикладной программе анализа ProteOn XPR36™.
Авторы настоящего изобретения идентифицировали ряд антител, обладающих специфичностью по отношению к hPD-L1, которые обладают рядом потенциальных возможностей и преимуществ по сравнению с существующими антителами. Например, раскрытые в данном документе антитела могут обладать одним или несколькими из следующих свойств:
a. Специфичность к блокированию только одним из лигандов PD-L1 (например, блокирует взаимодействие CD80/PD-L1, но не взаимодействие PD-1/PD-L1)
b. Иммуногенность/отсутствие побочных эффектов
c. Растворимость
d. Стабильность
e. Простота составления композиции
f. Частота дозирования и/или путь введения, например, из-за улучшенного периода полувыведения по сравнению с существующими антителами против PDL1
g. Технологичность (например, экспрессия, простота очистки, изоформы)
1D05 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 33, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 34. 1D05 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 43, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 (IMGT) или SEQ ID NO: 41 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 44. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 35 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 36). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 45 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 46).
84G09 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 13, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 7 (IMGT) или SEQ ID NO: 10 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 8 (IMGT) или SEQ ID NO: 11 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 9 (IMGT) или SEQ ID NO: 12 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 14. 84G09 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 23, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 17 (IMGT) или SEQ ID NO: 20 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 18 (IMGT) или SEQ ID NO: 21 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 19 (IMGT) или SEQ ID NO: 22 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 24. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 15 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 16). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 25 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 26).
Мутант 1 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 47, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Мутант 1 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 43, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 (IMGT) или SEQ ID NO: 41 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 44. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 45 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 46).
Мутант 2 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 48, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Мутант 2 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 43, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 (IMGT) или SEQ ID NO: 41 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 44. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 45 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 46).
Мутант 3 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 49, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Мутант 3 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 43, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 (IMGT) или SEQ ID NO: 41 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 44. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 45 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 46).
Мутант 4 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 342, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Мутант 4 1D05 НС имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 43, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 (IMGT) или SEQ ID NO: 41 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 44. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 45 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 46).
Мутант 1 1D05 LC имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 33, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 34. Мутант 1 1D05 LC имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 50, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Последовательность CDRL2 мутанта 1 1D05 LC определяется по системам Кабата или IMGT по последовательности VL, представленной SEQ ID NO: 50. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 35 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 36).
Мутант 2 1D05 LC имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 33, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 34. Мутант 2 1D05 LC имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 51, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 (IMGT) или SEQ ID NO: 41 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 35 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 36).
Мутант 3 1D05 LC имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 33, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 (IMGT) или SEQ ID NO: 30 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 (IMGT) или SEQ ID NO: 31 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 (IMGT) или SEQ ID NO: 32 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 34. Мутант 3 1D05 LC имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 298, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 (IMGT) или SEQ ID NO: 40 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 (IMGT) или SEQ ID NO: 42 (Кабат). Последовательность CDRL2 мутанта 3 1D05 LC определяется по системам Кабата или IMGT по последовательности VL, представленной SEQ ID NO: 298. Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 44. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 35 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 36). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 45 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 46).
411 В08 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 58, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 52 (IMGT) или SEQ ID NO: 55 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 53 (IMGT) или SEQ ID NO: 56 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 54 (IMGT) или SEQ ID NO: 57 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 59. 411В08 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 68, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 62 (IMGT) или SEQ ID NO: 65 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 63 (IMGT) или SEQ ID NO: 66 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 64 (IMGT) или SEQ ID NO: 67 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 69. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 60 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 61). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 70 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 71).
411С04 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 78, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 72 (IMGT) или SEQ ID NO: 75 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 73 (IMGT) или SEQ ID NO: 76 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 74 (IMGT) или SEQ ID NO: 77 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 79. 411С04 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 88, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 82 (IMGT) или SEQ ID NO: 85 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 83 (IMGT) или SEQ ID NO: 86 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 84 (IMGT) или SEQ ID NO: 87 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 89. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 80 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 81). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 90 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 91).
411D07 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 98, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 92 (IMGT) или SEQ ID NO: 95 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 93 (IMGT) или SEQ ID NO: 96 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 94 (IMGT) или SEQ ID NO: 97 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 99. 411D07 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 108, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 102 (IMGT) или SEQ ID NO: 105 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 103 (IMGT) или SEQ ID NO: 106 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 104 (IMGT) или SEQ ID NO: 107 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 109. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 100 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 101). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 110 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 111).
385F01 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 118, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 112 (IMGT) или SEQ ID NO: 115 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 113 (IMGT) или SEQ ID NO: 116 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 114 (IMGT) или SEQ ID NO: 117 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 119. 385F01 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 128, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 122 (IMGT) или SEQ ID NO: 125 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 123 (IMGT) или SEQ ID NO: 126 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 124 (IMGT) или SEQ ID NO: 127 (Кабат).
Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 129. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 120 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 121). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 130 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 131).
386Н03 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 158, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 152 (IMGT) или SEQ ID NO: 155 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 153 (IMGT) или SEQ ID NO: 156 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 154 (IMGT) или SEQ ID NO: 157 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 159. 386Н03 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 168, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 162 (IMGT) или SEQ ID NO: 165 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 163 (IMGT) или SEQ ID NO: 166 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 164 (IMGT) или SEQ ID NO: 167 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 169. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 160 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 161). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 170 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 171).
389А03 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 178, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 172 (IMGT) или SEQ ID NO: 175 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 173 (IMGT) или SEQ ID NO: 176 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 174 (IMGT) или SEQ ID NO: 177 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 179. 389А03 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 188, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 182 (IMGT) или SEQ ID NO: 185 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 183 (IMGT) или SEQ ID NO: 186 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 184 (IMGT) или SEQ ID NO: 187 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 189. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 180 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 181). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 190 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 191).
413D08 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 138, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 132 (IMGT) или SEQ ID NO: 135 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 133 (IMGT) или SEQ ID NO: 136 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 134 (IMGT) или SEQ ID NO: 137 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 139. 413D08 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 148, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 142 (IMGT) или SEQ ID NO: 145 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 143 (IMGT) или SEQ ID NO: 146 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 144 (IMGT) или SEQ ID NO: 147 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 149. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 140 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 141). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 150 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 151).
413G05 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 244, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 238 (IMGT) или SEQ ID NO: 241 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 239 (IMGT) или SEQ ID NO: 242 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 240 (IMGT) или SEQ ID NO: 243 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 245. 413G05 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 254, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 248 (IMGT) или SEQ ID NO: 251 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 249 (IMGT) или SEQ ID NO: 252 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 250 (IMGT) или SEQ ID NO: 253 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 255. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 246 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 247). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 256 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 257).
413F09 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 264, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 258 (IMGT) или SEQ ID NO: 261 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 259 (IMGT) или SEQ ID NO: 262 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 260 (IMGT) или SEQ ID NO: 263 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 265. 413F09 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 274, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 268 (IMGT) или SEQ ID NO: 271 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 269 (IMGT) или SEQ ID NO: 272 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 270 (IMGT) или SEQ ID NO: 273 (Кабат).
Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 275. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 266 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 267). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 276 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 277).
414 В06 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 284, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 278 (IMGT) или SEQ ID NO: 281 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 279 (IMGT) или SEQ ID NO: 282 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 280 (IMGT) или SEQ ID NO: 283 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 285. 414 В06 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 294, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 288 (IMGT) или SEQ ID NO: 291 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 289 (IMGT) или SEQ ID NO: 292 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 290 (IMGT) или SEQ ID NO: 293 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 295. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 286 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 287). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 296 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 297).
416Е01 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи (VH), представленную SEQ ID NO: 349, содержащую аминокислотную последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 343 (IMGT) или SEQ ID NO: 346 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 344 (IMGT) или SEQ ID NO: 347 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 345 (IMGT) или SEQ ID NO: 348 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи домена VH представлена SEQ ID NO: 350. 416Е01 имеет аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи (VL), представленную SEQ ID NO: 359, содержащую аминокислотную последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 353 (IMGT) или SEQ ID NO: 356 (Кабат), аминокислотную последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 354 (IMGT) или SEQ ID NO: 357 (Кабат), и аминокислотную последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 355 (IMGT) или SEQ ID NO: 358 (Кабат). Последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи домена VL представлена SEQ ID NO: 360. Домен VH может быть объединена с любой из последовательностей константной области тяжелой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, Seq ID Nos: 205, Seq ID Nos: 340, Seq ID Nos: 524, Seq ID Nos: 526, Seq ID Nos: 528, Seq ID Nos: 530, SEQ ID NO: 532 или SEQ ID NO: 534. Область VL может быть объединена с любой из последовательностей константной области легкой цепи, описанной в данном документе, например, SEQ ID NOs: 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237, 536 и 538. Полноразмерная аминокислотная последовательность тяжелой цепи представлена SEQ ID NO: 351 (последовательность нуклеиновой кислоты тяжелой цепи - SEQ ID NO: 352). Полноразмерная аминокислотная последовательность легкой цепи представлена SEQ ID NO: 361 (последовательность нуклеиновой кислоты легкой цепи - SEQ ID NO: 362).
Антитела по изобретению описаны в отношении следующих концепций, аспектов, предложений, компоновок и вариантов реализации. Если не указано иное, все понятия, варианты реализации, предложения, аранжировки и аспекты должны рассматриваться как способные сочетаться с любыми другими концепциями, аспектами, предложениями, компоновками или вариантами реализации, за исключением случаев, когда такая комбинация не будет иметь технического смысла, или когда явным образом будет указано иное.
Концепция 1. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с hPD-L1, представленным SEQ ID NO: 1, и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05, причем антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит CDRH3, содержащий мотив X1GSGX2YGX3X4FD, где X1, Х2 и Х3 независимо обозначают любую аминокислоту, а Х4 присутствует или отсутствует, и, в случае его присутствия, может обозначать любую аминокислоту.
В этих концепциях антитела или фрагменты могут включать или не включать биспецифические антитела. В одном варианте реализации, в этих концепциях, антитела или фрагменты включают биспецифические антитела. В одном варианте реализации, биспецифическое антитело не включает формат FIT-Ig. В одном варианте реализации, биспецифическое антитело не включает формат mAb2. В одном варианте реализации, биспецифическое антитело не включает ни формат FIT-Ig, ни формат mAb2. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент, в этих концепциях, включают биспецифическое антитело, но не включают биспецифическое антитело, имеющее формат FIT-Ig. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент, в этих концепциях, включают биспецифическое антитело, но не включают биспецифическое антитело, имеющее формат mAb2. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент, в этих концепциях, включают биспецифическое антитело, но не включают биспецифическое антитело, имеющее формат FIT-Ig или формат mAb2. В другом варианте реализации, в этих концепциях, антитела или фрагменты включают антитела с двойным связыванием.
Предпочтительно, антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с антигеном hPD-L1, не реагируют перекрестно с другими антигенами (но могут, необязательно, перекрестно реагировать с PD-L1 другого вида, например, макака-резуса, яванского макака или мыши). Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с антигеном hPD-L1, можно идентифицировать, например, с помощью иммуноанализов, BIAcore™ или других методов, известных специалистам в данной области. Антитело или его фрагмент специфически связываются с антигеном hPD-L1, когда они связываются с антигеном hPD-L1 с более высокой аффинностью, чем с любым перекрестно-реактивным антигеном, при определении с использованием экспериментальных методов, таких как радиоиммуноанализ (RIA) и твердофазные иммуноферментные анализы (ИФА). Как правило, специфическая или селективная реакция будет по меньшей мере вдвое превышать фоновый сигнал или шум, и наиболее характерно, более чем в 10 раз превышать фон. См., например, Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York, где на стр. 332-336 приведено обсуждение специфичности антител.
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент представляют собой человеческое антитело. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент представляют собой человеческое антитело или фрагмент. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент представляют собой полностью человеческое антитело или фрагмент. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент представляют собой полностью человеческое моноклональное антитело или фрагмент.
Также предлагается концепция 1а: антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с hPD-L1, представленным SEQ ID NO: 1, и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 411В08, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит CDRH3, содержащий мотив ARX1RX2X3SDX4X5D, где X1, Х2, Х3, Х4 и Х5 независимо обозначают любую аминокислоту.
Также предлагается концепция 1b: антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с hPD-L1, представленным SEQ ID NO: 1, и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 411В08, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит CDRH3, содержащий мотив X1RDGSGSY, где X1 обозначает любую аминокислоту.
Как предусмотрено в концепциях или аспектах настоящего изобретения, анти-PD-LI антитело или иммуноцитокин могут связываться с PD-L1, например, PD-L1 человека, со значением KD менее 50 нМ, менее 40 нМ, менее 30 нМ, по результатам определения методом поверхностного плазмонного резонанса. В другом варианте реализации, анти-PD-LI антитело или иммуноцитокин могут связываться с PD-L1, например, PD-L1 человека, с KD менее 20 нМ, менее 15 нМ, менее 10 нМ, по результатам определения методом поверхностного плазмонного резонанса. Анти-PD-LI антитело или иммуноцитокин могут связываться с PD-L1, например, PD-L1 человека, с KD менее 8 нМ, менее 5 нМ, менее 4 нМ, менее 3 нМ, менее 2 нМ или меньше 1 нМ, по результатам определения методом поверхностного плазмонного резонанса. KD может иметь значение 0,9 нМ или меньше, 0,8 нМ или меньше, 0,7 нМ или меньше, 0,6 нМ или меньше, 0,5 нМ или меньше, 0,4 нМ или меньше, 0,3 нМ или меньше, 0,2 нМ или меньше, или 0,1 нМ или меньше.
В другом варианте реализации, KD находится в диапазоне от 0,01 до 1 нМ, или от 0,05 до 2 нМ, или от 0,05 до 1 нМ. KD может определяться для hPD-L1, cynoPD-L1 (PD-L1 яванского макака) и/или мышиного PD-L1.
В другом варианте реализации, антитела против PD-L1, раскрытые в данном документе, имеют константу скорости ассоциации K0n (например, по результатам измерений методом SPR, например, при 25°С или при 37°С) приблизительно от 0,5 до 10 мкМ, например, приблизительно от 1 до 8 мкМ или приблизительно от 1 до 7 мкМ. В другом варианте реализации, константа скорости ассоциации KON составляет приблизительно от 1 до 5 мкМ, например, приблизительно 1 мкМ, приблизительно 1,5 мкМ, приблизительно 2 мкМ, приблизительно 2,5 мкМ или приблизительно 3 мкМ. В другом варианте реализации, скорость К on составляет приблизительно 3,5 мкМ, приблизительно 4 мкМ, приблизительно 4,5 мкМ, приблизительно 5 мкМ или приблизительно 5,5 мкМ.
В другом варианте реализации, антитела против PD-L1, раскрытые в данном документе, имеют константу скорости диссоциации KOFF (например, по результатам измерений методом SPR, например, при 25°С или при 37°С), приблизительно от 0,01 до 100 мМ, например, приблизительно от 0,1 до 50 мМ, или приблизительно от 0,5 до 50 мМ. В другом варианте константа скорости диссоциации KOFF составляет приблизительно от 0,5 до 10 мМ, или приблизительно от 0,5 до 10 мМ, например, приблизительно 1 мМ, приблизительно 2 мМ, приблизительно 3 мМ, приблизительно 4 мМ или приблизительно 5 мМ. В другом варианте константа скорости диссоциации KOFF составляет приблизительно 0,6 мМ, приблизительно 0,7 мМ, приблизительно 0,8 мМ или приблизительно 0,9 мМ.
В другом варианте реализации, антитела против PD-L1 (и иммуноцитокины), описанные в концепциях и аспектах настоящего изобретения, обеспечивают улучшенные уровни транзиентной экспрессии по сравнению с другими анти-PD-LI-антителами и иммуноцитокинами. Таким образом, в одном варианте реализации, анти-PD-LI антитело (или иммуноцитокин) экспрессируется в клетке HEK293, например, клетке HEK293T, с уровнем экспрессии приблизительно 100 мкг/мл или в диапазоне приблизительно от 100 до 350 мкг/мл. В другом варианте реализации, уровень экспрессии имеет значение выше приблизительно 350 мкг/мл.
В другом варианте реализации, анти-PD-LI антитело (или иммуноцитокин) экспрессируется в клетке СНО, например, клетке Expi-CHO, с уровнем экспрессии приблизительно 100 мкг/мл, или в диапазоне значений приблизительно от 100 до 350 мкг/мл. В другом варианте реализации, уровень экспрессии имеет значение выше приблизительно 350 мкг/мл.
В другом варианте реализации, анти-PD-LI антитело (или иммуноцитокин) экспрессируется в клетке СНО, например, клетке Expi-CHO или клетке СНО-Е7 EBNA, с уровнем экспрессии приблизительно 100 мкг/мл или в диапазоне значений приблизительно от 100 до 350 мкг/мл. В другом варианте реализации, уровень экспрессии имеет значение выше приблизительно 350 мкг/мл. Антитело, описанное в данном документе как 1D05, в формате человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 340, в объеме 2 л, в клетках СНО-Е7 EBNA, имеет уровень экспрессии приблизительно 115 мкг/мл. Антитело, описанное в данном документе как 416Е01, в формате человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 340), в объеме 2 л, в клетках СНО-Е7 EBNA, имеет уровень экспрессии приблизительно 160 мкг/мл. Антитело, описанное в данном документе как 1414В06, в формате человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 340), в объеме 2 л, в клетках СНО-Е7 EBNA, имеет уровень экспрессии приблизительно 783 мкг/мл. Антитело, описанное в данном документе как 413G05, в формате человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 340), в объеме 2 л, в клетках СНО-Е7 EBNA, имеет уровень экспрессии приблизительно 383 мкг/мл.
В любой из этих систем экспрессии, экспрессия проводится в масштабе от приблизительно 0,5 мл до 3 мл, например, приблизительно от 0,5 мл до 2 мл. В любой из этих систем экспрессии, анти-PD-LI антитело (или иммуноцитокин) может экспрессироваться из вектора рТТ5. В любой из этих систем экспрессии, анти-PD-L1 антитело (или иммуноцитокин) может экспрессироваться в сочетании с липидным трансфекционным реагентом и может, необязательно, экспрессироваться в клетке СНО, например, в клетке Expi-CHO. В любой из этих систем экспрессии, анти-PD-LI антитело (или иммуноцитокин) может экспрессироваться в сочетании с полиэтилениминовым (PEI) трансфекционным реагентом и может, необязательно, экспрессироваться в клетке СНО, например, клетке СНО-Е7 EBNA. В любой из этих систем экспрессии, анти-PD-LI антитело (или иммуноцитокин) может экспрессироваться в сочетании с хелперной плазмидой (например, AKT-хелперной плазмидой) и может, необязательно, экспрессироваться в клетке СНО, например, в клетке СНО-Е7 EBNA.
В любой из этих систем экспрессии, уровень экспрессии составляет от приблизительно от 100 мкг/мл до приблизительно 1500 мкг/мл, например, от приблизительно 100 мкг/мл до приблизительно 1000 мкг/мл, или от приблизительно 200 мкг/мл до приблизительно 1000 мкг/мл, или от приблизительно 350 мкг/мл до приблизительно 1000 мкг/мл. В любой из этих систем экспрессии, нижний предел экспрессии может составлять приблизительно 100 мкг/мл, приблизительно 200 мкг/мл, приблизительно 300 мкг/мл, или приблизительно 400 мкг/мл. В другом варианте реализации, нижний предел экспрессии может составлять приблизительно 500 мкг/мл, приблизительно 600 мкг/мл, приблизительно 700 мкг/мл, или приблизительно 800 мкг/мл. В любой из этих систем экспрессии, верхний предел экспрессии может составлять приблизительно 2000 мкг/мл, приблизительно 1800 мкг/мл, приблизительно 1600 мкг/мл, или приблизительно 1500 мкг/мл. В другом варианте реализации, верхний предел экспрессии может составлять приблизительно 1250 мкг/мл, приблизительно 1000 мкг/мл, приблизительно 900 мкг/мл, или приблизительно 800 мкг/мл.
В другом варианте реализации, система экспрессии представляет собой систему экспрессии Lonza, например, систему Lonza X-Ceed®. В системе экспрессии Lonza, экспрессию можно проводить в масштабе от примерно 30 мл до 2 л, например, от 50 мл до 1 л, или от 1 л до (tp) 2 л. В системе экспрессии Lonza, анти-PD-L1 антитело (или иммуноцитокин) может быть выражено в сочетании с электропорацией и, необязательно, без каких-либо вспомогательных плазмид. В системе экспрессии Lonza, анти-PD-L1 антитело (или иммуноцитокин) может экспрессироваться на уровне приблизительно 1 г/л или приблизительно 900 мг/л или приблизительно 800 мг/л или приблизительно 700 мг/л, В другом варианте реализации, в системе экспрессии Lonza, анти-PD-L1 антитело (или иммуноцитокин) может экспрессироваться на уровне приблизительно 600 мг/л или приблизительно 500 мг/л или приблизительно 400 мг/л. В системе экспрессии Lonza, анти-PD-L1 антитело (или иммуноцитокин) может экспрессироваться на уровне от приблизительно 400 мг/л до приблизительно 2 г/л, например, от приблизительно 500 мг/л до приблизительно 1,5 г/л, или от приблизительно 500 мг/л до приблизительно 1 г/л. В другом варианте реализации, уровень экспрессии превышает 1 г/л. В другом варианте реализации, антитела против PD-L1, описанные в концепциях, обеспечивают улучшенный период полувыведения по сравнению с другими анти-PD-L1 антителами, как описано далее в Аспекте 1 ниже.
Концепция 2. Антитело или фрагмент согласно концепции 1, где X1 представляет собой гидроксилсодержащую аминокислоту, необязательно, Т.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серии. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой цистеин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой треонин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой метионин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серии или цистеин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серии или треонин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серии или метионин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой цистеин или треонин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой цистеин или метионин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой треонин или метионин.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из серина, цистеина, треонина и метионина.
Концепция 2а. Антитело или фрагмент согласно концепции 1а, где X1 представляет собой алифатическую аминокислоту или амидную аминокислоту.
В одном варианте реализации, X1 выбирают из аспарагина (N) и валина (V). В одном варианте реализации, X1 представляет собой валин. В одном варианте реализации, X1 представляет собой аспарагин.
Концепция 2b. Антитело или фрагмент согласно концепции 1b, где Х1 представляет собой алифатическую аминокислоту.
В одном варианте реализации, X1 выбирают из аланина (А) или валина (V). В одном варианте реализации, X1 представляет собой валин. В одном варианте реализации, X1 представляет собой аланин.
Концепция 3. Антитело или фрагмент согласно концепции 1 или концепции 2, где Х2 представляет собой основную аминокислоту, необязательно, K.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой гистидин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой лизин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой аргинин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой гистидин или лизин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой гистидин или аргинин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой лизин или аргинин.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из гистидина, лизина и аргинина.
Концепция 3а. Антитело или фрагмент согласно концепции 1а или концепции 2а, где Х2 представляет собой алифатическую аминокислоту или амидную аминокислоту.
В одном варианте реализации, Х2 выбирают из лейцина (L), изолейцина (I), валина (V), аспарагина (N) и глутамина (Q). В одном варианте реализации, Х2 выбирают из лейцина (L), изолейцина (I) и валина (V). В одном варианте реализации, Х2 выбирают из аспарагина (N) и глутамина (Q). В одном варианте реализации, Х2 выбирают из лейцина (L) и глутамина (Q). В одном варианте реализации, Х2 представляет собой лейцин (L). В одном варианте реализации, Х2 представляет собой глутамин (Q).
Концепция 4. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 1-3, где Х2 представляет собой гидроксилсодержащую аминокислоту, необязательно, S или Т.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серии. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой цистеин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой треонин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой метионин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серии или цистеин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серии или треонин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой серин или метионин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой цистеин или треонин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой цистеин или метионин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой треонин или метионин.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из серина, цистеина, треонина и метионина.
Концепция 4а. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 1а, 2а или 3а, где Х3 представляет собой ароматическую аминокислоту.
В одном варианте реализации, Х3 выбирают из фенилаланина (F), тирозина (Y) и триптофана (W). В одном варианте реализации, Х3 выбирают из тирозина (Y) и триптофана (W). В одном варианте реализации, Х3 представляет собой тирозин (Y). В одном варианте реализации, Х3 представляет собой триптофан (W).
Концепция 5. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 1-4, где Х3 представляет собой ароматическую аминокислоту, необязательно, W.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой фенилаланин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой тирозин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой триптофан. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой фенилаланин или тирозин. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой фенилаланин или триптофан. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота представляет собой тирозин или триптофан.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из фенилаланина, тирозина и триптофана.
Концепция 5а. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 1а, 2а, 3а или 4а, где Х4 представляет собой ароматическую аминокислоту.
В одном варианте реализации, Х4 выбирают из фенилаланина (F), тирозина (Y) и триптофана (W). В одном варианте реализации, Х4 выбирают из тирозина (Y) и фенилаланина (F). В одном варианте реализации, Х4 представляет собой тирозин (Y). В одном варианте реализации, Х4 представляет собой фенилаланин (F).
Концепция 6. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 1-5, где Х4 отсутствует.
Концепция 6а. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 1а, 2а, 3а, 4а или 5а, где Х5 представляет собой алифатическую аминокислоту или гидроксилсодержащую аминокислоту.
В одном варианте реализации, Х5 выбран из лейцина (L), изолейцина (I), валина (V), серина (S), цистеина (С) и треонина (Т). В одном варианте реализации, Х5 выбран из лейцина (L), изолейцина (I) и валина (V). В одном варианте реализации, Х5 выбирают из серина (S), цистеина (С) и треонина (Т). В одном варианте реализации, Х5 выбран из лейцина (L) и серина (S). В одном варианте реализации, X5 представляет собой серин (S). В одном варианте реализации, X5 представляет собой лейцин (L).
Концепция 7. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 1-5, где Х4 присутствует.
Концепция 8. Антитело или фрагмент согласно концепции 7, где Х4 представляет собой алифатическую аминокислоту, необязательно, G.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из глицина, аланина, валина, лейцина и изолейцина.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из глицина и аланина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из глицина и валина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из глицина и лейцина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из глицина и изолейцина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из аланина и валина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из аланина и лейцина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из аланина и изолейцина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из валина и лейцина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из валина и изолейцина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из лейцина и изолейцина.
В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота выбрана из трех из всех из (selected from three of each of) глицина, аланина, валина, лейцина и изолейцина. В одном варианте реализации, гидроксилсодержащая аминокислота, выбранная из четырех из каждого из глицина, аланина, валина, лейцина и изолейцина.
Концепция 9. Антитело или его фрагмент, необязательно, согласно любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05, где антитело или фрагмент содержат домен VH, содержащий последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9а: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 84G09, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 9 или 12, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 9 или 12, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9b: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 411В08, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 54 или 57, или последовательность CDRH3, представленную Seq ID NO: 54 или 57, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9с: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 411С04, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 74 или 77, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 74 или 77, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9d: антитело или его фрагмент, необязательно, согласно любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 411D07, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 94 или 97, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 94 или 97, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9е: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 385F01, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 114 или 117, или последовательность CDRH3, представленную Seq ID NO: 114 или 117, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Понятие 9f: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 386Н03, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 144 или 147, или последовательность CDRH3, представленную Seq ID NO: 144 или 147, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9g: антитело или его фрагмент, необязательно, согласно любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 389А03, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 174 или 177, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 174 или 177, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9h: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 413D08, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 134 или 137, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 134 или 137, содержащую 5 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9i: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 413G05, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 240 или 243, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 240 или 243, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9j: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 413F09, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 260 или 263, или последовательность CDRH3, представленную Seq ID NO: 260 или 263, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 9k: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, которые специфически связываются с hPD-L1 и конкурируют за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 414В06, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 280 или 283, или последовательность CDRH3, представленную Seq ID NO: 280 или 283, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Понятие 9l: антитело или его фрагмент, необязательно, по любой из концепций 1-8, который специфически связывается с hPD-L1 и конкурирует за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 416Е01, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 345 или 348 или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 345 или 348, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Во всех концепциях 9, 9а-l, 17, 17а-l, 18, 18а-l, 19, 19а-l, 22, 22a-l, 23, 23a-l, 24 и 24а-l, в одном варианте реализации, CDR содержит одно аминокислотное замещение, которое может быть консервативным аминокислотным замещением. Во всех концепциях 9, 9а-l, 17, 17а-l, 18, 18а-l, 19, 19а-l, 22, 22a-l, 23, 23а, 24 и 24а-l, в одном варианте реализации, CDR содержит два аминокислотных замещения, которые могут быть консервативными аминокислотными замещениями. Во всех концепциях 9, 9а-l, 17, 17а-l, 18, 18а-l, 19, 19а-l, 22, 22a, 22b, 22d, 22f, 22g, 24 и 24а-l, в одном варианте реализации, CDR включает три аминокислотных замещения, которые могут быть консервативными аминокислотными замещениями. Во всех концепциях 9, 9а-с, 9е, 9д-1, 17, 17а-с, 17е, 17g-l, 19, 19а, 22, 22d, 22f, 22g, 24 и 24а-l, в одном варианте реализации, CDR содержит четыре аминокислотных замещения, которые могут быть консервативными аминокислотными замещениями. Во всех концепциях 9, 9а-с, 9е, 9g-l, 17, 17а-с, 17е, 17g-l, 22d, 22f и 22g в одном варианте реализации, CDR содержит пять аминокислотных замещений, которые могут быть консервативными аминокислотными замещениями. Во всех концепциях 9, 9а-с, 9е, 9g, 9i-l, 17, 17а-с, 17е, 17g и 17i-l, в одном варианте реализации, CDR включает шесть аминокислотных замещений, которые могут быть консервативными аминокислотными замещениями.
Аминокислотные замещения включают изменения, при которых аминокислоту заменяют на другой природный аминокислотный остаток. Такие замещения могут быть классифицированы как «консервативные», и в этом случае аминокислотный остаток, содержащийся в полипептиде, заменяется другой природной аминокислотой аналогичного характера либо по показателю полярности, функциональности или размеру боковой цепи. Такие консервативные замещения хорошо известны в данной области. Замещения, охватываемые настоящим изобретением, также могут быть «неконсервативными», в которых аминокислотный остаток, присутствующий в пептиде, замещен аминокислотой, имеющей отличные свойства, например, природной аминокислотой из другой группы (например, замещение заряженной или гидрофобной аминокислотой (amino; acid) аланином) или, альтернативно, в которых природная аминокислота замещена нетрадиционной аминокислотой.
В одном варианте реализации, консервативные аминокислотные замещения являются такими, как описано в данном документе. Например, замещением может быть замена Y на F, Т на S или K, Р на А, Е на D или Q, N на D или G, R на K, G на N или А, Т на S или K, D на N или Е, I на L или V, F на Y, S на Т или А, R на K, G на N или А, K на R, А на S, K или Р. В другом варианте реализации, консервативные аминокислотные замещения могут быть случаями замещения Y на F, Т А или S, I на L или V, W на Y, М на L, N на D, G на А, Т на А или S, D на N, I на L или V, F на Y или L, S на А или Т, и А на S, G, Т или V.
Концепция 10. Антитело или фрагмент, которые специфически связываются с HPD-L1 и содержит домен VH, содержащий CDRH3 размером от 12 до 20 аминокислот, и которые получены в результате рекомбинации VH генного сегмента человека, D генного сегмента человека и JH генного сегмента человека, где JH генным сегментом человека является IGHJ5 (например, IGHJ5*02).
В одном варианте реализации, CDRH3 составляет от 14 до 17 аминокислот, a JH генный сегмент человека представляет собой IGHJ5 (например, IGHJ5*02).
В качестве концепции 10а предлагается также антитело или фрагмент, которые специфически связываются с hPD-L1 и содержат домен VH, содержащий CDRH3 размером от 8 до 16 аминокислот, и которые получены путем рекомбинации VH генного сегмента человека, D генного сегмента человека и JH генного сегмента человека, где JH генный сегмент человека выбран из IGHJ4 (например, IGHJ4*02), IGHJ5 (например, IGHJ5*02) и IGHJ6 (например, IGHJ6*02).
В другом варианте реализации, JH генный сегмент человека представляет собой IGHJ6 (например, IGHJ6*02). В другом варианте реализации, CDRH3 содержит от 10 до 17 аминокислот, a JH сегмент человека представляет собой IGHJ6 (например, IGHJ6*02).
В другом варианте реализации, JH генный сегмент человека представляет собой IGHJ4 (например, IGHJ4*02). В другом варианте реализации, CDRH3 содержит от 7 до 17 аминокислот, a JH генный сегмент человека представляет собой IGHJ4 (например, IGHJ4*02).
Необязательно, антитело по концепции 10 или 10а имеет любые признаки концепций 1-9, включая аффинность связывания, константы скоростей ассоциации (Kon) и диссоциации (Koff), уровни экспрессии, период полувыведения и т.д.
Концепция 11. Антитело или фрагмент согласно концепции 10 или 10а, где VH генный сегмент человека представляет собой IGHV3 (например, IGHV3-9, такой как ICHV3-9*01).
В качестве концепции 11а предусмматриваются также антитело или фрагмент согласно концепции 10 или 10а, где VH генный сегмент человека выбран из IGHV3 (например, IGHV3-9, такой как IGHV3-9*01 или, например, IGHV3-7, такой как IGHV3-7*01 или, например, IGHV3-33, такой как IGHV3-33*01 или, например, IGHV3-11, такой как IGHV3-11*01 или, например, IGHV3-23, такой как IGHV3-23*04) или IGHV4 (например, IGHV4-4, такой как IGHV4-4*02 или, например, IGHV4-39, такой как IGHV4-39*01).
В одном варианте реализации, VH генный сегмент человека представляет собой IGHV3 (например, IGHV3-7, такой как IGHV3-7*01). В одном варианте реализации, VH генный сегмент человека представляет собой IGHV3 (например, IGHV3-33, такой как IGHV3-33*01). В одном варианте реализации, VH генный сегмент человека представляет собой IGHV3 (например, IGHV3-11, такой как IGHV3-11*01). В одном варианте реализации, VH генный сегмент человека представляет собой IGHV3 (например, IGHV3-23, такой как IGHV3-23*04).
В одном варианте реализации, VH генный сегмент человека представляет собой IGHV4 (например, IGHV4-4, такой как IGHV4-4*02). В одном варианте реализации, VH генный сегмент человека представляет собой IGHV4 (например, IGHV4-39, такой как IGHV4-39*01).
В качестве концепции 11b предусматриваются также антитело или фрагмент согласно концепциям 10, 10а, 11 или 11а, где D генный сегмент человека выбран из IGHD1 (например, IGHD1-20, такой как IGHD1-20*01), IGHD3 (например, IGHD3-10, такой как IGHD3-10*01), IGHD4 (например, IGHD4-11, такой как IGHD4-11*01), IGHD5 (например, IGHD5-7, такой как IGHD5-18*01) и IGHD6 (например, IGHD6-13, такой как IGHD6-13*01).
В одном варианте реализации, D генный сегмент человека представляет собой IGHD1 (например, IGHD1-20, такой как IGHD1-20*01). В одном варианте реализации, D генный сегмент человека представляет собой IGHD3 (например, IGHD3-10, такой как IGHD3-10*01). В одном варианте реализации, D генный сегмент человека представляет собой IGHD4 (например, IGHD4-11, такой как IGHD4-11*01). В одном варианте реализации, D генный сегмент человека представляет собой IGHD5 (например, IGHD5-18, такой как IGHD5-19*01). В одном варианте реализации, D генный сегмент человека представляет собой IGHD6 (например, IGHD6-13, такой как IGHD6-13*01).
В любой из концепций 10, 11 и 11а VH, DH и JH генные сегменты являются такими, как описано в комбинациях антител в таблице 5 ниже. В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV3 (например, IGHV3-7, такой как IGHV3-7*01), IGHD4 (например, IGHD4-11, такой как IGHD4-11*01) и IGHJ4 (например, IGHJ4*02). В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV4 (например, IGHV4-4, такой как IGHV4-4*02), IGHD3 (например, IGHD3-10, такой как IGHD3-10*01) и IGHJ4 (например, IGHJ4*02). В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV4 (например, IGHV4-39, такой как IGHV4-39*01), IGHD6 (например, IGHD6-13, такой как IGHD6-13*01) и IGHJ1 (например, IGHJ1*01). В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV3 (например, IGHV3-33, такой как IGHV3-33*01), IGHD5 (например, IGHD5-18, такой как IGHD5-18*01) и IGHJ6 (например, IGHJ6*02). В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV3 (например, IGHV3-11, такой как IGHV3-11*01), IGHD1 (например, IGHD1-20, такой как IGHD1-20*01) и IGHJ6 (например, IGHJ6*02). В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV3 (например, IGHV3-23, такой как IGHV3-23*04), IGHD5 (например, IGHD5-18, такой как IGHD5-18*01) и IGHJ4 (например, IGHJ4*02). В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV3 (например, IGHV3-7, такой как IGHV3-7*01), IGHD5 (например, IGHD5-24, такой как IGHD5-24*01) и IGHJ4 (например, IGHJ4*02). В одном варианте реализации, тяжелая цепь антитела получена из комбинации IGHV3 (например, IGHV3-23, такой как IGHV3-23*04), IGHD6 (например, IGHD6-13, такой как IGHD6-13*01) и IGHJ4 (например, IGHJ4*02).
Концепция 12. Антитело или фрагмент согласно концепциям 10, 10а, 11, 11а или 11b, где антитело или фрагмент содержат домен VL, который получен путем рекомбинации Vκ генный сегмент человека и Jκ генный сегмент человека, где Vκ генный сегмент человека представляет собой IGκV1D (например, IGκV1D-39, такой как IGκV1D-39*01).
В качестве концепции 12а предусматриваются также антитело или фрагмент согласно любой из концепций 10, 10а, 11, 11а или 11b, где Vκ генный сегмент человека выбран из IGκV1 (например, IGκV1-17, такой как IGκV1-17*01 или например, IGKV1-9, такой как IGκV1-9*d01 или, например, IGκV1D-12, такой как IGκV1D-12*02 или, например, IGκV1D-39, такой как IGκV1D-39*01) и IGκV4 (например, IGκV4-1, такой как IGκV4-1*01).
В одном варианте реализации, Vκ генный сегмент человека представляет собой IGκV1 (например, IGκV1-17, такой как IGκV1-17*01). В одном варианте реализации, Vκ генный сегмент человека представляет собой IGκV1 (например, IGκV1-9, такой как IGκV1-9*d01). В одном варианте реализации, Vκ генный сегмент человека представляет собой IGκV1 (например, IGκV1D-12, такой как IGκV1D-12*02). В одном варианте реализации, Vκ генный сегмент человека представляет собой IGκV1 (например, IGKV1D-39, такой как IGκV1D-39*01).
В одном варианте реализации, Vκ генный сегмент человека представляет собой IGκV1 IGκV4 (например, IGκV4-1, такой как IGκV4-1*01)
В качестве концепции 12b предусматриваются также антитело или фрагмент согласно концепции 10, 10а, 11 или 11а, где Jκ генный сегмент человека выбран из IGκJ1 (например, IGκJ1*01), IGκJ2 (например, IGκJ2*04), IGκJ3 (например, IGκJ3*01), IGκJ4 (например, IGκJ4*01) или IGκJ5 (например, IGκJ5*01).
В одном варианте реализации, Jκ генный сегмент человека представляет собой ICκJ1 (например, IGκJ1*01). В одном варианте реализации, Jκ генный сегмент человека представляет собой IGκJ2 (например, IGκJ2*04). В одном варианте реализации, Jκ генный сегмент человека представляет собой IGκJ3 (например, IGκJ3*01). В одном варианте реализации, Jκ генный сегмент человека представляет собой IGκJ4 (например, IGκJ4*01). В одном варианте реализации, Jκ генный сегмент человека представляет собой IGκJ5 (например, IGκJ5*01).
В любой из концепций 12 и 12а Vκ и Jκ генные сегменты являются такими, как описано в комбинациях антител в таблице 5 ниже. В одном варианте реализации, легкая цепь антитела получена из комбинации IGKV1 D (например, IGKV1D-12, такой как IGKV1D-12*02) и IGKJ3 (например, IGKJ3*01). В одном варианте реализации, легкая цепь антитела получена из комбинации IGKV4 (например, IGKV4-1, такой как IGKV14-1*01) и IGKJ2 (например, IGKJ2*04). В одном варианте реализации, легкая цепь антитела получена из комбинации IGKV1 (например, IGKV1-17, такой как IGKV1-17*01) и IGKJ1 (например, IGKJ1*01). В одном варианте реализации, легкая цепь антитела получена из комбинации IGKV1D (например, IGKV1D-12, такой как IGKV1D-12*02) и IGKJ4 (например, IGKJ4*01). В одном варианте реализации, легкая цепь антитела получена из комбинации IGKV1 (например, IGKV1-9, такой как IGKV1-9*d01) и IGKJ5 (например, IGKJ5*01). В одном варианте реализации, легкая цепь антитела получена из комбинации IGKV1D (например, IGKV1D-12, такой как IGKV1D-12*02) и IGKJ5 (например, IGKJ5*01).
Концепция 13. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 1D05.
Концепция 13а. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 84G09.
Концепция 13b. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 411В08.
Концепция 13с. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 411С04.
Концепция 13d. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 411D07.
Концепция 13е. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 385F01.
Концепция 13f. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 386Н03.
Концепция 13g. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 389А03.
Концепция 13h. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 413D08.
Концепция 13i. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 413G05.
Концепция 13j. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 413F09.
Концепт 13k. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 414В06.
Концепт 13l. Антитело или его фрагмент, которые специфически связываются с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 416Е01.
Антитела, описанные в этих концепциях, имеют последовательности, описанные выше.
В одном варианте реализации, предлагается антитело, специфически связывающееся с эпитопом, который по существу подобен эпитопу, с которым связывается любое из антител в концепции 13, 13а-13l.
Контактные аминокислотные остатки, участвующие во взаимодействии антитела и антигена, могут быть определены различными способами, известными специалистам в данной области.
В одном варианте реализации, последовательная замена аминокислот антигенной последовательности (с использованием стандартных методов молекулярной биологии для мутации ДНК кодирующей последовательности антигена), в этом случае hPD-L1 с аланином (аланиновое сканирование) или другой неродственной аминокислотой, может содержать остатки, мутация которых будет уменьшать или устранять способность антитела распознавать рассматриваемый антиген. Связывание может быть оценено с использованием стандартных методов, таких как, без ограничений, SPR, HTRF, ИФА (которые описаны в другой части данного документа). Могут быть сделаны другие замены для усиления нарушения связывания, такого как изменение заряда боковой цепи аминокислот антигенной последовательности (например, замена лизина на глутаминовую кислоту), взаимные замены полярных и неполярных остатков (например, замена серина на лейцин). Аланиновое сканирование или другой способ замещения аминокислот могут быть проведены либо с рекомбинантным растворимым антигеном, либо в том случае, когда мишень является мишенью клеточной мембраны, непосредственно на клетках с использованием транзиентной или стабильной экспрессии мутированных версий.
В одном варианте реализации, кристаллография белка может использоваться для определения контактных остатков между антителом и антигеном (т.е. для определения эпитопа, с которым связывается антитело), кристаллография позволяет непосредственно визуализировать контактные остатки, участвующие в взаимодействии антитело-антиген. Как и стандартная рентгеновская кристаллография, криоэлектронная микроскопия использовалась для определения контактных остатков антител и белка капсида ВИЧ (см. Lee, Jeong Hyun, et al. "Antibodies to a conformational epitope on gp41 neutralize HIV-1 by destabilizing the Env spike", Nature communications, 6, (2015)).
В одном варианте реализации, если антитело распознает линейный эпитоп, могут быть получены короткие пептиды на основе последовательности антигена, и связывание антитела с этими пептидами можно проанализировать с использованием стандартных методов, таких как, без ограничений, SPR, HTRF, ИФА (которые описаны в другой части данного документа). Дальнейшее исследование эпитопа может быть обеспечено путем проведения аланинового сканирования на любых пептидах, которые демонстрируют связывание. Альтернативу линейным пептидам, конформационное сканирование может быть выполнено с использованием технологии Pepscan (http://www.pepscan.com/) с использованием их химического связывания пептидов со скаффолдом, которая была использована для определения прерывистых эпитопов на антителах, нацеленных на CD20 (Niederfellner, Gerhard, et al. "Epitope characterization and crystal structure of GA101 provide insights into the molecular basis for type I/II distinction of CD20 antibodies.", Blood, 118.2, (2011), 358-367.).
В одном варианте реализации, для идентификации связывающих эпитопов могут быть использованы ограниченное протеолитическое расщепление и масс-спектрофотометрия. Комплекс антитело-антиген гидролизуется протеазой, такой как, без ограничений, трипсин. Гидролизованные комплексные пептиды сравнивают с результатами масс-спектрофотометрии отдельно взятых продуктов гидролиза антитела и антигена, чтобы определить, защищен ли конкретный эпитоп комплексообразованием. Дальнейшую работу по замещению аминокислот, конкурентному связыванию, можно затем использовать для выделения отдельных аминокислотных остатков, участвующих в взаимодействии (см., например, Suckau, Detlev, et al. "Molecular epitope identification by limited proteolysis of an immobilized antigen-antibody complex and mass spectrometric peptide mapping.", Proceedings of the National Academy of Sciences, 87.24, (1990), 9848-9852).
Таким образом, в одном варианте реализации, контактные остатки эпитопа идентифицируют путем сканирования неродственной аминокислотой (например, сканирования аланином). В другом варианте реализации, сканирование неродственной аминокислотой (например, сканирование аланином) проводят с использованием технологии, выбранной из SPR, HTRF, ИФА, рентгеновской кристаллографии, криоэлектронной микроскопии и комбинации ограниченного протеолитического расщепления и масс-спектрометрии. В одном варианте реализации, сканирование неродственной аминокислотой (например, сканирование аланином) проводят с использованием HTRF. В одном варианте реализации, сканирование неродственной аминокислотой (например, сканирование аланином) проводят с использованием ИФА.
Когда сканирование аланином проводят методом ИФА или HTRF, аминокислотный остаток идентифицируют как участвующий в образовании эпитопа, если снижение сигнала составляет по меньшей мере 25%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 30%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 35%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 40%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 45%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 50%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 55%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 60%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 70%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 75%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 80%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 85%. В одном варианте реализации, уменьшение сигнала составляет по меньшей мере 90%.
Когда сканирование аланином проводят методом SPR, аминокислотный остаток идентифицируют как участвующий в образовании эпитопа, если наблюдается по меньшей мере 10-кратное уменьшение аффинности. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 15-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 20-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере в 30-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 40-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 50-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности составляет, по меньшей мере, 100-кратным.
В одном варианте реализации, контактные остатки эпитопа идентифицируют методом рентгеновской кристаллографии. В одном варианте реализации, контактные остатки эпитопа идентифицируют методом криоэлектронной микроскопии. В одном варианте реализации, контактные остатки эпитопа идентифицируют комбинацией ограниченного протеолитического расщепления и масс-спектрометрии.
Концепция 14. Антитело или фрагмент согласно концепции 13, где эпитоп идентифицируют сканированием неродственной аминокислотой или рентгеновской кристаллографией.
Концепция 15. Антитело или фрагмент согласно концепции 14, где контактные остатки эпитопа определяют по снижению аффинности по меньшей мере в 10 раз при сканировании неродственной аминокислотой, например, сканировании аланином, по результатам определения методом SPR.
В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 15-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 20-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере в 30-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 40-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности является по меньшей мере 50-кратным. В одном варианте реализации, уменьшение аффинности составляет, по меньшей мере, 100-кратным.
SPR может проводиться, как описано выше.
Концепция 16. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 1D05.
Конкуренция может определяться методом поверхностного плазменного резонанса (SPR), причем такие методики легко доступны квалифицированному специалисту. SPR может проводиться с использованием Biacore™, Proteon™ или другого стандартного метода SPR. Такая конкуренция может быть вызвана, например, связыванием антител или фрагментов с идентичными или перекрывающимися эпитопами hPD-L1. В одном варианте реализации, конкуренцию определяют методом ИФА, причем такие методы легко доступны квалифицированному специалисту. В одном варианте реализации, конкуренцию определяют методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF), причем такие методы легко доступны квалифицированному специалисту. В одном варианте реализации, конкуренцию определяют с помощью сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS), причем такие методы легко доступны квалифицированному специалисту. В одном варианте реализации, конкуренцию определяют методом интерферометрии биослоя (BLI) ForteBio Octet®, причем такие методы легко доступны квалифицированному специалисту.
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент конкурируют (например, зависимым от дозы образом) с hPD-1 (или его гибридным белком) для связывания с экспрессируемым на поверхности hPD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент конкурируют (например, зависимым от дозы образом) с hPD-1 (или его гибридным белком) за связывание с растворимым hPDL-1.
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент частично или полностью ингибируют связывание PD-1 и/или CD80 с экспрессируемым на клеточной поверхности PD-L1, таким как hPD-L1. В другом варианте реализации, антитело или фрагмент частично или полностью ингибируют связывание hPD-1 и/или CD80 с растворимым hPD-L1. В некоторых вариантах реализации, антитело или фрагмент частично или полностью увеличивают секрецию IFNγ, CD25 и IL-2 из клетки с поверхностно-экспрессируемым PD-1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент частично или полностью ингибируют связывание CD80 с растворимым hPD-L1, но не обнаруживают какого-либо детектируемого ингибирования связывания PD-1 с экспрессируемым на поверхности клетки PD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент частично или полностью ингибируют связывание CD80 с растворимым hPD-L1, но не обнаруживают какого-либо детектируемого ингибирования связывания PD-1 с растворимым PD-L1.
В используемом в данном документе значении, термин «ингибирует», «ингибирование», «ингибирующий» и т.п., в используемом в данном документе значении, относится к способности антагониста (например, антитела или его фрагмента) связываться с эпитопом, который либо частично, либо полностью предотвращает связывание рецептора (например, CD80 или PD-1) с лигандом (например, PD-L1). Если эпитоп, с которым связывается антагонист, полностью блокирует сайт связывания лиганда, то связывание лиганда полностью предотвращается (что может быть физической блокировкой - в случае перекрывающихся эпитопов, или стерической блокировкой - когда антагонист является настолько большим, что он препятствует связыванию лиганда с его особым эпитопом), и лиганд не удаляется из кровообращения. Таким образом, концентрация циркулирующего лиганда может быть увеличена. Если эпитоп, с которым связывается антагонист, частично блокирует сайт связывания лиганда, лиганд может быть способен связываться, но только слабо (в случае частичного ингибирования) или в ориентации, отличной от естественного взаимодействия связывания. В этом случае, некоторая часть лиганда может быть удалена из кровообращения, но не в таком количестве, как при полностью свободном и доступном для связывания сайте связывания лиганда. Таким образом, ингибирование относится к физическому взаимодействию лиганда и рецептора. Ингибирование можно измерить с помощью HTRF, который более подробно описан в другой части данного документа и у Mathis (1995) Clinical Chemistry 41 (9), 1391-1397. Ингибирование также может быть измерено методом проточной цитометрии, где рецептор экспрессируется на клетках, или методом ИФА, где рецептор адсорбируется на планшетах.
Концепция 16а. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 84G09.
Концепция 16b. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 411В08.
Концепция 16с. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 411С04.
Концепция 16d. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 411D07.
Концепция 16е. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 385F01.
Концепция 16f. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 386Н03.
Концепция 16g. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 389А03.
Концепция 16h. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 413D08.
Концепция 16i. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 413G05.
Концепция 16j. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 413F09.
Концепция 16k. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 414В06.
Концепция 16l. Антитело или его фрагмент, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 416Е01.
Антитела имеют последовательности, описанные выше.
Концепция 17. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 10-16, где домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17а: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, и в случае зависимости от концепции 16 оно зависит от концепции 16а), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 9 или 12, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 9 или 12, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17b: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 54 или 57, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 54 или 57, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17с: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13 с, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 74 или 77, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 74 или 77, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17d: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d), в которой VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 94 или 97, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 94 или 97, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17е: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13е, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16е), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 114 или 117, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 114 или 117, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17f: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f), в которой домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 144 или 147, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 144 или 147, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17g: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 174 или 177, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 174 или 177, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17h: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 134 или 137, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 134 или 137, содержащую 5 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17i: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 240 или 243, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 240 или 243, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17j: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 260 или 263, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 260 или 263, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17k: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k), при этом VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 280 или 283 или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 280 или 283, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 17l: Антитело или его фрагмент согласно любой из концепций 10-16 (но в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, и в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l), при этом домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 345 или 348, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 345 или 348, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 18. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, в которых домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 или 30, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 или 30, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещения.
Концепция 18а: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9а, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16а, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17а), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 7 или 10, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 7 или 10 содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18b: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9b, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17b), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 52 или 55, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 52 или 55, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18с: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9с, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13с, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17с), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 72 или 75, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 72 или 75, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18d: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9d, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17d), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 92 или 95, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 92 или 95, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18е: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9е, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13е, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16е, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17е), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 112 или 115, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 112 или 115, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18f: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9f, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17f), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 142 или 145, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 142 или 145, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18g: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9g, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17g), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 172 или 175, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 172 или 175, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18h: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9h, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17h), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 132 или 135, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 132 или 135, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18i: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9i, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17i), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 238 или 241, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 238 или 241, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18j: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9j, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17j), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 258 или 261, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 258 или 261, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18k: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9k, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17k), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 278 или 281, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 278 или 281, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 18l: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9l, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l, и в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17l), где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 343 или 346, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 343 или 346, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, в которых домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 или 31, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 или 31, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 19а: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9а, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16а, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17а, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18а), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 8 или 11, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 8 или 11, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 19b: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9b, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17b, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18b), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 53 или 56, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 53 или 56, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19с: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9с, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13с, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17с, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18с), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 73 или 76, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 73 или 76, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19d: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9d, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17d, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18d), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 93 или 96, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 93 или 96, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19е: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9е, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13е, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16е, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17е, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18е), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 113 или 116, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 113 или 116, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19f: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9f, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17f, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18f), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 143 или 146, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 143 или 146, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19g: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9g, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17g, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18g), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 173 или 176, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 173 или 176, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотную замену (и).
Концепция 19h: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9h, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17h, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18h), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 133 или 136, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 133 или 136, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19i: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9i, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17i, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18i), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 239 или 242, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 239 или 242, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19j: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9j, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17j, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18j), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 259 или 262, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 259 или 262, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19k: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9k, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17k, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18k), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 279 или 282, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 279 или 282, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 19l: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9l, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17l, и в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18l), где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 344 или 347, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 344 или 347, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 20. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 33.
Концепция 20а: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9а, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16а, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17а, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18а, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19а), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 13.
Концепция 20b: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9b, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17b, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18b, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19b), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 58.
Концепция 20c: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9с, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13с, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17с, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18с, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19с), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 78.
Концепция 20d: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9d, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17d, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18d, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19d), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 98.
Концепция 20е: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9е, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13е, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16е, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17е, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18е, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19е), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 118.
Концепция 20f: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9f, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17f, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18f, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19f), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 158 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 158.
Концепция 20g: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9g, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17g, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18g, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19g), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 178.
Концепция 20h: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9h, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17h, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18h, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19h), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 138.
Концепция 20i: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9i, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17i, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18i, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19i), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 244.
Концепция 20j: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9j, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17j, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18j, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19j), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 264.
Концепция 20k: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9k, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17k, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18k, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19k), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 284.
Понятие 20l: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9l, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17l, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18l, и в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19l), где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 349 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 349.
В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 70% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 75% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 95% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 96% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 97% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 98% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99,5% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID.
Концепция 21. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, включающие первую и вторую копии указанного домена VH.
Концепция 22. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 или 40, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 или 40, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 22а: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9а, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16а, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17а, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18а, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19а, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20а), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 17 или 20 или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 17 или 20, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 22b: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9b, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17b, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18b, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19b, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20b), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 62 или 65, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 62 или 65, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 22с: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9с, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13с, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17с, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18с, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19с, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20с), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 82 или 85, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 82 или 85, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений,
Концепция 22d: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9d, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17d, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18d, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19d, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20d), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 102 или 105, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 102 или 105, содержащую 5 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 22е: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9е, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13e, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16e, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17e, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18е, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19е, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20е), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 122 или 125 или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 122 или 125, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 22f: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9f, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17f, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18f, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19f, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20f), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 162 или 165, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 162 или 165, содержащую 5 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 22g: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9g, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17g, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18g, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19g, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20g), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 182 или 185 или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 182 или 185, содержащую 5 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 22h: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9h, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17h, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18h, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19h, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20h), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 142 или 145, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 142 или 145, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 22i: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9i, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17i, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18i, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19i, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20i), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 248 или 251 или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 248 или 251, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 22j: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9j, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17j, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18j, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19j, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20j), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 268 или 271, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 268 или 271, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 22k: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9k, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17k, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18k, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19k, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20k), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 288 или 291, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 288 или 291, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 22l: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9l, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17l, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18l, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19l, и в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20l), содержащие домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 353 или 356, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 353 или 356, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений,
Концепция 23. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 или 41, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 или 41, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений, например, последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 50.
Концепция 23а: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9а, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16а, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17а, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18а, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19а, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20а, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22а), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 18 или 21, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 18 или 21, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений.
Концепция 23b: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9b, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17b, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18b, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19b, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20b, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22b), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 63 или 66, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 63 или 66, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 23с: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9с, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13с, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17с, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18с, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19с, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20с, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22с), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 83 или 86, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 83 или 86, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 23d: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9d, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17d, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18d, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19d, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20d, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22d), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 103 или 106, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 103 или 106, содержащую одну аминокислотную замену.
Концепция 23е: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9e, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13e, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16е, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17е, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18е, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19е, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20е, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22е), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 123 или 126, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 123 или 126, содержащую одну аминокислотную замену.
Концепция 23f: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9f, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17f, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18f, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19f, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20f, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22f), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 153 или 156 или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 153 или 156, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 23g: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9g, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17g, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18g, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19g, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20g, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22g), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 183 или 186, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 183 или 186, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 23h: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9h, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17h, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18h, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19h, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20h, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22h), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 143 или 146, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 143 или 146, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 23i: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9i, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17i, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18i, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19i, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20i, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22i), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 249 или 252, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 249 или 252, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 23j: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9j, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17j, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18j, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19j, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20j, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22j), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 269 или 272, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 269 или 272, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 23k: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9k, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17k, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18k, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19k, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20k, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22k), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 289 или 292, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 289 или 292, содержащую одну аминокислотную замену.
Концепция 23l: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9l, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17l, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18l, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19l, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20l, и в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22l), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL2 из SEQ ID NO: 354, или 357, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 354 или 357, содержащую одно аминокислотное замещение.
Концепция 24. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 или 42, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 или 42, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24а: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9а, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16а, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17а, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18а, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19а, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20а, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22а, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23а), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 19 или 22, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 19 или 22, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24b: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9b, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17b, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18b, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19b, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20b, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22b, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23b), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 64 или 67, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 64 или 67, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24с: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9с, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13с, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17с, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18с, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19с, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20с, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22с, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23с), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 84 или 87, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 84 или 87, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24d: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9d, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17d, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18d, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19d, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20d, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22d, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23d), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 104 или 107, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 104 или 107, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24е: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9е, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13е, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16е, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17е, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18е, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19е, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20е, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22е, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23е), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 124 или 127, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 124 или 127, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24f: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9f, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17f, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18f, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19f, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20f, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22f, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми концепции 23f), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 164 или 167, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 164 или 167, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24g: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9g, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17g, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18g, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19g, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20g, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22g, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23g), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 184 или 187, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 184 или 187, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24h: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9h, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17h, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18h, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19h, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20h, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22h, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23h), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 144 или 147, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 144 или 147, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24i: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9i, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17i, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18i, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19i, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20i, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22i, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23i), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 250 или 253, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 250 или 253, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24j: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9j, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17j, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18J, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19j, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20j, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22j, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23j), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 270 или 273, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 270 или 273, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24k: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9k, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17k, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18k, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19k, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20k, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22k, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23k), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 290 или 293, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 290 или 293, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 24l: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9l, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17l, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18l, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19l, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20l, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22l, и в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23l), содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 355 или 358, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 355 или 358, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
Концепция 25. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, содержащие (а) или указанный домен VL, где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85% или по меньшей мере на 90%), идентичную SEQ ID NO: 43 (например, последовательность домена VL в последовательности легкой цепи, представленной SEQ ID NO: 50, 51 или 298).
Концепция 25а: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9а, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13а, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16а, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17а, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18а, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19а, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20а, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22а, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23а, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24а), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 23.
Концепция 25b: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9b, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13b, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16b, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17b, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18b, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19b, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20b, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22а, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23b, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24b), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 68.
Концепция 25с: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9с, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13с, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16с, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17с, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18с, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19с, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20с, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22с, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23с, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24с), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 88.
Концепция 25d: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9d, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13d, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16d, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17d, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18d, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19d, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20d, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22d, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23d, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24d), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 108.
Концепция 25е: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9е, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13е, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16е, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17е, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18е, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19е, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20е, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22е, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23е, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24е), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 128.
Концепция 25f: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9f, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13f, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16f, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17f, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18f, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19f, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20f, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22f, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23f, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24f), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 168.
Концепция 25g: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9g, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13g, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16g, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17g, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18g, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19g, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20g, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22g, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23g, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24g), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 188.
Концепция 25h: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9h, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13h, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16h, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17h, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18h, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19h, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20h, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22h, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23h, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24h), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 148.
Концепция 25i: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9i, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13i, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16i, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17i, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18i, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19i, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20i, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22i, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23i, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24i), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 254.
Концепция 25j: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9j, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13j, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16j, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17j, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18j, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19j, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20j, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22j, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23j, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24j), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 274 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 274.
Концепция 25k: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9k, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13k, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16k, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17k, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18k, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19k, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20k, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22k, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23k, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24k), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 294 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 294.
Концепция 25l: Антитело или его фрагмент согласно любой предшествующей концепции (но в случае зависимости от концепции 9, они являются зависимыми от концепции 9l, в случае зависимости от концепции 13, они являются зависимыми от концепции 13l, в случае зависимости от концепции 16, они являются зависимыми от концепции 16l, в случае зависимости от концепции 17, они являются зависимыми от концепции 17l, в случае зависимости от концепции 18, они являются зависимыми от концепции 18l, в случае зависимости от концепции 19, они являются зависимыми от концепции 19l, в случае зависимости от концепции 20, они являются зависимыми от концепции 20l, в случае зависимости от концепции 22, они являются зависимыми от концепции 22l, в случае зависимости от концепции 23, они являются зависимыми от концепции 23l, и в случае зависимости от концепции 24, они являются зависимыми от концепции 24l), где домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 359 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере на 85%, или по меньшей мере на 90%) идентичную SEQ ID NO: 359.
В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 70% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 75% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 95% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 96% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 97% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 98% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99,5% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID.
Концепция 26. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 12-21, включающие первую и вторую копии (а) или указанного домена VL.
Концепция 27. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, которые специфически связываются с PD-L1 яванского макака, представленным SEQ ID NO: 2.
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью менее 1 нМ (например, от 1 нМ до 0,01 пМ или от 1 нМ до 0,1 пМ или от 1 нМ до 1 пМ). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью менее 10 нМ (например, от 10 нМ до 0,01 пМ или от 10 нМ до 0,1 пМ или от 10 нМ до 1 пМ). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью менее 0,1 нМ (например, от 0,1 нМ до 0,01 пМ или от 0,1 нМ до 0,1 пМ или от 0,1 нМ до 1 пМ). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью менее 0,01 нМ (например, от 0,011 нМ до 0,01 пМ или от 0,01 нМ до 0,1 пМ).
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью, не превышающей 2-кратную аффинность к hPD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью, не превышающей 4-кратную аффинность к hPD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью, не превышающей 5-кратную аффинность к hPD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью, не превышающей 6-кратную аффинность к hPD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью, не превышающей 8-кратную аффинность к hPD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с PD-L1 яванского макака с аффинностью, не превышающей 10-кратную аффинность к hPD-L1.
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент не связываются детектируемо с PD-L1 яванского макака. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент не связываются детектируемо с мышиным PD-L1.
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с мышиным PD-L1 с аффинностью менее 1 нМ (например, от 1 нМ до 0,01 пМ или от 1 нМ до 0,1 пМ или от 1 нМ до 1 пМ). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с мышиным PD-L1 с аффинностью менее 10 нМ (например, от 10 нМ до 0,01 пМ или от 10 нМ до 0,1 пМ или от 10 нМ до 1 пМ). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с мышиным PD-L1 с аффинностью менее 0,1 нМ (например, от 0,1 нМ до 0,01 пМ или от 0,1 нМ до 0,1 пМ или от 0,1 нМ до 1 пМ). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент связываются с мышиным PD-L1 с аффинностью менее 0,01 нМ (например, от 0,011 нМ до 0,01 пМ или от 0,01 нМ до 0,1 пМ).
Концепция 28. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, где антитело или фрагмент содержат легкую цепь каппа.
Аминокислотные и нуклеотидные последовательности константной области легкой цепи каппа представлены в SEQ ID NOs: 206-215.
В одном варианте реализации, легкая цепь может быть легкой цепью лямбда. Аминокислотные и нуклеотидные последовательности константного участка легкой цепи лямбда представлены в SEQ ID NOs: 216-237 и SEQ ID NO: 535, SEQ ID NO: 536 и SEQ ID NO: 538.
Концепция 29. Антитело или фрагмент согласно любой из концепций 9-28, где аминокислотные замещения представляют собой консервативные аминокислотные замещения, где, необязательно, консервативные заместители относятся к одной из шести групп (каждая группа, включает аминокислоты, являющиеся консервативными замещениями друг для друга), выбранных из:
1) аланин (А), серин (S), треонин (Т);
2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е);
3) аспарагин (N), глутамин (Q);
4) аргинин (R),лизин (K);
5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), валин (V); и
6) фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W).
Консервативные замены могут быть такими, как описано выше в концепции 9.
Концепция 30. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, в которых антитело или фрагмент содержат константную область, такую как константная область человека, например, нуль-эффекторная (effector-null) константная область человека, например, константная область IgG4 или константная область IgG1, где, необязательно, константная область представляет собой IgG4-PE (SEQ ID NO: 199) или инактивированный IgG1, представленный SEQ ID NO: 205.
В других вариантах реализации, антитело или фрагмент представляют собой любые из изотипов или константных областей, как было определено выше. В одном варианте реализации, константная область представляет собой IgG1 человека дикого типа (SEQ ID NO: 340). Например, константная область представляет собой константную область IgG1 с активированным эффектором, необязательно, обладающую ADCC (опосредованная антителами клеточная цитотоксичность) и/или CDC (комплементзависимая цитотоксичность) активностью. В одном варианте реализации, константная область сконструирована для улучшения ADCC и/или CDC и/или ADCP (антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз). В другом варианте реализации, константная область модифицирована для улучшения эффекторной функции.
Константная область IgG4 может быть любой из аминокислотных последовательностей константной области IgG4, или может кодироваться любой из последовательностей нуклеиновой кислоты SEQ ID NOs: 192-203. Константной областью тяжелой цепи может быть IgG4, содержащий как мутацию Leu235Glu, так и мутацию Ser228Pro. Такая константная область тяжелой цепи IgG4-PE (SEQ ID NOs: 198, кодируемая SEQ ID NOs: 199, 200 и 201) является нуль-эффекторной.
Альтернативной нуль-эффекторной константной областью человека является инактивированный IgG1, представляющий собой аллель IgG1*01, содержащий мутации L235A и/или G237A (например, LAGA, SEQ ID NO: 204, кодируемый SEQ ID NO: 205). В одном варианте реализации, антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, содержат константную область тяжелой цепи IgG1, где последовательность содержит аланин в положении 235 и/или 237 (нумерация по индексу EU).
Механизм антителозависимого клеточно-опосредованного фагоцитоза (ADCP) описан в GUI et al., "Antibody-Dependent Phagocytosis of Tumor Cells by Macrophages: A Potent Effector Mechanism of Monoclonal Antibody Therapy of Cancer", Cancer Res., 75(23), December 1, 2015.
Действенность Fc-опосредованных эффектов может быть усилена путем модификации домена Fc различными установленными методами. Такие методы повышают аффинность к определенным Fc-рецепторам, тем самым создавая потенциальные разнообразные профили усиления активации. Такой результат может быть достигнут путем модификации одного или нескольких аминокислотных остатков (например, как описано в Lazar et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., Mar 14; 103(11):4005-10; раскрытые в этом документе модификации включены в данный документ посредством ссылок). Было показано, что константные области IgG1 человека, содержащие определенные мутации или имеющие измененное гликозилирование на остатке Asn297 (например, N297Q, нумерация по индексу EU), улучшают связывание с Fc-рецепторами. В одном варианте реализации, такие мутации касаются одного или нескольких остатков, выбранных из 239, 332 и 330, для константных областей IgG1 человека (или эквивалентных положений в других изотипах IgG). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент содержат константную область IgG1 человека, имеющую одну или несколько мутаций, независимо выбранных из N297Q, S239D, I332E и A330L (нумерация по индексу EU).
В другом варианте реализации, увеличение аффинности к Fc-рецепторам достигается в результате изменения естественного профиля гликозилирования Fc-домена путем, например, генерации вариантов с пониженной степенью фукозилирования (under fucosylated) или дефукозилированных вариантов (как описано в Natsume et al., 2009, Drug Des Devel. Ther., 3:7-16, или Zhou Q., Biotechnol. Bioeng., 2008, Feb 15, 99 (3): 652-65, раскрытые в этих документах модификации включены в данный документ посредством ссылок). Нефукозилированные антитела содержат триманнозильную коровую структуру N-гликанов комплексного типа Fc без остатка фукозы. Эти антитела с модифицированной схемой гликозилирования, не содержащие корового остатка фукозы из N-гликанов Fc, могут проявлять более сильный ADCC, чем фукозилированные эквиваленты, из-за усиления связывающей способности FcγRIIIa. Например, для увеличения ADCC, остатки в области шарнира могут быть изменены для увеличения связывания с Fc-γRIII (см., например, Shields et al., 2001, J. Biol. Chem., Mar 2; 276(9):6591-604; раскрытые в этом документе модификации включены в данный документ посредством ссылок). Таким образом, в одном варианте реализации, антитело или фрагмент содержат константную область тяжелой цепи человеческого IgG, которая представляет собой вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG дикого типа, причем вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG связывается с человеческими рецепторами Fcγ, выбранными из группы, состоящей из FcγRIIB и FcγRIIA, с более высокой аффинностью, чем при связывании константной области тяжелой цепи человеческого IgG дикого типа с человеческими рецепторами Fcγ. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент содержат константную область тяжелой цепи человеческого IgG, которая представляет собой вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG дикого типа, причем вариант константной области человеческого IgG человека связывается с FcγRIIB человека с большей аффинностью, чем при связывании константной области тяжелой цепи человеческого IgG дикого типа с человеческим FcγRIIB. В одном варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи IgG человека представляет собой вариант IgG1 человека, вариант IgG2 человека или вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG4. В одном варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи IgG человека содержит одну или несколько аминокислотных мутаций, выбранных из G236D, P238D, S239D, S267E, L328F и L328E (система нумерации по индексу EU). В другом варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG содержит набор аминокислотных мутаций, выбранных из группы, состоящей из: S267E и L328F; P238D и L328E; P238D и одно или несколько замещений, выбранных из группы, состоящей из E233D, G237D, H268D, P271G и A330R; P238D, E233D, G237D, H268D, P271G и A330R; G236D и S267E; S239D и S267E; V262E, S267E и L328F; и V264E, S267E и L328F (система нумерации по индексу EU). В другом варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG дополнительно содержит одну или несколько мутаций аминокислот, которые уменьшают аффинность IgG к FcγRIIIA человека, FcγRIIA человека или FcγRI человека. В одном варианте реализации, FcγRIIB экспрессируется на клетке, выбранной из группы, состоящей из макрофагов, моноцитов, В-клеток, дендритных клеток, эндотелиальных клеток и активированных Т-клеток. В одном варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG содержит одну или несколько следующих аминокислотных мутаций G236A, S239D, F243L, Т256А, К290А, R292P, S298A, Y300L, V305I, A330L, I332E, ЕЗЗЗА, К334А, А339Т и P396L (система нумерации по индексу EU). В одном варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG содержит набор аминокислотных мутаций, выбранных из группы, состоящей из: S239D; Т256А; K290A; S298A; I332E; Е333А; K334A; А339Т; S239D и I332E; S239D, A330L и I332E; S298A, Е333А и K334A; G236A, S239D и I332E; и F243L, R292P, Y300L, V305I и P396L (система нумерации по индексу EU). В одном варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG содержит аминокислотные мутации S239D, A330L или I332Е (система нумерации по индексу EU). В одном варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG содержит аминокислотные мутации S239D и I332Е (система нумерации по индексу EU). В одном варианте реализации, вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG представляет собой вариант константной области тяжелой цепи человека IgG1, содержащий аминокислотные мутации S239D и I332Е (система нумерации по индексу EU). В одном варианте реализации, антитело или фрагмент содержат афукозилированную область Fc. В другом варианте реализации, антитело или его фрагмент являются дефукозилированными. В другом варианте реализации, антитело или фрагмент имеют пониженную степень фукозилирования.
В другом варианте реализации, раскрытые в данном документе антитела и фрагменты могут содержать тройную мутацию (M252Y/S254T7T256E), которая усиливает связывание с FcRn. См. Dall et al., Immunol 2002; 169: 5171-5180, обсуждение влияния мутаций со связыванием FcRn приведено в таблице 2, описанные в этом документе мутации включены в данный документ посредством ссылок.
В равной степени, усиление CDC может быть достигнуто за счет аминокислотных замен, которые увеличивают аффинность к C1q, первому компоненту классического каскада активации комплемента (см. Idusogie et al., J. Immunol., 2001, 166: 2571-2575; описанные модификации включены в данный документ посредством ссылок). Другой подход заключается в создании химерного домена Fc, созданного из сегментов человеческого IgG1 и человеческого IgG3, которые используют более высокую аффинность IgG3 к C1q (Natsume et al., 2008, Cancer Res., 68: 3863-3872; модификации включены в данный документ посредством ссылок). В другом варианте реализации, раскрытые в данном документе антитела или фрагменты антител могут содержать мутированные аминокислоты в остатках 329, 331 и/или 322 для изменения связывания C1q и/или снижения или уничтожения активности CDC. В другом варианте реализации, антитела или фрагменты антител, раскрытые в данном документе, могут содержать Fc-области с модификациями в остатках 231 и 239, в результате чего аминокислоты заменяют с целью изменения способности антитела фиксировать комплемент. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент имеет константную область, содержащую одну или несколько мутаций, выбранных из E345K, E430G, R344D и D356R, в частности, двойную мутацию, содержащую R344D и D356R (система нумерации по индексу EU).
Антитело может иметь константную область тяжелой цепи, которая связывает один или несколько типов Fc-рецептора, но не индуцирует клеточные эффекторные функции, то есть, которая не опосредует активность ADCC, CDC или ADCP. Такая константная область может быть неспособна связывать специфический Fc-рецептор (рецепторы), ответственный за запуск активности ADCC, CDC или ADCP. Антитело может иметь константную область тяжелой цепи, которая не связывает рецепторы Fcγ. Таким образом, в одном варианте реализации, константная область может содержать мутацию Leu235Glu (система нумерации по индексу EU).
В другом варианте реализации, антитела и фрагменты, раскрытые в данном документе, модифицированы для увеличения или уменьшения периода полувыведения из сыворотки. В одном варианте реализации, вводят одну или несколько из следующих мутаций: T252L, T254S или T256F, для увеличения биологического периода полувыведения антитела. Биологический период полувыведения также может быть увеличен путем изменения домена CH1 константной области тяжелой цепи или области CL с целью введения эпитопа связывания рецептора реутилизации, взятого из двух петель домена СН2 Fc-области IgG, как описано в патентах США №№5869046 и 6121022, причем раскрытые в этом документе модификации включены в данный документ посредством ссылок. В другом варианте реализации, шарнирную область Fc антитела или антигенсвязывающего фрагмента по изобретению мутируют для уменьшения биологического периода полувыведения антитела или фрагмента. Одну или несколько аминокислотных мутаций вводят в область интерфейса домена СН2-СН3 фрагмента Fc-шарнира, так чтобы антитело или фрагмент имели нарушенное связывание со стафилококковым (Staphylococcyl) белком A (SpA) по сравнению со связыванием нативного SpA с шарнирным доменом Fc. Специалистам в данной области известны другие способы увеличения периода полувыведения из сыворотки. Так, в одном варианте реализации, антитело или фрагмент пегилируют. В другом варианте реализации, антитело или фрагмент сливают с альбуминсвязывающим (albumin-binding) доменом, например, альбуминсвязывающим однодоменным антителом (dAb). В другом варианте реализации, антитело или фрагмент ПАСилируют (PASylated) (т.е. проводят сплайсинг (genetic fusion) полипептидных последовательностей, состоящих из PAS (XL-Protein GmbH), которые образует незаряженные структуры неупорядоченных клубков с большим гидродинамическим объемом). В другом варианте реализации, антитело или фрагмент представляют собой XTENylated®/rPEGylated продукты (т.е. проводят сплайсинг пептидной последовательности с неточными повторами (Amunix, Versartis) с терапевтическим пептидом). В другом варианте реализации, антитело или фрагмент представляют собой ELPylated продукты (т.е. проводят сплайсинг с последовательностью с ELP (эластин-подобный полипептид)-повторами (PhaseBio)). Различные такие гибридные продукты, позволяющие увеличить периоды полувыведения, описаны более подробно в Strohl, BioDrugs (2015) 29: 215-239, и эти гибридные продукты, например, приведенные в таблицах 2 и 6, включены в данный документ посредством ссылок.
Антитело может иметь модифицированную константную область, которая повышает стабильность. Так, в одном варианте реализации, константная область тяжелой цепи содержит мутацию Ser228Pro. В другом варианте реализации, раскрытые в данном документе антитела и фрагменты содержат шарнирную область тяжелой цепи, модифицированную с целью изменения числа цистеиновых остатков. Эта модификация может быть использована для облегчения сборки легкой и тяжелой цепей или для повышения или снижения стабильности антитела.
Концепция 31. Антитело или фрагмент согласно концепции 30, где константная область представляет собой константную область мыши.
В других вариантах реализации, константная область может быть получена от любого млекопитающего, не являющегося человеком, например, крысы, мыши, хомяка, морской свинки, собаки, кошки, лошади, курицы, ламы, дромадера и т.д. В одном варианте реализации, константная область представляет собой константную область крысы. В другом варианте реализации, константная область является константной областью ламы. Константная область мыши может быть любым из изотипов или аллелей, описанных выше.
Концепция 32. Антитело или фрагмент согласно концепции 30 или концепции 31, где константная область обладает активностью CDC и/или ADCC.
Концепция 33. Антитело согласно любой из предшествующих концепций, в котором:
a) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
b) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 43;
c) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
d) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
e) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
f) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 342, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
g) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
h) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
i) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
j) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
k) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 342, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
l) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
m) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
n) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
о) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
р) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 342, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
q) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
г) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
s) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
t) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
u) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 342, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
v) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68;
w) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 58, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 68;
х) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88;
у) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 78, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 88;
z) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108;
аа) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 98, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 108;
bb) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128;
cc) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 118, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 128;
dd) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 158, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168;
ее) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 158, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 168;
ff) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188;
gg) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 178, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 188;
hh) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148;
ii) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 138, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 148;
jj) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254;
kk) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 244, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 254;
ll) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 274;
mm) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 264, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 274;
nn) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 294; и
оо) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 284, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 294;
рр) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 349, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 359; и
qq) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 349, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 359.
В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 70% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 75% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 95% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 96% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 97% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 98% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99,5% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID.
Концепция 34. Антитело согласно любой из предшествующих концепций, где антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, и
a) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
b) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 35, и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 45;
c) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
d) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
e) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
f) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
g) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
h) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
i) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
j) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
k) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
l) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
m) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
n) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
о) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
р) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
q) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
r) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
s) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
t) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
u) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
v) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70;
w) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 60, и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 70;
х) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
у) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 80, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 90;
z) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110;
аа) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 100, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 110;
bb) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130;
cc) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 120, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 130;
dd) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170;
ее) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 160, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 170;
ff) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 190;
gg) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 180, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 190
hh) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 150;
ii) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 140, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 150;
jj) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 246, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256;
kk) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 246, и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 256;
ll) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 266, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 276;
mm) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 266, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 276;
nn) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 286, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 296; и
оо) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 286, и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 296;
рр) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 351, а аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 361; и
qq) аминокислотная последовательность тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 351, и аминокислотная последовательность легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 361,
В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 70% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 75% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 95% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 96% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 97% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 98% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99,5% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID.
Концепция 35. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, которые конкурируют за связывание с hPD-L1 с антителом 1D05, причем, необязательно, конкуренцию за связывание с hPD-L1 проводят с использованием метода SPR.
SPR может проводиться, как описано выше, или как описано в концепции 16.
Концепция 36. Антитело или фрагмент согласно любой из предшествующих концепций, в которых антитело или фрагмент способны ингибировать супрессию Т-клеток, опосредованное PD-L1, где, необязательно, супрессию Т-клеток измеряют по увеличению одного или нескольких показателей из IFNγ, IL-2, CD25 или пролиферации Т-клеток в анализе, обеспечивающем костимуляцию посредством прямой стимуляции CD3/CD28, стимуляции суперантигеном, или обеспечивающем костимуляцию путем совместной инкубации с клетками, способными индуцировать Т-клеточный ответ.
Измерения могут проводиться с использованием любой пригодной методики. Например, измерения могут проводиться с использованием ИФА, HTRF, включения BRDU (пролиферация), электрохемилюминесценции (ECL) или проточной цитометрии (например, FACS). Эти способы хорошо известны специалистам в данной области и описаны в других разделах данного документа. В одном варианте реализации, анализ представляет собой проточную цитометрию. В одном варианте реализации, анализ представляет собой ИФА. В одном варианте реализации, анализ представляет собой HTRF.
В одном варианте реализации, супрессию Т-клеток измеряется по увеличению IFNγ. В одном варианте реализации, супрессию Т-клеток измеряется по увеличению IL-2. В одном варианте реализации, супрессию Т-клеток измеряется по увеличению CD25. В одном варианте реализации, супрессию Т-клеток измеряется по увеличению IFNγ и IL-2. В одном варианте реализации, супрессию Т-клеток измеряется по увеличению IFNγ и CD25. В одном варианте реализации, супрессию Т-клеток измеряется по увеличению CD25 и IL-2. В одном варианте реализации, супрессию Т-клеток измеряется по увеличению IFNγ, IL-2 и CD25.
В одном варианте реализации, костимуляция обеспечивается прямой стимуляцией CD3/CD28.
В одном варианте реализации, костимуляция обеспечивается суперантигеном, таким как стафилококковый энтеротоксин В (SEB).
В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с клетками, способными индуцировать Т-клеточный ответ. Такие клетки могут представлять собой антигенпредставляющие клетки (АПК), например, моноциты, В-клетки или дендритные клетки. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с АПК. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с моноцитами. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с В-клетками. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с дендритными клетками.
Концепция 37. Биспецифическое антитело или гибридный белок, содержащие антитело или его фрагмент, как определено в любой предшествующей концепции.
Концепция 37а. Антитело с двойным связыванием или гибридный белок, содержащий антитело или его фрагмент, как определено в любой предшествующей концепции.
Антитело с двойным связыванием имеет значение, указанное выше.
Концепция 38. Биспецифическое антитело согласно концепции 37, где биспецифический формат выбран из DVD-Ig, mAb2, FIT-Ig, mAb-dAb, dock and lock, SEEDbody, scDiabody (одноцепочечное диатело)-Fc, диатело-Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутриклеточное антитело (intrabody), BiTE, диатело, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, Diabody-СН3, минитело, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, в частности, mAb2, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами и FIT-Ig, например, mAb2 и FIT-Ig.
В одном варианте реализации, биспецифический формат выбирают из DVD-Ig, mAb2, FIT-Ig, mAb-dAb, dock and lock, обмена Fab-плечо, SEEDbody, Triomab, LUZ-Y, Fcab, κλ-body, ортогонального Fab, scDiabody-Fc, диатело-Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутриклеточное антитело, BiTE, диатело, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, Diabody-СН3, тройное антитело (Triple body), миниантитело, минитело, минитело TriBi, scFv-СН3 KIH, scFv-CH-CL-scFv, F(ab')2- scFv, scFv-KIH, Fab-scFv-Fc, тетравалентный HCab, ImmTAC, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, DT-IgG, DutaMab, IgG(H)-scFv, scFv-(H) IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG-scFab, 2scFv-IgG, IgG-2scFv, scFv4-Ig и zybody.
В одном варианте реализации, биспецифический формат выбирают из DVD-Ig, FIT-Ig, mAb-dAb, dock and lock, обмена Fab-плечо, SEEDbody, Triomab, LUZ-Y, Fcab, κλ-body, ортогонального Fab, scDiabody-Fc, диатело-Fc, тандема scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутриклеточного антитела, BiTE, диатела, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, диатело-СН3, тройного антитела, миниантитела, минитела, TriBi, scFv-СН3 KIH, scFv-CH-CL-scFv, F(ab')2-scFv, scFv-KIH, Fab-scFv-Fc, тетравалентного HCab, ImmTAC, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженных пар, заряженных пар с общей легкой цепью, DT-IgG, DutaMab, IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG-scFab, 2scFv-IgG, IgG-2scFv, scFv4-Ig и zybody, например, DVD-Ig, FIT-Ig, mAb-dAb, dock and lock, SEEDbody, scDiabody-Fc, диатела-Fc, тандема scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутриклеточного антитела, BiTE, диатела, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, Diabody-СН3, минитела, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженных пар, заряженных пар с общей легкой цепью, в частности, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с обычными цепями легкой цепи и зарядов и FIT-Ig, например, FIT-Ig.
В одном варианте реализации, биспецифический формат выбирают из DVD-Ig, mAb2, mAb-dAb, dock and lock, обмена Fab-плечо, тела SEED, Triomab, LUZ-Y, Fcab, κλ-body, ортогонального Fab, scDiabody-Fc, диатело-Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутрибрюшинье, BiTE, диатела, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, Diabody-СН3, Тройной организм, миниантитело, минитело, TriBi минитело, scFv-СН3 KIH, scFv-CH-CL-scFv, F(ab')2- scFv, scFv-KIH, Fab-scFv-Fc, тетравалентный HCab, ImmTAC, knobs-in-holes, дырки с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, DT-IgG, DutaMab, IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG-scFab, 2scFv-IgG, IgG-2scFv, scFv4-Ig и zybody, например, DVD-Ig, mAb2, mAb-dAb, dock and lock, SEEDbody, scDiabody-Fc, диатело-Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутриклеточное антитело, BiTE, диатело, DART, TandAb, scDiabody, scDi abody-СН3, Diabody-СН3, микроволны, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, в частности, mAb2, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, и knobs-in-holes с общей легкой цепью, например, mAb2.
В одном варианте реализации, биспецифический формат выбирают из DVD-Ig, mAb-dAb, dock and lock, обмена Fab-плечо, тела SEED, Triomab, LUZ-Y, Fcab, κλ-body, ортогонального Fab, scDiabody-Fc, diabody- Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутрибрюшинье, BiTE, диатело, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, Diabody-СН3, Тройной организм, миниантитело, минитело, TriBi минитело, scFv -CH 3 KIH, scFv-CH-CL-scFv, F(ab') 2- scFv, scFv-KIH, Fab-scFv-Fc, тетравалентный HCab, ImmTAC, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общими легкая цепь, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, DT-IgG, DutaMab, IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L) (L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG- scFab, 2scFv-lgG, IgG-2scFv, scFv4-Ig и zybody, например, DVD-Ig, mAb-dAb, dock and lock, SEEDbody, scDiabody-Fc, диатело-Fc, тандем scFv-Fc, Fab-scFv-Fc, Fab-scFv, внутриклеточное антитело, BiTE, диатело, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-СН3, Dia корпус-СН 3, мини-отсек, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами, заряженные пары, заряженные пары с общей легкой цепью, в частности, knobs-in-holes, knobs-in-holes с общей легкой цепью и заряженными парами и knobs-in-holes с общей легкой цепью.
Концепция 39. Биспецифическое антитело согласно концепции 37 или концепции 38, где биспецифическое антитело специфически связывается с hPD-L1 и другим антигеном-мишенью, выбранным из ингибиторов иммунной контрольной точки (таких как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, TIM-3 и LAG-3), иммуномодуляторов (таких как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10, CXCL11 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R), иммунных активаторов (таких как CD137, GITR, 0Х40, CD40, CXCR3 (например, агонистические антитела против CXCR3), CD27, CD3, ICOS (например, агонистические антитела против ICOS), например, ICOS, CD137, GITR и OX40).
Концепция 39а. Биспецифическое антитело, связывающееся с hPD-L1, в котором VH, VL, или спаренные VH и VL содержат один или несколько CDR (например, CDRH3 и CDRL3) или последовательности вариабельной области любого из антител, описанных в Аспекте 1а ниже, и другим антигеном-мишенью, выбранным из ингибиторов иммунной контрольной точки (таких как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, TIM-3 и LAG-3), иммуномодуляторов (таких как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10, CXCL11 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R), иммунных активаторов (таких как CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистические антитела против CXCR3), CD27, CD3, ICOS (например, агонистические антитела против ICOS). ICOS, CD137, GITR и OX40).
Концепция 39b. Биспецифическое антитело согласно концепции 37 или концепции 38, где биспецифическое антитело специфически связывается с hPD-L1 и другим антигеном-мишенью, выбранным из ингибиторов иммунной контрольной точки (таких как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, TIM-3 и LAG-3), иммуномодуляторов (таких как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R), иммунных активаторов (таких как CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистические антитела против CXCR3), CD3, ICOS (например, агонистические анти-ICOS антитела), например, ICOS, CD137, GITR и OX40).
В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является ингибитор иммунной контрольной точки, такой как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, CTLA-4, TIM-3 и LAG-3. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является иммунный модулятор, такой как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10, CXCL11 и CD155, или такой как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является иммунный активатор, такой как CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистические анти-CXCR3 антитела), CD27, CD3 и ICOS (например, агонистические анти-ICOS антитела), или CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистические анти-CXCR3 антитела), CD3 и ICOS (например, агонистические анти-ICOS антитела), например, ICOS, CD137, GITR и OX40). В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является CTLA-4. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является TIGIT. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является TIM-3. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является LAG-3. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является GITR. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является VISTA. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является CD137. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является SIRPα. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является CXCL10. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является CD155. В одном варианте реализации, другим антигеном-мишенью является CD40.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой PD-1, и связывание с PD-1 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CTLA4, и связывание с CTLA4 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой TIGIT, и связывание с TIGIT обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой TIM-3, и связывание с TIM-3 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL, имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой LAG3, и связывание с LAG3 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой VISTA, и связывание с VISTA обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой BTLA, и связывание с BTLA обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой hHVEM, и связывание с hHVEM обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CSF1R, и связывание с CSF1R обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CCR4, и связывание с CCR4 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD39, и связывание с CD39 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD40, и связывание с CD40 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD73, и связывание с CD73 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD96, и связывание с CD96 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CXCR2, и связывание с CXCR2 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CXCR4, и связывание с CXCR4 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD200, и связывание с CD200 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой GARP, и связывание с GARP обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой SIRPα, и связывание с SIRPa обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CXCL9, и связывание с CXCL9 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CXCL10, и связывание с CXCL10 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CXCL11, и связывание с CXCL11 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD155, и связывание с CD155 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD137, и связывание с CD137 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой GITR, и связывание с GITR обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой ОХ40, и связывание с ОХ40 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD40, и связывание с CD40 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CXCR3, и связывание с CXCR3 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD27, и связывание с CD27 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой CD3, и связывание с CD3 обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, VL или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в Аспекте 1А ниже.
В другом варианте реализации, биспецифическое антитело связывает другой антиген-мишень, представляющий собой ICOS, и связывание с ICOS обеспечивается антигенсвязывающим доменом (например, VH, V L или спаренными VH и VL), имеющим любую из последовательностей, включая последовательности CDR (например, CDRH3 и/или CDRL3) или последовательности вариабельных областей, как описано в схеме (arrangement) 5 и схеме 5а ниже, и любое из антител против ICOS, описанных в предложениях (sentences) 1-102, и предложениях 1а-21а.
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает GITR (необязательно, GITR Fab имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывает GITR (необязательно, антитело к GITR имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, FIT-Ig активируется эффектором (например, как описано в любой из концепций 30-32). В другом варианте реализации, FIT-Ig отключается эффектором (например, представляет собой формат IgG4, или как описано в любой из концепций 30-31).
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, CH2 и СН3), которое связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает ICOS (например, связывается с агонистической активностью и, необязательно, ICOS Fab имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в схеме 5 или в схеме 5а, или в предложениях 1-102 или в предложениях 1а-21а ниже). В одном варианте реализации, ICOS Fab имеет последовательность любого из антител ICOS, описанных в данном документе в предложениях 1-102 или в предложениях 1а-21а). В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который включает полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывает ICOS (например, связывается с агонистической активностью или необязательно, антитело ICOS имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в схеме 5 или в схеме 5а, или в предложениях 1-102 или в предложениях 1а-21а ниже), и Fab, который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1А ниже). В одном варианте реализации, FIT-Ig активируется эффектором (например, как описано в любой из концепций 30-32). В другом варианте реализации, FIT-Ig отключен эффектором (например, представляет собой формат IgG4, или является таким, как описано в любой из концепций 30 или 31).
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает TIM-3 (необязательно, TIM-3 Fab имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывает TIM-3 (необязательно, антитело TIM-3 имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, FIT-Ig активируется эффектором (например, как описано в любой из концепций 30-32). В другом варианте реализации, FIT-Ig отключен эффектором (например, представляет собой формат IgG4, или является таким, как описано в любой из концепций 30 или 31).
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает CD137 (необязательно, CD137 Fab имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывается с CD137 (необязательно, антитело CD137 имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, FIT-Ig активируется эффектором (например, как описано в любой из концепций 30-32). В другом варианте реализации, FIT-Ig отключен эффектором (например, представляет собой формат IgG4, или является таким, как описано в любой из концепций 30 или 31).
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3) который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает CD3 (необязательно, CD3 Fab имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3) который связывает CD3 (необязательно, антитело CD3 имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, FIT-Ig активируется эффектором (например, как описано в любой из концепций 30-32). В другом варианте реализации, FIT-Ig отключен эффектором (например, представляет собой формат IgG4, или является таким, как описано в любой из концепций 30 или 31).
Любая из перечисленных выше мишеней (и Fab и/или полных антител, описанных более подробно в Аспекте 1А) может быть применена к структуре FIT-Ig.
Концепция 40. Биспецифическое антитело согласно концепции 39, где другим антигеном-мишенью является TIGIT или LAG3.
В любой из концепций 37-40, если антитело или его фрагмент имеют последовательности вариабельных областей тяжелой и легкой областей 84G09, то биспецифическое антитело должно рассматриваться как не включающее формат mAb2, где Fcab имеет аффинность связывания с LAG3.
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, CH2 и CH3), которое связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает TIGIT (необязательно, Fab TIGIT имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, CH2 и СН3), которое связывается с TIGIT (необязательно, антитело TIGIT имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, FIT-Ig активируется эффектором (например, как описано в любой из концепций 30-32). В другом варианте реализации, FIT-Ig отключен эффектором (например, представляет собой формат IgG4, или является таким, как описано в любой из концепций 30 или 31).
В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, CH2 и CH3), которое связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает LAG3 (необязательно, Fab LAG3 имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, биспецифическое антитело имеет формат FIT-Ig, который содержит полное антитело (например, антитело, содержащее легкую цепь, содержащую VL и CL, и тяжелую цепь, содержащую VH, CH1, СН2 и СН3), которое связывает LAG3 (необязательно, антитело LAG3 имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже), и Fab, который связывает hPD-L1 (необязательно, антитело имеет структуру, как определено в любой из концепций 1-40, или антитело имеет последовательность, включающую CDR и вариабельные области, как определено в Аспекте 1а ниже). В одном варианте реализации, FIT-Ig активируется эффектором (например, как описано в любой из концепций 30-32). В другом варианте реализации, FIT-Ig отключен эффектором (например, представляет собой формат IgG4, или является таким, как описано в любой из концепций 30 или 31).
Концепция 41. Антитело или фрагмент, как определено в любой предшествующей концепции для использования в лечении или профилактике опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния, например, выбранного из неопластического или не связанного с новообразованиями заболевания, хронических вирусных инфекций и злокачественных опухолей, таких как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома, вирусно-индуцированные раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки), саркомы мягких тканей, гематологические злокачественные новообразования, таких как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома и диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома) (например, меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи и мезотелиома или, например, вирусно-индуцированные раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки) и саркомы мягких тканей).
Концепция 42. Использование антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40, при изготовлении лекарственного средства для введения человеку с целью лечения или профилактики опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния у человека, например, выбранного из неопластического или не связанного с новообразованиями заболевания, хронических вирусных инфекций и злокачественных опухолей, таких как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома, вирусно-индуцированные виды рака (например, рак шейки матки и рак носоглотки), саркомы мягких тканей, гематологические злокачественные опухоли, такие как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома, и диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (например, меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи и мезотелиома или, например, вирусно-индуцированные раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки) и саркомы мягких тканей).
Концепция 43. Способ лечения или профилактики опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния, например, выбранного из неопластического или не связанного с новообразованиями заболевания, хронических вирусных инфекций и злокачественных опухолей, таких как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома, вирусно-индуцированные раковые заболевания (такие как рак шейки матки и рак носоглотки), саркомы мягких тканей, гематологические злокачественные опухоли, такие как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома и диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома (например, меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи и мезотелиома или, например, вирусно-индуцированные раковые заболевания (таких как рак шейки матки и рак носоглотки) и саркомы мягких тканей), у человека, включающий введение указанному человеку терапевтически эффективного количества антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40, в результате чего проводится лечение или профилактика опосредованного hPD-L1 заболевания или состояния.
В любой из концепций 41-43, опосредованное hPD-L1 заболевание может быть любым из описанных в данном документе. В одном варианте реализации, в любой из концепций 41-43 опосредованное hPD-L1 заболевание является вирусно-индуцированным раковым заболеванием, таким как рак шейки матки и рак носоглотки, например, рак шейки матки, вызванный инфекцией ВПЧ (вирус папилломы человека). В одном варианте реализации, в любой из концепций 41-43 опосредованное hPD-L1 заболевание представляет собой хроническую вирусную инфекцию. В одном варианте реализации, в любой из концепций 41-43 опосредованное hPD-L1 заболевание является неопластическим заболеванием. В одном варианте реализации, в любой из концепций 41-43 опосредованное hPD-L1 заболевание является не связанным с новообразованиями заболеванием. В одном варианте реализации, в любой из концепций 41-43 опосредованное hPD-L1 заболевание является злокачественной опухолью. В одном из вариантов реализации, в любой из концепций 41-43 опосредованное hPD-L1 заболевание представляет собой рак, который, как известно, реагирует на терапию PD-L1, такой как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома. В одном варианте реализации, в любой из концепций 41-43 опосредованное hPD-L1 заболевание представляет собой рак, который является саркомой мягких тканей.
Концепция 44. Антитело или фрагмент согласно концепции 41, использование согласно концепции 42, или способ согласно концепции 43, где заболевание или состояние, опосредованное hPD-L1, является раком.
Концепция 44а. Антитело или фрагмент согласно концепции 41, использование согласно концепции 42, или способ согласно концепции 43, где заболевание или состояние, опосредованное hPD-L1, является нейродегенеративным заболеванием, расстройством или состоянием, где, необязательно, нейродегенеративное заболевание, расстройство или состояние выбрано из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона, первичного прогрессирующего рассеянного склероза, вторичного прогрессирующего рассеянного склероза, кортикобазальной дегенерации, синдрома Ретта, расстройства дегенерации сетчатки, выбранного из возрастной макулярной дегенерации и пигментного ретинита; передней ишемической оптической нейропатии, глаукомы, увеита, депрессии, связанного с травмой стресса или посттравматического стрессового расстройства, лобно-височной деменции, деменций тела Леви, легких когнитивных нарушений, атрофии задней коры головного мозга, первичной прогрессирующей афазии и прогрессирующего супрануклеарного паралича или связанной с возрастом деменции, в частности, болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза, болезни Паркинсона и болезни Хантингтона и, например, болезни Альцгеймера.
В концепции 44а, терапевтически эффективное количество антитела или фрагмента может содержать антигенсвязывающий сайт, который специфически связывает PD-L1, например, hPD-L1.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает PD-L1, например, hPD-L1. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт PD-L1 содержит области CDRH1, CDRH2, CDR3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или VH и VL, любого из антител против PD-L1, выбранных из атезолизумаба (Roche), авелумаба (Merck), BMS-936559/MDX-1105 (BMS), дурвалумаба/Medi4736 (Medimmune), KN-035, СА-170, FAZ-053 М7824, ABBV-368, LY-3300054, GNS-1480, YW243.55.S70, REGN3504 и любого из антител PD-L1, раскрытых в WO 2017/034916, WO 2017/020291, WO 2017/020858, WO 2016/141101, WO 2015/007235, WO 2015/109124, WO 2014/165082, WO 2013/173223, WO 2017/020801, WO 2016/000619, WO 2015/179654, WO 2015/112805, WO2014/100079, WO2013/079174, WO 2016/111645, WO 2016/160792, WO 2015/173267, WO 2015/061668, WO 2014/055897, WO 2012/145493, WO 2016/197367, WO 2016/022630, WO 2000/181342, WO 2014/159562, WO 2013/181634, WO 2011/066389, WO 2010/077634, WO 2010/036959, WO 2010/089411 или WO 2007/005874, причем указанные антитела и последовательности включены в данный документ посредством ссылок.
В другом варианте реализации концепции 44а, антигенсвязывающий сайт PD-L1 содержит область CDRH1, CDRH2, CDR3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или VH и VL, любого из антител против PD-L1, выбранных из антитела против PD-L1, раскрытого в данном документе, в частности, клоны антител против PD-L1, раскрытых в концепциях 16а-161 и, более конкретно, клон 84G09 антитела против PD-L1.
В другом варианте реализации концепции 44а, антигенсвязывающий сайт PD-L1 содержит область CDRH1, CDRH2, CDR3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или VH и VL, клона 84G09 анти-PD-LI антитела, и опосредованное hPD-L1 заболевание или состояние представляет собой болезнь Альцгеймера.
Концепция 45. Антитело или фрагмент, применение или способ согласно концепции 44, где рак выбирают из меланомы, карциномы клеток Меркеля, немелкоклеточного рака легкого (плоскоклеточного и некемного), рака почки, рака мочевого пузыря, головы и карциномы шейки матки и мезотелиомы, или выбирают из вирусно-индуцированного рака (например, рака шейки матки и рака носоглотки) и саркомы мягких тканей.
Концепция 46. Антитело или фрагмент, использование или способ согласно любой из концепций 41-45, дополнительно включающие проведение для человека дополнительной терапии, например, введение дополнительного терапевтического агента, причем, необязательно, дополнительный терапевтическое средство независимо выбирают из группы, состоящей из:
а. других ингибиторов иммунных контрольных точек (таких как антитела против TIM-3, антитела против CTLA-4, антитела против TIGIT и антитела против LAG-3);
b. иммунных стимуляторов (таких как антитела против ОХ40, антитела против GITR, антитела против CD137, антитела против ICOS и антитела против CD40);
c. антагонистов хемокиновых рецепторов (таких как CXCR4, CCR4 и CXCR2);
d. таргетных ингибиторов киназ (таких как ингибиторы CSF-1R или VEGFR);
e. ингибиторов ангиогенеза (таких как анти-VEGF-A или дельта-подобный лиганд-4);
f. иммуностимулирующих пептидов или хемокинов (таких как CXCL9 или CXCL10);
g. цитокинов (таких как IL-15 и IL-21);
h. биспецифических антагонистов Т-клеток (BiTE), имеющих по меньшей мере одну специфичность против CD3 (например, CD3/CD19 BiTE);
i. других биспецифических молекул (например, IL-15-содержащих молекул, нацеленных на ассоциированные с опухолью антигены, например, рецепторы эпидермального фактора роста, такие как EGFR, Her-2, New York Esophageal Cancer-1 (NY-ESO-1), GD2, EpCAM или ассоциированный с меланомой антиген-3 (MAGE-А3));
j. онколитических вирусов (таких как вирус HSV (вирус герпеса человека) (который, необязательно, секретирует GMCSF), вирус болезни Ньюкасла и вирус осповакцины);
k. вакцинации опухоль-ассоциированными антигенами (такими как рака пищевода New York Esophageal Cancer-1 [NY-ESO-1], ассоциированный с меланомой антиген-3 [MAGE-3]);
l. клеточных терапий (таких как Т-клетки с химерными антигенными рецепторами (CAR-T), например, экспрессирующие анти-CD19, анти-EpCam или антимезотелин);
m. биспецифические активаторы (engagers) NK-клеток, обладающие специфичностью против активирующего рецептора MK, такого как NKG2D или CD16a; и
n. адоптивного переноса опухолеспецифических Т-клеток или клеток LAK, или, необязательно, дополнительная терапия представляет собой химиотерапию, лучевую терапию и хирургическое удаление опухолей.
Лучевая терапия может проводиться с однократной дозой или дробными дозами, с облучением непосредственно пострадавших тканей либо всего организма.
Химиотерапевтические средства могут быть такими, как описано выше, в частности, агентами, индуцирующими иммуногенную гибель клеток, например, платиновыми терапиями, такими как оксалиплатин. В одном варианте реализации, химиотерапия является стандартом цитотоксической химиотерапии для лечения рака.
В этом аспекте, биспецифические молекулы включают «биспецифические антитела» и гибридные белки антител, включая форматы и молекулы, описанные в концепциях 37-40.
Антитела могут представлять собой любую из последовательностей или антител, описанных в схеме 5, 5а, или подробно описанных в Аспекте 1а.
Дополнительные терапевтические средства в этой концепции могут быть доставлены любым их способов, хорошо известных специалистам в данной области. Например, дополнительные терапевтические средства могут быть доставлены перорально, системно или местно (в среду опухоли). В одном варианте реализации, дополнительный терапевтическое средство доставляется перорально. В одном варианте реализации, дополнительный терапевтическое средство поставляется системно (например, внутривенно). В одном варианте реализации, дополнительный терапевтическое средство доставляется местно в среду опухоли.
Композиции и пути введения описаны более подробно ниже.
Концепция 47. Антитело или фрагмент, использование или способ согласно концепции 46, где дополнительный терапевтическое средство вводят последовательно или одновременно с анти-hPD-L1 антителом или фрагментом.
Концепция 48. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или фрагмент, как определено в любой из концепций 1-40, и фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель или носитель и, необязательно, дополнительно содержащая дополнительный терапевтическое средство, независимо выбранный из группы, состоящей из:
а) других ингибиторов иммунных контрольных точек (таких как антитела против TIM-3, антитела против CTLA-4, антитела против TIGIT и антитела против LAG-3);
b) иммунных стимуляторов (таких как антитела против ОХ40, антитела против GITR, анти-CD137-антитела, анти-ICOS антитела и антитела против CD40);
c) антагонистов хемокиновых рецепторов (такие как CXCR4, CCR4 и CXCR2);
d) нацеленные ингибиторы киназы (такие как ингибиторы CSF-1R или VEGFR);
e) ингибиторы ангиогенеза (например, анти-VEGF-A или дельта-подобный лиганд-4);
f) иммуностимулирующие пептиды или хемокины (такие как CXCL9 или CXCL10);
g) цитокины (такие как IL-15 и IL-21);
h) биспецифические активаторы Т-клеток (BiTE), имеющие по меньшей мере одну специфичность против CD3 (например, BiTE CD3/CD19);
i) другие биспецифические молекулы (например, IL-15-содержащие молекулы, нацеленные на ассоциированные с опухолью антигены, например, рецепторы эпидермального фактора роста, такие как EGFR, Her-2, New York Esophageal Cancer-1 (плоскоклеточная карцинома пищевода, Нью-Йорк-1) (NY-ESO-1), GD2, ЕрСАМ или ассоциированный с меланомой антиген-3 (MAGE-A3));
j) онколитические вирусы (такие как вирус HSV (который, необязательно, секретирует GMCSF), вирус болезни Ньюкасла и вирус осповакцины);
k) вакцинация ассоциированными с опухолью антигенами (такими как плоскоклеточной карциномы пищевода, Нью-Йорк-1 [NY-ESO-1], связанный с меланомой антиген-3 [MAGE-3]);
l) клеточные методы лечения (такие как Т-клетки с химерными антигенными рецепторами (CAR-T), например, экспрессирующие анти-CD19, анти-EpCam или анти-мезотелиновые антитела);
m) биспецифические активаторы NK-клеток, обладающие специфичностью против активирующего рецептора МК, такого как NKG2D или CD16a; и
n) адоптивный перенос опухолеспецифических Т-клеток или клеток LAK. Фармацевтические композиции хорошо известны специалистам в данной области. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент вводят внутривенно. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент вводят подкожно.
В одном примере, антитело или фрагмент, раскрытые в данном документе, содержатся в медицинском контейнере, например, флаконе, шприце, контейнере для внутривенного введения (IV) или инъекционном устройстве (таком как интраокулярное или интравитреальное инъекционное устройство). В примере, антитело или фрагмент находятся in vitro, например, в стерильном контейнере.
В одном варианте реализации, композиция составлена в соответствии с обычными процедурами в виде фармацевтической композиции, адаптированной для внутривенного введения людям. Как правило, композиции для внутривенного введения представляют собой растворы в стерильном изотоническом водном буфере. При необходимости, композиция может также включать солюбилизирующий агент и местный анестетик, такой как лигнокаин (lignocamne), для облегчения боли в месте инъекции. Однако, такие композиции можно вводить путем, отличным от внутривенного.
Как правило, ингредиенты композиций либо поставляются отдельно, либо смешиваются вместе в стандартной дозированной форме, например, в виде сухого лиофилизированного порошка или безводного концентрата в герметично закрытом контейнере, таком как ампула или саше, с указанием количества активного агента. В тех случаях, когда композиция должна вводиться путем инфузии, она может дозироваться из инфузионной бутылки, содержащей стерильную воду или физиологический раствор для фармацевтического применения. Когда композицию вводят путем инъекции, может быть предусмотрена ампула стерильной воды для инъекций или физиологического раствора, так чтобы ингредиенты могли быть смешаны перед введением.
В этом аспекте, биспецифические молекулы включают «биспецифические антитела» и гибридные белки антител, включая форматы и молекулы, описанные в концепциях 37-40.
Дополнительные терапевтические средства в этой концепции могут быть доставлены любым их способов, хорошо известных специалистам в данной области. Например, дополнительные терапевтические средства могут быть доставлены перорально, системно или местно (в среду опухоли). В одном варианте реализации, дополнительный терапевтическое средство доставляется перорально. В одном варианте реализации, дополнительный терапевтическое средство поставляется системно (например, внутривенно). В одном варианте реализации, дополнительный терапевтическое средство доставляется местно в среду опухоли.
Антитела могут иметь любую из последовательностей, или могут быть любыми из антител, описанных в схеме 5, 5а, или подробно описанных в Аспекте 1а.
Концепция 49. Фармацевтическая композиция согласно концепции 48 или набор, включающий фармацевтическую композицию, как определено в концепции 48, где композиция предназначена для лечения и/или профилактики опосредованного hPD-L1 состояния или заболевания, например, выбранного из неопластического или не связанного с новообразованиями заболевания, хронических вирусных инфекций и злокачественных опухолей, таких как меланома, карцинома клеток Меркеля, немелкоклеточный рак легкого (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, мезотелиома, вирусно-индуцированные раковые заболевания (например, рак шейки матки и рак носоглотки), саркомы мягких тканей, гематологические злокачественные опухоли, такие как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома, диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома.
Концепция 50. Фармацевтическая композиция согласно концепции 48 или концепции 49 в комбинации с, или набор согласно концепции 49, содержащие этикетку или инструкции по использованию для лечения и/или профилактики указанного заболевания или состояния у человека; где, необязательно, этикетка или инструкции содержат номер регистрационного удостоверения лекарственного средства (например, регистрационный номер FDA или ЕМА); где, необязательно, набор включает устройство дл внутривенного введения (IV) или инъекционное устройство, содержащее антитело или фрагмент.
Концепция 51. Способ модуляции взаимодействия PD-1/PD-L1 у пациента, включающий введение эффективного количества антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40, указанному пациенту.
В другом варианте реализации, предлагается способ модуляции взаимодействия CD80/PD-L1 у пациента, включающий введение эффективного количества антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40, указанному пациенту. В другом варианте реализации, антитело или фрагмент модулируют взаимодействие CD80/PD-L1, но не модулируют взаимодействие PD-1/PD-L1. В другом варианте реализации, антитело или фрагмент блокируют взаимодействие CD80/PD-L1, но не блокируют взаимодействие PD-1/PD-L1. В другом варианте реализации, антитело или фрагмент ингибируют взаимодействие CD80/PD-L1, но не ингибируют взаимодействие PD-1/PD-L1.
Концепция 52. Способ ингибирования активности PD-L1 у пациента, включающий введение эффективного количества антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40, указанному пациенту.
В одном варианте реализации, антитело или фрагмент блокируют или ингибируют связывание PD-1 с PD-L1. В одном варианте реализации, антитело или фрагмент блокируют или ингибируют связывание CD80 с PD-L1.
Концепция 53. Способ лечения пролиферативного заболевания у животного (например, человека), включающий введение эффективного количества антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40, указанному пациенту.
Пролиферативные заболевания могут быть любыми из описанных в других разделах данного документа.
Концепция 54. Способ детектирования экспрессии PD-L1 в образце, включающий введение в контакт образца с антителом или фрагментом, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 55. Способ, включающий введение в контакт биологического образца с антителом или фрагментом, как определено в любой из концепций 1-40, с образованием комплекса с PD-L1, присутствующим в образце, и измерение присутствия, отсутствия или уровня содержания комплекса в биологическом образце.
Концепция 56. Способ согласно концепции 55, в котором присутствие, отсутствие и/или уровень экспрессии PD-L1 детектируется до начала лечения, а высокий уровень экспрессируемого на поверхности PD-L1 свидетельствует об успешном лечении.
Концепция 57. Способ согласно концепции 55, где присутствие, отсутствие и/или уровень экспрессии PD-L1 детектируют во время лечения в качестве биомаркера раннего ответа.
Концепция 58. Способ согласно концепции 55 или концепции 57, в котором присутствие, отсутствие и/или уровень экспрессии PD-L1 детектируют во время или после лечения, чтобы помочь определить один или несколько показателей из следующих: было ли лечение успешным, следует ли продолжать лечение, и/или следует ли модифицировать лечение.
Концепция 59. Способ по любой из концепций 55-58, где терапия включает проведение лечения анти-PD-LI антителом, необязательно, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 60. Способ контроля эффективности терапии, включающий детектирование экспрессии поверхностно экспрессируемого PD-L1 у пациента до терапии и во время или после терапии, в котором антитело или фрагмент, как определено в любой из концепций 1-40, используют для детектирования экспрессии поверхностно экспрессируемого PD-L1.
Концепция 61. Способ согласно концепции 60, в котором поверхностно экспрессируемый PD-L1 детектируется in vivo.
Концепция 62. Способ согласно концепции 60, в котором поверхностно экспрессируемый PD-L1 детектируется в образце ткани in vitro.
Концепция 63. Способ идентификации связывающих партнеров для PD-L1, включающий иммунопреципитацию интактного белкового комплекса, содержащего PD-L1, с использованием антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 64. Способ диагностики у человека заболевания, связанного с измененной экспрессией PD-L1, включающий стадии введения в контакт биологического образца человека с антителом, как определено в концепциях 1-40, с образованием комплекса между антителом и PD-L1, присутствующим в образце; и детектирование количества комплекса.
Концепция 65. Нуклеиновая кислота, кодирующая CDRH3 антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 65а. Также предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая CDRH2 антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 65b. Также предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая CDRH1 антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 65с. Также предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая CDRL1 антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 65d. Также предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая CDRL2 антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 65е. Также предусматривается нуклеиновая кислота, кодирующая CDRL3 антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
В одном варианте реализации, нуклеиновая кислота представляет собой выделенную и очищенную нуклеиновую кислоту.
Концепция 66. Нуклеиновая кислота, кодирующая домен VH и/или домен VL антитела или фрагмента, как определено в любой из концепций 1-40.
Последовательности нуклеиновых кислот доменов VH и VL по изобретению приведены в перечне последовательностей. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 70% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 75% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на 96% идентична указанному ID-идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 97% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 98% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 99% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 99,5%, идентична указанному идентификатору SEQ ID No.
Концепция 67. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 36 и/или SEQ ID NO: 46.
Концепция 67а. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 16 и/или SEQ ID NO: 26.
Концепция 67b. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 61 и/или SEQ ID NO: 71.
Концепция 67с. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 81 и/или SEQ ID NO: 91.
Концепция 67d. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 101 и/или SEQ ID NO: 111.
Концепция 67е. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 121 и/или SEQ ID NO: 131.
Концепция 67f. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 161 и/или SEQ ID NO: 171.
Концепция 67g. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 181 и/или SEQ ID NO: 191.
Концепция 67h. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 141 и/или SEQ ID NO: 151.
Концепция 67i. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 247 и/или SEQ ID NO: 257.
Концепция 67j. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 267 и/или SEQ ID NO: 277.
Концепция 67k. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 287 и/или SEQ ID NO: 297.
Концепция 67l. Нуклеиновая кислота согласно концепции 66, содержащая нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 80% идентична последовательности SEQ ID NO: 352 и/или SEQ ID NO: 362.
В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 70% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 75% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на 96% идентична указанному ID-идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 97% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 98% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 99% идентична указанному идентификатору SEQ ID No. В одном варианте реализации, последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 99,5%, идентична указанному идентификатору SEQ ID No.
Концепция 68. Нуклеиновая кислота, кодирующая тяжелую цепь или легкую цепь антитела, как определено в любой из концепций 1-40.
Концепция 69. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту согласно любой из концепций 65-68; где вектор, необязательно, представляет собой вектор СНО или HEK293.
Концепция 70. Хозяин, содержащий нуклеиновую кислоту согласно любой из концепций 65-68 или вектор согласно концепции 69.
3. Иммуноцитокины
Изобретатели описали иммуноцитокины, которые содержат антитело, связывающееся с ингибитором иммунной контрольной точки, таким как PD-L1, слитый с N-концом или С-концом тяжелой цепи или легкой цепи (например, С-концом тяжелой или легкой цепь, и в частности, легкой цепи). Иммуноцитокины содержат молекулу цитокина, которая может быть IL-2 или его вариантом (включая вариант, имеющий делецию от 1 до 10 аминокислот на N-конце). Описанные выше антитела могут быть использованы в любом иммуноцитокине, описанном в данном документе.
Без ограничения теорией, иммуноцитокины по изобретению могут обеспечивать одно или несколько из следующих преимуществ:
- синергетическая активность (в силу терапевтической активности фрагмента Fab антитела в комбинации с цитокином)
- улучшенное нацеливание на опухоль
- способность сохранять эффекторные функции, такие как CDC, ADCC и/или ADCP
- уменьшенное воздействие за пределами мишени
- пониженная токсичность (например, по сравнению с свободным цитокином или цитокином, слитым с тяжелой цепью иммуноцитокина)
- пониженная иммуногенность
- более низкая доза/частота дозирования, в частности, из-за улучшенного периода полувыведения продуктов слияния цитокинов с легкой цепью по сравнению с эквивалентными продуктами слияния с тяжелыми цепями
- Специфичность к блокированию только одним из лигандов PD-L1 (например, блокирует взаимодействие CD80/PD-L1, но не взаимодействие PD-1/PD-L1)
- Растворимость
- Стабильность
- Простота составления композиции
- Частота дозирования и/или пути введения
- Технологичность (например, экспрессия, простота очистки, изоформы)
1D05 ICK содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 299 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 300. Легкая цепь содержит домен VL, содержащий CDR, и последовательность VL антитела 1D05, как описано выше, слитую в тяжелой цепи с полноразмерным человеческим цитокином IL-2 дикого типа. Он не содержит линкерного пептида. Тяжелая цепь содержит домен VH, содержащий CDR, и последовательность VH антитела 1D05, как описанно выше, слитую с инактивированной константной областью IgG (SEQ ID NO: 205).
1D05 D5-9 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D5-9 IL-2 (SEQ ID NO: 303), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-9 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-9 IL-2 (SEQ ID NO: 304), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D5-7 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D5-7 IL-2 (SEQ ID NO: 305), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1 IL-2 (SEQ ID NO: 306), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-2 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-2 IL-2 (SEQ ID NO: 307), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-3 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-3 IL-2 (SEQ ID NO: 308), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-4 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-4 IL-2 (SEQ ID NO: 309), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-5 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-5 IL-2 (SEQ ID NO: 310), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-6 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-6 IL-2 (SEQ ID NO: 311), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-7 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-7 IL-2 (SEQ ID NO: 312), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D1-8 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-8 IL-2 (SEQ ID NO: 313), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D9 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9 IL-2 (SEQ ID NO: 314), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D9-8 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-8 IL-2 (SEQ ID NO: 315), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D9-7 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-7 IL-2 (SEQ ID NO: 316), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D9-6 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-6 IL-2 (SEQ ID NO: 317), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D9-4 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-4 IL-2 (SEQ ID NO: 318), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D9-3 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-3 IL-2 (SEQ ID N0:319), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D9-2 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-2 IL-2 (SEQ ID NO: 320), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D2-6 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D2-6 IL-2 (SEQ ID NO: 321), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D3-7 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D3-7 IL-2 (SEQ ID NO: 322), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
1D05 D4-8 ICK содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 33 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D4-8 IL-2 (SEQ ID NO: 323), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
В любом из конструктов ICK, описанных выше, связывающий участок IL-2 может быть вариантом IL-2, в частности, IL-2, имеющим мутацию R38A (как описано в аминокислотах 21-133 варианта IL-2, описанного как SEQ ID NO: 517) или мутацию R38Q (как описано в аминокислотах 21-133 варианта IL-2, описанного как SEQ ID NO: 518).
В любом из вышеописанных конструктов ICK область VH антитела 1D05 может быть заменена на область VH мутированного 1D05 - мутант тяжелой цепи 1 (SEQ ID NO: 47), мутированного 1D05 - мутант тяжелой цепи 2 (SEQ ID NO: 48), мутированного 1D05 - мутант тяжелой цепи 3 (SEQ ID NO: 49) или мутированного 1D05 - мутант тяжелой цепи 4 (SEQ ID NO: 342). Предпочтительной мутированной областью VH тяжелой цепи 1D05 является мутированный 1D05 - мутант тяжелой цепи 4 (SEQ ID NO: 342).
Таким образом, некоторые конструкты ICK включают:
Мутированный 1D05 - мутант тяжелой цепи 4 D5-9 ICK, который содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 342 (содержащую CDR мутированного 1D05 - мутанта тяжелой цепи 4, как описано в данном документе), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D5-9 IL-2 (SEQ ID NO: 303), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
Мутированный 1D05 - мутант тяжелой цепи 4 D1-9 ICK, который содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 342 (содержащую CDR мутированного 1D05 - мутанта тяжелой цепи 4, как описано в данном документе), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-9 IL-2 (SEQ ID NO: 304), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
Мутированный 1D05 - мутант тяжелой цепи 4 D1-8 ICK, который содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 342 (содержащую CDR мутированного 1D05 - мутанта тяжелой цепи 4, как описано в данном документе), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D1-8 IL-2 (SEQ ID NO: 313), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
Мутированный 1D05 - мутант тяжелой цепи 4 D9-7 ICK, который содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 342 (содержащую CDR мутантного мутанта 4D55 с тяжелой цепью, как описано в данном документе), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-7 IL-2 (SEQ ID NO: 316), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
Мутированный 1D05 - мутант тяжелой цепи 4 D9-2 ICK, который содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность области VH SEQ ID NO: 342 (содержащую CDR мутированного 1D05 - мутанта тяжелой цепи 4, как описано в данном документе), слитую с инактивированной константной областью IgG1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 205. Легкая цепь содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 43 (содержащую CDR 1D05, как описано выше), непосредственно слитую на С-конце с D9-2 IL-2 (SEQ ID NO: 320), которая непосредственно слита с аминокислотами 21-133 hlL-2 (SEQ ID NO: 324).
В любом из вышеописанных конструктов ICK, область VL антитела 1D05 может быть заменена на область VL мутированного 1D05 - мутанта легкой цепи 1 (SEQ ID NO: 50), мутированного 1D05 - мутанта легкой цепи 2 (SEQ ID NO: 51) или мутированного 1D05 - мутанта легкой цепи 3 (SEQ ID NO: 298).
В любом из конструктов ICK, описанных выше, обе области VH и VL антитела 1D05 могут быть заменены на две области VH и VL любого из других антител, описанных в данном документе, т.е. 84G09, 411 В08, 411С04, 411D07, 385F01, 413D08, 386Н03, 389А03, 413G05, 413F09 и 414В06.
В любом из конструктов ICK, описанных выше, константная область тяжелой цепи SEQ ID NO: 205 может быть заменена на любую из константных областей тяжелой цепи SEQ ID NOs:193, 195, 197, 199, 203, 205, 340, 524, 526, 528, 530, 532 или 534.
Иммуноцитокины могут быть описаны в приведенных ниже предложениях или аспектах. Если не оговорено иное, признаки любой из концепций, описанных выше, являются применимыми mutatis mutandis к любому из приведенных ниже аспектов.
Аспект 1. Иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, причем тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с hPD-L1, представленным SEQ ID No: 1, и конкурирует за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05; и
иммуноцитокин содержит домен VH, который содержит CDRH3, содержащий мотив X1GSGX2YGX3X4FD, где X1, Х2 и Х3 независимо обозначают любую аминокислоту, и Х4 присутствует или отсутствует и, в случае его присутствия, может обозначать любую аминокислоту.
В описанных в данном документе аспектах, последовательности CDR могут быть определены в соответствии с любым способом, известным специалистам в данной области, таким как использование системы Кабата (Кабат), метода IMGT или метода Чотиа (Chothia), каждый из которых описан более подробно в данном документе. В одном варианте реализации, области CDR представляют собой области CDR человека.
В дополнение к областям CDR, домены VH и/или VL могут дополнительно содержать каркасные области, такие как FW1, FW2 и FW3. Домены VH и/или VL могут иметь любое происхождение, описанное в данном документе, и могут быть, например, полностью человеческими, гуманизированными, мышиными или верблюжьими. В одном варианте реализации, домены VH и/или VL являются доменами VH и/или VL человека. CDR могут иметь нечеловеческое происхождение (например, мышиное происхождение) и быть пересажены в каркасные области человека. В другом варианте реализации, CDR являются синтетическими.
В другом варианте реализации, области VH могут быть выбраны из группы, состоящей из вариабельного домена антитела (например, VL или VH, вариабельного домена антитела (antibody single variable domain) (доменного антитела или dAb), вариабельного домена VHH верблюжьего антитела, вариабельного домена акульего иммуноглобулина (NARV), нанотела (Nanobody™) или вариабельного домена камелизированного VH); связывающего домена рецептора Т-клеток; домена суперсемейства иммуноглобулина; вариабельного лимфоцитарного рецептора бесчелюстных (agnathan); домена фибронектина (например, аднектин (Adnectin™)); константного домена антитела (например, домена СН3, например, СН2 и/или СН3 Fcab™), где константный домен не является функциональным доменом CH1; scFv; (scFv)2; одноцепочечного диатела (sc-diabody); scFab; центирина и эпитопсвязывающего домена, полученных из каркаса, выбранного из CTLA-4 (Evibody™); липокалинового домена; белка А, такого как Z-домен белка А (например, Affibody™ или SpA); А-домена (например, Avimer™ или Maxibody™); белка теплового шока (такого как эпитопсвязывающий домен, полученный из GroEl и GroES); трансферринового домена (например, trans-body); белка с анкириновым повтором (например, DARPin™); пептидного аптамера; лектинового домена С-типа (например, тетранектина (Tetranectin™)); человеческого γ-кристаллина или убиквитина человека (аффилина); домена PDZ; токсина скорпиона; и домена Кунитц-типа ингибитора протеазы человека.
Константная область содержит по меньшей мере два домена константной области тяжелой цепи, выбранных из CH1, СН2, СН3 и СН4. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) домена CH1 и домена СН2. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) домена CH1, шарнирной области и домена СН2. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) домена CH1 и домена СН3 и, необязательно, шарнирной области. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) домена CH1 и домена СН4 и, необязательно, шарнирной области. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) домена CH1, домена СН2 и домена СН3 и, необязательно, шарнирной области. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) домена CH1, домена СН2 и домена СН4 и, необязательно, шарнирной области. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) домена CH1, домена СН3 и домена СН4 и, необязательно, шарнирной области. В одном варианте реализации, константная область содержит (или состоит из) полной константной области.
Константная область может принадлежать к любому изотипу, описанному в данном документе, например, IgA, IgD, IgE, IgG и IgM. В одном варианте реализации, константная область имеет любое происхождение, описанное в данном документе, и может быть, например, человеческой, мышиной или верблюжьей. В одном варианте реализации, константная область является (полной) константной областью человека. В одном варианте реализации, константная область представляет собой константную область IgG человека. В одном варианте реализации, константная область является (полной) константной областью IgG1 человека. В одном варианте реализации, константная область представляет собой нуль-эффекторную (полную) константную область IgG1 человека. В одном варианте реализации, константная область имеет активность CDC и/или ADCC и/или ADCP. В одном варианте реализации, константная область генетически модифицирована для усиления активности CDC и/или ADCC и/или ADCP. Константная область может быть любой из константных областей, описанных в концепциях 30-32 выше.
Константная область легкой цепи может быть константной областью каппа-или лямбда-легкой цепи. Константная область легкой цепи может быть такой, как описано в концепции 28 выше.
Цитокин IL-2 представляет собой молекулу цитокина, которая придает активность IL-2 одному или обоим из рецептора IL-2 с промежуточной ааффинностью (αβ) и высокоаффинного рецептора IL-2 (αβγ). Цитокин IL-2 включает варианты цитокинов IL-2. Цитокин IL-2 может иметь человеческое или нечеловеческое происхождение, например, принадлежать млекопитающему, не являющемуся человеком, включая, без ограничений, приматов (например, обезьян, таких как макак-резус или яванский макак), грызунов (таких как мыши, крысы и морские свинки) сельскохозяйственных животных (таких как крупный рогатый скот, овцы, свиньи, козы, лошади, куры, индюки, утки и гуси) и домашних млекопитающих (таких как собаки и кошки). В одном варианте реализации, цитокин IL-2 представляет собой человеческий цитокин IL-2.
В используемом в данном документе значении, термин «вариант IL-2 цитокин» обозначает цитокин, имеющий делецию до 10 аминокислот из N-концевой последовательности, в сочетании с замещениями до 5 аминокислот, делециями или вставками в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 5 (например, 1,2,3,4 или 5) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 15 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 5 (например, 1, 2, 3, 4 или 5) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 5 (например, 1, 2, 3, 4 или 5) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 3 (например, 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 2 (например, 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 10 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с 1 аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 9 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 9 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 3 (например, 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 9 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 2 (например, 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 9 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с одним аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 8 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 8 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 3 (например, 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 8 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 2 (например, 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 8 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с одним аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 7 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 7 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 3 (например, 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 7 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с до 2 (например, 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 7 (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с одним аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 6 (например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 6 (например, 1,2,3,4,5 или 6) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 3 (например, 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 6 (например, 1,2,3,4,5 или 6) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 2 (например, 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 5 (например, 1, 2, 3, 4 или 5) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 5 (например, 1, 2, 3, 4 или 5) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 5 (например, 1, 2, 3, 4 или 5) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 6 (например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с одним аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 3 (например, 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 4 (например, 1,2,3 или 4) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 2 (например, 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 4 (например, 1,2,3 или 4) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с одним аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 3 (например, 1, 2 или 3) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в комбинации с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 3 (например, 1, 2 или 3) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в комбинации с до 3 (например 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 3 (например, 1, 2 или 3) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в комбинации с до 2 (например 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) до 3 (например, 1, 2 или 3) делеций аминокислот в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с одним аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) 1 или 2 аминокислотных делеций в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 4 (например, 1, 2, 3 или 4) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) 1 или 2 аминокислотных делеций в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 3 (например, 1, 2 или 3) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) 1 или 2 аминокислотных делеций в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа) в сочетании с до 2 (например, 1 или 2) аминокислотных замещений в других местах цитокина IL-2. В одном варианте реализации, вариант цитокина IL-2 содержит (или состоит из) 1 или 2 аминокислотных делеций в N-концевой последовательности (например, в пределах первых 20, или первых 15, или первых 10 аминокислот рассматриваемой последовательности IL-2 дикого типа), в сочетании с одним аминокислотным замещением в другом месте цитокина IL-2.
Замещения в других местах цитокина IL-2 дополнительно определены в аспекте 44 ниже.
Конкретные цитокины IL-2 и варианты цитокинов IL-2 дополнительно определены в аспектах 40-45 ниже.
Аминокислотная последовательность α-цепи IL-2 человека представлена в SEQ ID NO: 327. Аминокислотная последовательность β-цепи IL-2 человека представлена в SEQ ID NO: 328. Аминокислотная последовательность γ-цепи IL-2 человека представлена в SEQ ID NO: 239.
В любых аспектах или концепциях данного документа, иммуноцитокин или анти-PDLI антитело или фрагмент могут иметь период полувыведения, составляющий по меньшей мере 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов или 8 часов. В другом варианте реализации, период полувыведения любого из иммуноцитокинов или анти-PD-LI антител или фрагментов, предусматриваемых в данном документе, составляет по меньшей мере 9 часов, или по меньшей мере 10 часов, или по меньшей мере 11 часов, или по меньшей мере 12 часов. В другом варианте реализации, период полувыведения любого из иммуноцитокинов или анти-PD-LI антител или фрагментов, предусматриваемых в данном документе, составляет по меньшей мере 13 часов, или по меньшей мере 14 часов, или по меньшей мере 15 часов, или по меньшей мере 16 часов. В другом варианте реализации, период полувыведения любого из иммуноцитокинов или анти-PD-LI антител или фрагментов, предусматриваемых в данном документе, составляет по меньшей мере 17 часов, или по меньшей мере 18 часов, или по меньшей мере 19 часов, или по меньшей мере 20 часов. В другом варианте реализации, период полувыведения любого из иммуноцитокинов или анти-PD-LI антител или фрагментов, предусматриваемых в данном документе, составляет по меньшей мере 21 час или, по меньшей мере, 22 часа или по меньшей мере 23 часа или по меньшей мере 24 часа. В другом варианте реализации, период полувыведения любого из иммуноцитокинов или анти-PD-LI антител или фрагментов, предусматриваемых в данном документе, составляет по меньшей мере 25 часов, или по меньшей мере 26 часов, или по меньшей мере 27 часов, или по меньшей мере 30 часов. В другом варианте реализации, период полувыведения любого из иммуноцитокинов или анти-PD-LI антител или фрагментов, предусматриваемых в данном документе, составляет по меньшей мере 32 часа, или по меньшей мере 34 часа, или по меньшей мере 36 часов, или по меньшей мере 40 часов. В одном варианте реализации, период полувыведения определяют в мышиной модели (например, нокин (knock-in)-мыши с PD-L1 человека, например, как описано в Примере 22 ниже, или у иммунокомпрометированной мыши с ксенотрансплантатом человеческих Т-клеток). В другом варианте реализации, период полувыведения определяют в исследовании с введением однократной дозы яванским макакам (например, как описано в Примере 18 или Примере 23 ниже). В другом варианте реализации, период полувыведения определяют в искусственно размноженных исследованиях с однократной дозой у яванских макак (например, как описано в Примере 19 или Примере 26 ниже).
Аспект 1а. Иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, причем тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константная область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константная область легкой цепи, (CL);
e) необязательно, линкер, (L); и
f) цитокин IL-2;
где домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с антигеном, выбранным из: ингибитора иммунной контрольной точки (такого как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, TIM-3 и LAG-3), иммунного модулятора (такого как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10, CXCL11 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R) и иммунного активатора (такого как CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистическая активность против CXCR3), CD27, CD3 и ICOS (например, агонистическая активность против ICOS), например, ICOS, CD137, GITR и OX40).
В другом варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывается с антигеном, выбранным из: ингибитора иммунной контрольной точки (такого как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, TIM-3 и LAG-3), иммунного модулятора (такого как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R) и иммунного активатора (такого как CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистическая активность против CXCR3), CD3 и ICOS (например, агонистическая активность против ICOS), например, ICOS, CD137, GITR и OX40).
Любой из вариантов реализации аспекта 1 являются применимыми mutatis mutandis (с необходимыми изменениями) к аспекту 1а. Любые из признаков или вариантов реализации аспектов 2-54 являются применимыми mutatis mutandis к аспекту 1а. Любые из признаков антител или других вариантов реализации или признаков концепций 1-70 являются применимыми mutatis mutandis к аспекту 1а.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает PD-L1, например, hPD-L1. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт PD-L1 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL любого анти-PD-L1 антитела, выбранного из атезолизумаба/MPDL3280A (Roche), авелумаба/MSB0010718C (Merck), BMS-936559/MDX-1105 (BMS), дурвалумаба/Medi4736 (Medimmune), KN-035, СА-170, FAZ-053 M7824, ABBV-368, LY-3300054, GNS-1480, YW243.55.S70, REGN3504 и любых из PD-L1-антител, раскрытых в WO 2017/034916, WO 2017/020291, WO 2017/020858, WO 2017/020801, WO 2016/111645, WO 2016/00735, WO 2016/176654, WO 2016/197367, WO 2016/061142, WO 2016/149201, WO 2016/00619, WO 2016/022630, WO 2016/007235, WO 2015/173267, WO 2015/181342, WO 2015/109124, WO 2015/195163, WO 2015/112805, WO 2015/061668, WO 2014/159562, WO 2014/165082, WO 2014/100079, WO 2014/055897, WO 2013/181634, WO 2013/173223, WO 2013/079174, WO 2012/145493, WO 2011/066389, WO 2010/077634, WO 2010/036959, WO 2010/089411 или WO 2007/005874, причем указанные антитела и последовательности включены в настоящее описание посредством ссылки.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает ICOS, например, NCOS. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает ICOS, например, hICOS, и является агонистом ICOS, например, hICOS. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает ICOS, например, hICOS, и является антагонистом ICOS, например, hICOS. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт ICOS содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL любого из антител против ICOS, описанных в схеме 5 и схеме 5а ниже, и любых антител против ICOS, описанных в предложениях 1-102, и предложениях 1а-21а.
В любом из следующих вариантов реализации, конкретный антигенсвязывающий сайт специфически связывается с человеческой мишенью. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает ингибитор иммунной контрольной точки. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает ингибитор иммунной контрольной точки, выбранный из PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает ингибитор иммунной контрольной точки, выбранный из TIGIT, CTLA-4, TIM-3 и LAG-3.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает PD-1, например, PD-1 человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт PD-1 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из пембролизумаба (Keytruda®/MK-3475), ниволумаб (Opdivo®/BMS-936558/MDX-1106), MEDI-0680/АМР514, PDR001, ламбролизумаба, BMS-936558, REGN2810, BGB-A317, BGB-108, PDR-001, SHR-1210, JS-001, JNJ-63723283, AGEN-2034, PF-06801591, генолимзумаба, MGA-012, IBI-308, BCD-100, TSR-042 ANA011, AUNP-12, KD033, MCLA-134, mDX400, muDX400, STI-A1110, АВ011, 244С8, 388D4, ХСЕ853 или пидилизумаба/СТ-011, или из любого из антител против PD-1, описанных в WO 2015/112800 и US 2015/0203579 (включая антитела в таблицах 1-3) US 9394865 и US 4888802, WO 2017/087599 (включая антитело SSI-361 и SHB-617), WO 2017/079112, WO 2017/071625 (включая депозит С2015132, гибридому LT004 и антитела 6F5/6F5 (Re), 6F5H1 L1 и 6F5 H2L2), WO 2017/058859 (включая PD1AB-1 до PD1AB-6), WO 2017/058115 (включая 67D9, c67D9, и hu67D9), WO 2017/555547 (включая 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 и 13112.15380), WO 2017/040790 (включая AGEN2033w, AGEN2034w, AGEN2046w, AGEN2047w, AGEN2001w и AGEN2002w), WO 2017/025051 и WO 2017/024515 (включая 1.7.3 hAb, 1.49.9 hAb, 1.103.11 hAb, 1.103.11-v2 hAb, 1.139.15 hAb и 1.153.7 hAb), WO 2017/025016 и WO 2017/024465 (включая антитела А-I), WO 2017/020858 и WO 2017/020291 (включая 1.4.1, 1.14.4, 1.20.15 и 1.46.11), WO 2017/019896 и WO 2015/112900 и US 2015/0210769 (включая BAP049-hum01 - BAP049-hum16 и BAP049-Clone-A - BAP049-Clone-E), WO 2017/019846 (включая mAb 1 PD-1 - mAb 15 PD-1), WO 2017/016497 (включая МНС723, МНС724, МНС725, МНС728, МНС729, m136-M13, m136-M19, m245-M3, m245-M5 и m136-M14), WO 2016/201051 (включая антитело ЕН12.2Н7, антитело hPD-1 mAb2, антитело hPD-1 mAb7, антитело hPD-1 mAb9, антитело hPD-1 mAb15 или антитело против PD-1, выбранное из Таблицы 1), WO 2016/197497 (включая DFPD1-1 - DFPD1-13), WO-2016/197367 (включая 2.74.15 и 2.74.15Ab4 - 2.74.15Ab8), WO 2016/196173 (включая антитела в Таблице 5 и Фигуры 1-5), WO 2016/127179 (включая R3A1, R3A2, R4B3 и R3D6), WO 2016/077397 (включая антитела, описанные в Таблице 1 Примера 9), WO 2016/106159 (включая мышиные антитела в Таблице 3 Примера 2 и гуманизированные антитела в Таблицах 7, 8 и 9 Примера 3), WO 2016/092419 (включая С1, С2, С3, ЕН12.1, mAb7-G4, mAb15-G4, mAb-AAA, mAb15-AAA), WO 2016/068801 (включая клон A3 и его варианты и другие антитела, описанные на Фиг. 1-4), WO 026/014688 (включая 10D1, 4С10, 7D3, 13F1, 15Н5, 14А6, 22А5, 6Е1, 5А8, 7А4 и 7A4D и гуманизированные антитела из Примеров 9/10), WO 2016/015685 (включая 10F8, ВА08-1, ВА-08-2 и 15Н6), WO 2015/091911 и WO 2015/091910 (включая антисобачьи антитела PD-1 в Примерах 2, 3 и 4), WO 2015/091914 (включая антисобачьи антитела PD-1 в Таблице 3), WO 2015/085847 (включая mAb005, H005-1 -Н005-4), WO 2015/058573 (включая сАВ7), WO 2015/036394 (включая LOPD180), WO 2015/035606 (включая антитела в Таблице 1 Примера 2, в Таблицах 14, 15 и 16 Примера 7 и в Таблицах 20, 21 и 22 Примера 11) WO 2014/194302 (включая GA2, RG1B3, RG1H10, RG2A7, RG2H10, SH-A4, RG4A6, GA1, GB1, GB6, GH1, А2, С7, Н7, SH-A4, SH-A9, RG1H11 и RG6B), WO 2014/179664 (включая 9А2, 10 В11, 6Е9, АРЕ1922, АРЕ1923, АРЕ1924, АРЕ1950, АРЕ1963 и АРЕ2058), WO 2014/206107 (включая клоны 1, 10, 11, 55, 64, 38, 39, 41 и 48), WO 2012/135408 (включая h409A11, h409A16 и h409A17), WO 2012/145493 (включая антитела 1Е3, 1Е8, 1Н3 и h1H3 Var 1 - h1H3 Var 14), WO 2011/110621 (включая антитело 949 и модифицированные варианты, раскрытые на Фиг. 1-11), WO 2011/110604 (включая антитело 948 и модифицированные варианты, раскрытые на Фиг. 3-11), WO 2010/089411 (включая депозиты в CNCM №№1-4122, 1-4080 или 1-4081), WO 2010/036959 (включая антитела в Таблице 1 Примера 1), WO 2010/029435 и WO 2010/029434 (включая клоны 2, 10 и 19), WO 2008/156712 (включая hPD-1.08A, hPD-1.09A, h409A11, h409A16 и h409A17, и антитела, описанные в Примере 2, Таблица Н, Примере 4 и Таблице IV), WO 2006/121168 (включая клоны 17D8, 4Н1, 5С4, 4А11, 7D3, 5F4 и 2D3), WO 2004/004771 или WO 2004/056875 (включая PD1-17, PD1-28, PD1-33, PD1-35, PD1-F2 и Abs, описанные в Таблице 1); последовательности и признаки антител против PD-1 включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CTLA-4, например, hCTLA-4. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CTLA-4 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из ипилимумаба (MDX-010, CAS No. 477202-00-9), тремелимумаб (тицилимумаб/СР-675,206), клона 2F1 антитела, клона 1F4 (Abnova Corporation), клона 9Н10 (EMD Millipore), клона BNU3 (GeneTex), клона 1 Е2, клона AS32 (Biosciences) клона А3.4Н2.Н12 (Acris Antibodies), клона 060 (Sino Biological), клона BU5G3 (Creative Diagnostics), клона MIH8 (MBL International), клона A3.6B10.G1 или клона L3D10 (BioLegend) или из любого из антител против CTLA-4, описанных в WO 2017/087588 (ISV, раскрытые на Фигуре 2), WO 2017/084078 (клоны С2, С4, С10, С11, С12 и С13 и Фигуры 4-7), WO 2016/196237 (включая AGEN1884W, AGEN2041w, последовательности на Фиг. 19А, 19В и Таблицы 1-6), WO 2016/130986 и WO 2016/130898 (включая Е8, F7 и антитела (Abs), описанные в Таблице 4), WO 2016/015675 (включая гибридому LT001 и антитела 8D2, 8D2H1L1, 8D2H2L2, 8D2H3L3, 8D2H2L15 и 8D2H2L17), WO 2012/120125 (включая 3В10, 8Н5 и антитела (Abs), идентифицированные в Примерах 1, 2, 3 и 5), WO 2010/097597 (включая JMW-3 В3 и раскрытые варианты и фрагменты), WO 2009/100140 (включая 10D1, 1Н5, 3А4, 6С10 и антитела, описанные на Фиг. 1-6), WO 2007/008463 и WO 2006/101692 и WO 2006/101691 и WO 2006/048749 и WO 2005/09238 (включая 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1, 12.9.1.1 и 10D1), WO 2006/096491 (включая депозит АТСС №11.2.1 11.2.1.4 РТА-5169 и 4.1.1 4.1.1.1 PTA-5166), WO 2006/066568 (включая TGN2122.C, TGN2422.C, 4.8Н10Н5 и 4.3F6B5 и антитела, описанные в Таблицах 3-14), WO 2006/029219 (включая L3D10, L1B11, K4G4, KM10 и YL2), WO 2004/029069 (включая депозит АТСС № РТА-4537), WO 01/54732 (включая антитела 25, 26, 27, 29, 33, 34, 35, 36 и 38), WO 01/14424 (включая 3А4, 9А5, 2Е2, 2Е7, 4В6, 4Е10, 5С4, 5G1, 11Е8 и 11G1 и антитела, идентифицированные в Примерах 3 и 4 и Таблице 3) и WO 00/37504 (включая 3.1.1, 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2, 4.13.1, 4.14.3, 6.1.1, 11.2.1, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1 и 12.9.1.1); последовательности и признаки антител против CTLA-4 включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает TIGIT, например, человеческий TIGIT. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт TIGIT содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из RG-6058 (MTIG-7192A) или из любого из антител против TIGIT, описанных в WO 2017/053748 (включая 1А4, 1D3, 4А3, 10А7, 4.1D3.Q1E, h10A7.K4G3, 4.1D3 и другие антитела, описанные в Примерах 1 и 2), WO 2017/037707 (включая VSIG9#1 и 258-csl#4), WO 2017/030823 (включая 14D7, 26В10 и гуманизированные варианты в Примере 3), WO 2016/191643 (включая 313R11, 313R12, 313R14, 313R19, 313R20, АТСС РТА-122180 и АТСС РТА-122181), WO 2016/106302 (включая 14В2, 13Е6, 6F9, 11G11, 10С9, 16F6, 11С9, 27А9, 10D7, 20G6, 24Е8, 24G1, 27F1, 15А6, 4Е4, 13D1, 9В11, 10В8, 22G2, 19Н2, 8С8, 17G4, 25Е7, 26D8 и 16А8), WO 2016/028656 (включая 14А6, 28Н5 или 31С6 и гуманизированные варианты из Примера 6) и WO 2009/126688 (US 2013/0251720, включая 10А7 и 1F4); последовательности и признаки антител против TIGIT включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает TIM-3, например, человеческий TIM-3. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт TIM-3 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL- из F38-2E2 (BioLegend), клона 2Е2 (Merck Millipore), клона 6В6Е2, клона 024 (Sino Biological) клона 344801 (R&D Systems), клона Е-18, клона Н-191 (Santa Cruz Biotechnology) или клона 13A224 (United States Biological), TSR-022 (Tesaro) или из любого из антител против TIM-3, описанных в WO 2017/079115 (включая антитела против TIM3, перечисленные в таблицах 30-38), WO 2017/055404 (включая PD1TIM3-0389, PD1TIM3-0168, PD1TIM3- 0166, TIM3-0038, TIM3-0018, TIM3-0028, TIM3-0438 - Таблица С), WO 2017/031242 (таблица 10), WO 2016/179194 (включая антитела на Фигуре 1b, включая mAb F38-2E2 и 2Е2), WO 2016/171722 (включая 344823 и антитела из гибридом 7D11, 10G12, 11G8, 8В.2С12 и 25F.1D6), WO 2016/161270 (включая АРЕ5137 и АРЕ5121), WO 2016/111947 (включая mAb5, mAb13, mAb15, mAb17, mAb21, mAb22, mAb26, mAb27, mAb48, mAb58 и mAb91), WO 2016/071448 (включая TIM3-0016, TIM3-0018, TIM3-0021, TIM3-0022, TIM3-0026, TIM3-0028, TIM3-0030, TIM3-0033, TIM3-0038, TIM3-0433, TIM3-0434, TIM3-0438 и TIM3-0443), WO 2016/068802 (включая 1В9, 1Н9, 1Н10, 2С7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4 и 2С8 - Фигуры 1, 2 и 3), WO 2016/068803 (включая A3, В10, G6, G7, G9, АН и A11_gl - Фигуры 1, 2 и 3), WO 2015/117002 (включая ABTIM3, ABTIM3-hum02, ABTIM3-hum05, ABTIM3-hum06, ABTIM3-hum09, ABTIM3-hum10, ABTIM3-hum12, ABTIM-hum01, ABTIM-hum04, ABTIM3-hum07, ABTIM3-hum08, ABTIM3-hum04, ABTIM3-hum21, ABTIM3-hum03, ABTIM3-hum11 и антитела, перечисленные в таблице 9), WO 2015/048312 (включая 5D12) WO 2014/022332 (включая 2С12), WO 2013/006490 (включая антитела в таблице 1), WO 2011/155607 (включая 512, 644, 4545, 4177, 8213, 344823 и 34823), WO 2003/063792 (включая антитела 8 В.2С12 и 25F.1D6), WO 2017/019897 (включая молекулы антител, раскрытые в Таблицах 1-4, включая ABTIM3, ABTIM3-hum20, ABTIM3-hum22 и ABTIM3-hum23), WO 2016/079050 и WO 2016/079050 (включая Tim3_0022, Tim3_0016, Tim3_0018, Tim3_00122, Tim3_0022, Tim3_0021, Tim3_0028, Tim3_0026, Tim3_0033, Tim3_0038, Tim3_0030, 1.7.Е10, F38-2EL и 27-12Е12); последовательности и признаки антител против TIM-3 включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает LAG-3, например, LAG-3 человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт LAG-3 включает CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из клона антитела 17В4 (Enzo Life Sciences) или клона 333210 (R&D Systems), или клона 14L676 (United States Biological), или C9B7W (PharMingen), или 11Е, или IMO321, или mAb C9B7W (BioXcell), или из любого из антител против LAG-3, описанных в WO 95/30750, WO 2004/788928, WO 2008/132601 (включая IMP731 Lag-3 Ab, IMP321, А9Н12 Lag-3 mAb и 31G11), WO 2010/019570 (включая 25F7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11F2 и 17Е5), WO 2014/140180 (включая H5L7, H5L7BW, IMP731 и антитела в Таблицах 3 и Таблице 7), WO 2014/179664 (включая АРЕ03109), WO 2014/008218 (включая Lag3.1, Lag3.5, Lag3.6, Lag3.7 и Lag3.8), WO 2015/042246, WO 2015/116539 (включая BMS-986016), WO 2015/138920 (включая BAP050-hum01 - BAP050-hum20, huBAP050(Ser), BAP050-hum01-Ser - BAP050-hum20-Ser, BAP050-Clone-F, BAP050-Clone-G, BAP050-Clone-H, BAP050-Clone-I, BAP050-Clone-J, BAP050 и BAP050-chi), WO 2015/198312, WO 2016/028672 (включая Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 и Ab9), WO 2016/126858, WO 2016/200782 (включая LAG-3 mAb1 - LAG-3 mAb6), WO 2017/015560 (включая L32D10, L3E3, L3C5, L35D4, L35G6, L33H11, L32A9, L32A4, L3A1 и антитела, перечисленные в Таблице 3), WO 2017/062888 (включая mAb1, Н4Н15477Р, Н4Н15483Р, Н4Н15484Р, Н4Н15491, Н4Н17823Р, Н4Н17826Р2, Н4Н17828Р2, H4sH15460P, H4sH15462P, H4sH15463P, H4sH15464P, H4sH15466P, H4sH15467P, H4sH15470P, H4sH15475P, H4sH15479P, H4sH15480P, H4sH15482P, H4sH15488P, H4sH15496P2, H4sH15498P2, H4sH15505P2, H4sH15518P2, H4sH15523P2, H4sH15530P2, H4sH15555P2, H4sH15558P2, H4sH15567P2 и Н4Н17819Р), WO 2017/019894, WO 2017/037203 (включая 8Е2, 13Е2, 34F4, 17В4 и IMP761), WO 2017/087589 (включая 11В09) или WO 2017/087901; последовательности и признаки антител против LAG-3 включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает VISTA, например, человеческий VISTA. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт VISTA содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из любого из антител против VISTA, описанных в WO 2016/207717 и WO 2015/097536 (включая VSTB50, VSTB53, VSTB60, VSTB95, VSTB112, VSTB116, VSTB174, VSTB175, VSTB149, VSTB140 и антитела в Таблице 1А и Примерах 7 и 8) и WO 2014/190356 (включая клоны 2D3 и 18С3); последовательности и признаки анти-VISTA-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает иммунный модулятор. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает иммунный модулятор, выбранный из BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10, CXCL11 и CD155, или из BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10 и CD155. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает иммунный модулятор, выбранный из GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает GARP, например, GARP человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт GARP содержит CDRH1, CDRH2, CDR3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из G14D9, Plato-1, 272, G6, 50 G10 или 7В11, или из любого из антител против GARP, описанных в WO 2007/113301 и WO 2015/015003 (включая MHGARP8, LHG-10, LHG-10-D, LHG-10.3-D, LHG-10.4-D, LHG-10.5-D, LHG-10.6-D, LHG-10.3, LHG-10.4, LHG-10.5, LHG-10.6, 27E10, MHGARP1, MHGARP2, MHGARP3, MHGARP4, MHGARP5, MHGARP6, MHGARP7 и MHGARP9), WO 2017/051888 (включая 110F, 105F, c151D, c198D, h198D, h151D, h151D-H1L1 и h198D-H3L4); последовательности и признаки анти-GARP-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает SIRPα, например, SIRPαчеловека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт SIRPα содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из ED9 (ThermoFisher) или 602411 (Novus Biologicals), или из любого из антител против SIRPα, описанных в WO 97/48723, WO 00/24869 (включая 10С4), WO 00/66159 (включая ED9 и ED17), WO 01/40307, WO 02/092784 (включая SE5A5, SE7C2 и SE12C3), WO 2004/108923 (включая SE12C3 и 2F34), WO 2009/046541 (включая Р84), WO 2011/076781, WO 2012/172521, WO 2012/040207 (включая SE5A5 и мышиный Р84), WO 2013/056352 (включая 29-АМ4-5, Ab АМ4-5, АМ5-1, АМ5-3, АМ5-5, АМ5-6, SIRPalpha-AM3-35, AM4-1, SIRP29-AM3-35, SIRP29-AM4-5, SIRP29-AM4-1, 29-АМ2-2, 29-AM4-4, 29-AM4-1, 29-АМ4-5, 29-AM3-35 и SIRP29-AM3-63), WO 2016/063233, WO 2016/205042 (включая Р362) или WO 2015/138600 (включая KWAR23); последовательности и признаки анти-SIRPα антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CXCR4, например, CXCR4 человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CXCR4 включает CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL улокуплумаба/BMS-936564, клона 44717.111 или PF-06747143, или из любого из антител против CXCR4, описанных в WO 97/49424 (включая MAB12G5), WO 99/50461, WO 01/42308, WO 03/06830 и WO 2003/066830 (включая Ab124 и Ab125), WO 2004/059285 (включая ALX40-4C), WO 2006/089141 (включая mAb 2N, 6R, 18, 19, 20, 33 и 48), WO 2007/005605, WO 2008/142303 (включая МАВ170, МАВ171, МАВ173 и МАВ172), WO 2008/060367 и WO 2013/071068 и WO 2015/015401 (включая BMS-936564/MDX-1338), WO 2009/140124 (включая антитела I, II, III, IV и V), WO 2009/117706 (включая 701, 708, 716, 717, 718 и 4G10), WO 2011/161266 (включая 4CXCR100, 4CXCR103, 4CXCR104, 4CXCR101, 4CXCR238D2 и 4CXCR238D4), WO 2011/098762 (включая С-9Р21 (Таблица 1), В-1М22 (Таблица 2), С1124 (Таблица 3), D-1K21 (Таблица 4) и 9N10 (Таблица 5)), WO 2012/175576, WO 2013/013025 (включая 2А4, 6С7, 4С1, 7С8, 5С9 и 5Е1), WO 2013/017566 (включая Mab 427аВ1 и 515Н7), WO 2013/017562 (включая 1-3859 Mab и 515Н7), WO 2015/069874 (включая антитела, соответствующие SEQ ID Nos 25 и 29), WO 2015/015401 (включая 12А11, 6В6, 3G10, m3G10.hIgG1, m3G10.hIgG4, h3G10.A57.hIgG1, h3G10.A57.A58A.hIgG1, h3G10.1.91.A58A.hIgG1, h3G10.1.91.A58B.hIgG1 и h3G10.2.37.2.72.hIgG1), WO 2016/156570 (включая 281F12, 281А6 и 281D4), WO 2016/109872 (включая антитела, перечисленные в Таблицах 1, 2, 9 и 12, М3-114-6Н, АМ4-272-6Н, АМ3-523-6Н, АМ4-272, АМ3-114, АМ3-523, АМ4-746 и АМ4-1121), WO 2017/071625, WO 2012/175576, WO 2010/125162 и WO 2012/055980 и WO 2011/121040 и WO 2010/037831 (включая с414Н5 (414Н5), с515Н7 (515Н7) и 301aE5), WO 2009/138519 (включая ALX40-4C, 238D2, 238D4, 237В5, антитела и последовательности перечисленные в Таблице 1, Таблице 1.1, Таблице A-I, Таблице В-1.1 и В-5), WO 2011/042398 (включая 238D2 и 238D4), WO 2011/083140 (включая раскрытые в Таблицах С-2, С-3, С-4 и С-5, на Фигуре 2, и ALX-0651, 15Н3, 10Е12, 10G10, 238В6, 10Е9, 281Е10, 10А10, 14А2 и 15А1) или WO 2011/083141; последовательности и признаки анти-CXCR4-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает BTLA, например, hBTLA. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт BTLA включает CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из клона антитела 1В7, клона 2G8, клона 4С5 (Abnova Corporation), клона 4В8 (antibodies-online), клона MIH26 (Thermo Scientific Pierce Antibodies), клона UMAB61 (OriGene Technologies), клона 330104 (R&D Systems), клона 1В4 (Lifespan Biosciences), клона 440205, клона 5Е7 (Creative Diagnostics) или из любого из антител против BTLA, описанных в WO 2016/176583 (включая клон 6F4), WO 2011/014438 (включая 8D5, 8А3, 20Н4, 21Н6, 15С5, 19А7 и 4С7), WO 2010/106051 (включая депозит CNCM №1-4123) и WO 2008/076560 (включая 1В4, Е4Н9, 3С2, 3С2а, 6А5, 11Е2, E8D9, 10Н6 и 4С9, как описано в Примере 2); последовательности и признаки анти-BTLA-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает hVEM, например, hVEM человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт HVEM содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL- из любого из антител против HVEM, описанных в WO 2008/083169 (включая LBH1); последовательности и признаки анти-BTLA-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CSF1R. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CSF1R содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL- из любого из антител против CSF1R, описанных в WO 2009/026303 (включая 1.2, 1.109, 2.360 и 1.2.SM и антитела на Фиг. 1 и 2), WO 2009/112245 (включая CXIIG6), WO 2011/070024 (включая Mab 2F11, 2Е10, 2Н7 и 1G10, и их производные), WO 2011/107553 (включая 7H5.2G10/DSM АСС2922), WO 2011/123381 (включая антитело 1 и антитело 2), WO 2011/131407 (включая 7G5.3B6/DSM АСС2921), WO 2011/140249 (включая 0301, 0302, и 0311, их производные, и антитела в Таблицах 2, 3 и 5), WO 2013/169264 и WO 2014/036357 и WO 2016/106180 и WO 2016/168149 (включая huAb1 - huAb16), WO 2012/110360 и WO 2013/057281 (включая CXIIG6, H19K12, H27K5 и H27K15 и гуманизированные антитела в Таблицах 1 и 2), WO 201/087699 (включая 9D11.2E8 и 10H2.2F12), WO 2014/072441 (включая H27K15), WO 201/173814 и WO 2013/1320 44 (включая Mab 2F11, Mab 2Е10, Mab 2Н7, Mab 1G10 и sc2-4A5, и антитела в Таблицах 3 и 3b), WO 2015/028455 и WO 2015/028454 (включая Ab535, Ab969 и производные, например, Ab969.g2), WO 2015/036511 и WO 2016/207312 (включая 2F11, 2Е10 и производные, описанные в варианте реализации 33) и WO 2017/049038 (включая ALM-423 и антитела, перечисленные в Таблице 2); последовательности и признаки анти-CSF1R-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD39, например, человеческий CD39. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD39 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из BY40, BY12, BA54g (Biolegend), BU61 (Santa Cruz Biotech), A1 (Ebiosciences), AC2 (Immunotech), 22A9 (Abcam), 24DMS1 или любое из анти-CD39-антител, описанных в WO 96/32471, WO 00/04041, WO 01/10205 (включая CD39L4), WO 2009/09547 (включая CNCM-I-3889/BY40), WO 2014/169255, WO 2012/085132 (включая антитела W12, BY40 и BA54g), WO 2016/073845 (включая R29-5-13A, R29-5-71A, R29-5-165C и R29-9-8B), WO 2017/089334 (включая 1-391, 1-392 и антитела, полученные из гибридом 1-3889 и CNCM 1-41171) и WO 2009/095478; последовательности и признаки анти-CD39-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD40, например, человеческий CD40. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD40 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из BMS3h-56-269, СР-870893, дацетузумаба, SEA-CD40, ADC-1013, RO7009789 и Chi Lob 7/4, или из любого из анти-CD40-антител, описанных в WO 2017/059243, WO 2017/059196, WO 2017/040932, WO 2017/040566, WO 2017/004016, WO 2017/004006, WO 2016/196314, WO 2016/028810, WO 2016/023875, WO 2015/134988, WO 2015/091853, WO 2014/070934, WO 2014/065403, WO 2014/065402, WO 2014/04298, WO 2 013/164789, WO 2012/149354, WO 2012/149356, WO 2012/125569, WO 2012/111762, WO 2012/075111, WO 2012/065950, WO 2012/041635, WO 2011/123489, WO 2010/123012, WO 2010/104761, WO 2010/121231, WO 2009/062125, WO 2010/104747, WO 2010/104748, WO 2010/104749, WO 2010/024676, WO 2009/094391, WO 2009/062054, WO 2008/091954, WO 2007/129895, WO 2007/124299, WO 2007/053767, WO 2007/053661, WO 2006/128103, WO 2006/073443, WO 2005/063981, WO 2005/063289 (US 2012/0263732), WO 2005/044855, WO 2005/044306, WO 2005/044304, WO 2005/044304, WO 2005/044854, WO 2005/044305, WO 03/40170 (US 5763442 B, US 6718633 B, US 3338660 B, US 7288251 B, US 7626012 B, US 8388971 B, US 2013/0024956), WO 03/029296, WO 02/088186, WO 01/83755, WO 02/28905, WO 02/28480, WO 02/28481, WO 02/28904, WO 01/37870, WO 01/16180, WO 00/75348, WO 99/61057, WO 99/47575, WO 97/31025, WO 95/17202 и WO 95/96653; последовательности и признаки анти-CD40-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD73, например, человеческий CD73. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD73 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из 1Е9 (Santa Cruz Biotechnology), AD2, 7G2, 4G4, или из любого из анти-CD73-антител, описанных в WO 2017/064043 (включая 7Н10, 12F9, 15D7, 4В11, 11D9 и 9D2), WO 2016/081748 (включая 4С3, 7А11, 6Е11, 5F8, 4С3, 11F11, 11А6, CD73.4-1, CD73.4-2, CD73.3, 11F11-1, 11F11-2, 11F11, 4С3-1, 4С3-2, 4С3-3, 4D4, 10D2-1, 10D2-2, 11А6, 24Н2, 5F8-1, 5F8-2 и 5F8-3), WO 2016/131950 (включая 11Е1, 8С7, 3С12 и 6Е1), WO 2016/075176 (включая MEDI9447, клон 10.3 и клон 2С5) и WO 2016/075099 (включая CD730004, CD730008, CD7300011, CD730021, CD730042, CD730046, CD730047, CD730068 и CD730069), WO 2016/055609 (включая 11Е1, 6Е1, 3С12 и 8С7); последовательности и признаки анти-CD73-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD96, например, человеческий CD96. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD96 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL 6A6 или NK92.39 (Е bioscience), 1C8, 3Н8, МАА6359, или из любого из антител против CD96, описанных в WO 2008/073316, WO 2009/007124, WO 2013/184912, WO 2014/089169, WO 2014/149310 (включая антитело 3.3), WO 2015/024060 или WO 2015/024042, WO 2015/024060 (включая mAb 3.3); последовательности и признаки анти-CD96-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CXCR2, например, CXCR2 человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CXCR2 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL- из любого из антител против CXCR2, описанных в WO 2015/169811 (включая HY29 и HY29GL), WO 201/170317 (включая CX2-Mab, №№1-19), WO 2012/062713, WO 2013/168108 (включая 163D2-127D1, 163E3-127D1, 163Е3-54В12, 163D2-54B12, 2В2-163Е3, 2B2-163D2, 97А9-2В2, 97А9-54В12, 127D1-163D2, 127D1-163E3, 2В2-97А9, 54B12-163D2, 54В12-163Е3, 163D2-2B2, 163Е3-2В2, 127D1-97A9, 54В12-97А9, 97A9-127D1 и их производные), WO 2009/117706 (включая 48311.211, 5Е8 / CXCR2, клон 19 и их производные), WO 2009/120186 (включая RII115, 48311 и их производные) и WO 2002/26249; последовательности и признаки анти-CXCR2-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD200, например, CD200 человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD200 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из DX-109, самализумаба/ALXN-6000, TTI-200.7, или любого из антител против CD200, описанных в WO 99/256565 (включая М3В5 и антитела в Примерах 4 и 5), WO 02/11762 (включая 3В6 и антитела в примерах), WO 2004/060295 (US 2004/0213783), WO 2004/078938 (включая scFv-9), WO 2006/020266 (US 8840885 В2, включая CG1R3A10, cG2aR3A10, cG2aR3B7, dGIR3A5, dGIR3B5 и dGIR3B10 и антитела, описанные на Фиг. 9А-9С, Фиг. 21А и 21В), WO 2007/084321 (US 8709415 В2, включая ALXN5200, hB7VH3VL2, C2aB7G1, C2aB7G2/G4, V3V2-G1 и V3V2-G2/G4), WO 2009/014745 (включая OX90mG2a (Фиг. 10), OX90NE и OX90NE-AG) и WO 2011/100538 и US 2013/0189258 (включая антитело 1 и антитело 2); последовательности и признаки анти-CD200-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывается с CCR4, например, CCR4 человека. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CCR4 включает CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из могамулизумаб, KM3060 (см. Niwa et al., 2004, Cancer Research 64, 2127-2133) и KW-0761 (см. Ishida et al., Annals of Oncology 2008, vol. 19, supplement 4, 513) или из любого из антител против CCR4, описанных в WO 2016/178779 и WO 2016/057488 (включая mAb2-3, 1-44, 1-49, 2-1 и 2-2), WO 2015/179236 (включая KW-0761), WO 201/166500 (включая mAb1567, c1567, h1567, mAb1-4 и 2-3 и антитела в Примерах 6 и 13), WO 2012/076883 (включая антитела 208, 306, 308, 406, 501, 503, 601, 603 и 803 - Таблицы 1-9), WO 2010/142952 (включая 17G, 9Е, 11F, 9Е10, 9E10J и 9E1D - см. Таблицы 1-16), WO 2009/086514 (включая mAb1567 и гуманизированные mAb в Примере 14), WO 2005/035582 (включая антитело DG44/CCR4 и антитело Ms705/CCR4 (FERM BP-8467)), WO 2005/053741 и WO 01/64754 (US 6989145 B, US 7666418 В, US 8197814 В, US 8632996 В, включая KM2160 (FERM BP-10090), KM2760 (депозит FERM BP-7054)), WO 2003/018635 (включая KM2160, KM8759 (FERM ВР-8129) и KM8760 (FERM BP-8130), WO 00/47474 (US 6488930 B, US 7138117 В, включая 2В10, 10Е4, 1G1 и антитела, депонированные с номерами доступа АТСС НВ-12624 и НВ-12625) и WO 00/41724 (US 6881406 B, US 6245332 B, включая 1G1 и антитело, депонированное с номером доступа АТСС НВ-12624); последовательности и признаки анти-CCR4-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CXCL9, например, человеческий CXCL9. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CXCL9 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из mAb 392-100 или AF392 (R&D Systems).
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CXCL10, например, человеческий CXCL10. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CXCL10 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL mAb266 (R&D Systems) или из любого из антител против CXCL10, описанных в WO 017/8708 (включая CR.G (IP-10) (IgG1) (PharMingen) и IP-10 (IgG) (A.Luster), WO 02/15932, WO 03/006045, WO 2004/082714, WO 2004/045525, WO 2004/045526, WO 2004/101511 (включая антитела в Таблице 1 и AIP12, HuAIP12, MuAIP12, AIP13, HuAIP13, MuAIP13, AIP6, AIP8, AIP14, AIP18, AIP21, AIP22, AIP5 и AIP17), WO 2005/060457 (включая AIP5, AIP6, AIP8, AIP10, AIP12, AIP13, AIP14, AIP17, AIP18, AIP21, AIP22, AIP32 и AIP36), WO 2005/011605, WO 2005/023201, WO 2005/058815 (включая 1D4, 1Е1, 2G1, 3С4, 6А5, 6А8, 6В10, 7С10, 8F6, 10А12 и 10A12S13C4), WO 2005/084708, WO 2006/039819, WO 2006/118085, WO 2008/047486, WO 2008/044824 (включая антитела №124, №31, №28, №43 и №137), WO 2008/106200, WO 2009/023566, WO 2012/149320 (включая MSX-1100 и 6А5), WO 2014/003742 (включая антитело Примера 14), WO 201/170735, WO 2014/189306, WO 2015/063187; последовательности и признаки антител против CXCL10 включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD155, например, человеческий CD155. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD155 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из клона SKII.4 (BioLegend).
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает иммунный активатор. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает иммунный активатор, выбранный из CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистическая активность против CXCR3), CD3 и ICOS (например, агонистическая активность против ICOS). В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает иммунный активатор, выбранный из ICOS, CD137, GITR и OX40.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD137, например, hCD137. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD137 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из урелумаба, BMS-663513, PF-05082566 (Pfizer), 1D8 и 3Е1, 4В4 (BioLegend 309809), Н4-1ВВ-М127 (BD Pharmingen 552532), BBK.2 (Thermo Fisher M S621PABX), 145501 (Leinco Technologies B591), антитело, продуцируемое клеточной линией, депонированной как АТСС № НВ-11248 (патент США 6974863) или XmAb-5592, или из любого из анти-CD137-антител, описанных в WO 2017/04945, WO 2016/134358, WO 2015/179236, WO 2012/177788, WO 2012/145183, WO 2012/032433, WO 2009/135019, WO 2005/035584, патенте США 6974863, WO 2004/055513 и WO 2004/010947; последовательности и признаки анти-CD137-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает GITR, например, hGITR. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт GITR содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из MK4166, TRX518, TRX385, МАВ689 (R&D Systems), YGITR765 (Novus Biologicals) или 1D8 (Novus Biologicals), или из любого из антител против GITR, описанных в WO 025/187835 (включая 28F3, 3С3-1, 3С3-2, 2G6, 8А6, 9G7-1, 9G7-2, 14Е3, 19Н8-1, 19Н8-2, 19D3, 18Е10 и 6G10), WO 2015/184099 (включая 1042-7, 32-15, 1039-45, 1333-21, 231-1039-45, 231-32-15, Hum231#1, Hum231#2, m6C8, pab1964, pab1973, pab1975 - pab1977, pab1979 - pab1981, pab1983, pab2159, pab2160, pab2161 и антитела в Таблицах 1 и 2), WO 2015/031667 (включая антитела Ab1 - Ab59 в Таблице 1), WO 2015/026684 (включая антитело с CDR-последовательностями SEQ ID 1-66), WO 2013/039954 (включая 2155, 1718, 1649, 1362, 954, 827, 698, 706 и антитела, перечисленные в Таблицах 1 и 3), WO 2011/051726 (включая антитела, содержащие CDR а-f, перечисленные на странице 17), WO 2011/028683 (включая антитела 36Е5, 61F6, 61G6, 3D6, 6Н6, 1D8, 17F10, 35D8, 49А1, 9Е5, 31Н6 и антитела из гибридом РТА-9889, РТА-9890, РТА-9891, РТА-9892, РТА-9893, РТА-10286, РТА-10287, РТА-10288, РТА-10289, РТА-10290 и РТА-10291), WO 2009/009116 (включая антитело 2F8), WO 2007/133822 (включая антитела, перечисленные в Таблице 1), WO 2006/105021 (включая 6С8, 2F8, HuN6C8-Agly, HuQ6C8-Gly и HuQ6C8-Agly), WO 2006/050172 и WO 2004/084942 (включая DTA-1), WO 03/006058 (включая anti-GITR/TNFRSF18#AF524), WO 2016/054638 (включая mAb №1-81, №3-167, №5-139, №7-192, №10-116, №11-126, №12-46, №13-169, №14-182, №15-68 и №17-60), WO 2016/196792 (включая 6G10, 28F3, 19D3, 18Е10, 3С3, 2G6, 8А6, 9G7, 14Е3 и 19Н8), WO 201/87678 (включая 28F3, 19D3, 18Е10, 3С3-1, 3С3-2, 2G6, 8А6, 9G7-1, 9G7-2, 14Е3, 19Н8-1, 19Н8-2 и 6G10); последовательности и признаки анти-GITR-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает OX40, например, hOX40. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт OX40 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из GSK3174998, L106 BD (Pharmingen, продукт №340420), АСТ35 (Santa Cruz Biotechnology, № по каталогу 20073), MOXR0916, MEDI-6469, MEDI-0562, 9B12 (Weinberg, AD, et al., J Immunother 29, 575-585 (2006)), гуманизированное анти-ОХ40 Ab, описанное в Morris et al., Mol Immunol. May 2007; 44(12):3112-3121, или из любого из антител против OX40, описанных в WO 2000/077085 (включая SAP9, SAP28.2, SAP15.3, SAP 29-50, SAP 25-29 и SAP 29-23 и гуманизированные варианты, описанные в Примерах 4 и 5), WO 2017/063162 (включая 03, 019, 021 и вариант со зрелой аффинностью в Примере 5 - Таблица 2, включая 21#Н28НЗЗ, 21#Н65, 21#Н96, 21#VHnew-L80, 21#H96-L80), WO 2017/050729 (включая SP197), WO 2017/021912 и WO 2017/021910 (включая ANTIBODY 106-222, OX86 и антитела, описанные на Фиг. 6 и 7), WO 2016/200836 и WO 2016/200835 (включая MOXR0916/1A7.gr1 IgG1), WO 2016/196228 (включая 3F4, 14В6-1, 14В6-2, 23Н3, 18Е9, 8В11, 20В3, 20С1, 6Е1-1, 6Е1-2, 14А2, 14А2-1, 14А2-2, L106, OX40.1, OX40.5, OX40.8, OX40.6 и OX40.16 и OX40.21 - Фигуры 1-10), WO 2016/179517 (включая 11D4, pab1949, pab1949-1, pab2044, pab2193 -1, Таблицы 1-4), WO 2016/057667 (включая 9B12 и OX40mAb24), WO 2015/153513 (включая 3С8, 1D2, 1А7 и их варианты, описанные в перечне последовательностей, включая A1A7.gr1 и 3C8.gr.5, антитела, описанные на Фигуре 1), WO 2014/148895 (включая АСТ35, 12Н3, 12Н3 (Фиг. 25) - и гуманизированные версии VL1H1, VL1VH2, VL1VH3, VL2H1, VL2VH2 и VL2VH3 (Фиг. 43 и 44) и 20Е5 (Фиг. 24)), WO 2013/068563 (включая А26 [Фиг. 2]), WO 2013/038191 (включая АСТ35, 12Н3 и 12Н3), WO 2013/028231 (включая 119-122, 119-43-1, 106-222 и антитела в Таблице 1), WO 2013/008171 (включая 2F8, 1D4 и их производные, включая VH6/VL9, и антитела на Фиг. 4 и 5, и Таблицы 6 и 7), WO 2012/027328 (включая 119-122, 119-43-1, Hu106 и Hu106-222), WO 2010/096418 (включая А26), WO 2008/106116 (включая антитела в Таблицах 1 и 2 и А10 (включая A10A-F), В66 - Fig14 - В2, В24, В36, В37 и В39) и WO 2007/062245 (включая 112V8 (АТСС № РТА-7219), 112Y55 (АТСС № РТА-7220), 112Y131 (АТСС № РТА-7218), 112F32 (АТСС № РТА-7217) и 112Z5 (АТСС № РТА-7216); последовательности и признаки антител против OX40 включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CXCR3, например, CXCR3. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CXCR3 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из GSK3174998 или из любого из анти-CXCR3 антител, описанных в WO 2016/200836, WO 2016/200835, WO 2016/196228, WO 2016/179517, WO 2016/057667, WO 2015/153513, WO 2014/148895, WO 2013/068563, WO 2013/038191, WO 2013/028231, WO 2013/008171, WO 2012/027328, WO 2010/096418, WO 2011/073180, WO 2008/106116 и WO 2007/062245; последовательности и признаки анти-CXCR3-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD27, например, hCD27. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD27 содержит CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL- из любого из антител против CD27, описанных в WO 2016/145085 (в том числе 1F5), WO 2015/016718 (включая hCD27.15 и 1F5), WO 2014/140374 (включая 2F2, 5F24, 5F32, 10F13, 10F31, 11F26, 1052-015, F2A4B2 и их производные, включая hz5F24VH+V5Q, hz5F24VL+K45Q), WO 2013/138586 (включая С2177, С2186, С2191 и С2192 и производные в Примерах 8-12 и Таблицах 7-42), WO 2012/004367 (включая hCD27.15/ATCC № РТА-11008), WO 2011/130434 (включая 1G5, 1Н8, 3Н12, 3Н8, 2G9, 1F5, 3А10, 2С2, ms 1A4, ms 9F4 и ms M-T271), WO 2011/081164 и WO 2010/001908 (включая KM4027, KM4028, KM4026, KM4030, KM4032 и их производные), WO 2008/051424 (включая LG3A10 и АТ124-1); последовательности и признаки анти-CD27-антител включены в данный документ посредством ссылок.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает CD3, например, hCD3. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт CD3 включает CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 и CDRL3, или VH, или VL, или область VH и VL из антитела OKT3, отеликсизумаба, теплизумаба или висилизумаба, или из любого из анти-CD3-антител, описанных в WO 2017/010874, WO 2017/009442, WO 2016/204966, WO 2016/180721, WO 2016/179003, WO 2016/116626, WO 2016/014974, WO 2015/104346, WO 2015/095392, WO 2015/001085, WO 2014/047231, WO 2013/188693, WO 2013/186613, WO 2013/158856, WO 2012/173819, WO 2012/162067, WO 2005/118635, WO 2004/108158, WO 2004/052397, WO 2004/024771, W0 01/51644, WO 00/05268, WO 97/44362, WO 93/19196, WO 92/06193 и WO 91/09968; последовательности и признаки анти-CD3-антител включены в данный документ посредством ссылок.
Аспект 1b. Иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, причем тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
а) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
б) константная область тяжелой цепи;
c) необязательно, линкер, (L); и
d) цитокин IL-2;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
e) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3; и
f) константную область легкой цепи (CL);
где домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с антигеном, выбранным из: ингибитора иммунной контрольной точки (такого как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, TIM-3 и LAG-3), иммунного модулятора (такого как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R) и иммунного активатора (такого как CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистические антитела против CXCR3), CD27, CD3 и ICOS (например, агонистические анти-ICOS антитела), например, ICOS, CD137, GITR и OX40).
В другом варианте реализации, антигенсвязывающий сайт, который специфически связывается с антигеном, выбран из: ингибитора иммунной контрольной точки (такого как PD-1, CTLA-4, TIGIT, TIM-3, LAG-3 и VISTA, например, TIGIT, TIM-3 и LAG-3), иммунного модулятора (такого как BTLA, hHVEM, CSF1R, CCR4, CD39, CD40, CD73, CD96, CXCR2, CXCR4, CD200, GARP, SIRPα, CXCL9, CXCL10 и CD155, например, GARP, SIRPα, CXCR4, BTLA, hVEM и CSF1R) и иммунного активатора (такого как CD137, GITR, OX40, CD40, CXCR3 (например, агонистические антитела против CXCR3), CD3 и ICOS (например, агонистические анти-ICOS антитела), например, ICOS, CD137, GITR и OX40).
Любой из вариантов реализации аспекта 1 и/или аспекта 1а является применимым mutatis mutandis (с необходимыми изменениями) к аспекту 1b. Любые из признаков или вариантов реализации аспектов 2-54 являются применимыми mutatis mutandis к аспекту 1b. Любой из признаков антител или других вариантов реализации или признаков концепций 1-70 является применимым mutatis mutandis к аспекту 1b.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывает любой из антигенов, как указано в Аспекте 1а.
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт специфически связывается с hPD-L1, представленным SEQ ID NO: 1, и конкурирует за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05; причем иммуноцитокин содержит домен VH, который содержит CDRH3, содержащий мотив X1GSGX2YGX3X4FD, где X1, X2 и Х3 независимо представляют собой любую аминокислоту, а Х4 либо присутствует, либо отсутствует, и, в случае его присутствия, может быть любой аминокислотой.
В любом из аспектов 1 или 1а, формулировка части f) может быть изменена следующим образом: «f) цитокин, например, выбранный из IL-7, IL-15, IL-21, IL-12, GM-CSF, TNFα, TGFβ, CXCL9, CXCL10 и интерферона-α". В 1b формулировка части d) может быть заменена на «d) цитокин, например, выбранный из IL-7, IL-15, IL-21, IL-12, GM-CSF, TNFα, TGFβ, CXCL9, CXCL10 и интерферона-α". Таким образом, раскрытые в данном документе иммуноцитокины могут содержать цитокины, отличные от цитокина, обладающего активностью цитокина IL-2. В одном варианте реализации, цитокин представляет собой IL-7 (SEQ ID NO: 330). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой IL-15 (SEQ ID NO: 331). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой IL-21 (SEQ ID NO: 332). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой IL-12, содержащий α-цепь (SEQ ID NO: 336) и β-цепь (SEQ ID NO: 337). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой GM-CSF (SEQ ID NO: 333). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой TNFα (SEQ ID NO: 335). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой TGFβ. В одном варианте реализации, цитокин представляет собой CXCL9 (SEQ ID NO: 338). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой CXCL10 (SEQ ID NO: 339). В одном варианте реализации, цитокин представляет собой интерферон-α (SEQ ID NO: 334).
В другом варианте реализации, цитокин является иммуностимулирующим цитокином. В другом варианте реализации, цитокин является стимулирующим Т-клеточным цитокином.
Аспект 2. Иммуноцитокин согласно аспекту 1, где X1 представляет собой гидроксилсодержащую аминокислоту, необязательно, Т.
Аспект 3. Иммуноцитокин согласно аспекту 1 или аспекту 2, где X2 представляет собой основную аминокислоту, необязательно, K.
Аспект 4. Иммуноцитокин согласно любому из аспектов 1-3, где X2 представляет собой гидроксилсодержащую аминокислоту, необязательно, S или Т.
Аспект 5. Иммуноцитокин по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что Х3 представляет собой ароматическую аминокислоту, необязательно, W.
Аспект 6. Иммуноцитокин согласно любому из аспектов 1-5, где Х4 отсутствует.
Аспект 7. Иммуноцитокин согласно любому из аспектов 1-5, где Х4 присутствует.
Аспект 8. Иммуноцитокин согласно аспекту 7, где Х4 представляет собой алифатическую аминокислоту, необязательно, G.
Признаки аспектов 2-7 могут быть такими, как определено в любой из концепций 2-7 выше.
Аспект 9. Иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, причем тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
где домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с hPD-L1 и конкурирует за связывание с указанным hPD-L1 с антителом 1D05, где антитело или фрагмент содержат домен VH, который содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений, где, необязательно, Иммуноцитокин соответствует любому из аспектов 2-8.
В этом аспекте, любые признаки CDRH3, описанные в концепциях 9 и 9a-l, и любые варианты реализации концепции 9, являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 10. Иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, причем тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с hPD-L1; и
причем домен VH содержит CDRH3, который состоит из 12-20 аминокислот и получен путем рекомбинации VH генного сегмента человека, D генного сегмента человека и JH генного сегмента человека, причем JH генный сегмент человека представляет собой IGHJ5 (например, IGHJ5*02).
В этом аспекте, любые признаки CDRH3, описанные в концепциях 10 и 10а, являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 11. Иммуноцитокин согласно аспекту 10, где VH генный сегмент человека представляет собой IGHV3 (например, IGHV3-9, такой как IGHV3-9*01).
В этом аспекте, любые признаки генных сегментов, описанные в концепциях 11, 11а или 11b, являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 12. Иммуноцитокин согласно аспекту 10 или аспекту 11, где антитело или фрагмент содержат домен VL, который получен путем рекомбинации Vκ генный сегмент человека и Jκ генный сегмент человека, где VL генный сегмент человека представляет собой IGκV1D (например, IGKV1D-39, такой как IGKV1D-39*01).
В этом аспекте, любые признаки генных сегментов, описанные в концепциях 12, 12а или 12b, являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 13. Иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, причем тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который специфически связывается с эпитопом, идентичным эпитопу, с которым специфически связывается антитело 1D05.
В этом аспекте, любые признаки эпитопов, анализов и других вариантов реализации, описанные в любой из концепций 13 и 13а-13l, являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 14. Иммуноцитокин согласно аспекту 13, где эпитоп идентифицируют сканированием неродственной аминокислотой или рентгеновской кристаллографией.
Аспект 15. Иммуноцитокин согласно аспекту 14, где контактные остатки эпитопа определяют по снижению аффинности, по меньшей мере, в 10 раз при сканировании неродственной аминокислотой, например, сканировании аланином, по результатам определения методом SPR.
В этом аспекте, любые признаки концепции 15 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 16. Иммуноцитокин, содержащий тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина, причем тяжелая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
a) домен VH, содержащий CDRH1, CDRH2 и CDRH3; и
b) константную область тяжелой цепи;
и легкая цепь содержит, в направлении от N- к С-концу:
c) домен VL, содержащий CDRL1, CDRL2 и CDRL3;
d) константную область легкой цепи (CL);
e) необязательно, линкер (L); и
f) цитокин IL-2;
причем домен VH и домен VL состоят из антигенсвязывающего сайта, который конкурирует за связывание с hPD-L1 с антителом 1D05.
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 16а-16l или любого из конкурентных анализов и других вариантов реализации, описанных в концепции 16, или признаки концепции 35 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 17. Иммуноцитокин согласно любому из аспектов 10-16, где домен VH содержит последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, или последовательность CDRH3, представленную SEQ ID NO: 29 или 32, содержащую 6 или меньше аминокислотных замещений.
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 17а-17l являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 18. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где домен VH содержит последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 или 30, или последовательность CDRH1, представленную SEQ ID NO: 27 или 30, содержащую 3, 2 или 1 аминокислотных замещений.
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 18а-18l являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 19. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где домен VH содержит последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 или 31, или последовательность CDRH2, представленную SEQ ID NO: 28 или 31, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 19а-19l являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 20. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33 или аминокислотную последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере 85%, или по меньшей мере 90%), идентична SEQ ID NO: 33 (например, последовательности домена VH в любой из последовательностей тяжелой цепи, представленных SEQ ID Nos: 47-49).
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 20а-20l или любого из вариантов реализации концепции 20 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 21. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, содержащий первую и вторую копии указанной тяжелой цепи.
Аспект 22. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, содержащий домен VL, который содержит последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 или 40, или последовательность CDRL1, представленную SEQ ID NO: 37 или 40, содержащую 3 или меньше аминокислотных замещений.
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 22а-22l являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 23. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, содержащий домен VL, который содержит последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 или 41, или последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 38 или 41, содержащую 2 или 1 аминокислотных замещений, например, последовательность CDRL2, представленную SEQ ID NO: 50.
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 23а-23l являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 24. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, содержащий домен VL, который содержит последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 или 42, или последовательность CDRL3, представленную SEQ ID NO: 39 или 42, содержащую 4 или меньше аминокислотных замещений.
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 24а-24l являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 25. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, содержащий домен VL, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43 или аминокислотную последовательность вариабельного домена легкой цепи, которая по меньшей мере на 80% (например, по меньшей мере 85%, или по меньшей мере 90%), идентична SEQ ID NO: 43 (например, последовательности домена VL в последовательности легкой цепи, представленной SEQ ID NO: 50 или 51).
В этом аспекте, любые признаки антител концепций 25а-25l или любого из вариантов реализации концепции 25 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 26. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, содержащий первую и вторую копии указанной легкой цепи.
Аспект 27. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, который специфически связывается с PD-L1 яванского макака, представленным SEQ ID NO: 2.
В этом аспекте, любые варианты реализации концепции 27 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 28. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где антитело или фрагмент содержат легкую цепь каппа.
В этом аспекте, любые варианты реализации концепции 28 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 29. Иммуноцитокин по любому из аспектов 9-28, где аминокислотные замещения представляют собой консервативные аминокислотные замещения, где, необязательно, консервативные замещения относятся к одной из шести групп (каждая группа содержит аминокислоты, являющиеся консервативными замещениями друг для друга), выбранных из:
1) аланин (А), серин (S), треонин (Т);
2) аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е);
3) аспарагин (N), глутамин (Q);
4) аргинин (R), лизин (K);
5) изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), валин (V); и
6) фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W). В этом аспекте, любые варианты реализации концепции 9 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 30. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где антитело или фрагмент содержат константную область, например, константную область IgG1, где, необязательно, константная область представляет собой инактивированный (disabled) IgG1, представленный SEQ ID NO: 205.
В этом аспекте, любые признаки или варианты реализации концепций 30, 31 или 32 являются применимыми mutatis mutandis.
Аспект 31. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где:
A) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
B) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 43;
C) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
D) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
Е) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43;
F) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
G) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
Н) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
I) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 50;
J) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
K) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
L) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
М) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 51;
N) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
О) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 47, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
Р) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 48, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
Q) домен VH содержит аминокислотную последовательность домена VH, представленную SEQ ID NO: 49, а домен VL содержит аминокислотную последовательность домена VL, представленную SEQ ID NO: 298;
R) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68;
S) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 58, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 68;
Т) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88;
U) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 78, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 88;
V) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108;
W) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 98, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 108;
X) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128;
Y) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 118, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 128;
Z) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 158, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168;
АА) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 158, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 168;
ВВ) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 178, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 188;
СС) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 178, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 188;
DD) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 138, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148;
ЕЕ) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 13, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 148;
FF) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 244, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 254;
GG) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 244, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 254;
НН) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 264, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 274;
II) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 264, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 274;
JJ) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 294;
KK) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 284, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 294;
LL) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и
MM) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 13, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 23;
NN) домен VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 349, а домен VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 359; и
OO) домен VH содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 349, а домен VL содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 359.
В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 70% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 75% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 95% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 96% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 97% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 98% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99,5% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID.
Аспект 32. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где:
A) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 299, и VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
B) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 299, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 45;
C) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
D) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а VL и CL, содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
E) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, a VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
F) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45;
G) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 238, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
Н) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
I) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а VL и CL, содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
J) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
K) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50;
L) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 299, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
М) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
N) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
О) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
P) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, a VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51;
Q) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 299, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
R) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
S) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
Т) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
U) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 298;
V) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60, и VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70;
W) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 60, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 70;
X) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80, и VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90;
Y) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 80, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 90;
Z) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110;
AA) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 100, a VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 110;
ВВ) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120, и VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130;
СС) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 120, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 130;
DD) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 160, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 170;
ЕЕ) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 160, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 170;
FF) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 180, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 190;
GG) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 180, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 190;
НН) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 140, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 150;
II) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 140, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 150;
JJ) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 246, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256;
KK) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 246, a VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 256;
LL) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 266, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 276;
MM) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 266, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 276;
NN) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 286, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 296; и
OO) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 286, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 296;
РР) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25; и
QQ) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 15, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 25;
RR) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 351, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 361; и
SS) VH и константная область содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 351, а VL и CL содержат аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична SEQ ID NO: 361.
В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 70% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 75% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 95% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 96% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 97% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 98% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID. В одном варианте реализации, аминокислотная последовательность, по меньшей мере на 99,5% идентична последовательности с указанным идентификатором SEQ ID.
Аспект 33. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где антигенсвязывающий сайт специфически связывает PD-L1, тогда как цитокин IL-2 связывает высокоаффинный (αβγ) рецептор IL-2 (IL-2R).
В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт связывает PD-L1 одновременно со связыванием цитокином IL-2 αβγ IL-2R. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт связывает PD-L1 последовательно со связыванием цитокином IL-2 αβγ IL-2R. В одном варианте реализации, цитокин IL-2 дополнительно связывает промежуточный (βγ) IL-2R.
Аспект 34. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где иммуноцитокин способен ингибировать супрессию Т-клеток, опосредованную PD-L1.
В одном варианте реализации, иммуноцитокин ингибирует PD-L1-опосредованную супрессию Т-клеток. В одном варианте реализации, иммуноцитокин ингибирует PD-L1-опосредованную супрессию Т-клеток в анализе in vitro. В другом варианте реализации, антигенсвязывающий сайт имеет любые из признаков или вариантов реализации концепций 51 или 52.
В другом варианте реализации, антигенсвязывающий сайт блокирует или ингибирует связывание PD-1 с PD-L1. В одном варианте реализации, антигенсвязывающий сайт блокирует или ингибирует связывание CD80 с PD-L1.
Аспект 35. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где иммуноцитокин способен усиливать опосредованную IL-2R активацию Т-клеток.
В одном варианте реализации, иммуноцитокин усиливает активацию Т-клеток, опосредованную IL-2R. В одном варианте реализации, иммуноцитокин усиливает опосредованную IL-2R активацию Т-клеток в анализе in vitro.
Аспект 36. Иммуноцитокин согласно аспекту 34 или аспекту 35, где супрессию Т-клеток или усиление опосредованной IL-2R активации Т-клеток измеряют по увеличению одного или нескольких показателей из IFNγ, IL-2, CD25 или пролиферации Т-клеток в анализе, обеспечивающем костимуляцию посредством прямой стимуляции CD3/CD28, стимуляции суперантигеном, или обеспечивающем костимуляцию путем совместной инкубации с клетками, способными индуцировать Т-клеточный ответ.
Измерения могут проводиться с использованием любой пригодной методики. Например, измерения могут проводиться с использованием ИФА, HTRF, включения BRDU (пролиферация), электрохемилюминесценции (ECL) или проточной цитометрии (например, FACS). Эти способы хорошо известны специалистам в данной области и описаны в других разделах данного документа. В одном варианте реализации, анализ представляет собой проточную цитометрию. В одном варианте реализации, анализ представляет собой ИФА. В одном варианте реализации, анализ представляет собой HTRF.
В этом аспекте, когда аспект 36 является зависимым от аспекта 34, любые признаки или варианты реализации концепции 36 являются применимыми mutatis mutandis.
Когда Аспект 36 является зависимым от Аспекта 35, в одном варианте реализации, усиление опосредованной IL-2R активации Т-клеток измеряют по увеличению одного или обоих показателей из IFNγ и CD25.
Когда Аспект 36 является зависимым от Аспекта 35, в одном варианте реализации, костимуляция обеспечивается прямой стимуляцией CD3/CD28.
Когда Аспект 36 является зависимым от Аспекта 35, в одном варианте реализации, костимуляция обеспечивается суперантигеном, таким как стафилококковый энтеротоксин В (SEB).
Когда Аспект 36 является зависимым от Аспекта 35, в одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с клетками, способными индуцировать Т-кпеточный ответ. Такие клетки могут представлять собой антигенпредставляющие клетки (АПК), например, моноциты, В-клетки или дендритные клетки. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с АПК. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с моноцитами. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с В-клетками. В одном варианте реализации, анализ обеспечивает костимуляцию путем совместной инкубации с дендритными клетками.
Аспект 37. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, который не содержит линкер (L), или иммуноцитокин согласно любому из предыдущих пунктов, где CL в соответствии с d) непосредственно сливается с цитокином в соответствии с f).
В одном варианте реализации, CL легкой цепи или тяжелой цепи непосредственно сливают с цитокином.
В одном варианте реализации аспекта 1b CL в соовтетствии с b) непосредственно сливают с цитокином в соответствии с d).
Аспект 38. Иммуноцитокин согласно любому из аспектов 1-37, где линкер представляет собой пептидный линкер длиной от 1 до 20 аминокислот.
В одном варианте реализации, линкер представляет собой пептидный линкер длиной от 1 до 15 аминокислот. В одном варианте реализации, линкер представляет собой пептидный линкер длиной от 1 до 10 аминокислот. В одном варианте реализации, линкер представляет собой пептидный линкер длиной от 1 до 5 аминокислот.
В одном варианте реализации, линкер может быть химическим линкером. В случае рекомбинантных гибридных белков линкеры кодируются последовательностями нуклеиновых кислот, расположенными в рамке, между кодирующими областями различных участков иммуноцитокина. В случае синтетических белков, линкерные пептиды вводят во время синтеза.
Линкеры хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области. Например, см. описание в Denardo et al., 1998, Clin. Cancer Res., 4(10):2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7; и Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol., 26(8):943-50, раскрытые в этих документах модификации включены в данный документ посредством ссылок.
Аспект 39. Иммуноцитокин согласно аспекту 38, где линкерный пептид выбран из поли-G или (G4S)X, где Х равно 1,2,3 или 4.
В других вариантах реализации, линкер может быть выбран из STG, GSTG, RS, TVAAPS, GGGGS, GSTVAAPS, TVAAPSGS или GSTVAAPSGS. В другом варианте реализации, линкер представляет собой Gln-Arg-Val-Asp (получен из N-конца константной области каппа собаки). В другом варианте реализации, линкером представляет собой GGNGT или YGNGT.
Аспект 40. Иммуноцитокин согласно любому из предшествующих аспектов, где цитокин IL-2 представляет собой человеческий IL-2 (hIL-2) или его вариант.
Варианты IL-2 описаны в аспекте 1.
Также предлагается вариант цитокина, который может быть любым из не относящихся к IL-2 цитокинов, описанных в данном документе (включая не относящиеся к IL-2 цитокины, описанные в Аспекте 1, например, выбранные из IL-7, IL-15, IL-21, IL-12, GM-CSF, TNFα, αCXCL9, αCXCL10 и интерферон-α). Определение варианта IL-2 цитокина является применимым mutatis mutandis к другим цитокинам (включая иммуностимулирующие цитокины и цитокины, стимулирующие Т-клетки), раскрытым в данном документе, например, включающим любую из N-концевыхделеций, описанных для IL-2 в аспекте 1.
Аспект 41. Иммуноцитокин согласно аспекту 40, где hIL-2 содержит или состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 301.
Аспект 42. Иммуноцитокин согласно аспекту 40, где hIL-2 содержит вариант IL-2, который содержит модификацию на N-конце, необязательно, делецию от 1 до 10 аминокислот.
В используемом в этом аспекте значении, модификация на N-конце любого из описанных в данном документе цитокинов (включая не относящиеся к IL-2 цитокины, описанные в Аспекте 1, например, выбранные из IL-7, IL-15, IL-21, IL-12, GM-CSF, TNFα, αCXCL9, αCXCL10 и интерферон-α) относится к одному или нескольким (например, от 1 до 10, например, 1-5) аминокислотным замещениям, делециям или вставкам.
В одном варианте реализации, модификация представляет собой одно или несколько (например, от 1 до 10, например, 1-5) аминокислотных замещений на N-конце цитокина. Замещения могут быть консервативными замещениями, например, как определено в концепции 9, концепции 29 или аспекте 29. В одном варианте реализации, модификация является делецией. В другом варианте реализации, модификация представляет собой N-терминальную делецию, например, любую из делеций, описанных в концепции 9 и аспекте 1. В одном варианте реализации, модификация (такая как делеция от 1 до 10 аминокислот) находится в пределах конечных 50 аминокислот на N-конце цитокина, например, цитокина IL-2. В одном варианте реализации, модификация (например, делеция от 1 до 10 аминокислот) находится в пределах конечных 30 аминокислот N-конца цитокина, например, цитокина IL-2. В одном варианте реализации, модификация (такая как делеция от 1 до 10 аминокислот) находится в пределах конечных 25 аминокислот N-конца цитокина, например, цитокина IL-2. В одном варианте реализации, модификация (например, делеция от 1 до 10 аминокислот) находится в пределах конечных 20 аминокислот N-конца цитокина, например, цитокина IL-2. В одном варианте реализации, модификация (например, делеция от 1 до 10 аминокислот) находится в пределах конечных 15 аминокислот N-конца цитокина, например, цитокина IL-2. В одном варианте реализации, модификация (такая как делеция от 1 до 10 аминокислот) находится в пределах конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, например, цитокина IL-2.
В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию от 1 до 9 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечных 1-9 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию от 1 до 8 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечных 1-8 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию от 1 до 7 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечных 1-7 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию от 1 до 6 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечных 1-6 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию от 1 до 5 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечных 1-5 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию от 1 до 4 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечных 1-4 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию от 1 до 3 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечных 1-3 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию 1 или 2 аминокислот из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, таких как делеция конечных 1 или 2 аминокислот N-конца цитокина. В одном варианте реализации, модификация представляет собой делецию 1 аминокислоты из конечных 10 аминокислот N-конца цитокина, такую как делеция конечной аминокислоты N-конца цитокина. В конкретном варианте реализации, цитокин представляет собой цитокин IL-2, такой как цитокин IL-2 человека.
В одном варианте реализации, делеции подвергается 9-я аминокислота с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. В одном варианте реализации, делеции подвергаются 8-я и 9-я аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, к цитокину IL-2 человека. В одном варианте реализации, делеции подвергаются 7-я, 8-я и 9-я аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. В одном варианте реализации, делеции подвергаются от 6-й до 9-й аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. В одном варианте реализации, делеции подвергаются от 4-й до 9-й аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. В одном варианте реализации, изобретения, делеции подвергаются от 3-й до 9-й аминокислоты с N-конца цитокина, например, IL-2 цитокина, например, человеческого цитокина IL-2. В одном варианте реализации, делеции подвергаются от 2-й до 9-й аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. В одном варианте реализации, делеции подвергаются от 2-й до 6-й аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. В одном варианте реализации, делеции подвергаются от 3-й до 7-й аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. В одном варианте реализации, изобретения, делеции подвергаются от 4-й до 8-й аминокислоты с N-конца цитокина, например, цитокина IL-2, например, цитокина IL-2 человека. Любая из делеций, описанных в Аспекте 1 выше, может быть применена mutatis mutandis к не относящимся к IL-2 цитокинам в соответствии с данным аспектом.
Аспект 42а. Вариант hIL-2, содержащий N-концевую модификацию по любому из аспектов или признаков аспекта 42. В одном варианте реализации аспекта 42а вариант hIL-2 представляет собой очищенный вариант hIL-2. В другом варианте реализации аспекта 42а вариант hIL-2 представляет собой выделенный и очищенный вариант hIL-2.
Аспект 42b. Вариант цитокина, выбранный из IL-7, IL-15, IL-21, IL-12, GM-CSF, TNF, CXCL9, CXCL10 и интерферона-α, содержащий N-концевую модификацию по любому из аспектов или признаков аспекта 42. В одном варианте реализации аспекта 42а вариант цитокина представляет собой очищенный вариант цитокина. В другом варианте реализации аспекта 42а вариант цитокина представляет собой выделенный и очищенный вариант цитокина.
Аспект 43. Иммуноцитокин согласно аспекту 40 или аспекту 42, где hIL-2 содержит вариант IL-2, содержащий N-концевую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:303-323.
Аспект 43а. Вариант hIL-2, содержащий N-концевую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:303-323.
В одном варианте реализации аспекта 43а вариант hIL-2 представляет собой очищенный вариант hIL-2. В другом варианте реализации аспекта 43а вариант hIL-2 представляет собой выделенный и очищенный вариант hIL-2. В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) N-концевой последовательности, выбранной из SEQ ID NO:303-323, непосредственно слитой с последовательностью IL-2, выбранной из SEQ ID NO:324, 517 и 518.
Аспект 44. Иммуноцитокин согласно любому из аспектов 40, 42 или 43, где вариант hIL-2 содержит одну или несколько (например, от 1 до 5, например, одну или две) мутаций, независимо выбранных из следующих:
1) D20 (например, D20T);
2) R38 (например, R38W, R38A или R38Q);
3) F42 (например, F42A или F42K);
4) Y45 (например, Y45A);
5) Е62 (например, Е62А);
6) N88 (например, N88R);
7) С125 (например, C125S);
8) Q126 (например, Q126W); или
9) R38 и F42 (такие как R38W и F42K, или R38A и F42A);
причем нумерация остатка определена по отношению к последовательности IL-2 дикого типа человека, SEQ iD NO:301.
Аспект 44а. Вариант hIL-2 по любому из аспектов 42а или 43а, где вариант hIL-2 содержит одну или несколько (например, от 1 до 5, например, одну или две) мутаций, независимо выбранных из следующих:
1) D20 (например, D20T);
2) R38 (например, R38W, R38A или R38Q);
3) F42 (например, F42A или F42K);
4) Y45 (например, Y45A);
5) Е62 (например, Е62А);
6) N88 (например, N88R);
7) С125 (например, C125S);
8) Q126 (например, Q126W); или
9) R38 и F42 (такие как R38W и F42K, или R38A и F42A);
причем нумерация остатка определена по отношению к последовательности IL-2 дикого типа человека, SEQ ID NO:301.
В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации F42 (такой как F42A или F42K, например, F42A). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации Y45 (например, Y45A). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации Е62 (такой как Е62А).
В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A) и мутации F42 (такой как F42A или F42K, например, F42A). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A) и мутации Y45 (такой как Y45A). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A) и Е62 (такой как Е62А). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации Y45 (такой как Y45A) и Е62 (такой как Е62А). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации F42 (такой как F42A или F42K, например, F42A) и мутации Е62 (такой как Е62А). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации F42 (такой как F42A или F42K, например, F42A) и мутации Y45 (например, Y45A).
В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A), мутации F42 (такой как F42A или F42K, например, F42A) и мутации Y45 (такой как Y45A). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A), мутации F42 (такой как F42A или F42K, например, F42A) и мутации Е62 (такой как Е62А). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A), мутации Y45 (такой как Y45A) и мутации Е62 (такой как Е62А).
В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38 (такой как R38W, R38A или R38Q, например, R38A), мутации F42 (такой как F42A или F42K, например, F42A), мутации Y45 (такой как Y45A) и мутацию Е62 (такой как Е62А). В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) мутации R38A, F42A, Y45A и Е62А.
Другие мутации hIL-2 известны специалистам в данной области техники. В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2012/062228 (см. Пункты 2-7 формулы изобретения, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 1999/60128 (см. пункты формулы изобретения 6, 7, 8, 10, 11 и 12, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 1993/20849 (см. пункты формулы изобретения 4 и 5, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2003 / 015697 (см. пункты формулы изобретения 7 и 10, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2005/007121 (см. пункты формулы изобретения 9-14, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2005/086798 (см. пункты формулы изобретения 5-10, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2005/086751 (см. пункты формулы изобретения 5-9, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2009/061853 (см. пункт 5 формулы изобретения, включенную в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2012/088446 (см. пункты формулы изобретения 3-8 и 11-13, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2012/107417 (см. пункты формулы изобретения 2, 4, 6 и 9, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2012/119093 (см. пункты формулы изобретения 1-7 формулы изобретения, включенные в данный документ посредством ссылки). В одном варианте реализации, мутации hIL-2 представляют собой мутации, описанные в WO 2015/164815 (см. пункты формулы изобретения 3-19, включенные в данный документ посредством ссылки).
В этих аспектах, где нумерация остатков определяется со ссылкой на последовательность IL-2 человека дикого типа, если, например, присутствует одна делеция аминокислоты на N-конце цитокина, а в заявке описывается аминокислотная мутация N88, то для варианта IL-2, имеющего одну делецию аминокислоты, N фактически будет находиться в положении 87. Если цитокин имеет 3 делеции аминокислот на N-конце, а мутация представляет собой мутацию F42A, то фактическим положением мутации в варианте последовательности будет F39.
Аспект 45. Иммуноцитокин согласно аспекту 40, где hIL-2 содержит вариант IL-2, состоящий из N-концевой последовательности, выбранной из SEQ ID NO:242-262, слитой с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:324.
В одном варианте реализации, вариант hIL-2 содержит (или состоит из) N-концевой последовательности, выбранной из SEQ ID NO:303-323, слитой с аминокислотной последовательностью, выбранной из SEQ ID NO:324, 517 и 518.
В одном варианте реализации, иммуноцитокин представляет собой 1D05 D1-9 ICK. В одном варианте реализации, иммуноцитокин представляет собой 1D05 D1-9. В одном варианте реализации, иммуноцитокин представляет собой 1D05 D9-2 ICK. В одном варианте реализации, иммуноцитокин представляет собой 1D05 D9-7 ICK.
Аспект 45а. Вариант hIL-2, содержащий N-концевую последовательность, выбранную из SEQ ID NO:303-323, слитую с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:324.
В одном варианте реализации аспекта 45а, вариант hIL-2 представляет собой очищенный вариант hIL-2. В другом вари